细胞计数法
细胞计数法
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
1、制备细胞悬液
对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤2（计数与计算过程）。如果计数对象为贴壁生长的细胞，首先需将培养物制备成细胞悬液。
1）、终止培养，将培养液吸出，用PBS洗培养物一次。
2）、给培养瓶内加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化1-3min 。期间在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化液。
3）、加入一定量的培养液（如果这些培养细胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。
2、计数与计算过程
1）、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。
3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。
4）、按下式计数细胞悬液的密度：
细胞密度＝（4个大正方格细胞总数/4）×稀释倍数×104个/ml
注：稀释倍数（至少乘以2，因与trypanblue等体积混合）
上图示计数的规则：表示可计数：表示不计数：
范例：
T75 monolayer culture制成10ml细胞悬浮液，取0.1ml溶液与0.1ml trypan blue混合均匀于试管中，取少许混合液加入血球计数盘，计数四大方格内之细胞数目。（其实取20ul即可）
活细胞数/方格：55，62，49，59；死细胞数/方格：5，3，4，6；细胞总数=243
平均细胞数/方格=60.75；稀释倍数=2
细胞数/ml：60.75×104×2（稀释倍数）=1.22×106
细胞数/flask（10ml）：1.22×106×10ml=12.2×106
存活率：225/243
注意事项：
1）、务必使分散成单个细胞，取样计数前，充分混匀细胞悬液。
2）、显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm2或>500个/10 mm2
时，说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。
血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber中细刻9个1mm2大正方形，其中4个角落之正方形再细刻16个小格，深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时，计数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml中之细胞数目。
存活测试之步骤为dyeexclusion，利用染料会渗入死细胞中而呈色，而活细胞因细胞膜完整，染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue染料，如果细胞不易吸收trypan blue，则用红色之Erythrosin bluish。
0.4%w/v trypan blue（GibcoBRL15250-061 ）
Erythrosin bluish（SigmaE-9259）
细胞计数及活力测定
一、原理
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。
在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。
用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。
二、仪器、用品与试剂
1、仪器与用品：普通显微镜、血球计数板、试管、吸管、酶标仪（或分光光度计）
2、试剂：0.4％台盼兰，0.5％四甲基偶氮唑盐（MTT）、酸化异丙醇
3、材料：细胞悬液
三、操作步骤
（一）细胞计数
1、将血球计数板及盖片用擦试干净，并将盖片盖在计数板上。
2、将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间。
3、静置3分钟。
4、镜下观察，计算计数板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按下式计算：
细胞数/ml＝4大格细胞总数/ 4×稀释倍数×10-4
注意：镜下偶见由两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团占10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。
（二）细胞活力
1、将细胞悬液以0.5ml加入试管中。（其实取20ul即可）
2、加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。
死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞，活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。
活力测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液对原细胞悬液的加倍稀释作用。（三）MTT法测细胞相对数和相对活力
活细胞中的琥珀酸脱氢酶可使MTT分解产生兰色结晶状甲赞颗粒积于细胞内和细胞周围。其量与细胞数呈正比，也与细胞活力呈正比。
l、细胞悬液以1000rpm离心10分钟，弃上清液。
2、沉淀加入0.5－1ml MTT，吹打成悬液。
3、37℃下保温2小时。
4、加入4—5 ml酸化异丙醇（定容）。打匀。
5、1000 rpm离心，取上清液酶标仪或分光光度计570nm比色，酸化异丙醇调零点。
注意：MTT法只能测定细胞相对数和相对活力，不能测定细胞绝对数。
附：1、0.4%台盼兰染液配制：
台盼兰0.4克加双蒸水至100 ml。
2、MTT配制：
MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的基础液中。4℃下保存。
3、酸化异丙醇配制：
异丙醇中加入HCl使最终达0.04mol/L。
微生物的计数——血球计数板法
微生物得计数——血球计数板法 【摘要】测定微生物细胞数量得方法很多，有分光光度法、显微直接计数法与平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但就是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小.?显微计数法适用于各种含单细胞菌体得纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质，常不易分辨.菌体较大得酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(PetｒｏｆHausｓｅr)细菌计数板。两种计数板得原理与部件相同，只就是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜，计数板下部得细菌不易瞧清.本实验采用血球计数板法，主要目得就是了解血球计数板法得构造与使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目得与要求 １、了解微生物计数常用得三种方法：分光光度法;平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板得构造与使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，就是一种常用得微生物计数方法。此法得优点就是直观、快速.将经过适当稀释得菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间得计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室得容积就是一定得（０、1mｍ2），所以可以根据在显微镜下观察到得微生物数目来换算成单位体积内得微生物总数目。由于此法计得得就是活菌体与死菌体得总与，故又称为总菌计数法. 血球计数板,通常就是一块特制得载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间得平台又被一短横槽隔成两半，每一边得平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分九个大方格,中间得大方格即为计数室，微生物得计数就在计数室中进行。 计数室得刻度一般有两种规格,一种就是一个大方格分成１６个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种就是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论就是哪种规格得计数板,每一个大方格中
生理实验报告2红细胞计数
红细胞计数 一、实验目的： 学习、掌握应用稀释法计数红细胞的方法 二、实验原理： 1．血液中血细胞数很多，直接计数有一定难度，需要将血液稀释到一定倍数，然后用血细胞计数板计数。 2．在显微镜下计数一定容积的稀释血液中的红细胞，之后需要将其换算成每升血液中所含的红细胞数。 三、实验用品： 器具：显微镜、血细胞计数板、小试管、采血管、1mL和5mL移液管、玻璃棒、刺血针、干棉球 试剂：哺乳动物红细胞稀释液、蒸馏水、75%酒精 四、实验方法与步骤： 1．采血 2．稀释：用移液管取10微升血液，加至2mL红细胞稀释液中3．充池：将盖玻片的一边与计数池的纵线末端接触，然后缓慢放下，使盖玻片平放在计数室两侧的隆起上，醮少许红细胞稀释液靠近盖玻片乾元，靠毛细管作用将稀释液冲入计数池，于高倍镜下观察红细胞分布情况 4．静置计数板2~3min 待经红细胞下沉后，大方格四角以及中央取5个4×4中方格红细胞数，用高倍镜或低倍镜计数
5．计数，计算 注意事项： 1.保证计数板和盖玻片清洁；以防影响计数结果的准确性。 2.一次完成充池，如充池过少、过多、有气泡或出现任何碎片，应拭净计数板及盖玻片后重新操作。 3.充池后平放计数板，不能移动盖玻片。 4.计数板中细胞如果严重分布不均，应重新充池计数。 5.凡压线的细胞应按照数上不数下、数左不数右的原则，避免漏数或重复计数。 五、实验结果观察与记录以及分析： 1．结果计算：（53+113+76+60+64）/5=73.2 每16格平均73.2个红细胞,红细胞数： 73.2×25×200×10×1000000=3.66×10的12次方个／升 2．显微镜下图片 ①空白计数板： 低倍镜：
血细胞计数板计算方法
血细胞计数板计算方法 血细胞可以说是人类身体的一种微型结构，而且细胞计数吧，通常是用来计算血细胞数量的一种生物学工具。血细胞计数板计算公方法是怎样的呢？如果你对这个问题感兴趣，不妨跟小编一起来研究一下吧。 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的菌数（即80个小格）。 6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。 7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。 通过上文的介绍，你对血细胞计数板的计算方法是否增加了了解呢？血细胞是存在于我们人体血液中的一种重要组成成分，对人类的健康来说具有举足轻重的影响。而医生通过测量你的血细胞分布状况和数量，对于判断身体的病灶具有重大的作用。因此我们都应该对血细胞的计算方法有所了解。
血球计数法计数原理
一、血球计数板的使用原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。 计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由 16×25=25×16=400个小方格组成。 1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算： 酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数
细胞计数方法细胞计数板法
细胞计数方法——-－-—细胞计数板法 实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。 具体操作: １. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。 ２、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置３miｎ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。 3。计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。然后按公式计算: 细胞数/ｍL=四大格细胞总数/4×1０个／ml (注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有１6 个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数,取平均值m,m×1６即每个格得平均值。所以,细胞密度=m×1６×10个／ml) 说明:公式中除以4,因为计数了４个大格得细胞数。 公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为: １。0mm(长)×1.0mm(宽)×０。１mm(高)=0.1mm 而1ml=1０00ul＝１0０0ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10% 以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。) =========＝===============＝==＝=＝=＝＝===＝=＝＝====＝== 细胞计数板得使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区。计数区得刻度有两种:一种就是计数区分为１６个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成２5个小方格;另一种就是一个计数区分成２5个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成1６个小方格。但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成、
细胞计数实验原理
实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液） 细胞计数与存活测试 1. 原理： 1.1. 计算细胞数目可用血球计数盘或是Coulter counter 粒子计数器自动计数。 1.2. 血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber 中细刻9 个1 mm2 大正方形， 其中4 个角落之正方形再细刻16 个小格，深度均为0.1 mm。当chamber 上方 盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1 mm2 x 0.1 mm=1.0 x 10-4 ml。使用时，计 数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml 中之细胞 数目。 细胞计数要点： ①进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于1×107 L-1，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中。 ②要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。 ③取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确。 ④数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照1个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。 ⑤操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。 初学者易犯的错误：计数前未将待测悬液吹打均匀。滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。
血球计数板使用方法
血球计数板介绍 用优质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm.容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。 使用方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的 计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3个。 6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。 7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。 计数公式 1、16格×25格的血球计数板计算公式： 细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数 1、25格×16格的血球计数板计算公式： 细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数
细胞计数方法 细胞计数板法
细胞计数方法------细胞计数板法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml (注：当细胞很多时，可在四个大格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后对选定的小格计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个大格的平均值。所以，细胞密度=m×16×104个/ml) 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。） ================================================ 细胞计数板的使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
微生物大小与数量的测定实验报告
山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
微生物的计数_血球计数板法
微生物的计数——血球计数板法 【摘要】测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目的与要求 1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板的构造和使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方
细胞计数
细胞计数 一、实验目的 a)1、掌握血球计数板的正确使用方法及技巧。 b)2、掌握用血球计数板计算细胞浓度的原理及方法。 二、实验原理 a)计数室容积一定，只要将适宜浓度的待测细胞悬液加入计数室并在显微 镜下计数就可算出单位体积内的细胞总数目。 b)血球计数板的计数室结构：大小：3.0mm×3.0mm。分区：9个边长1.0mm 的正方形区；其中四周和中央区为计数区，称之为一个大方格。中央大 方格用双线围成中方格；中方格内再用单线划分成小方格。四周大方格 由单线围成中方格。 c)血球计数板的规格：第一种：中间大方格组成为16×25（16个中方格， 每个中方格内25个小方格）＝400。第二种：中间大方格组成为25×16 （25个中方格，每个中方格内16个小方格）＝400 d)计数板上标识数目含义：1/400mm2：中间大方格共有400个小方格，每 小格面积为1/400mm2。0.1mm：计数板底部到盖玻片的高度。 三、实验仪器及试剂 a)材料：1/1000稀释的抗凝鸡血或绵羊血 b)试剂:肝素钠溶液,0.9%氯化钠 c)用品：普通显微镜、血球计数板、计数用盖玻片、10μL枪及枪头、酒 精棉球、吸水纸等。 四、实验步骤 a)清洁计数板及盖玻片：先用水洗，再用（70%）酒精棉球擦 b)镜检计数室：加盖片一起观察是否干净、格子是否清晰 c)样品浓度检查：加样显微观察，以每小格不超过4~5个细胞为宜，否则
应进行稀释 d)样品稀释：等渗盐水 e)加样：先加盖玻片，再加样；样加在盖玻片边缘，毛细作用吸入 f)选择计数区域：2个或4个周围大方格或全部格子。 g)计数：压线细胞不重复计数 h)计算原始细胞样品浓度：个/mL或个/L i)清洗计数板 五、实验结果 六、实验分析 经过两次计数的统计及平均，最后得到的菌液浓度为3.85*10^6个每毫升。 七、实验注意事项 a)准确稀释及混合细胞样品。 b)计数板要清洁。 c)加样量要准确。 d)计数要准确。每个样品至少计数2次，结果取其平均值；2次计数误差 不应大于10%。 e)压线细胞不能重复计数。
细胞数的测定(血球计数板的使用方法)
、目的与要求了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。 二、原理 用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的厚载玻 片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分为16个小方格（即25X 16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，每一个大方格边长为 1 mm则每一个大方格的面积为 1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片 与载玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容积为0.1 mm3 实磴圈-石血球计弦板杓构jfi 三、血球计数板的使用方法 （一）菌悬液的制备为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5?10个酵母为 宜，可采用10倍系列稀释法。 （二）加菌悬液样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。由盖玻 片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。静置5-10分钟。 （三）显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。当芽抱菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。 （四）计数时若使用刻度为25X 16 （大格）的计数板，则数四角的4个大格（即100小格）内的菌数。如用刻 细胞数的测定 D申決甌裕牧我
红白细胞计数实验报告
《实验诊断学》实验报告 实验一红细胞、白细胞计数 实验原理 一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后，充入血细胞计数池中，于显微镜下计数一定体积内的红细胞数。用稀醋酸液将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池中，于显微镜下计数一定体积内的白细胞数。根据稀释倍数和计数的容积，换算求得每升血液中的红细胞数量以及白细胞数量。 实验内容与步骤 实验材料： 显微镜、微量吸管、毛细吸管、改良Neubauer计数板、盖玻片、小试管、RBC稀释液、WBC 稀释液、正常人的全血、纱布 实验步骤： 1、红细胞计数准备： 加稀释液，用微量吸管吸取RBC稀释液蒸馏水2.0 ml加到小试管内。 取血，毛细吸管取血10 μl。 用纱布擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2-3次，立即混匀。 2、白细胞计数准备： WBC稀释液: 冰醋酸3.0 mL（破坏红细胞） 蒸馏水97.0 mL 亚甲蓝（染色） 小试管加WBC稀释液0.38 mL。 采血，微量吸管取血20 μL。 擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2-3次，立即混匀。 充池、观察： 将计数板及盖玻片檫净，将盖玻片覆盖在计数板上。 用滴管吸取混均的红细胞悬液充入上方计数室，静置3-5 min，高倍镜下计数；白细胞悬液充入下方计数室，静置2-3 min，低倍镜下计数。 观察计数，红细胞，高倍镜下计数中央大方格内四角的4个中方格和正中的1个中方格的红细胞，压线细胞的计数按照数上不数下，数左不数右的原则。计数时按照弓形的计数方式，以免漏数或多数。 用低倍镜计数出计数池内四角大方格中的白细胞总数。 实验结果 1、红细胞计数实验结果： 5个中方格内RBC的计数／个=24+27+32+22+25 根据计算公式： RBC/L＝5个中方格内RBC数×5×10×200×106 ＝5个中方格内RBC数/100×1012 推算得出RBC：1.3×1012／L 正常人群的红细胞计数参考区间： 人群红细胞计数（×1012／L）
手把手教你做细胞计数实验
手把手教你做细胞计数实验 实验用品 0.4% 台盼蓝溶液、无水乙醇或 95% 乙醇溶液、脱脂棉、普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。 实验原理 在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。 细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。 细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状 况。 实验内容与方法 （一）制备动物细胞悬液 将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。 （二）细胞计数 1.计数板处理 用无水乙醇或 95% 乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。 2.染色
用滴管吸取 0.4% 台盼蓝染液，按1∶1 比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10×10 倍）观察计数。 3.计数方法 按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分 16 个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%（图 7-1）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。
红细胞计数、白细胞计数实验报告
一.实验原理 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液注入血红细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。 二.实验内容与步骤 1、红细胞计数 （1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板 （2）试剂：RBC稀释液①Hayem 稀释液：NaCl, Na2SO4，HgCl2 ②枸橼酸钠甲醛盐水溶液:枸橼酸钠，甲醛，NaCl ③生理盐水或含1%甲醛的生理盐水：仅在急诊或无上述两种稀释液时临时使用 （3）标本：外周血或抗凝血（EDTA抗凝) （4）操作步骤：①小试管加RBC稀释液2.0 ml。 ②采血，取血10 μl。 ③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立 即混匀。 ④混匀后充入计数室，静置3~5 min，高倍镜下计数（用高 倍镜依次计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细
胞数。） 2、白细胞计数 （1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板 （2）试剂：WBC稀释液：冰醋酸3.0 mL（破坏红细胞）；蒸馏水97.0 mL；亚甲蓝（染色） （3）标本：新鲜全血或末稍血 （4）操作步骤：①小试管加WBC稀释液0.38 mL。 ②采血，微量吸管取血20 μL。 ③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立 即混匀。 ④混匀后充入计数室，静置2~3 min，低倍镜下计数（用低 倍镜计数出计数池内四角大方格中的白细胞总数。） 三.实验结果 表一红细胞计数表 RBC/L＝405/100×1012＝4.05×1012／L 表二白细胞计数表 WBC/L ＝112/20×109＝5.6×109／L 实验结果：RBC：4.05×1012／L WBC：5.6×109／L 四.讨论 1、从实验结果与正常范围比较，实验结果没有超出正常范围，提示被采血
细胞计数方法-细胞计数板法
细胞计数方法--—--—细胞计数板法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。 具体操作: 1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板． 2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3、计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。然后按公式计算: 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×１0个/ml （注：当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有16 个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数，取平均值m,ｍ×16即每个格得平均值。所以,细胞密度=m×１6×10个/mｌ) 说明:公式中除以4,因为计数了4个大格得细胞数。 公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为： 1、0mm(长）×1、0mｍ(宽）×0、1mｍ(高)=0、1mm 而1ml＝1000ｕl=1０００ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10% 以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。) ========＝==＝＝=====＝===＝=＝＝＝=====＝======＝====＝=== 细胞计数板得使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区.计数区得刻度有两种：一种就是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开）,而每个大方格又分成2５个小方格;另一种就是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
实验五、微生物的计数——血球计数板法
实验五、微生物的计数——血球计数板法测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目的与要求 1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板的构造和使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方
血球计数板的使用(有图指导)
血球计数板的构造和使用 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3. 计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.
血球计数板的使用 以计数酵母菌为例 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数. (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央计数室上加盖专用的厚玻片. (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内. (5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.
(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数. 3.计算公式 (1)16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.
实验报告-细胞复苏及细胞鉴别与计数
细胞生物学实验报告 实验二细胞复苏及细胞鉴别与计数 1引言 1.1 实验目的 1. 掌握无菌操作技术。掌握细胞复苏技术。 2. 掌握用血球计数板进行细胞计数的方法。 3. 学习死活细胞鉴别的方法。 4. 了解细胞污染的判定方法。 5. 了解细胞形态的多样性。 1.2 实验原理 1.细胞复苏：以一定的复温速率将冻存的培养物恢复到常温的过程，复苏时要快速融化，必须将冻存在-196℃液氮中的细胞在1分钟内快速融化至37℃，使细胞迅速通过最易受损的温度区间-5-0℃，使冻存时细胞外的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。 2.细胞计数：采用血细胞计数板法，血细胞计数板由一块长约7.5cm，宽 3.5cm的厚玻璃制成，平台中部上下各有一个计数室，每个计数室分9大格，每格边长1mm，面积1mm2，盖上盖玻片后体积为0.1mm3。四角的大格划分为16个中方格，一般用作白细胞、血小板组织培养的细胞计数。中央的大方格则由双线划分为25个中方格，每个中方格面积为0.04mm2，盖上盖玻片后体积为0.004mm3，每个中方格又分成16个小方格，用于红细胞、微生物细胞的计数。细胞计数原则：细胞压线则计上不计下，计左不计右，镜下计数，有时偶尔有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。对每个试样重复计数3次，取其算数平均值。 2实验仪器、试剂及操作步骤 2.1 实验仪器 超净工作台、倒置相差显微镜、CO2培养箱、酒精灯、酒精棉球、酒精喷壶、试管架、滴管筒 （头）、吸管筒（头）、废液缸、移液器、枪头等 2.2 实验试剂 DMEM培养基、血清、抗生素等 2.3 实验步骤 细胞复苏： 1.实验室和超净工作台消毒，紫外照射20Min左右。 2.穿好实验服，进无菌室前穿鞋套、洗手。 3.关闭紫外灯，开日光灯和开风机，超净工作台台面应整洁，用75%酒精擦双手消毒，擦拭台面。 4.自液氮中取出冷冻管，检查盖子是否旋紧，立即投入40℃水浴锅中解冻，轻摇冷冻管使其在1分钟内 全部融化。 5.正确摆放超净台内的实验用品，点燃酒精灯，准备一次性滴管和移液管。 6.将冻存管放入离心机中800转/分钟离心10分钟。 7.小心将冻存管移入超净台中，用75％的酒精棉球擦拭冻存管外部，打开冻存管用巴氏吸管弃上清， 加1mL的DMEM培养基吹打细胞使之均匀，取90uL细胞悬液和10uL台盼蓝染液于小指管中进行活细胞染色计数。 8.剩余细胞悬液吸至一个细胞培养瓶中，在细胞培养瓶中补加4mL的DMEM培养基，将盖子拧好稍回转，
细胞培养之细胞计数
细胞培养之细胞计数 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 一.准备工作： 取一瓶传代的细胞，按照《传代细胞培养（消化法）》中的传代方法繁殖细胞，待长成单层后以被使用. 二.细胞悬液制备： 用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后，加入培养液（或Hanks液或PBS 等平衡盐溶液），吹打制成待测细胞悬液。 三.细胞计数： 1.取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上. 2.制备计数用的细胞悬液：用吸管吸5滴细胞悬液到一离心管中，加入5滴台盼蓝染液（0.4％）或苯胺黑。活细胞不会被染色，加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。 3.将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 4.统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的四个大铬（每个大格含有16个中铬）中没有被染液染上色的细胞数目。 5.计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度： 细胞悬液的细胞数/ml＝（四个大格子细胞数/4)×2×104 说明：/4因为计数了4个大格的细胞数；×2因细胞悬液：染液=1：1稀释；×104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm×1.0mm×0.1mm＝0.1mm3而 1ml＝1000mm3 四.细胞计数要点： 1.进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中； 2.要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。 3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确； 4.数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。 5. 操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。 五.初学者易犯的错误： 1. 计数前未将待测悬液吹打均匀。 2. 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。 3. 滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。 六.本实验特殊试剂的配制：
血液检查实验报告doc
血液检查实验报告 篇一：血型测定实验报告 血型测定实验报告 一、实验目的： 学习ABO型血的鉴定原理和方法。观察红细胞凝集现象，了解抗原抗体反应。 二、实验原理： 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A 和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A 型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A 或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1）三消毒采血针；载玻片；消毒棉签；抗A、抗B血型定型试剂；75%乙醇；受检者血液四、实验步骤 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml 生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血
时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5） 10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。五、实验结果： 我们组本次实验中，载玻片1左边为抗B型定型试剂，呈淡红色，未发生凝聚；右边为抗A型定型试剂，血液在试剂中凝结，试剂较清亮。该受试者1血型为A。 载玻片2左右边的试剂内的血液皆不出现凝结现象，受试者2为O型血。 六、实验讨论： 1.实验中要分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌，以免造成抗体试剂不纯。 2.实验中我们组发现15分钟后没有出现血凝现象，可用牙签轻轻搅拌一会儿，有些载玻片上就不现了血块，但有些经搅拌后仍不出现血凝现象，表示确实不含相应的抗原。篇二：血糖的测定实验报告