植物组织中可溶性糖与淀粉的测定
植物组织中可溶性糖与
淀粉的测定
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植物组织中可溶性糖与淀粉的测定
一、蒽酮法测定可溶性糖
【仪器与用具】
分光光度计；电炉；铝锅；20ml 刻度试管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；记号笔；吸水纸适量。
【试剂】
1．蒽酮乙酸乙酯试剂：取分析纯蒽酮1g ，溶于50ml 乙酸乙酯中，贮于棕色瓶中，在黑暗中可保存数星期，如有结晶析出，可微热溶解。
2．浓硫酸（比重）。 【方法】
1．标准曲线的制作
取20ml 刻度试管11支，从0～10分别编号，按表24-1加入溶液和水。
表1 各试管加溶液和水的量
然后按顺序向试管内加入1ml 9%苯酚溶液，摇匀，再从管液正面快速加入5ml 浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8ml ，在恒温下放置30min ，显色。然后以空白为参比，在485nm 波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
按表1加入标准的蔗糖溶液，然后按顺序向试管中加入蒽酮乙酸乙酯试剂和5ml 浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，逐管均准确保温1min ，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630nm 波长下测其光密度，以光密度为纵坐标，以糖含量为横坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。
2．可溶性糖的提取
取新鲜植物叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取～0.30g ，共3份，或干材料。分别放入3支刻度试管中，加入5～10ml 蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min （提取2次），提取液过滤入25ml 容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
3．显色测定 吸取样品提取液于20ml 刻度试管中（重复2次），加蒸馏水，以下步骤与标准曲线测定相同，测定样品的光密度。
4．计算可溶性糖的含量
可溶性糖含量(mg/g)=3
10???
W n a V C
式中 C －标准方程求得糖量(μg)； a －吸取样品液体积(ml)；
V－提取液量(ml)；
n －稀释倍数；
W－组织重量（g）。
四、淀粉含量的测定
【仪器与用具】
电子天平；容量瓶：100ml×4，50ml×2；漏斗；小试管若干支；电炉；刻度吸管×1，×3，5ml×4；分光光度计；记号笔。
【试剂】
（1）浓硫酸（比重）；
（2）L HClO
4
；
（3）2%蒽酮试剂：同蒽酮法（或9%苯酚，同方法一）；
（4）淀粉标准液：准确称取100mg纯淀粉，放入100ml容量瓶中，加60～70ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸，冷却后加蒸馏水稀释至刻度，则每ml含淀粉1mg，吸取此液，加蒸馏水稀释至50ml，即为每ml含淀粉100μg的标准液。
【方法】
1．标准曲线制作
取小试管11支从0～10编号，按表2加入溶液和蒸馏水。
以下步骤按苯酚法或蒽酮法均可，绘制相应的标准曲线。
表2 各试管加入标准液和蒸馏水量
2．样品提取
将提取可溶性糖以后的残渣，移入50ml容量瓶中，加20ml热蒸馏水，放入沸水浴中煮沸15min，再加入L高氯酸2ml提取15min，冷却后，混匀，用滤纸过滤，并用蒸馏水定容（或以2500r/min离心10min）。
3．测定可采用苯酚法或蒽酮显色法测定。
按下式计算淀粉的含量。淀粉水解时，在单糖残基上加了1分子水，因而计算时所得的糖量乘以才为扣除加入水量后的实际淀粉含量。
淀粉含量（%）=
100
106
?
?
?
W
a
V
C
式中 C－标准曲线查得的淀粉含量（μg）；
V－提取液总量（ml）；
a－显色时取液量（ml）；
W－样品重（g）。
注：淀粉水解完全度试验样品测定中可同时作1份用于淀粉水解完全度检验的样品，在酸解过滤后，将其残渣加上2ml水，搅拌均匀，吸2滴于白瓷-KI溶液，显微镜下观察，若出现紫蓝色颗粒，证明水解不完盘上，加2滴I
2
全，其正式测试样品需再加高氯酸水解，直至不出现蓝紫色为止。