体内药分终极思考题

一、体内药分与普通药分的异同（目的、方法、性质）

①分析目的：同：二者均以药物应用的安全性和有效性为目的

异：普通：以控制药品质量为目的

体内：以考察体内药物浓度、状态和过程为目的

②分析方法：a、灵敏度：普通：一般可通过增加样品量来提高灵敏度，化学分析法、仪器

分析法均可

体内：一般不能通过增加样品量来提高灵敏度，且样品中血浓极

低，对方法灵敏度要求较高，定量测定只能用仪器分析法 b、选择性：普通：仅考虑原料及制剂中有关物质、制剂中的辅料、复方及中

药材中共有组分干扰

体内：除考虑干扰成分外，还有内源性成分、代谢物的干扰，选

择性要求很高

③样品的性质：普通：正常情况下，样品中药物的化学结构、存在状态、含量等一般均保持

恒定

生物样品：化学结构发生变化受代谢酶的作用，会生成代谢物

存在状态发生变化可与生物大分子不同程度结合

药物浓度发生变化药浓动态变化，波动范围3个数量级以上

二、选择固相萃取条件的一般原则是什么？为了提高萃取回收率和样品的净化程度，在固相萃取的四个基本步骤中应注意哪些问题？

一般原则：固相与被测组分应具有相似的极性。含有被测组分的样品应使用极性相反的溶剂溶解后上柱，冲洗改用与被测组分极性相似的溶剂冲洗。

应注意的问题：

1活化：目的是创造一个易于保留组分的，并能除去柱内有关杂质的固相环境a：初溶剂（较强溶剂）用于湿润、溶胀及净化固定相

b：中溶剂（较弱溶剂）用于建立一个合适的固定相环境，有利于药物保留

②上样：将样品加入到固相柱，并迫使样品溶剂通过固定相的过程为保留待测组分，上样溶

剂必须较弱，否则溶剂将不被保留，结果回收率会很低，这一现象称“穿漏”。

③淋洗：洗脱不需要的样品（弱保留杂质），淋洗溶剂的洗脱强度应略强于或等于上样溶剂。

（以使能洗脱样品中的许多干扰成分，但不能强到能洗脱任意一种待测组分的强度）①待测组分洗脱：洗脱的强度最好是仅能将待测组分洗脱，而样品中的某些强保留组分不

被洗脱下来，起到纯化浓集组分的目的。

三、评价以下实验室常用样品预处理方法的优劣及适用情况：

⑴血浆样品经沉淀蛋白后取上清液进行分析；⑵血浆样品经LLE后进行分析

答案：⑴当药物或其代谢物浓度较高（>20mg/ml），干扰杂质较少，测定要求不很高时（如临床监测），只需简单的分离手续即可。如⑴法，方便简单，易操作，但使药物浓度降低，残余蛋白影响检测系统，可溶性杂质可能干扰测定。

分析ng/ml级以下水平，尤其是当药物与代谢物与内源性成分紧密相关时，测定前需反复提取。

⑵LLE优点：①方法简单、快速并经济适用；②可将被测组分自大量内源性物质中选择性萃取分离；③可将萃取液挥发，使被测组分浓集，以增加分析方法的灵敏度；④可一次进行多量样品的萃取。

LLE缺点：①萃取步骤复杂、速度较慢；②可能产生乳化现象，萃取回收率不够高；③对易挥发易分解组分不适用；④可能富集萃取溶剂中的杂质，且萃取溶剂大多有毒易燃，易污染环境。

血浆样品经LLE净化可减少内源性杂质的干扰，操作简便快捷，浓集组分后可增加测定灵敏度。

四、在内标法中，可适当降低操作精度的步骤有哪些？请以LLE法和SPE法分别说明。

在加入内标之后，萃取溶剂的加入就不必使用精密的移液管，可采用简单的玻璃注射器快速加入；萃取液也不需精密、定量转移，而采取各管“尽量转移”方式，可用一般毛细吸管或其他非定量转移液体的工具；其他一些预处理操作都可适当简化。

五、在UV法中，生物样品必须满足哪些条件即可直接测定（仅去蛋白处理，不进行萃取分离）？

①样品中的内源性杂质在测定波长处应不干扰药物的测定，或其干扰程度可减小至忽略不计；②不应存在药物代谢物的干扰；③药物在体液样品中有较高的浓度。

六、用于体内药物分析方法验证的主要效能指标有哪些？请简述各项效能指标的含义

①准确度：用质控样品的相对偏差及相对回收率进行衡量②精密度：用质控样品的批内与批间RSD衡量③灵敏度：用定量下限（LLOQ）衡量④特异性：以分析方法是否准确、专一地测定分析⑤稳定性：考察生物样品中药浓在各种存放条件下的变异情况⑥提取回收率：是评价萃取方案优劣的指标之一⑦线性关系及线性范围：表示药物浓度与响应值的相关性及线性关系⑧测定中的质量控制：测定数据带入当日标准曲线求得药物浓度，并随行平行测定高、中、

低3个浓度的质控样品

七、采用柱切换技术分析生物样品时应注意哪些问题？

柱切换技术是采用切换阀连接两根或两根以上相同或不同分离机理的色谱柱，通过使用不同强度的流动相并改变其流向，在前一根色谱柱（预柱）完成待测组分与干扰大分子（蛋白质等）的分离，达到纯化与浓集的目的，在随后的色谱柱（分析柱）完成待测组分的选择性分离。注意的问题：①体液样品在用前需要经过离心或过滤除去颗粒性杂质，然后再经过简单的预处理；②采用0.2mol/L的醋酸作为预处理柱的再生清洗液，可使预柱在一定程度上延缓柱压的升高；③预处理流动相应以水为主，有机溶剂的比例较低（弱洗脱能力，有利于蛋白质及极性内源性成分的洗脱）；④预柱以1-5cm的短柱为宜；⑤预柱的填料的粒径应适宜；

⑥体液样品直接进样时，应注意提高高蛋白结合率的药物的回收率：a.选择长链烃的填料，

，b.适当降低流速；⑨住切换时间的设定以高浓度样品中待测组分被全部切入柱的最如C

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短时间为宜。

八、免疫反应所需的基本试剂有哪些？在免疫反应体系中哪些组分能产生检测信号？该信号与定量分析有何关系？

包括抗体、标记药物与非标记药物，标记药物能产生检测信号，非标记药物在标准曲线制备时是药物标准品，在样品中则为被测药物，它用于建立被测药物量（浓度）与响应量之间的函数关系，供建立标准曲线，是样品中药物浓度计算的依据。

九、在非均相免疫分析中为何要进行游离型与结合型药物的分离？有哪些常用的分离技术？为减少IA中的交叉免疫干扰，可采用哪些措施？

某些免疫分析待抗原-抗体反应达平衡后，需要将与抗体结合的标记药物（B）同游离的标记药物（F）分开，才能测定B和F各自的浓度（信号强度），在分离之前，检测仪器只能测得二者的总浓度。

分离技术有：沉淀法、吸附法、固体法与双抗体法

可采取的措施：

1）当药物与载体蛋白相联结时，应使药物与蛋白相连结的部位尽量远离药物分子上的抗原决定簇，让抗原决定簇充分暴露而不被掩盖，使远离连接部位的抗原决定

簇充分发挥抗原特异性作用，提高抗体的专一性，减少交叉免疫干扰。

2）应用多克隆抗体时须注意不同批试剂盒中抗体质量的差异

3）单克隆抗体是结构相同的均质抗体，产生的交叉免疫程度很低

10.简述毒物的分类及毒物分析的基本特点；简述体内及体外检材的定义、来源、特点及其

检验结果对法医学鉴定的意义。分类：1、合成药毒物

2、天然药毒物

3、毒品

4、杀虫剂

5、除草剂

6、杀鼠剂

7、气体毒物

8、挥发性毒物

9、金属毒物

10、水溶性无机毒物

毒物分析的基本特点：

1、分析目的难于事先确定

2、检验材料特别

3、分析方法的应变性

4、肩负法律责任

5、涉及范围的多学科性

11.在药物中毒（口服）的临床抢救中，为尽快判断致毒药物的类别和含量，应按何种方式（或顺序）进行采样？

1.剩余药物：中毒者服剩的药片、药物残渣连同药瓶及器皿一起送检，这是很有价值的检

材

2.胃内容物：其中含有未吸收的药物，且一般浓度都较高，故是最适宜的检材

3.洗胃液：洗胃液比胃内容物药浓度低些，但也含有原来的药物

4.尿液：大部分药物中毒主要经肾排泄，因此对中毒病人应该收集尿液。由于尿中不含蛋

白质，在提取过程中较方便，因此是较好检材。

5.血液：值得注意的是，严重中毒者血中药物含量可用一般方法检出，但对轻微中毒或服

用时间较长者，血药浓度较低，采用一般分析方法很难测出。

12.用HPLC法检验乌头中毒时，如果检材组分的保留值与对照品的不同，但紫外吸收光谱相似，能否以此作为检出乌头的依据？为什么？

由于乌头的品种多，且成分比较复杂，加上水解产物，色谱峰一般比较多，当色谱图中有紫外吸收与对照品相同但保留值有差异时，无论是下肯定还是否定结论都需特别慎重。

13.采用色谱法检测鸦片时，一般会出现哪些组分的斑点或峰？其中有海洛因吗？为什么？检测鸦片时，除吗啡斑点外一般还应有可待因、蒂巴因、那可汀、罂粟碱等斑点，但无海洛因斑点。

因为可待因、罂粟碱等均可从鸦片中直接提取得到，而海洛因则是由鸦片的提取物吗啡二乙酰化得到的二乙酰吗啡，即在鸦片中并不含有天然的海洛因。

14. 如何选择海洛因检验的体内检材？在检验中应注意哪些问题？

1.尿：最常用的筛查用检材，取样方便，操作简单；吸食海洛因后应注意检测时限。尿中

O6—单乙酰吗啡一般在2—4小时内达到高峰，6小时后，大多吸食者的尿中已检测不出。

2.血：常用检材，取样、保存不太方便；代谢情况与尿相似，应注意检测时限。

3.毛发：具采样方便、药物稳定、检材易保存、可检测时限长、不易掺假等其他生物检材

不具备的一些优点；不作为常规检材，一般用于以下几种情况：

1)尿样已超过检测时限，但需了解近期有无毒品摄入行为。

2)尿样呈阳性，但需确认是一次性摄入还是长期摄入。

3)了解戒毒后是否复吸、就业检测等。

15. 在法医毒物分析中，对照检材有何作用？

对照检材是毒物分析工作中需要进行对照实验时采取的检材。这类检材一般是在采集检验材料时采取的相关检材。例如，采集与事件有关药毒物的相同样品用作对照，在被可疑毒物污染的各类衣物用品上猜忌其未被污染的部分用作对比物，采集埋尸坑中未受腐尸浸渍的棺木、殓物、泥土，选择健康动物或非中毒死亡的人体组织等。