(完整版)实验9水中总大肠菌群的测定—多管发酵法
实验九水中总大肠菌群的测定—多管发酵法一．实验目的和要求
1．掌握多管发酵法测定水中大肠菌群的技术。
2．预习第六章细菌学检验法的关内容。
二．原理
总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。
三．仪器
(1)高压蒸气灭菌器。
(2)恒温培养箱、冰箱。
(3)生物显微镜、载玻片。
(4)酒精灯、镍铬丝接种棒。
(5)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯（200、500、2000mL）、锥形瓶（500、1000mL）、采样瓶。
四．培养基及染色剂的制备
1．乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
2．三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外，各组份用量增加至三倍。
3．品红亚硫酸钠培养基：
①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中，先将20～30g琼脂加到900mL 蒸馏水中，加热溶解，然后加入3.5g磷酸氢二钾及10g蛋白胨，混匀，使其溶解，再用蒸馏水补充到1000mL，调节溶液pH为7.2～7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g乳糖，混匀，定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，置于高压灭菌器中，在121℃灭菌15min，贮存于冷暗处备用。
②平皿培养基的制备：将上法制备的贮备培养基加热融化。根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌试管中；再按比例称取无水亚硫酸钠，置于另一灭菌试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（灭菌）。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色再褪至淡红色为止（不宜加多）。将此混合液全部加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡）。立即将此培养基适量（约15mL）倾入已灭菌的平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用，但保存时间不宜超过两周。如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。
4．伊红美培养基：
①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中，先将20～30g琼脂加到900mL 蒸馏水中，加热溶解。再家人2.0g邻酸二氢钾及10g蛋白胨，混合使之溶解，用蒸馏水补充至1000mL，调节溶液pH值为7.2～7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g乳糖，混匀后定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，于121℃高压灭菌15min，贮于冷暗处备用。
②平皿培养基的制备：将上述制备的贮备培养基融化。根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例分别吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液（0.4g伊红溶于20mL水中）和一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液（0.065g美蓝溶于13mL水中），加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此培养基适量倾入已灭菌的空平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用。
5．革兰氏染色剂：
①结晶紫染色液：将20mL结晶紫乙醇饱和溶液（称取4～8g结晶紫溶于100mL95%乙醇中）和80mL 1%草酸铵溶液混合、过滤。该溶液放置过久会产生沉淀，不能再用。
②助染剂：将1g碘与2g碘化钾混合后，加入少许蒸馏水，充分振荡，待完全溶解后，用蒸馏水补充至300mL。此溶液两周内有效。当溶液由棕黄色变为淡黄色时应弃去。为易于贮备，可将上述碘与碘化钾溶于30mL蒸馏水中，临用前再加水稀释。
③脱色剂：95%乙醇。
④复染剂：将0.25g沙黄加到10mL95%乙醇中，待完全溶解后，加90mL蒸馏水。
五．测定步骤
1．生活饮用水：
①初发酵试验：在两个装有已灭菌的50mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中（内有倒管），以无菌操作各加入已充分混匀的水样100mL。在10支装有已灭菌的5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），以无菌操作加入充分混匀的水样10mL混匀后置于37℃恒温箱内培养24h。
②平板分离：上述各发酵管经培养24h后，将产酸、产气及只产酸的发酵管分别接种于伊红美蓝培养基或品红亚硫酸钠培养基上，置于37℃恒温箱内培养24h，挑选符合下列特征的菌落：
a．伊红美蓝培养基上：深紫黑色，具有金属光泽的菌落；紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落；淡紫红色，中心色较深的菌落。
b．品红亚硫酸钠培养基上：紫红色，具有金属光泽的菌落；深红色，不带或略带金属光泽的菌落；淡红色，中心色较深的菌落。
③取上述特征的群落进行革兰氏染色：
a．用以培养18～24h的培养物涂片，涂层要薄；
b．将涂片在火焰上加温固定，待冷却后滴加结晶紫溶液，1min后用水洗去；
c．滴加助色剂，1min后用水洗去；
d．滴加脱色剂，摇动玻片，直止无紫色脱落为止（约20～30s），用水洗去；
e．滴加复染剂，1min后用水洗去，晾干、镜检，呈紫色者为革兰氏阳性菌，呈红色者为阴性菌。
④复发酵试验：上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢的杆菌，则挑选该菌落的另一部分接种于装有普通浓度乳糖蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），每管可接种分离自同一初发酵管（瓶）的最典型菌落1～3个，然后置于37℃恒温箱中培养24h，有产酸、产气者（不论倒管内气体多少皆作为产气论），即证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群存在的阳性管（瓶）数查附表1“大肠菌群检数表”，报告每升水样中的大肠菌群数。
2．水源水
①于各装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分
别加入10mL 水样；于各装有10mL 乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分别加入1mL 水样；再于各装有10mL 乳糖蛋白胨培养液的5个试管中（内有倒管），分别加入1mL 1∶10稀释的水样。共计15管，三个稀释度。将各管充分混匀，置于37℃恒温箱内培养24h 。
②平板分离和复发酵试验的检验步骤同“生活饮用水检验方法”。
③根据证实总大肠菌群存在的阳性管数，查附表2“最可能数（MPN ）表”，即求得每100mL 水样中存在的总大肠菌群数。我国目前系以1L 为报告单位，故MPN 值再乘以10，即位1L 水样中的总大肠菌群数。
例如，某水样接种10mL 的5管均为阳性；接种1mL 的5管中有2管为阳性；接种1∶10的水样1mL 的5管均为阴性。从最可能数（MPN ）表中查检验结果5～2～0，得知100mL 水样中的总大肠菌群数为49个，故1L 水样中的总大肠菌群数为49×10=490个。
对污染严重的地表水和废水，初发酵试验的接种水样应做1∶10、1∶100、1∶1000或更高倍数的稀释，检验步骤同“水源水”检验方法。
如果接种的水样量不是10mL 、1mL 和0.1mL ，而是较低或较高的三个浓度的水样量，也可查表求得MPN 指数，再经下面公式换算成每100mL 的MPN 值：
)
()
(10mL mL MPN MPN 接种量最大的一管指数值?
=
附表1 大肠菌群检数表
接种水样总量300mL （100mL2份，10mL10份）
附表2 最可能数（MPN）表
（接种5份10mL水样、5份1mL水样、5份0.1mL水样时，不同阳性及阴性情况下100mL
水样中细菌数的最可能数和95%可信限值）
多管发酵法检测水中的大肠菌群的实验报告
学院：环境科学与工程学院班级：11级环境科学（2）班 姓名：李宝携学号：3111007398 实验3 多管发酵法检测水中的大肠菌群 一、实验目的 （1）了解饮用水和水源水大肠菌群的原理和意义。 （2）学习检测水中大肠菌群的方法。 二、实验原理 大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。 大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。 多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。当发酵产酸时，溴甲酚紫可由紫色变为黄色，乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。 三、实验材料 1、水样 中心湖湖水 2、试剂 三倍浓缩乳酸蛋白胨培养液 3、仪器及其他用品 试管、发酵管、烧杯、量筒、移液枪、高压灭菌锅 四、操作过程 1、取16支发酵管，其中5支加入5mL三倍乳糖蛋白胨培养液。取35mL三倍乳糖蛋白胨培养液于烧杯中，量取70mL水进行稀释，将三倍乳糖蛋白胨培养液稀释成一倍的乳酸蛋白胨培养液，分别取10mL一倍的乳酸蛋白胨培养液与10支试管中，最后，1支加入9ml自来水。 2、完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。 3、灭菌完毕，冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样。取1mL的水样于装有9mL自来水的试管中，混合摇匀，并分别移1mL于另外的5支10mL的试管中。 4、将各试管充分混均，包装完成，将其置于37℃恒温箱中培养24h。 5、取出培养液，观察试管的颜色及其中的气泡数并记录数据。 6、观察完毕，清洗仪器并整理数据。
5.水中大肠杆菌的检测(多管发酵法)
水中大肠杆菌群书的监测（发酵法） 一、试验目的： 1.了解和学习水中大肠杆菌的测定原理和测定意义。 2.学习和掌握水中大肠杆菌的监测方法。 二、试验原理： 水的微生物学的检验，特别是大肠杆菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水的标准规定饮用水中大肠杆菌群书每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。 水中大肠杆菌的检验方法，常用多管发酵发和滤膜法。多管发酵发可运用于各种水样的检验，但操作繁琐，需要时间长。滤膜法仅用于自来水和深井水。操作简洁快速，但不适用于杂质较多，易于阻塞滤孔的水样。 三、试验材料： 1.培养基：乳糖蛋白胨培养基，伊红美蓝培养基 2.器材：灭菌三角瓶、无菌平皿、无菌吸管、无菌试管等。 四、试验内容 第一天： 1.水样的采集
自来水洗将自来水龙头用酒精灯火焰灼烧灭菌，在开放水龙头取水流5ｍｈ，以灭菌山角瓶接水取样以备分析。 2.用发酵法检查大肠杆菌 （1）生活饮用水的检验 ①初步发酵试验：在2个各装有50ｍｈ的3倍乳糖蛋白胨培养液的三角瓶中，以无菌操作各自加水样10ｍｈ。摇匀后，37℃培养24ｈ 第二天： ②平板分离：经24ｈ培养后。特产酸产气及只产酸的发酵管，分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板（EMD培养基上），37℃培养18～24ｈ。大肠杆菌群在EMD平板上，菌落呈紫黑色，具有或略带或不带有金属光泽，或者呈淡紫红色，仅中心颜色较深，挑取符合上述特征的菌落进行涂片，革兰氏染色，镜检。 第三天： ③复发酵试验：将革兰氏阴性无芽孢杆菌的菌落的剩余部分接于单倍乳糖发酵管中，为防止遗漏，每管可接种来自同一初发酵管的平板上同一类型菌群1～3个，37℃培养24ｈ，如果产酸又产气者，即证实有大肠菌群存在。 第四天： ④报告：根据证实有大肠菌群存在的复发酵管的阳性管，查附录1或2，报告每升水样品中大肠菌群数（MPN）
粪大肠菌群测定复习试题
粪大肠菌群测定复习试题 一、填空题 1.地表水环境质量标准(GHZB1—1999)中，对环境质量卫生指标粪大肠菌群项目作出明确规定：Ⅰ类水质标准值为；Ⅱ类水质标准值为；Ⅲ类水质标准值为；Ⅳ类水质标准值为，Ⅴ类水质标准值为。 答：≤200个/L；≤1000个/L；≤2000个/L；≤5000个/L；≤10000个/L。 2.粪大肠菌群是一部分，用粪大肠菌群作为卫生学指标比用 更有。目前，粪大肠菌群被认为是受粪便污染的最实用的。 答：总大肠菌群；总大肠菌群；代表性；指示菌。 3.检测粪大肠菌群时作发酵试验用的培养基，是由、、 、等配制而成的，调节pH为，应在 灭菌。 答：蛋白胨；牛肉浸膏；乳糖；氯化钠；7.2-7.4；115℃；20min。 4.农田灌溉水质标准(GB5084—92)中，根据农作物的需求状况，将灌溉水质按灌溉作物分为三类：水作、旱作和蔬菜。其生物指标粪大肠菌群标准值定为 。 答：≤10000个/L。 5.为了区别存在于中的大肠菌群和存在于的大肠菌群,可将培养_ __ _____，在此种条件下仍能_____ 并使____________ _，则称为粪大肠菌群。 答：自然环境；温血动物肠道内；温度提高到44℃；生长；发酵乳糖产酸产气。 6.进行复发酵试验时，用3mm 或灭菌棒将转接到 培养液中。在培养。培养后观察发酵管 表明确信。
答：接种环；培养物；EC；44±0.5℃水浴下，24±2h；产气；试验阳性。 7.在污水综合排放标准(GB8978—1996)中，把医院、兽医院及医疗机构含病原体污水的粪大肠菌群分为三级标准：一级标准值；二级标准值；三级标准值。而传染病、结核病医院污水的粪大肠菌群三级标准值分别为：、、。 答：500个/L；1000个/L；5000个/L；100个/L；500个/L；1000个/L。8.EC培养液的配比是：胰胨，乳糖，氯化钠，磷酸二氢钾，胆盐三号，磷酸氢二钾，溶解于蒸馏水中。在 15min，灭菌后应为。 答：20g；5g；5g；1.5g；1.5g；4g；1000mL；121℃灭菌；pH；6.9。 二、问答题 1.粪大肠菌群的涵义是什么？ 答：指一群需氧及兼性厌氧在44.5℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 2.控制粪大肠菌群指标值的意义是什么？ 答：为了人体健康卫生的要求。 3.粪大肠菌群测定有几种方法？通常用哪种方法？ 答：有三种：多管发酵法、滤膜法、延迟培养法。用多管发酵法。 4.简诉测定粪大肠菌群多管发酵法的操作步骤？ 答：测定分二个步骤进行：量取若干经稀释的水样，接种乳糖蛋白胨培养液，进行初发酵试验：在37±0.5℃下培养24±2h，产酸和产气的发酵管表明试验阳性，再将表明试验阳性的发酵管中的培养物转接到EC培养液中，进行复发酵试验，在44±0.5℃水浴下培养24±2h，发酵管产气表明确信试验阳性。 5.在何种情况下用多少三倍浓度的培养基接种？ 答：接种体积为10ml时，试管内应装入有3倍浓度乳糖蛋白胨培养液5ml。 6.什么叫兼性厌氧细菌？ 答：氧存在或不存在的条件下均能繁殖的细菌。
水中大肠菌群的测定
水中大肠菌群的测定报告题目水中大肠菌群的测定作者姓名 班级生科1104班 指导教师 完成时间2013年6月 生物学实验教学中心
目录 引言 (2) 1 实验材料 (2) 2 实验步骤 (2) 2.1 (3) 2.2 (4) 2.3 (5) 2.4 (5) 2.5数据分析与结果处理................... 错误!未定义书签。 3 结果与分析 (6) 3.1图片................................. 错误!未定义书签。 3.2...................................... 错误!未定义书签。总结. (7) 参考文献 (11)
水中大肠菌群的测定 （指导老师：） （湖北师范学院生命科学学院生物技术1104班湖北黄石 435002）摘要：测定青山湖水中的大肠菌群的含量。将待测水分别稀释10倍、100倍、1000倍3种梯度在三倍浓缩培养基 37℃培养24h后挑 选出产酸或产气的菌画线接种到伊红美蓝平板中37℃培养24h， 将培养基中表现为阳性的菌落做革兰氏染色镜检为阴性的菌种 接种到乳糖蛋白胨培养基中37℃培养24h,挑选大肠杆菌阳性 菌。结果稀释10倍的水有3管大肠杆菌阳性菌，稀释100倍的 水有3管，稀释1000倍的有2管，即青山湖水中大肠杆菌的含 量为MPN=11000. 关键词：大肠杆菌、多管发酵法青山湖水
水中大肠菌群的测定 （指导老师：） （湖北师范学院生命科学学院生物技术1104班湖北黄石 435002） 引言 水对我们的生命起着重要的作用，它是生命的源泉，是人类赖以生存与发展的不可缺少的最重要的物质资源之一。人的生命一刻也离不开水，水是人生命需要最主要的物质。水也是大肠菌群的天然环境，一般地面水比地下水含菌数量多，并易被病原菌污染。人饮用后引发疾病。水质细菌学检验是培水与污水水质分析工作中的一项重要指标。 水的微生物学的检验，特别是肠道细菌的检验，在保证饮水安全和控制传染病上有着重要意义，同时也是评价水质状况的重要指标。国家饮用水标准规定，饮用水中大肠菌群数每升中不超过3个，细菌总数每毫升不超过100个。 1 实验材料 药品：蛋白胨，牛肉膏，乳糖，蒸馏水，1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，2%伊红（曙红）水溶液，0.5%美蓝（亚甲蓝）水溶液，氢氧化钠水溶液。工业酒精、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液，番红复染液，香柏油，二甲苯。 仪器(生产厂家)：显微镜，天平，培养箱，水浴锅，平皿，德氏管，
总大肠菌群数量测定
总大肠菌群 在饮用水的微生物安全监测中，普遍采用正常的肠道细菌作为粪便污染指标，而不是直接测定肠道致病菌。 总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革氏阴性无芽胞杆菌。总大肠菌群系指每升水样中所含有的总大肠菌群的数目。 总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。 一多管发酵法 1应用范围 1.1本法适用于饮用水、水源水，特别是浑浊度含量高的水质中总大肠菌群的测定。 1.2水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在。 2原理 根据总大肠菌群应具有的生物特性， 产气，能在选择性培养基上产生典型菌落。 3仪器 3.1显微镜 3.2革兰氏染色用有关器材。 3.3高压蒸汽灭菌器。 3.4干热灭菌箱。 3.5恒温箱。
3.6冰箱。 3.7放大镜。 3.8试管、平皿（直径 4培养基 4.1乳糖蛋白胨培养液 4.1.1成分 蛋白胨10g 牛肉膏3g 乳糖5g 氯化钠5g 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液 蒸馏水1000ml 4.1.2制法 将蛋白胨、牛肉膏、 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液， 灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 4.2三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。4.3品红亚硫酸钠培养基（供多管发酵法用）4.3.1成分 蛋白胨10g
乳糖10g 磷酸氢二钾3.5g 琼脂15~30g 蒸馏水1000ml 无水亚硫酸钠5g左右 5%碱性品红乙醇溶液 4.3.2储备培养基的制备如革兰氏阴性无芽胞杆菌， 9cm）、刻度吸管等，置于干热灭菌箱中 1ml 1000ml蒸馏水中加热溶解， 充分混匀，分装于装有倒管的试管中，在37℃24h内能发酵乳糖并产酸160℃灭菌2h 调整pH为7.2~7.4，再加入1ml置高压蒸汽灭菌器中，以115℃乳糖及氯化钠置于 20ml 先将琼脂加至900蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH值为7.2~7.4，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌中以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 4.3.3平皿培养基的配制 将上法制备的储备培养基加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中。再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解后，置于沸水浴中煮沸10min以灭菌。
大肠菌群测定方法
大肠菌群及检验 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工
作中。 二、大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。 （一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 具体操作参见GB4789.3-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》 （二）原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国FDA的标准方法，用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法：推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。证
粪大肠菌群操作细则精编版
粪大肠菌群多管发酵法 1、培养基、试剂与仪器 本标准所用试剂除另有注明外，均为符合国家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新制备的去离子水。 单倍乳糖蛋白胨培养液： 称取23.0g乳糖蛋白胨营养液于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，每试管约8ml（先用移液管吸取7ml至试管中，再用滴管吸取营养液放至小玻璃管中，直至营养液溢出。注意小玻璃管中不能有气泡，若出现气泡，应将气泡排出后再注入营养液。），于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。 EC 培养液： 称取37.0gEC肉汤于1L蒸馏水中，加热煮沸至完全，分装于含有倒置的小玻璃管的试管中，每管8ml（操作方法同单倍乳糖蛋白胨营养液），于高压蒸汽灭菌器中，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。 培养基的存放 在密封瓶中的脱水培养基成品要存放在大气湿度低、温度低于30℃的暗处，存放时应避免阳光直接照射，并且要避免杂菌侵入和液体蒸发。当培养液颜色变化，或体积变化明显时废弃不用。 验所需仪器 超净工作台、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、冰箱、酒精灯、天平、电炉、500ml广口瓶、烧杯、玻璃棒、玻璃发酵管、试管架、移液管、移液枪、接种环2步骤 前期准备 器皿灭菌（高压蒸汽灭菌）：所用采集水样的广口瓶、玻璃试管、移液管、玻璃棒、接种环、移液枪枪头等器皿均需放入高压锅灭菌。 广口瓶：将清洗干净的采样瓶盖好瓶盖，用牛皮纸、报纸等防潮纸将瓶盖、瓶顶和瓶颈处包裹好，用绳子绑好，置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。
玻璃试管（已经装好营养液）、移液管、玻璃棒、接种环、移液枪枪头：用牛皮纸、报纸等防潮纸将其包裹好，置于121℃的高压蒸汽灭菌器灭菌15分钟。 采样：采取水样时，可握住瓶子下部直接将已灭菌的带盖采样瓶插入水中，约距水面10~15cm处，拔瓶盖，瓶口朝水流方向，使水样灌入瓶内然后盖上瓶盖，将采样瓶从水中取出。如果没有水流，可握住瓶子水平前推，直到充满水样为止。采好水样后，迅速盖上瓶盖和包装纸。 采好的水样，应迅速运往实验室，进行检验，一般从取样到检验不宜超过 2h，否则应使用10℃以下的冷藏设备保存样品，但不得超过6h。 4.2 水样接种量 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度确定水样接种量。每个样品至少用三个不同的水样量接种。同一接种水样量要有五管。 相对未受污染的水样接种量为10mL、1mL、0.1mL。受污染水样接种量根据污染程度接种1mL、0.1mL、0.01mL 或0.1mL、0.01mL、0.001mL 等。使用的水样量可参考下表1。(根据实验经验，经过紫外消毒的水样取0.1mL、0.01mL、0.001mL体积进行检测，可根据水样的洁净度适当调整取样体积。) 表1 接种用水量参考表 如接种体积为10mL，则试管内应装有三倍浓度乳糖蛋白胨培养液5mL；如接种量为1mL 或少于1mL，则可接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10mL 中。 4.3 初发酵试验 将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中。在37℃±0.5℃下培养24h±2h。产酸和产气的发酵管表明试验阳性。如在倒管内产气不明显，可轻拍试管，有小气泡升起的为阳性。 4.4 复发酵试验
(完整版)实验9水中总大肠菌群的测定—多管发酵法
实验九水中总大肠菌群的测定—多管发酵法一．实验目的和要求 1．掌握多管发酵法测定水中大肠菌群的技术。 2．预习第六章细菌学检验法的关内容。 二．原理 总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。多管发酵法的原理是根据大肠菌群能发酵乳糖、产酸、产气，以及具备革兰氏染色阴性，无芽孢，呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数。试验结果以最可能数（most probable number），简称MPN表示。 三．仪器 (1)高压蒸气灭菌器。 (2)恒温培养箱、冰箱。 (3)生物显微镜、载玻片。 (4)酒精灯、镍铬丝接种棒。 (5)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯（200、500、2000mL）、锥形瓶（500、1000mL）、采样瓶。 四．培养基及染色剂的制备 1．乳糖蛋白胨培养液：将10g蛋白胨、3g牛肉膏、5g乳糖和5g氯化钠加热溶解于1000mL蒸馏水中，调节溶液pH为7.2～7.4，再加入1.6%溴甲酚紫乙醇溶液1mL，充分混匀，分装于试管中，于121℃高压灭菌器中灭菌15min，贮存于冷暗处备用。 2．三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液：按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。除蒸馏水外，各组份用量增加至三倍。 3．品红亚硫酸钠培养基： ①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中，先将20～30g琼脂加到900mL 蒸馏水中，加热溶解，然后加入3.5g磷酸氢二钾及10g蛋白胨，混匀，使其溶解，再用蒸馏水补充到1000mL，调节溶液pH为7.2～7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g乳糖，混匀，定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，置于高压灭菌器中，在121℃灭菌15min，贮存于冷暗处备用。 ②平皿培养基的制备：将上法制备的贮备培养基加热融化。根据锥形瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌试管中；再按比例称取无水亚硫酸钠，置于另一灭菌试管内，加灭菌水少许使其溶解，再置于沸水浴中煮沸10min（灭菌）。用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色再褪至淡红色为止（不宜加多）。将此混合液全部加入已融化的贮备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡）。立即将此培养基适量（约15mL）倾入已灭菌的平皿内，待冷却凝固后，置于冰箱内备用，但保存时间不宜超过两周。如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。 4．伊红美培养基： ①贮备培养基的制备：于2000mL烧杯中，先将20～30g琼脂加到900mL 蒸馏水中，加热溶解。再家人2.0g邻酸二氢钾及10g蛋白胨，混合使之溶解，用蒸馏水补充至1000mL，调节溶液pH值为7.2～7.4。趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入10g乳糖，混匀后定量分装于250mL或500mL锥形瓶内，于121℃高压灭菌15min，贮于冷暗处备用。
水中大肠杆菌的检测方法
附件 水肠杆菌群检测方法－多管发酵法 NIEA E201.54B 一、方法概要 本方法系用以检测水中革兰氏染色阴性，不产生生孢子之杆状好氧或兼性厌氧菌，且能在35 ± 1 ℃、 48 ± 3小时发酵乳糖并产生酸及气体之大肠杆菌群（Coliform group）；在不同体积或不同稀释度之水 样所产生之结果，以「100 mL水中最大可能数（MPN/100 mL）」表示 100 mL水中存在之大肠杆菌群数目。 二、适用围 本方法适用地面水体、地下水体、废水、污水及水源水质水样肠杆菌群之检验。 三、干扰 (一) 水样中含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长之物质。 (二) 检测使用的玻璃器皿及设备含有抑制或促进大肠杆菌群细菌生长的物质。 四、设备 (一) 量筒：100至1000 mL之量筒。 (二) 吸管：有0.1刻度之10 mL灭菌玻璃吸管或市售无菌塑料吸管，或无菌微量吸管（micropipet）。 (三) 试管：大小约150 × 15 mm之试管或有盖螺旋试管。 (四) 发酵管（fermentation tube）：大小约22 × 9 mm之玻璃管。 (五) 稀释瓶：容量约100 mL可灭菌之硼硅玻璃制品。 (六) 锥形瓶：200至2000 mL之可灭菌硼硅玻璃制品。 (七) 采样容器：容量120 mL以上无菌之硼硅玻璃瓶或无菌塑料有盖容器，或市售无菌袋。 (八) 冰箱：温度能保持在4 ± 2℃者。 (九) 天平：待测物重量大于2 g时，须能精秤至0.01 g；待测物重量不大于2 g时，须能精秤至0.001 g。 (十) 培养箱：温度能保持在35 ± 1℃者。 (十一) 高压灭菌釜：温度能维持在121℃（压力约15 lb/in2或 1.1 Kg/cm2）灭菌15分钟以上者。
总大肠菌群,粪大肠菌群试卷
一．填空题 1.总大肠菌群多管发酵法测定的步骤分为____________、_____________和______________。 2.粪大肠菌群多管发酵法的初发酵试验，是将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中，在____℃培养____h，产酸产气则为阳性。 二、判断题 1.总大肠菌群测定时，如果不能实现常规的检验步骤，例如水样运输途中不能保证所要求的温度，或采样后不能在允许的时间内进行检验等，都可采用延迟培养法。（） 2.对受污染严重的水体样品，如果在初发酵中未发现产气，则应将其培养到48h，然后再进一步证实有无大肠菌类细菌。( ) 3．如果粪大肠菌群测定的接种体积为10ml，则试管内应装有三倍乳糖蛋白胨培养液10m1，如接种量为1m1，则接种于普通浓度的乳糖蛋白胨培养液10m1中。( ) 4．粪大肠菌群多管发酵法的复发酵试验，是将培养物转接到EC培养液中，在35℃下培养24h。( ) 5．水中总大肠菌群和粪大肠杆菌的快速测定法，适用于医院污水、生活污水、垃圾渗滤液以及其他行业(如餐饮业、食品加工等)排入地表水中的污水。( ) 三、选择题 1．我国目前以为总大肠菌群的报告单位，MPN值再乘即为该体积水样中的总大肠菌群数。( ) A． 100m1， 10 B． 1 L， 1 C， 1 L， 10 四．简答题 1.简述多管发酵法测定水源水中总大肠菌群的初发酵操作步骤。 2.如果总大肠菌群和粪大肠菌群测定水样接种量不是10ml、1m1和0.1ml而是较低或较高三个浓度的水样，应如何计算总大肠菌群数或粪大肠菌群数?试写出计算公式。
答案 一．1.初发酵试验 平板分离 复发酵试验 2. 37 24 二．1.正确 2.正确 3.错误 4.错误 5.正确 三.1.C 四. 1.答案：(1)将水样做1∶10稀释。(2)在各装有5m1三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)各加入10ml 水样；在各装有10m1乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)各加入1ml 水样；在各装有10m1乳糖蛋白胨培养液的5个试管中(内有倒管)各加入1m1 1∶10的稀释的水样。(3)将各管充分混匀，置37℃恒温箱培养24h 。 2.答案：如果接种的水样量不是10m1、1m1和0.1m1，而是较低或较高的三个浓度的水样，可先查MPN 表求出MPN 指数，再经过下面的公式换算成每100m1的MPN 值。MPN 值乘以10，即为1L 水样中的总大肠菌群数(或粪大肠菌群数)。 ()()ml ml MPN MPN 接种量最大的一管 指数值10?=
水中大肠菌群的检测
水中大肠菌群的检测法 ——（多管发酵法）一、实验原理 大肠菌群是评价水质好坏的一个重要的卫生指标，也是反映水体被生活污水污染的一项重要监测项目。大肠菌群是一群以大肠埃希氏菌（Escherichia coli）为主的需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌，在37℃生长时，能在48小时内发酵乳糖并产酸产气。我国生活饮用水卫生标准中规定一升水样中总大肠菌群数不超过三个。 多管发酵法包括初发酵试验、平板分离和复发酵试验三个部分。发酵管内装有乳糖蛋白胨液体培养基，并倒置一德汉氏小套管。乳糖能起选择作用，因为很多细菌不能发酵乳糖，而大肠菌群能发酵乳糖而产酸产气。本实验为精简实验，所以省略了平板分离和复发酵试验后两部分，直接通过第一部分初发酵试验的颜色变化进行判断是否存在大肠菌群。 初发酵试验 水样接种于发酵管内，37℃下培养，24小时内小套管中有气体形成，并且培养基混浊，颜色改变，说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。48小时后仍不产气的为阴性结果。 二、实验器材 1.水样 中心湖的湖水 2．试剂 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管 3．仪器及其它用品 移液枪，16支试管（16支德汉氏小套管） 三、实验步骤 初发酵试验 取16支发酵管，其中10支用移液管加入10ml一倍的乳酸蛋白胨培养液，5支加入5ml三倍乳糖蛋白胨培养液，1支加入9ml自然水。然后往16支试管各倒置一支汉氏小套管。完成后包装好，于121℃高压灭菌锅中灭菌30min左右。将取回来的中心湖水样稀释20倍。待试管冷却后，在无菌操作条件下，向装有三倍的乳酸蛋白胨培养液的5支试管加入10ml水样，向装有一倍的乳糖蛋白胨培养液的5支试管中加入1ml水样，向装有一倍的乳 酸蛋白胨培养液的另5支试管中加入1ml 10-1水样。将各试管充分混均，置于37℃恒温箱中
滤膜法测定总大肠菌群
滤膜法测定总大肠菌群 1 主题内容与适用范围 本方法规定了生活饮用水中总大肠菌群的滤膜测定方法。 本方法适用于生活饮用水和低浊度的水源水中总大肠菌群数的测定。 2 方法提要 用孔径为0.45μm的微孔滤膜过滤水样，细菌被截留在滤膜上，将滤膜贴在选择性培养基上，经培养后，计数生长在滤膜上的典型大肠菌群菌落数。 3 培养基与试剂 3.1 品红亚硫酸钠培养基 3.1.1 成份 A 蛋白胨10g B 酵母浸膏5g C 牛肉膏5g D 乳糖10g E 琼脂15~20g F 硫酸氢二钾3.5g G 无水亚硫酸钠5g左右 H 碱性品红乙醇溶液(50g/L) 20mL I 蒸馏水1000mL 3.1.2 储存培养基的制备 先将琼脂加到500mL蒸馏水中，煮沸溶解，于另500mL蒸馏水中加入硫酸氢二钾、蛋白胨、酵母浸膏和牛肉膏，加热溶解，倒入已溶解的琼脂，补充蒸馏水至1000mL，混匀后调pH为7.2~7.4，再加入乳糖，分装，115℃高压灭菌20min，储存于冷暗处备用。 3.1.3 平皿培养基的配制 将上法制备的储存培养基加热融化，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5％碱性品红乙醇溶液置于灭菌空试管中，再按比例称取所需的无水硫酸钠置于另一灭菌试管中，加灭菌水少许，使其溶解后，置沸水浴中煮沸10min以灭菌。 用灭菌吸管吸取已灭菌的亚硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液至深红色退成淡粉色为止，将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加到已融化的储存培养基内，并充分混匀(防止产生气泡)，立即将此种培养基15mL倾入已灭菌的空平皿中。待冷却凝固后置冰箱内备
用。此种以制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周。如培养基已由淡粉色变为深红色，则不能再用。 3.2 乳糖蛋白胨培养基 3.2.1 成份 A 蛋白胨10g B 牛肉膏3g C 乳糖5g D 氯化钠5g E 溴甲酚紫乙醇溶液(16g/L) 1mL F 蒸馏水1000mL 3.2.2 制法 将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠溶于蒸馏水中，调整pH为7.2~7.4，再加入1mL1.6％溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，115℃高压灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 4 仪器 4.1 滤器。 4.2 滤膜，孔径0.45~0.65μm。直经根据滤器规格，目前常用的有3.5cm和4.7cm两种。 4.3 抽滤设备。 4.4 无齿镊子。 4.5 培养箱: 36±1℃。 4.6 冰箱: 0~4℃。 4.7 天平。 4.8 显微镜。 4.9 平皿: 直径为9cm。 4.10 灭菌刻度吸管: 1mL,10mL。 5 检验步骤 5.1 准备工作 5.1.1 滤膜灭菌: 将滤膜放入烧杯中，加入蒸馏水，置于沸水浴中煮沸灭菌三次，每次15min。前两次煮沸后需更换水洗涤2~3次，以除去残留溶剂。
饮用水中大肠杆菌的检测方法
饮用水中大肠杆菌的检测方法 (一)水样的采集 供细菌学检验的水样，必须按一般无菌操作的基本要求采集，并保证再运送、贮存过程中不受污染。水样从采集到检验不应超过4h，在0～4℃下保存不应超过24h ，如不能在4h 内分析，应在检验报告上注明保存时间和条件。 1、自来水取样：应在水龙头打开放水5min，再用无菌容器接取水样，待分析。如水样内含有余氯，则采样瓶灭菌后按每500mL水样加3%Na2S2O3.5H2O溶液1mL。 2、江、河、湖、池自然水体取样：可用采样器，采样瓶应先灭菌。采样后，瓶内应留有空隙。如果与其他化验项目联合取样，细菌学分析水样应采在其他样品之前。 (二)初发酵试验 1.水样稀释：制备水样10-1、10-2的稀释液，方法为用无菌移液管吸取水样10mL放于盛有90mL无菌水和若干玻璃珠的锥形瓶中，充分振荡使混合均匀，并使其中的细菌尽量呈单个存在，即为10-1稀释液;再从10-1制备10-2稀释液。以此类推，稀释到所需倍数。 2.接种和培养：以无菌操作于5支三倍浓缩培养基(接种前一定应先检查杜汉氏小管内有无气泡)中各加入水样10mL，5支普通培养基试管中加入水样1mL，5支普通培养基试管中加入10-1稀释液1mL，小心混匀放入37℃培养箱中培养24h 。此即5管法。 3.结果观察：37℃中培养24h后取出观察，观察有无气体(杜汉氏小管内有无气体)和酸产生(培养基有无变色)。在48h之间，培养管内倒置的杜汉氏小管内有任何量的气体积累，或培养基颜色从紫色变为黄色，便可初步断定为阳性反应。 若所测定的15支管中均为阳性反应，说明浓水样污染严重，可将样品进一步稀释后，再按上述方法接种、培养和观察。
水质 总大肠菌群测定作业指导书
水质 总大肠菌群测定作业指导书 1 含义及执行标准 1.1 含义 总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37℃生长时能使乳糖发酵，在24小时内产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 1.2 方法原理 多管发酵技术是以最可能数（most probable number ，简称MPN ）来表示试验结果的。它是根据统计学理论，通过水样不同稀释浓度多组重复生物培养阳性结果估计水体中被测生物密度的一种方法，具体是通过查MPN 表获得结果的。 1.3 水环境质量标准 表1-1 总大肠菌群地下水质量分类指标 （GB/T 14848-93） 表1-2 总大肠菌群生活饮用水卫生标准 （GB 5749-2006） 表1-3 总大肠菌群渔业水质标准 （GB 11607-89） 1.4 水污染物排放标准 表1-4 总大肠菌群船舶污染物排放标准 （GB 3552-83） 2 分析方法 2.1 方法名称、方法来源及适用范围
方法名称：多管发酵法 方法来源：《水和废水监测分析方法》(第四版)国家环保总局2002年第五篇第二 章五(一) 方法适用范围：此法适用于各种水样（包括底泥）的总大肠菌群测定。 2.2仪器 高压蒸汽灭菌器 电热干燥箱 恒温培养箱 显微镜 冰箱 采样瓶、三角烧瓶、试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管等器皿121℃（20min）高压 蒸汽灭菌后于电热干燥箱中烘干。 2.3 标准菌株制备 将标准菌株的母种或稳定工作种接种到单倍乳糖蛋白胨培养液中培养对照控制。必须包 括大肠埃希氏菌和山夫登堡沙门氏菌两种对照。接种完后需记录：母种的来源，母种和工作 种的保存方法、保存温度、传代间隔时间、生长培养基及孵育条件，确认试验（存活度、纯 度、关键诊断指标等），母种到工作种的传代代数。 2.4 培养基 2.4.1 单倍乳糖蛋白胨培养液：市售乳糖蛋白胨培养基，按铭牌配制，用定量加液器分装每个试管10ml，加塞，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。 2.4.2 三倍乳糖蛋白胨培养液：市售乳糖蛋白胨培养基，按铭牌比例，三倍配制（蒸馏水除外），用定量加液器分装每个试管5ml或每个大试管50mL，加塞，在115℃灭菌20min，贮存于暗处备用。 2.4.3 品红亚硫酸钠培养基：市售品红亚硫酸钠培养基，按铭牌配制，分装于三角烧杯内，加塞，在115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 2.4.4 伊红美蓝培养基：市售伊红美蓝培养基，按铭牌配制，分装于三角烧杯内，加塞，在115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。 2.3.5培养基存放于带紫外灯的灭菌物品专用贮藏柜中，当培养基颜色变化，或体积明 显变化时废弃不用。 2.5分析步骤 2.5.1 生活饮用水 ①初发酵实验：在二个装有已灭菌的50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养基的大试管中（内有倒 管），以无菌操作各加入已充分混匀的水样100ml；在10支装有已灭菌的5ml三倍浓缩乳糖 蛋白胨培养液的试管中（内有倒管），以无菌操作加入充分混匀的水样10ml，混匀后置于 37℃恒温箱培养24h。 ②平板分离：经初发酵试验培养24h后，发酵试管颜色变黄为产酸，小玻璃倒管内有气泡为
大肠菌群检测方法
大肠菌群检测方法 进入无菌室步骤 1．进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。5—1小时。 2．关灯后0?5小时后放可进入。 3．进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套 实验步骤 1，进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成） 2，准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。 3，直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml） 4，再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml） 5，再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 6，再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液 7，更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml） 8，再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 9，再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。） 10，把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中） 11，梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成 －2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成 －3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样 12，如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面） 13，取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。 14，再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准） 15，只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。16，清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。5小时同时不能放气。
水中粪大肠菌群快速检测方法_固定底物酶底物法与多管发酵法的比较_高瑞坤
收稿日期:2008-07-08 作者简介:高瑞坤(1963-),男,福建泉州人,工程师.参考文献: [4]Gitelson A,Mayo M,Yacobi Y Z,et al.The use of hi gh spectral radiometer data for detection of low chlorophyll concentrations in Lake Kinneret[J].J.Plank ton Res. 1994,16:993-10021 [5]Hoge F,Swift R.Ocean color spectral variability studies using solar induced chlorophyll fluorescence[J].Applied Optics.1987,26:18-21 [6]Iluz D,Yacobi Y Z,Gitelson A.Adaptation of an algori thm for chlorophyll-a es timation by optical data in the oligotrophic Gulf of Eilat[J].Int.J.Remote Sensing. 2003,24(5):1157-11631 [7]Schalles J F,Gitelson A,Yacobi Y Z,Kroenke A E. Chlorophyll esti mation using whole seasonal,remotely sensed high spectral-resolutiondata for an eutrophic lake [J].J.Phycol.1998,34:383-391 [8]Yacobi Y Z,Gi telson A,M ayo M.Remote sensing of chlorophyll in Lake Kinneret using high spectral resolution radiometer and Landsat TM:Spectral features of reflectance and algorithm development[J].J.Plankton Res.1995,17:2155-21731 水中粪大肠菌群快速检测方法-固定底物酶底物法 与多管发酵法的比较 高瑞坤1,汤琳2,付强3(1.厦门市环境监测中心站,福建厦门361004; 2.上海环境监测中心,上海200030;31中国环境监测总站,北京100012) 摘要:目的在于比较固定底物酶底物法与多管发酵法用于水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)的检测,使用科立得T M (Colilert R o)试剂和传统方法检测地表水、水源水及污水水样,比较固定底物酶底物法与多管发酵法用于水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)检测结果的一致性。结果表明,固定底物酶底物法与多管发酵法用于水中粪大肠菌群(耐热大肠菌群)检测结果具有一致性,固定底物酶底物法可以用作评价水质微生物污染的标准方法。 关键词:粪大肠菌群(耐热大肠菌群);固定底物酶底物法科立得TM(Colilert R o);多管发酵法;快速检测 中图分类号:X832文献标识码:A文章编号:1002-6002(2008)04-0039-03 Com parison between rapid detection m ethod of Defined Substrate Technology(DST)enzyme substrate technique and multiple-tube fermentation technique in water Fecal bacteria(Thermotoleerant coliform bacteria)detection GAO Ru-i kun1,et al(1.Xiamen Environ mental Monitoring Centre,Xiamen361004,China) Abstract:In order to compare bet ween rapid detection method of Defined Substrate Technology(DST)enzyme substrate technique and mul tiple-tube fermentation technique in water Fecal bacteria(Thermotoleerant coliform bacteria)detection,use科立得TM(Colilertò) and traditional method to test real water samples are included in this experiment.Results demonstrate that Defined Substrate Technology (DST)enzyme substrate technique shows equivalence with multiple-tube fermentation technique.It is suggested that Defined Substrate Technology(DST)enzyme substrate technique can be used as a standard method for water microbiological safety evaluation. Key words:Fecal bacteria(Thermotoleeran t coliform bacteria);Defined Substrate Technology(DST)enzyme substrate technique科立得TM(Colilert R o);Mul tiple-tube fermentation technique;Rapid detection 目前水中粪大肠杆菌群(耐热大肠菌群)检测方法主要有传统的滤膜法及多管发酵法,并且已经列入环保行业标准方法(HJ P T347-2007),此两种传统方法被国内环境检测部门广泛采用,但上述方法操作时间需2~5天,步骤较为繁琐,需验证试验,不能对水的卫生学状况做出快速评价,制约了其应用。且多管发酵法每毫升水样中最低检出限为2个粪大肠菌群,而固定底物酶底物法却能抑制200万个异样细菌,精确检测到1个粪大肠菌群。因此,采用快速简便且精确的检测方法 第24卷第4期2008年8月 中国环境监测 Environmental Monitoring i n China Vol.24No.4 Aug.2008