分光光度计基本原理

分光光度计基本原理
分光光度计基本原理

分光光度计基本原理

分光光度计主要用于反射和透射测量。

分三种光源:

S偏振光、P偏振光和自然光。

现有设备7xx(2xx日立U

4100、1xxJACSO-V

650、1xxJACSO-V

570、2xxKT

1100、1台瞬间7700)主要由是由分光光度计和电脑组成,由电脑程序驱动。

1基本部件

1.1光源:

用于提供足够强度和稳定的连续光谱。分光光度计中常用的光源有热辐射光源和气体放电光源两类。

热辐射光源用于可见光区,如钨丝灯和卤钨灯;气体放电光源用于紫外光区,如氢灯和氘灯。钨灯和碘钨灯可使用的范围在340 -- 2500 nm。氢灯和氘灯。

它们可在180 -- 375 nm范围内产生连续光源。

紫外—可见分光光度计通常都配有可见和紫外两种光源。

1.2单色器:

是从连续光谱中获得所需单色光的装置。

(1)入射狭缝

(2)准直镜(透镜或凹面反射镜),它使入射光束变为平行光束。

(3)色散元件,棱镜或光栅,它使不同波长的入射光色散开来。

(4)聚焦透镜或聚焦凹面反射镜聚焦,它使不同波长的光聚焦在焦面的不同位置。

(5)出射狭缝。

1.3积分球:

它主要用途是测定光源发出的总光通量。它的制造:

首先在球内壁上涂一层腻子,作为底层;然后喷点白漆,作为中间层;最后喷一层白涂料(硫酸钡或氧化镁)作为表层。

1.4检测器:

检测器的作用是检测光信号。常用的检测器有光电管和光电倍增管。

1.5电脑,就是微处理机。一方面可对分光光度计进行操作控制,另一方面可进行数据处理。

2、先用3xx光度计的特点

U4100的

V650能测位相

3、日常测量

3.1改参数

1.光源要求(S.P.自然光)

2、扫描速度

3、狭缝

3.2基本的步骤

3.3设备测量种类

U4100测量:

合色棱镜(成品、PL、2P)等

V650:单层,小DVD,带位相的零件,AR的反射测量等

4.测量的原理,影响准确性的因素

4.1xx分光光度计V650

光源样品xx积分球和光电探测器

4.2xx分光光度计U4100

光源样品xx

积分球和

光电探测器

参比池

它的优点:

光电传感器就可以交替探测到经过样品的探测光束的强度与参考光束的光强度,然后将两束光强信号进行相除,就可以得到样品的透过率。它可以降低光源稳定性对光谱测试精度的影响。

测量的原则:

入射光轴重合,出射光轴重合,难在后着。

商用的光谱仪都有很好的性能,但是如果操作测试不当,就会获得错误的光谱测试结果。主要影响准确性的因素:

透射因素:

1、测量样品口径的影响

在测量中应保证仪器的测量光束全部穿过样品。

1)、在样品室的测量光路和参考光路中同时添加小孔光阑。

2)、只在样品xx添加小孔光阑。

2、测量样品厚度的影响:

如果样品较厚,或倾斜入射时,影响较大。

倾斜入射注意两点:1.薄膜倾斜入射引起的偏振效应,2.倾斜入射引起的测试光束的平移效应。

3、测量样品的楔角的影响

楔形的测试样品使光束不能在光轴上成像而造成一个离轴光斑,落在光电传感器的另一位置或它的外面。在光学加工时采用自由公差,楔角可以达到10分,会造成明显的误差,采取措施:

使用小孔光阑,既压缩光束的发散角。

4、测量样品后表面的影响

要用白玻璃校正的原因。

5、光线的偏振效应

测合色棱镜:

S光、P光

6、仪器的光谱分辨率

7、空气中某些成分的吸收带影响

在近红外区域,二氧化碳的吸收带常常会干扰测试结果,以类金刚薄膜,它的光谱测试曲线会有尖锐的透射起伏。民用的不考虑。

薄膜反射率的测量:

反射率的测量比透射率要复杂和困难。原因:

1、不容易找到在很宽范围中具有100%反射率性能的长期稳定的参考样品。

2、在反射率测量中,由于反射光路的变化灵敏,有样品和无样品时,光斑在光

电探测器光敏面上的位置往往会变动,增加了很多误差。

3、各种薄膜元件对反射率测量的范围和精度都有不同的要求。

板材测量:

小的板材它的位置影响特别大

棱镜测量:

角度、形状、

单次反射法测试薄膜的反射率(奥林巴斯)

采用公焦显微镜的原理,样品的光斑较小,可以剔除其它表面的反射,不受

形状约束。

红外分光光度计确认方案

红外分光光度计确认方案 ****药业有限公司

确认报告确认名称:红外分光光度仪确认

红外分光光度计确认方案 ****药业有限公司

目录 1.概述 2.确认目的 3.确定范围 4.职责 5.人员组成 6.风险评估 7.确认方案内容 7.1设计确认及相关文件 7.2安装确认 7.3运行确认 7.4性能确认 8. 偏差处理 9.确认结果及评价 10.再确认周期

1.概述 傅里叶变换红外光谱仪(简称FT-IR)是利用干涉调频的工作原理,根据干涉图和光谱图之间的对应关系,通过测量干涉图和对干涉图进行傅里叶变换来获得光谱图;它能同时测量、记录来自光源所有谱元的信息,高效率地采集来自光源的辐射能量。检测器接收到的随光程差变化的信号强度便是光源所有谱元的贡献。数据处理系统通过对干涉图函数进行傅里叶变换得到按频率(波数)分布的物质的吸收光谱。由于具有多通道的优点,因有具有较高的信噪比、分辩率、检测灵敏度和较快的扫描速度,广泛应用于物质的定性定量及结构成分分析,是测量、研究分子振动、转动光谱的重要工具。 2. 确认目的 确认傅里叶变换红外光谱仪测定数据准确可靠,符合检验要求。 3. 确认范围 本文件适用于傅里叶变换红外光谱仪的确认。 4. 职责 4.1质量控制部职责 负责起草确认方案、总结报告; 负责整个确认方案的实施,并做记录、总结报告; 负责该确认得出可靠的确认结论,适用于产品检验。 4.2质量保证部职责 做好过程监控,确保方案执行过程符合法规要求; 负责确认方案的审核; 负责确认实施的协调; 负责确认档案的管理。 5.人员组成 6.风险评估 6.1风险识别 6.1.1注意仪器是否稳定牢固,防止仪器不稳定。

原子吸收分光光度计使用说明书

GGX-5型火焰原子吸收分光光度计使用说明书 1 GGX-5火焰原子吸收分光光度计的使用 1.1 仪器特点 原子吸收是指基态自由原子对光辐射能的共振吸收。通过测量自由原子对光辐射能的吸收程度而推断出样品中的某一元素的量大小,根据这一原理研制的分析测试仪器称原子吸收分光光度计。仪器主要由原子化系统、光学系统、信号检测放大输出系统及附属设备组成。下面先将仪器部分结构的性能和特点概述一下: (1) 元素灯, 光源稳定, 寿命较长,我站较常使用的铜、铅、镉、锰、铁、镍等元素灯, 使用五至六年后才更换(具体点灯时间没有统计) 。在使用期内光源是十分稳定的,当一旦出现光能量下降得利害且光源不稳时,需反接处理或更换元素灯。 (2) 原子化系统, 现在很多生产厂家采用石英玻璃喷雾器, 玻璃喷雾器具有耐腐蚀、干扰小的优点, 出厂前已将玻璃喷雾器出口的碰撞球的位置调节固定好, 无须使用者再调节球的位置。同时配有各种口径的毛细吸液管, 使用者可根据需要选择提升量大小, 以调节最灵敏、最稳定的雾化率达到理想的检测效果。(3) GGX-5型, 由于生产厂吸取了国外同行的先进电子线路和技术, 仪器的数据输出相当稳定, 工作曲线线性、数据重复性和准确性等技术指标都能达到比较理想的水平, 部分使用同型号仪器的用户亦有同感。 1.2 原子吸收分光光度计的开关机原则“先开后关, 后开先关”原则。如开机程序“电源→A 键→B 键→C 键”, 关机时必须是“C 键→B 键→A 键→电源”。气路必须先开空气压缩机, 待一定空气压力和流量后, 才能开乙炔气点火, 关机时必须关闭(切断) 乙炔气源后, 才关空气压缩机。如果开关机程序操作混乱, 极容易损伤或烧毁电气设备, 甚至发生严重安全事故。GGX-5型采用了燃气安全阀系统, 该系统只有当仪器主机电源开通后, 空气压力和流量达到一定的条件下, 燃气阀门才能撞开, 这种装备为安全使用仪器加了一道非常实用有效的防线。开关机除了要严格按程序外, 还必须严格地、准确地将各功能键调到应处的位置。要

荧光分光光度计- 原理概要

分子荧光分析法 发光光谱:物质分子或原子吸收辐射被激发后,电子以无辐射跃迁至第一电子激发态的最低振动能级,再以辐射的方式释放这一部分能量而产生的光谱称为荧光、磷光。 根据物质接受的辐射能量的大小及与辐射作用的质点不同,荧光分析法可分为以下几种: 1. X射线荧光分析法 用X射线作光源,待测物质的原子受激发后在很短时间内(10-8 s)发射波长在X 射线范围内的荧光。 2. 原子荧光分析法: 待测元素的原子蒸气吸收辐射激发后,在很短的时间内(10-8 s),部分将发生辐射跃迁至基态,这种二次辐射即为荧光,根据其波长可进行定性,根据谱线强度进行定量。 荧光的波长如与激发光相同,称为共振荧光。 荧光的波长比激发光波长长,称为stokes荧光;若短,称为反stokes荧光。 3. 分子荧光分析法: 有些物质的多原子分子,在用紫外、可见光(或红外光)照射时,也能发射波长在紫外、可见(红外)区荧光,根据其波长及强度可进行定性和定量分析,这就是通常的(分子)荧光分析法。

基本原理 一. 分子荧光的发生过程 (一)分子的激发态——单线激发态和三线激发态 大多数分子含有偶数电子,在基态时,这些电子成对地存在于各个原子或分子轨道中,成对自旋,方向相反,电子净自旋等于零:S=?+(-?)=0,其多重性M=2S+1=1 (M 为磁量子数),因此,分子是抗(反)磁性的,其能级不受外界磁场影响而分裂, 称“单线态”; 图1 单线基态(A)、单线激发态(B)和三线激发态(C) 当基态分子的一个成对电子吸收光辐射后,被激发跃迁到能量较高的轨道上,通常它的自旋方向不改变,即?S=0,则激发态仍是单线态,即“单线(重)激发态”; 如果电子在跃迁过程中,还伴随着自旋方向的改变,这时便具有两个自旋不配对的电子,电子净自旋不等于零,而等于1:S=1/2+1/2=1 其多重性:M=2S+1=3 即分子在磁场中受到影响而产生能级分裂,这种受激态称为“三线(重)激发态”; “三线激发态” 比“单线激发态” 能量稍低。但由于电子自旋方向的改变在光谱学上一般是禁阻的,即跃迁几率非常小,只相当于单线态→单线态过程的10-6~10-7。(二)分子去活化过程及荧光的发生: (一个分子的外层电子能级包括S0(基态)和各激发态S1,S2,…..,T1…..,每个电子能级又包括一系列能量非常接近的振动能级) 处于激发态的分子不稳定,在较短的时间内可通过不同途径释放多余的能量(辐射或非辐射跃迁)回到激态,这个过程称为“去活化过程”,这些途径为: 1. 振动弛豫:在溶液中,处于激发态的溶质分子与溶剂分子间发生碰撞,把一部分能

红外分光光度法鉴别

演示性试验 实验二十六 红外分光光度法鉴别 氢化可的松与醋酸氢化可的松 一、实验目的 1.了解红外分光光度计的基本原理及操作方法。 2.熟悉利用红外光谱鉴别药物的方法。 二、仪器与试药 1.仪器 FI 型光栅红外分光光度计 玛瑙乳钵 2.试药 溴化钾 三、实验原理 1.氢化可的松: 分子中三个羟基的存在,形成分子内及分子间的氢键缔合,使羟基的谱带变宽向低波数移动,V OH 约为3400cm ﹣1,C 20酮的Vc=o 为1715cm ﹣1,△4-3-酮的Vc=o 为1645cm –1,原因是与羟基形成氢 键、与双键共轭,故向低波数移动;Vc=o 为1620cm –1,由于C 3酮基形成氢键向低波数移动时,1620cm –1峰表现为肩峰:Vc=o1140~1000cm –1。 2.醋酸氢化可的松: 酯链羟基,因诱导效应,降低了羟基的极性,增强了双键成分因而增强了键力,使Vc=o 为1750cm –1;C 20酮基的位置在1710cm –1,△4-3-酮的Vc=o 为1635cm ﹣1;Vc-o-c1240cm ﹣1和1060cm ﹣1 是酯类的红外光谱特征。 四、实验内容: 取干燥供试品 1~2mg 与200mg 溴化钾(干燥并过 200目筛)粉末,在玛瑙乳钵中研磨均匀,将样粉适量置压片模具中,均匀覆盖模底,装置模具,联接真空系统,抽气5分钟(除去混于粉末中的湿气及空气,)然后,边抽气边加压至8吨维持5分钟,去除真空,取下模具,去除透明的供试品溴化钾片,置于样品框中,将样品框置于红外分光光度仪的光路中,空白置于参比光路,选择适当的增益、狭缝、程序及扫描时间,扫描区间为4000cm ﹣1~400cm ﹣1,得红外光谱曲线。 五、注意事项 1.供试品的纯度必须符合要求。 2.研磨样品时,应在红外灯下小心操作。 3.实验用溴化钾必须干燥、纯度符合要求并且颗粒均匀。 4.某些供试品在固体状态测定时,可能因为同质多晶型,测得图谱与标准图谱不符,此时应 CH 3O

分光光度计简易操作手册

UVPROBE简易操作手册 第1章:初始画面 第2章:装置的连接 第3章:测定 第4章:光谱测定方式 4-1参数和显示的设置 4-2光谱测定 4-3数据处理功能 1.波长范围和纵轴范围的变更 2.峰谷检测 3.光谱线色彩的改变等 4.面积计算 5.数据计算 6.其他 第5章:光度分析方式 5-l参数和显示的设置 5-2定量测定 第6章:动力学方式 第1章:初始画面 启动UVPROBE以后,出现上示的对话窗口,需要输入设定的用户名和密码,然后点击确定健。 测量前注意事项 1、测量前先打开仪器,再打开计算机,测量完成后确认样品室内无样品后,关上样品室盖,先关闭计算机再关闭仪器。 2、电压不稳定一定要使用镇压器,否则将烧坏仪器保险丝。 3、样品池内溶液不要超过池容积的4/5,样品池放入样品室前外部要擦干。测量完毕后,比色皿要冲洗干净。 4、定期检查干燥剂情况,若已经变色要更换。

5、使用大样品室要把检测器切换到EXT状态,使用完后要拨到INT状态。 6、测量时,波长范围的边界要尽量避开检测器和光源更换时的波长。 第2章:装置的连接 首先从下拉式菜单的仪器项上追加需要的仪器。操作完毕如下图①所示,加装了UV-1650、UV- 2550、UV- 2450以及UV- 3150;使用时点击实际连接的仪器,例如下图的UV- 2450,然后点击上图的连接键②,这样装置与PC机连接(当然,中间的通讯电缆的连接、通讯口的指定等都是必须的,此处不再赘述)并开始下示的初始化面。 使用大样品室时,首先安装光路转换器(下图左),然后将检测器切换按钮拨到EXT档(下图右),测 量完毕后需要将检测器切换按钮又拨回到INT档上。 初始化大约需要5分钟左右,进行一系列的检查和初置,如一切顺利通过就可以开始测定。若某些项 检测失败,请检查光源是否正常发光和干燥剂是否放置正确。

721可见分光光度计使用方法

721可见分光光度计使用方法 一、开机预热 仪器在使用前应预热30分钟。 二、波长调整 转动波长旋钮,并观察波长显示窗,调整至需要的测试波长。 注意事项:转动测试波长调100%T/0A后,以稳定5分钟后进行测试为好(符合行业标准及质监局检定规程要求)。 三、设置测试模式 按动“功能键”,便可切换测试模式。相应的测试模式循环如下:*开机默认的测试方式为吸光度方式 四、结果打印(721型无此功能) 在得到测试结果后按动“打印”键便可打印结果(需外接标准串行打印机)。 五、光源切换(适用于752、754、755B型) 因为仪器在紫外区和可见区使用不同的光源,所以需要波动光源切换杆来手动的切换光源。建议的光源切换波长为340nm,即200nm-339nm适应氘灯,340nm-1000nm使用卤素灯。 注意事项:如果光源选择不正确,或光源切换杆不到位,将直接影响仪器的稳定性。特殊测试要求除外。 六、比色皿配对性 仪器所附的比色皿是经过配对测试的,未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。适应比色皿一套两只,供紫外光谱区使用,置入样品架时,两只石英比色皿上标记Q或箭头方向要一致。玻璃比色皿一套四只,供可见光谱区使用。 石英比色皿和玻璃比色皿不能混用,更不能和其他不经配对的比色皿混用。用手拿比色皿应握比色皿的磨砂表面,不应该接触比色皿的头光面,即透光面上不能有手印或溶液痕迹,待测溶液中不能有气泡、悬浮物,否则也将影响样品的测试精度。比色皿在使用完毕后应立即清洗干净。 七、调T零(0%T) 1.在T模式时,将遮光体置入样品架(如图七所示),合上样品室盖,并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按动“调0%T”键,显示器上显示“00.0”或“-00.0”,便完成调T零,完成调T零后,取出遮光体。 注意事项:1.测试模式应在透射比(T)模式; 2.如果未置入遮光体合上样品室盖,并使其进入光路便无法完成调T零;

分光光度计说明

722可见分光光度计使用说明书 1.仪器的主要用途 722可见分光光度计能在近紫外、可见光谱区域对样品物质作定性和定量的的分析。仪器可广泛地应用于医药卫生、临床检验、生物化学、石油化工、环境保护、质量控制等部门,是理化实验室常用的分析仪器之一 2.仪器的工作环境 2.1仪器应安放在干燥的房间内,使用温度为5℃~35℃,相对湿度不超过85%。 2.2使用时放置在坚固平稳的工作台上,且避免强烈的震动或持续的震动。 2.3 室内照明不宜太强,且避免直射日光的照射。 2.4 电扇不宜直接向仪器吹向,以免影响仪器的正常使用。 2.5 尽量远离高强度的磁场、电场及发生高频波的电器设备。 2.6供给仪器的电源电压为AC220V±22V,频率为50Hz±1Hz,并必须装有良好的接地线。推荐使用交流稳压电源,以加强仪器的抗干扰性能。使用功率为1000W以上的电子交流稳压器或交流恒压稳压器。 2.7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐蚀气体的场所使7 避免在有硫化氢、亚硫酸氟等腐 蚀气体的场所使用。 3 仪器的主要技术指标及规格 3.1 光学系统:单束光、衍射光栅。 3.2 波长范围:330nm~800nm。 3.3 光源:钨卤素灯12V30W。 3.4 接收元件:光电池。 3.5 波长准确度:≤±2nm。

3.6 波长重复性:1nm。 3.7 光谱带宽:<6nm。 3.8 杂散光:0.7%τ(在360nm处)。 3.9 透射比测量范围:0.0%τ~100.0%τ。 3.10 吸光度测量范围:0.000A~1.999A。 3.11 浓度直读范围:0000~1999。 3.12 透射比准确度:±1.0%τ。 3.13 透射比重复性:0.5%τ。 3.14 噪声:≤0.3%τ。 3.15 稳定性:亮电流≤0.5%τ/3min, 暗电流≤0.2%τ/3min。 3.16 电源:AC220V±22V,50Hz±1Hz。 3.17 外型尺寸:570mm×400mm×260mm。 3.18 净杂散光测量范围:18 净重:22kg。 4.仪器的工作原理 分光光度计的基本原理是溶液中的物质在光的照射激发下,产生了对光的吸收效应,物 质对光的吸收是具有选择性的。各种不同的物质都具有其各自的吸收光谱,因此当某单色光通过溶液时,其能量就会被吸收而减弱,光能量减弱的程度和物质的浓度有一定的比例关系,也即符合于比色原理--比耳定律。 τ=I/I0 logI0/I=KCL A=KCL

可见分光光度计使用说明

722可见分光光度计 使 用 说 明 书 上海精密科学仪器有限公司

目录 第一章设计原理与主要用途 2 第二章仪器的工作环境 2 第三章仪器的安装 3 第四章主要技术指标及规格 3 第五章仪器视图与构件名称 3 第六章仪器使用操作说明 4 第七章仪器的应用问题解决方案11 附录A 仪器验收13

第一章 设计原理与主要用途 一、原理 分光光度计的基本原理是:物质在光的照射下会产生对光吸收的效 应,而且物质对光的吸收是具有选择性的。各种不同物质都具有其 各自的吸收光谱。因此不同波长的单色光通过溶液时其光的能量就 会被不同程度的吸收,光能量被吸收的程度和物质的浓度有一定的 比例关系,即符合比耳定律。 0I I T = abc T I I A ===1lg lg 0 其中:T —透射比 A —吸光度 I 0—入射光强度 a —吸收系数 I —透射光强度 b —溶液的光程长度 c —溶液的浓度 由上式可以看出当吸收系数a 与光程长度b 不变时,吸光度与溶液 浓度成正比。本仪器正是依据这一原理而设计的。 二、用途 本仪器可供物理、化学、医学、生物学等学科进行科研或供化学工 业、食品工业、制药工业、冶金工业、临床生化、环境保护部门进 行各种物质的定性定量分析。 第二章 仪器的工作环境 一、仪器的运输和存储 本仪器在运输过程中必须防雨淋、曝晒及剧烈冲击。 本仪器存储时应包装完好的存储于有遮蔽的仓库内,周围无酸性气 体、碱及其它有害物质。仓库的环境温度在-25℃~40℃之间,相对 湿度不大于85%。 二、仪器的使用环境 避开阳光直射的场所和有较大气流流动的场所。 请不要安放在有腐蚀性气体及灰尘多的场所。 应避开有强烈振动和持续振动的场所。 应远离发出磁场、电场和高频电磁波的电气装置。 仪器应放在可载重的稳定水平台面上,仪器背部距墙壁至少15cm 以 上,以保持有效的通风散热。 避开高温高湿环境 使用温度: 室温 5℃~40℃

紫外分光光度计的使用方法

UV2600型紫外分光光度计操作规程 一、开机 1.打开仪器电源。 2.打开电脑,点击UV Analyst 进入光谱分析软件。 3.软件将自动搜索仪器端口,点击“联机”,软件与仪器联机成功。 二、选择测试模式 根据实验需求选择测试模式。仪器提供的测试模式有“波长扫描”“时间扫描”“定点测量”“定量测量”“核酸测量”和“蛋白质测量” 【波长扫描】主要用以检测样品对一定范围波长光的吸收情况,以便对样品进行定性测量。 1.点击左侧主功能栏中的“波长扫描”即可进入波长扫描界面。 2. 根据实验要求,在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以扣除空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 注意:在“基线测量”中所选择的基线必须与参数设置中基线一致! 【时间扫描】是检测样品在特定波长范围内吸光度(或透过率)随时间的推移而发生变化情况。主要用以检测样品的稳定性或进行化学动力学研究。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求,在“设置”设定检测参数。 3 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“基线测量”以后扣除样品空白的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“扫描”。以完成样品波长扫描检测。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存谱图。 【定点测量】是检测样品在特定波长中的吸光度(或透过率)。 1. 点击左侧主功能栏中的“定量测量”即可进入定量测量界面。 2. 根据实验要求,在“设置”设定检测参数。 3. 在样品室内参比及检测光路同时放入装有空白溶液的比色皿。 4. 点击“自动校零”,以扣除该波长中空白溶液的背景吸收。 5. 将检测光路中的空白溶液换成待测样品。 6. 点击“测量”,以完成样品的吸光度(或透过率)的测量。 7. 点击“保存”并选择保存路径即可保存测量结果。 【定量测量】可通过检测标准样品或输入特定的系数建立标准曲线后测量样品的浓度值。

荧光分光光度法测定荧光素钠的含量

荧光分光光度法测定荧光素钠的含量 一、实验目的 1.学习荧光分光光度法测定荧光素钠的分析原理。 2.掌握荧光分光光度计的操作技术和测定荧光素钠的方法。 二、实验原理 荧光分析法,是以溶液中物质分子对光的选择性吸收为基础而建立起来的一类分析方法。 常温下,处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子,激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级,再以辐射跃迁的形式回到基态,发出比吸收光波长长的光而产生荧光。 在稀溶液中,荧光强度I F 与物质的浓度c 有以下的关系: 当实验条件一定时,荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系: 这是荧光光谱法定量分析的理论依据。 三、仪器及试剂 1.仪器 960荧光分光光度计; LC-UV 紫外检测器; 微量进样器 2.试剂 ① 二氯荧光素(分析纯); ② 荧光素钠 四、操作步骤 1.标准溶液配制 准确称取0.05g 二氯荧光素标样,配制成2500ml 溶液,则此溶液浓度为0.05μm/mL ,分别移取此溶液2.0ml 、4.0ml 、6.0ml 、8.0ml ,于25ml 容量瓶中,bc I I F εφ0303.2=Kc I F =

并用蒸馏水稀释至刻度,摇匀后,待测定各标准溶液的荧光强度。 2.荧光强度测定 (1)荧光光度计操作 开启220V稳压电源至220V; 打开主机电源开关。 检查氙灯电是否开启。 (2)二氯荧光素发光谱的绘制,参数设置如下: ①设定纵坐标 ②设定灵敏度; ③设定扫描速度; ④发射波长EMISSION Wavelength 250.0 nm; ⑤激发波长范围200-350 nm; ⑥将某一浓度的二氯荧光素标液置于试样池中; ⑦扫描得到激发光谱。 (3)标准溶液及样品的测定,参数设置如下: ①设定纵坐标 ②设定灵敏度; ③设定扫描速度; ④设定激发波长EXCITION Wavelength 496.0nm(从激发光谱曲线中)得到; ⑤发射波长范围EMISSION Wavelength 518nm; ⑥将1号标准溶液放入试样池中; ⑦扫描得到荧光光谱。 仪器开始扫描,得到1号标准溶液的荧光强度。其余4各标准溶液和样品液只要重复上述⑥⑦操作,就可以分别得到它们的荧光光谱。按各标液的荧光强度做出I-C工作曲线。 五、数据记录及计算 1.列表

紫外可见光分光光度计工作原理

紫外可见光分光光度计工作原理 摘要:紫外分光光度计,就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 关键字:工作原理结构应用展望 工作原理 物质的吸收光谱本质上就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量,相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构,其吸收光能量的情况也就不会相同。因此,每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线,可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量,这就是分光光度定性和定量分析的基础。分光光度分析就是根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。 又因为许多物质在紫外-可见光区有特征吸收峰,所以可用紫外分光光度法对这些物质分别进行测定(定量分析和定性分析)。紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律。 朗伯-比耳定律(Lambert-Beer)是光吸收的基本定律,俗称光吸收定律,是分光光度法定量分析的依据和基础。当入射光波长一定时,溶液的吸光度A是吸光物质的浓度C及吸收介质厚度l(吸收光程)的函数。 凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物,根据在特定吸收波长处所测得的吸收度,可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。 结构 可见-紫外分光光度计。其应用波长范围为200~400nm的紫外光区、400~850nm 的可见光区。主要由辐射源(光源)、色散系统、检测系统、吸收池、数据处理机、自动记录器及显示器等部件组成。目前, 国际上一般按紫外可见分光光度计的仪器结构将其分为单光束、准双光束、双光束和双波长四类。

主要应用 在水和废水监测中的应用,对于一个水系的监测分析和综合评价,一般包括水相(溶液本身)、固相(悬浮物、底质)、生物相(水生生物)。在水质的常规监测中,紫外可见分光光度法占有较大的比重。由于水和废水的成分复杂多变,待测物的浓度和干扰物的浓度差别很大,在具体分析时必须选择好分析方法。 在农产品和食品分析中可用于检测的组分或成分有蛋白质、赖氨酸、葡萄糖、维生素C、硝酸盐、亚硝酸盐、砷、汞等; 在植物生化分析中可用于检测叶绿素、全氮和酶的活力等; 在饲料分析中可用于检测烟酸、棉酚、磷化氢和甲酯等。 技术展望和应用前景 近十年来,紫外/可见分光技术变化不大,始终没有革命性的突破。然而,随着光学设计、电子技术和软件的进步,使得仪器的复杂性降低,可靠性和分析效能提高,这些都说明传统仪器也在不断发展。高端系统如紫外/可见/近红外仪器采用了多个检测器,可对大体积样品、固体样品进行分析,可快速扫描,配有多个探头和其他附件。现在我们能够清晰看到的是:在紫外/可见范围内的低成本光学检测,这一点将在国土安全、生物技术、医药、航空、环保和工业控制等领域为厂家带来新的商机。

分光光度计使用说明

722型分光光度计的使用方法 一、测量原理 分光光度法测量的理论依据是伯郎—比耳定律:当容液中的物质在光的照射和激发下,产生了对光吸收的效应。但物质对光的吸收是有选择性的,各种不同的物质都有其各自的吸收光谱。所以根据定律当一束单色光通过一定浓度范围的稀有色溶液时,溶液对光的吸收程度A 与溶液的浓度c(g/l)或液层厚度b(cm)成正比。其定律表达式A=abc (a是比例系数)。当c的单位为mol/l时,比例系数用ε表示,则A=εbc称为摩尔吸光系数。其单位为L·mol-1·cm-1它是有色物质在一定波长下的特征常数。 T(透光率)=I/I0 A(吸光度)= -lgT 或A=K·C·L(比色皿的厚度) 测定时,入射光I, 吸光系数和溶液的光径长度不变时,透过光是根据溶液的浓度而变化的,即“K”为常数。比色皿厚度一定,“L”、“I0”也一定。只要测出A即可算出“C”。 《分光光度计的表头上,一行是透光率,一行是吸光度。》 二、722型分光光度计的使用 1、将灵敏度旋钮调至“1”档(信号放大倍率最小)。 2、开启电源,指示灯亮,选择开关置于“T”,波长调至到测试用波长。仪器预热20分钟。 3、打开试样室(光门自动关闭),调节透光率零点旋钮,使数字显示

为000.0。(调节100%T旋钮),盖上试样室盖,将比色皿 架处于蒸馏水校正位置,使光电管受光,调节透光率100%旋钮使数字显示100.0。如显示不到100.0,则可适当增加微电流放大的倍数。(增加灵敏度 的档数同时应重复(3)调节仪器透光率的“0”位)但尽量使倍率置于低档使用。这样仪器会有更高的稳定性。 4、预热后,按(3)连续几次调整透光率的“0”位和“100%”的位置,待稳定后仪器可进行测定工作。 三、吸光度“A”的测量 将选择开关置于A 。调节吸光度调零旋钮,使得数字显示为零,然后将被测样品移入光路,显示值即为被测样品的吸光度值。 四、浓度c的测量 将选择开关由“A”旋至“C”将已标定浓度的样品放入光路,调节浓度旋钮,使得数字显示为标定值,将被测样品放入光路即可读出被测样品的浓度值。 注意事项: 1、测量完毕,速将暗盒盖打开,关闭电源开关,将灵敏度旋钮调至最低档,取出比色皿,将装有硅胶的干燥剂袋放入暗盒内,关上盖子,将比色皿中的溶液倒入烧杯中,用蒸馏水洗净后放回比色皿盒内。 2、每台仪器所配套的比色皿不可与其它仪器上的表面皿单个调换。

荧光分光光度分析法

第一章荧光分光光度分析法 1.1概述 1.1.1 基本原理 由高压汞灯或氙灯发出的紫外光和蓝紫光经滤光片照射到样品池中,激发样品中的荧光物质发出荧光,荧光经过滤过和反射后,被光电倍增管所接受,然后以图或数字的形式显示出来。物质荧光的产生是由在通常状况下处于基态的物质分子吸收激发光后变为激发态,这些处于激发态的分子是不稳定的,在返回基态的过程中将一部分的能量又以光的形式放出,从而产生荧光。 不同物质由于分子结构的不同,其激发态能级的分布具有各自不同的特征,这种特征反映在荧光上表现为各种物质都有其特征荧光激发和发射光谱,因此可以用荧光激发和发射光谱的不同来定性地进行物质的鉴定。 在溶液中,当荧光物质的浓度较低时,其荧光强度与该物质的浓度通常有良好的正比关系,即IF=KC,利用这种关系可以进行荧光物质的定量分析,与紫外-可见分光光度法类似,荧光分析通常也采用标准曲线法进行。 1.1.2 基本结构 图1 荧光分光光度计工作原理示意图 (1)光源:为高压汞蒸气灯或氙弧灯,后者能发射出强度较大的连续光谱,且在300nm~400nm 范围内强度几乎相等,故较常用。 (2)激发单色器:置于光源和样品室之间的为激发单色器或第一单色器,筛选出特定的激发光谱。 (3)发射单色器:置于样品室和检测器之间的为发射单色器或第二单色器,常采用光栅为单色器。筛选出特定的发射光谱。

(4)样品室:通常由石英池(液体样品用)或固体样品架(粉末或片状样品)组成。测量液体时,光源与检测器成直角安排;测量固体时,光源与检测器成锐角安排。(5)检测器:一般用光电管或光电倍增管作检测器。可将光信号放大并转为电信号。 1.1.3 仪器操作规程 1.1.3.1 开机 a. 确认所测试样液体或固体,选择相应的附件。 b. 先开启仪器主机电源,预热半小时后启动电脑程序RF-5301PC,仪器自检通过后,即可正常使用。 1.1.3.2 测样 (1)spectrum模式 a. 在“Acquire Mode”中选择“Spectrum”模式。 ?对于做荧光光谱的样品,“Configure”中“Parameters”的参数设置如下:“Spectrum Type”中选择Emission;给定EX波长;给定EM的扫描范围(最大范围220nm—900nm);设定扫描速度;扫描间隔;狭缝宽度,点击“OK”完成参数的设定。 ?对于做激发光谱的样品,“Configure”中“Parameters”的参数设置如下:“Spectrum Type”中选择Excitation;给定EM波长;给定EX的扫描范围(最大范围220nm—900nm);设定扫描速度;扫描间隔;狭缝宽度,点击“OK”,完成参数的设定。 b. 在样品池中放入待测的溶液,点击“Start”,即可开始扫描。 c. 扫描结束后,系统提示保存文件。可在“Presentation”中选择“Graf” “Radar” “Both Axes Ctrl+R”来调整显示结果范围;在“Manipulate” 中选择“Peak Pick”来标出峰位,最后在“Channel”中进行通道设定。 d. 述操作步骤对固体样品同样适用。 (2)Quantitative模式 a. 在“Acquire Mode”中选择“Quantitative”模式。 b. “Configure”中“Parameters”的参数设置如下: Method 选择“Multi Point Working Curve” ;“Order of Curve” 中选择“1st和

红外分光光度计的原理是怎样的

红外分光光度计的原理是怎样的 红外分光光度计是目前石油化工、医药卫生等诸多行业进行物质结构分析的一个重要工具。 红外分光光度计的基本原理: 由光源发出的光,被分为能量均等对称的两束,一束为样品光通过样品,另一束为参考光作为基准。 这两束光通过样品室进入光度计后,被扇形镜以一定的频率所调制,形成交变信号,然后两束光和为一束,并交替通过入射狭缝进入单色器中; 经离轴抛物镜将光束平行地投射在光栅上,色散并通过出射狭缝之后,被滤光片滤除次光谱,再经椭球镜聚焦在探测器的接收面上。 探测器将上述交变的信号转换为相应的电信号,经放大器进行电压放大后,转入A/D转换单位,计算机处理后得到从高波数到低波数的红外吸收光谱图。 用户在使用红外分光光度计时需要注意: 1、使用之前把厂家附带的使用说明书熟读一遍,以便能够对将其操作的具体流程以及注意事项有一个大致的了解。 另外,在操作红外分光光度计之前还要注意对其整个仪器进行较为细致的检查; 如果发现检查该光度计无任何问题时就可以放心的使用了,但如果是发现其仪器有问题则应该及时的与商家进行,切勿在不懂的情况下对其进行修理。

2、使用时一定要注意按照开机、校正、检测样品、保存数据、取出样品、复位、关机等正确的步骤对其进行有序的操作,并且用户要轻轻的操作仪器,避免对其进行胡乱的拍打或剧烈撞击。 另外,在使用的过程中一定要注意不能擅自对红外分光光度计进行调整,更不能拆卸其中的零件。 3、在每次样品测定结束后要注意保证红外分光光度计设备干净整洁; 尤其是对于不小心残留在仪器表面的液体要及时的清理干净,同时还要注意将其仪器的所在房间打扫干净。 另外,不使用红外分光光度计一定要记得将其电源开关及时的关掉。 标签: 红外分光光度计

Nanodrop分光光度计操作说明

Nanodrop分光光度计操作说明 1.双击电脑屏幕上的Nanodrop图标,启动软件. 2.选择所需的测量模式,屏幕上会弹出初始化仪器的提示.往仪器的加样孔中加入2微升的 蒸馏水,合上上盖使形成液柱,然后点击确定以开始初始化,可以听见电磁阀开合的声音. 3.五六秒后屏幕上的提示信息消失,表示初始化完成.用擦镜纸将蒸馏水擦干净,加入2-3微 升的Buffer,合上上盖并点击Blank. 4.Blank完成后,用擦镜纸将Buffer擦干净即可以开始上样,点击Measure开始测量. 建议: 在每次测量完毕后,用蒸馏水清洁样品平台,这样可以保证下一次测量的准确性。 每次测量的样品量建议不少于2微升 图一图二 图三图四 5. 测量完成后,点击Show Report查看结果,选择Save进行保存. 6. 保存的数据对应地保存在C:\Nanodrop Data文件夹. 注: 具体的实验方法如BCA,Bradford等以及标准曲线的建立请参阅生物学资料和说明书

名词介绍: Nuclear Acid Measurement: 核酸测量 Protein 280: 用280nm波长测量蛋白,选择适当的蛋白类型(如BSA,IgG等),软件将在测量后给出吸光度值并自动计算其浓度 MicroArray Measurement: 使用不同的荧光染料来测定核酸浓度 UV-vis Measurement: 连续波谱扫描,可用于寻找最大吸收峰 Cell Cultures: 用600nm波长测量菌密度 Protein BCA: BCA法测蛋白 Protein Bradford: Bradford法测蛋白 Protein Lowry: Lowry法测蛋白 User Preference: 用户对于软件的默认设置做一些修改 Utility & Diagnostics: 性能诊断 Sample Type: 选择样品的类型 : 使用者自己输入波长,并查看样品在此波长的OD值 Abs: 吸光度值 A260 10mm Path : 常规的分光光度计使用的比色杯宽度约为10mm,即测量光程为 10mm,与常规分光光度计不同的是,Nanodrop的测量光程是 1mm和0.2mm.但是软件会自动将所测得的吸光度值转换成 10mm光程对应的值. A260 10mm Path就是指10mm测量光 程时样品在260nm波长时的OD值 A280 10mm Path: 10mm测量光程时,样品在280nm波长时的OD值 Dye: 染料 Max Absorbance: 使用者自己输入纵轴的最大量程 Hi Abs:点击此钮用于测量高浓度样品(最高至10mm测量光程的75A ),仪器将采用0.2mm光程测量 Replicate#: 测量重复样品或重复的标准品时的计数器 Reset This Std: 清除所选标准品的所有重复样品

分光光度计操作指南

Imation Data Storage and Information Management
Document No.: M0-001-1408-8 Effective: 7-Mar-2013 Version: E
Imation LOCK User Manual
Security Application Program V2.0 - E
Imation Enterprises Corp. 1 Imation Way, Oakdale, MN 55128-3414 USA ? Imation Corp. Imation and the Imation logo are trademarks of Imation Corp. and its affiliates. All other trademarks are the property of their respective owners.

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Table of Contents
A. B. C. D. E. Introduction ................................................................................................................. 2 General Description ...................................................................................................... 2 Features ....................................................................................................................... 2 Before Using the Security Application Program – Imation LOCK .................................... 3 Introduction to Imation LOCK ....................................................................................... 4 E1. E2. E3. E4. E5. F. G. H. I. Main Screen ...................................................................................................... 4 Set Password / Change Password ........................................................................ 4 Disable Password .............................................................................................. 7 Unlock Device................................................................................................... 8 Configure Partition Sizes...................................................................................11
Checking the Security Application Program – LOCK’s Version .................................... 13 Running the Program As Privileged User ..................................................................... 14 FAQ – Frequently Asked Questions ............................................................................. 14
Regulatory ………………………………………………………………………..……16

荧光分光光度计实验

实验2 荧光分光光度计实验 一、实验目的 1、了解发光材料的激发和发射过程; 2、掌握用荧光分光光度计测量发光材料激发光谱和发射光谱的测量方法。 二、仪器用具 F-4600荧光分光光度计,发光材料 三、实验原理 光吸收和辐射与发光材料中的能级结构密切相关。紫外光激发荧光粉发光是研究发光材料发生性能和发光中心在基质晶格中能级结构的重要手段。本实验采用F-4600荧光分光光度计来研究发光材料的激发光谱和发射光谱。 F-4600荧光分光光度计的光学系统从功能上划分为两大部分,即激光光路和发射检测光路。激发光路将光源发出的光分解为单色光输出,照射到发光材料上激发荧光粉发光。发光材料发出的光进入发射光检测光路,被分解为单色光照射到光电倍增管上,光电倍增管输出信号的强度与照射到其上面的光强度呈正比。 由氙弧灯发出的光变色单色光后,即为荧光物质的激发光。被测的荧光物质在激发光照射下所发出的荧光,经过单色器变成单色荧光粉后照射于测样品用的光电倍增管上,由其所发生的光电流经过放大器放大输到记录仪,将激发光单色器的光栅,固定在最适当的激发光波长处,而让荧光单色器凸轮转动,将各波长的荧光强度讯号输出至记录仪上,所记录的光谱即发射光谱,简称荧光光谱。 当测绘荧光激发光谱时,将激发光单色器的光栅固定在最适当的荧光波长处,而让激发光单色口的凸轮转动,将各波长的激发光讯号输出至记录仪上,所记录的光谱即激发光谱。 四、实验内容 按实验要求,连接好计算机后开始实验。首先测试发射光谱,设置激发波长460nm,得到该样品的发射光谱,即

峰值波长出现在540nm左右。 加入1个310nm长波通型滤波片, 在测试激发光谱,输入检测波长540nm,得到激发光谱: 利用检测波长波长460nm,得到发射光谱:

分光光度计操作规程

1、目的 本规程用于指导操作者正确操作和使用设备。 2、范围 本规程适用于指导本公司752 分光光度计操作规程的安全操作 3、操作规程 3.1操作准备 3.1.1开机预热 仪器在使用前应预热30分钟。 3.1.2波长调整 转动波长旋钮,并观察波长显示窗,调整至需要的测试波长 注意事项:转动测试波长调100%T/OA 后,以稳定5分钟后进行测试为好 3.1.3设置测试模式 按动“功能键”,便可切换测试模式。相应的测试模式循环如下: *开机默认的测试方式为吸光度方式 3.1.4结果打印 在得到测试结果后按动“打印”键便可打印结果(需外接标准串行打印机) 3.1.5光源切换 因为仪器在紫外区和可见区使用不同的光源,所以需要拨动光源切换杆来手动的切换光源。 建议的光源切换波长为340nm,即200nm-339nm 使用氚灯,340nm-1000nm 使用卤钨灯 注意事项:如果光源选择不正确, 或光源切换杆不到位,将直接影响仪器的稳定性。特殊测试要求除外。 1.1.6比色皿配对性 仪器所附的比色皿是经过配对测试的(其配对误差不大于0.5%T ),未经配对处理的比色皿将影响样品的测试精度。石英比色皿,供紫外色谱和可见光谱区使用,玻璃比色皿,供可见光谱使用。比色皿是有方向性的,置人样品架时,两只石英比色皿上标记Q 或箭头、四只玻璃比色皿上标记G 方向要一致。 注:玻璃比色皿使用的波长范围(320nm —1100nm ),石英比色皿使用的波长范围

(200-1000nm) 1.1.7调T零(0%T) 在T 模式时,将遮光体质人样品架,合上样品室盖,并拉动样品架拉杆使其进入光路。然后按动“调0%T”键,显示器上显示“000.0”或“-000.0”,便完成调T零,完成调T零后,取出遮光体。 注意事项:1、测试模式应在T模式 2、如果未置入遮光体合上样品室盖,并使其进入光路便无法完成调T零 3、调T零时不要打开样品室盖、推拉样品架 4、调T零后(未取出遮光体)如切换至吸光度测试模式,显示器上显示为“3.000” 5、如直接在吸光度(A)模式调T零,则在置入遮光体后不管显示器上是否显 示:3.000,均需按动“调0%T”键。 1.1.8调100%T/OA 将参比(空白)样品置入样品架,并推拉样品架拉杆使其进入光路,然后按动“调100%T”键,此时屏幕显示“BL”,延时数秒便显示“100.0”(在T模式时)或-0.000、0.000(在A 模式时),即自动完成调100%T/OA 1.1.9吸光度测试 1.按动“功能键”,切换至透射比测试模式 2.调整测试波长 3.置入遮光体,合上样品室盖,并使其进入光路,按动“调0%T”键调T零,此时仪器显示“000.0”或“-000.0”。完成调T零后,取出遮光体 4.按动“功能键”切换至吸光度测试模式 5.置入参比(空白)样品,按动“100%T”键,此时仪器显示BL 延时数秒后便便显示“-0,000”或0.000 6.置入待测样品,读数测试数据 1.1.10透射比测试 1.按动“功能键”,切换至透射比测试模式 2.调整测试波长 3.置入遮光体,合上样品室盖,并使其进入光路,按动“o%T”键调T零,此时仪器显示“000.0”或“-000.0”。完成调T零后,取出遮光体。 4.置入参比(空白)样品,按动“100%T”键,此时仪器显示“BL”延时数秒后便显示“-0。000”或“0.000” 5.置入待测样品,读取测试数据。 1.1.11浓度方式测试 1、按动“功能键”,切换到透射比测试模式 2、调整测试波长 3、置入遮光体,合上样品室盖,并使其进入光路,按动“调0%T”键调T零,此时仪 器显示“000.0”或“-000.0”。完成调T零后,取出遮光体。 4、置入参比(空白)样品,按动“调100.0%T”键,此时仪器显示“BL”延时读秒后 便显示“100.0” 5、置入标准浓度样品并使其进入光路 6、按动“功能键”切换到浓度测试模式 7、按动参数设置键(“↑”或“↓”)设置标准样品浓度,并按动“确认”键 8、置入待测样品,读取测试数据

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