(完整版)实验设计
实验设计选题：苦瓜降血糖
分组：六
组员：张黄能，郑赵情，余文琴，殷屹浩楠
实验题目：苦瓜的降血糖作用实验研究
一、实验目的
1）掌握苦瓜降糖机制
2）掌握大鼠糖尿病模型的制备方法
二、实验意义
中医认为，糖尿病属于消渴病范畴，其病机是阴津亏损，燥热内盛，阴虚为本，燥热为标。古代医药文献记载了许多中药可以治疗消渴病，苦瓜便为其中之一，其为葫芦科苦瓜属植物苦瓜的未成熟果实，人药历史已经十分悠久，《本草纲目》记载“苦瓜味苦，性寒凉，无毒，具有除邪热、解疲乏、清心明目、益气壮阳之功”。在I临床上常用于治疗中暑及各种热性病。苦瓜在世界许多国家和地区均有入药记载。亚马逊当地土著居民将苦瓜叶子做的茶用于治疗糖尿病，也用作治疗疝气；苦瓜全草在墨西哥用于治疗糖尿病，根则用于春药原料；其果实在日本南部作为健胃药，在印度则用于驱虫及各种炎症。近年来从苦瓜的果实中分离出多种皂苷、蛋白质、生物碱、甾类、萜类等，具有抗糖尿病、抗病毒及抗肿瘤等作用。其中尤以苦瓜抗糖尿病作用研究较为广泛深入，现将苦瓜在糖尿病治疗中的作用研究。三、实验材料与仪器
微囊化喷雾干燥苦瓜粉（自制）、优降糖片(格列本脲片)、鼠笼、灌胃器、电子秤、注射器、Sum Plus血糖测定仪．Sure P1us血糖测定纸（美国Lifescan公司）
四、实验原理
1）采用化学药品链脲佐菌素(Streptozo[ocin)制备大鼠糖尿病模型。链脲佐菌素能选择性地被胰腺摄取．引起B一细胞坏死．从而表现出与人类相近似的糖尿病症状：高血糖、尿糖、多尿、多食、体重下降、高脂血症、酮尿以及酸中毒
2）苦瓜降糖机制
（1）类胰岛素样作用
（2）刺激胰岛B细胞增加胰岛素的分泌
影响组织时葡萄糖的摄
（4）影响葡萄糖代谢酶
（5）改善胰岛素抵抗
3）根据糖尿病的“三多一少”的特点，因此记录各组小鼠的血糖值、饮食、饮水、尿量、呼吸、体重能够反映叫血糖的治疗作用。
五、实验方法：
1)实验名称：苦瓜的降血糖作用实验研究
2)实验动物：大鼠60只，体重180~220g
3)实验步骤：
六、实验性链尿霉素糖尿病大鼠模型的建立
将新配制的0．5％链尿佐菌素缓冲液按55mg／kg的剂量给禁食12 h的大鼠进行左下腹腔注射．72 h后检测禁食12 h的大鼠血糖值。血糖值大于11者为造模成功．删除未造成模型的大鼠。
七、动物分组
从60只大鼠中随机取12只作为空白对照组(1组)．其余按照以上方法将已造成链尿霉素糖尿
病模型的大鼠按血糖值分为4组，每组12只。其中3组为给药组2、3、4组)，另一组为模型对
照组(5组)。
八、给药剂量与给药方法
1、以优降糖组0．1 g／kg为阳性对照组．低剂量苦瓜组O．25 g/kg，高剂量苦瓜组0．5
g/kg。动物分组后,分别按剂量灌胃给药。模型对照组给予等剂量生理盐水，连续4周，每天1
次，分别于第2周末和第4周末检测血糖值和血中的尿素氮值。并且记录每4天各组小鼠的进
食、饮水、尿量、呼吸、体重。
2、血糖测定，尾尖取血少许．放于血糖试纸条的药效部位．待其变蓝后将其插入血糖测
量仪中读数。
九、实验记录结果
记录每4天小鼠的呼吸频率
组号呼吸 (次/min) 0 4 8 12 16 20 24 28 1
2
3
4
5
记录每4天小鼠的体重
组号体重（g）
0 4 8 12 16 20 24 28 1
2
3
4
5
记录每4天小鼠的平均尿量
组号体重（g）
0 4 8 12 16 20 24 28 1
2
3
4
5
记录每两周后血糖值小鼠的血糖值
组号血糖值
给药前 2 周后 4 周后
1
2
3
4
5
1、降糖率的计算方法
降糖率=灌药前的血糖值一灌药后血糖值/灌药前的血糖值。
2、数据处理
对测定的结果．实验前、后采用配对t检验．应用POMs统计软件进行处理。对进食、饮水、尿量、呼吸、体重所得出的值做出一条随时间变化的曲线。用统计学处理所有数据经统计学处理后用±ｓ表示，组间差异采用ｔ检验。ｐ＜０．０５为差异显著，ｐ＜０．０１为差异极显著。
3、预期结果
高剂量苦瓜组对STz糖尿病大鼠有良好的降血糖效应．且能有效地恢复其体重呼吸和尿量。低剂量苦瓜组对STZ糖尿病大鼠也有一定的降血糖效应和恢复体重作用。
4、讨论
1）苦瓜具有清热消暑、养血益气、补肾健脾、滋肝明目的功效，对治疗痢疾、疮肿、中暑发热、痱子过多、结膜炎等病有一定的功效。苦瓜的维生素C含量很高，具有预防坏血病、保护细胞膜、防止动脉粥样硬化、提高机体应激能力、保护心脏等作用。苦瓜中的苦瓜素被誉为“脂肪杀手”能使捏取脂肪和多糖减少。促进饮食、消炎退热：苦瓜中的苦瓜甙和苦味素能增进食欲，健脾开胃;所含的生物碱类物质奎宁，有利尿活血、消炎退热、清心明目的功效;降低血糖：苦瓜的新鲜汁液，含有苦瓜甙和类似胰岛素的物质，具有良好的降血糖作用，是糖尿病患者的理想食品。
2）苦瓜的主要降糖成分为：三萜类一苦瓜皂苷、甾类一苦瓜苷、苷类一苦瓜脑苷、胰岛素多肽、生物碱、蛋白质、微量元素等。
3）苦瓜的主要降糖机制：抑制葡萄糖的吸收、促进葡萄糖的利用、影响葡萄糖代谢的关键、对胰岛B细胞的作用、类胰岛素作用、免疫调节作用。
4）实验中可能遇到的问题：
（1）每隔几天为大鼠测血糖较为合适；或者是否可每注射一次药量测量一次，作出变化曲线。
（2）在建模时，如何确定血糖范围来认定造模成功与否。
（3）查的文献大都用链尿佐菌素缓冲液作为造血糖模型的药物，是否还有其他的糖尿病建模方法。
5）我们查阅了常用的小鼠取血方法:尾静脉取血、眼部取血、断头取血。由于本实验要多次取血，且取血量不多，所以用尾静脉取血。
6）苦瓜作为一种药食同源的天然植物用于治疗糖尿病在世界上源远流长，特别是在中国、印度以及东南亚、非洲、南美等地区均有丰富而详细的入药记载。现代动物实验研究也证明，苦瓜降低血糖作用确切；临床研究显示苦瓜用于治疗糖尿病取得显著效果。随着对苦瓜化学成分和功能保健作用研究的不断深入，特别是发现苦瓜口服降糖有效的这一“植物胰岛素”特性，使攻克医学界胰岛素口服制剂这一难题成为可能。
7）而苦瓜在临床研究中几乎没有任何毒副作用的报道，但在动物实验中发现苦瓜存在一定
毒性(果实和种子比其他部位的毒性稍高)，对动物的主要毒性是抗生育作用和胚胎毒作用。粗提物未见致畸作用，但纯化的苦瓜素具有致畸胎作用。苦瓜的根、茎、叶、花、果实和种子均可药用，且含有16种氨基酸，包括8种人体必需氨基酸。它具有高效低毒、来源广泛、取料容易的特点，应用前景广阔，在医药领域有巨大潜力。因此，对苦瓜进行品系筛选，以及对其抗糖尿病活性成分及其作用机制研究是非常有必要的。
参考文献：
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