(参考)国家自然科学基金申请书

项目类别投送学科代码科学部编码

A C030304

国家自然科学基金

申请书

项目名称: 靶向求源探索宫颈癌发病分子学机理

申请者：马丁

所在单位：华中科技大学同济医学院

邮政编码：430030

通讯地址：湖北省武汉市航空路13号

电话：

传真：

电子信箱：

申请日期: 2002年3月

国家自然科学基金委员会

一九九七年制

填报说明

一、填写申请书前，请先查阅国家自然科学基金有关项目申请办法及规定。申请书各项内容，要实事求是，逐条认真填写。表达要明确、严谨，字迹要清晰易辨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的缩写词，须注出全称。

二、申请书为十六开本，复印时用B5复印纸，于左侧装订成册。第三页起各栏空格不够时，请自行加页。一式六份（至少一份为原件），由所在单位审查签署意见后，按申报学科投送国家自然科学基金委员会对口科学部。地区科学基金项目，申请书另报送省（自治区）科委一份原件。

三、封面右上角“科学部编号”由对口科学部填写，项目类别和申报学科代码1由申请者填写。

四、下列人员不得作为申请项目的负责人提出申请，但可作为项目组成员参加研究：

—在读（含在职）研究生

—已离退休的科研人员

—申请单位的兼职科研人员

五、申请者和项目组中具有高级专业技术职务的主要成员申请（含参加）的项目数，连同在研的国家自然科学基金项目数（不含重点项目、重大项目），不得超过两项。

六、同一项目组研究内容相近的项目，只允许报送一个学科。

七、申请者可因同类项目竞争等原因，提出不宜评议本项目的专家名单（姓名与单位，3人以内），密封于信封中，钉在申请书原件封面，或另专函相关学科，供科学部选择同行评议人时参考。科学部将对此信息保密。

八、国家自然科学基金委员会通讯地址：北京市海淀区花园北路35号东门

邮政编码：100083

简表填写要求

一、简表内容将输入计算机，必须逐项认真填写，采用国家公布的标准简化汉字，简表中所有代码以

最新发布的《国家自然科学基金申请项目分类目录及代码》为准填写。高技术探索课题主题号按《高技术新概念新构思探索课题项目指南》中主题号填写，申请重点项目时项目类别也填写B，并在申请书封面右上角加注“高技术探索课题重点项目”。

二、凡选择性栏目，将相应提示符A、B等之一填入该栏的右下角。

三、部分栏目填写要求：

项目名称?应确切反映研究内容和范围，最多不超过25个汉字（包括标点符号）。

基础研究?指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动。

应用基础研究?指有广泛应用前景，但以获得新知识、新原理、新方法为主要目的的研究。

申报学科?申请项目所属的最基础学科。如涉及多学科可填写两个，先填为主学科。

申请金额?以万元为单位，用阿拉伯数字表示，注意小数点。

起止年月?起始时间从申请的次年1月算起。完成时间为完成年度的12月。

所用实验室?系指研究项目将利用的实验室仅填写国家计委批准的国家重点实验室或部门批准的开放实室。

所在单位名称及代码?按单位公章填写全称。例如“中国科学院西安光学精密机械研究所”不得填“中

科院西安光机所”或“西安光机所”。全称中的数字，一律写中文，例如：

航空航天工业部第七○一研究所。首次申请国家自然科学基金的单位，尚未

编入单位代码，其代码暂不填写。

参加单位数?指研究项目组主要成员所在单位数，包括主持单位和合作单位（含作者所在单位），以阿拉伯数字表示。

项目组主要成员?指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作用的人员，本人应在申请书上签名。本栏双线右侧内容不输入计算机。

研究内容和意义?摘要及主题词均录入软盘。

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二、立论依据

（包括项目的研究意义、国内外研究现状分析，附主要的参考文献及出处）

对对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目的科学意义；

对应用基础研究，着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述

其应用前景。

宫颈癌是危害全世界妇女健康的首要恶性肿瘤之一，居女性癌症死亡率第二位[1]。宫颈癌发病率及死亡率在不同地区、不同经济状况的国家有显著差异。据世界卫生组织报告，发病率最高的国家为智利（15.4/10万），中国(14.6/10万)仅次于智利，都是宫颈癌的高发国家。特别近年来宫颈癌发病率在我国有明显增高趋势，并趋于年轻化[2, 3]。因此，如何找寻宫颈癌发病因素，探索发病的分子学基础，最终达到根除宫颈癌是关系到攻克重大疾病，保护我国妇女健康的重要课题。

宫颈癌发病的高危因素就目前研究资料主要可能为以下因素：(1)人类乳头状瘤病毒(HPV)感染和性因素：约95℅宫颈癌患者体内可检出HPV。HPV已被视作宫颈癌发病的首要因素[4-6]。在初次性生活过早（<16岁）、性生活活跃、性紊乱和性生活不洁的妇女中宫颈癌发病率高。性因素被认为引导致癌因子HPV 、巨细胞病毒(CMV)等的入侵而具备的，宫颈癌作为一种性传播性疾病已普遍被认同。(2)宫颈病变：宫颈慢性疾病如宫颈中重度糜烂、慢性子宫颈炎、宫颈息肉、宫颈湿疣、产后裂伤等与宫颈癌发生有关联，实际上宫颈慢性病变给HPV等致癌因子更多的侵入机会。(3)基因改变：细胞遗传学研究发现，宫颈癌细胞存在非随机性染色体异常，如第1、3、5、11和17号染色体上有等位基因缺失[7]。(4)激素：糖皮质激素、类固醇激素如雌孕激素等可以增强病毒转录。(5)免疫状态：某些HLA基因型在宫颈癌患者中较正常人更为常见，表明宫颈癌易感性可能部分由调节对HPV免疫反应的先天遗传因素所决定[8]。吸烟者、肾移植患者易患宫颈鳞癌，可能与免疫功能缺陷有关。由于机体免疫功能下降，清除病毒能力亦下降，导致病毒持续感染状态。上述五点高危因素实际上或多或少都与HPV感染有关[9]。

探索宫颈癌发病过程中的分子生物学因素是国内外学者关注的课题，特别在HPV与宫颈癌发病关联方面进行了先期研究。HPV亚型繁多，约100多种，其中约有20种与人类生殖区皮肤粘膜病变有关，根据其对生殖系统致癌危害性又分为“高危组”和“低危组”。低危组有HPV6、11、40、42等，主要引发良性增生如尖锐湿疣；高危组有HPV16、18、31、

33、51等，常引起恶性转化[5]。HPV结构为一小的双链病毒，其基因组可分为三部分。就目

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接第3页（项目的研究意义、国内外研究现状分析，附主要的参考文献—附页）

在病毒复制时起重要作用。其中E6、E7编码的癌蛋白可能对病毒复制及HPV感染的宿主细胞的转化十分关键[2,3]， E1蛋白具有ATP酶活性，对于病毒的复制亦很重要，而E2蛋白能与调控区下游区(URR)结合充当转录活化或抑制因子。HPV 的DNA在宿主细胞中以两种方式存在，一种是整合状态，另一种是染色体外的附加体形式。在癌前组织中病毒常位于染色体之外，而在癌细胞中，病毒DNA以单拷贝或多拷贝串联方式整合于宿主细胞DNA中，结果导致E2基因缺失，E2基因的作用是抑制E6、E7基因启动，从而使E6、E7基因表达异常最后表现为细胞增长失控。另外，HPV在宿主细胞染色体中整和似乎是随机的[2,3,7]。在某些细胞株中正是这种整合发生在已知的致癌基因附近，因而也可能由于HPV的整合，激活了细胞癌基因，引起细胞恶性转化[10]。上述初步研究尚在探索阶段。

宫颈癌作为危害中国妇女健康的首要癌肿，是医学生物领域迫待研究攻关的课题。在过去一段时期，经过许多学者的努力，已初步了解到HPV与宫颈癌发生可能的内在关系，这为病毒诱导基因突变最终导致癌肿这一重要观点提供了理论基础[11, 12]。但由于受探索思维和技术条件的限制，对病毒诱发肿瘤机制的根本内涵仍不甚了解，特别是HPV感染诱发促进宫颈癌发生的关键环节尚仅只能根据有限的资料进行推测, 更不能解释以下急待澄清的问题：(1 )HPV感染与宫颈癌发生的“时空径限”和“强频度径限”；(2) HPV亚群感染与宫颈癌类别的关联；(3) HPV在宿主细胞染色体中的整和方式； (4) HPV如何维持持续恶性表型；(5) HPV关键癌变基因片段的定位以及相应病毒蛋白功能表达的关建所在； (6)HPV 致癌蛋白致使p53及Rb产生无效调节的内在联系；(6) 癌变关键调节环节以及相应可能的阻断措施[13,14]。以上要点对揭示宫颈癌发病机理和分子学基础是至关重要的。

本项目采用新的科学探索思维、新的研究手段，运用生物芯片技术在DNA、RNA和蛋白三个层次全面系统探索宫颈癌发病机制，研究要点包括HPV相关致癌基因的筛查和确定、病毒蛋白在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频度和强度的度量标准。本课题将采用双向分子验证分析系统，旨在探索宫颈癌发病的分子生物学原理，一方面运用正向追综手段，即基因芯片差异显示方法筛选出目标基因，进而追综相应蛋白在致病过程中的功能演变；另一方面采用逆向求源方法，即二维蛋白解析方法和蛋白芯片差异显示手段确定致病蛋白，反向逆源找出致病基因。众所周知，任何病理过程的分子基础都包含

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