实验一 总糖和还原糖的测定

实验一总糖和还原糖的测定（3，5-二硝基水杨酸法）

171850044钱诗晨

一、实验目的

掌握还原糖和总糖的测定原理，学习用3，5-二硝基水杨酸法测定还原糖的方法。

二、实验原理

单糖和某些寡糖含有游离的醛基或酮基，有还原性，属于还原糖；而多糖和蔗糖等属于非还原性糖。利用多糖能被酸水解为单糖的性质可以通过测定水解后的单糖含量对总糖进行测定。

还原糖在碱性条件下被氧化成糖酸及其他产物，3，5-二硝基水杨酸（DNS）则被还原为红棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在540nm处一定浓度范围内还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量和总糖的含量。

三、实验器材

1.面粉

2.试管

3.吸管

4.水浴锅

5.电炉

6.紫外可见分光光度计

7.PH试纸

8.容量瓶

9.量筒、研体、三角烧瓶、玻璃漏斗

10.电子分析天平

面粉里含多糖淀粉，遇碘变蓝

四、实验试剂

1.标准葡萄糖溶液（1.0mg/ml）：准确称取干燥恒重的葡萄糖100mg，溶于蒸馏水并定容至100ml，混匀，4℃冰箱中保存备用。

2.3，5-二硝基水杨酸（DNS）试剂:将6.3gDNS和262ml2mol/L NaOH溶液，加到500ml含有185g酒石酸甲钠的热水溶液中，再加5g结晶酚和5g亚硫酸钠，搅拌溶解，冷却后加蒸馏水定容至1000ml贮于棕色瓶中备用。

3.6mol/L HCl:取250ml浓HCl(35%~38%),用蒸馏水稀释到500ml。

4.6mol/L NaOH：称取24g NaOH溶于蒸馏水并稀释至100ml。

5.碘—碘化钾溶液：称取5g碘，10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。

五、实验操作

1.葡萄糖标准溶液曲线的制作

取干净试管6支，按表7进行操作。以吸光度为纵坐标，各标准液浓度（mg/ml）为横坐标作图得标准曲线

2.样品中还原糖的提取和测定

准确称取1.0g红薯粉，加蒸馏水约10ml，在研体中磨成匀浆，转入三角烧瓶中，

并用约30ml的蒸馏水冲洗研体2~3次，洗出液也转入三角烧瓶中。与50℃水浴

中保温0.5h，不时搅拌，是还原糖浸出。将浸出液（含沉淀）转移到100ml离心

管中，于4000r/minx下离心5min，沉淀用20ml蒸馏水洗一次，搅一搅再离心，

将两次离心的上清液合并，用蒸馏水定容至100ml，混匀，作为还原糖待测液。

取1ml进行还原糖的测定。

0123456789

葡萄糖00.10.20.30.40.510.50.250.05水 1.00.90.80.70.60.500.50.750.95 DNS 2.0

水 4.0

A（520nm）0.0000.0580.1360.2530.3350.436 1.0330.4710.4200.049有色数据是红薯粉中浸出来的还原糖制备的样品，绿色数据被舍弃了

根据标准曲线，当A=1.033时，对应浓度为1.0，根据公式求得ω=；

七、计算

1.计算还原糖的百分含量

当A=0.471时，对应浓度为0.560，ω=11，2%；

当A=0.420时，对应浓度为0.490，ω=16.8%；

当A=0.049时，对应浓度为0.068，ω=13.6%

八、注意事项

1.使用离心机，一定要注意相对两个离心管的平衡。

2.稀释液倍数，可根据具体情况决定，浓度在线性范围中，有时候可超过标示倍数。

3.未知样品的条件应该与标准溶液一致