实验7标本中未知细菌的分离和鉴定
细菌分离提纯实验报告
细菌分离提纯实验报告细菌分离提纯是一项常见的实验技术，通过这项技术可以从混合菌液中分离出单一的、纯净的细菌菌落。
这项技术在生物学、医学、环境科学等领域都有广泛的应用。
细菌分离提纯的实验步骤主要包括：取样、制备稀释液、涂布平板、培养菌落、筛选菌落、鉴定细菌。
首先，取样是细菌分离提纯的第一步。
当我们需要分离某种细菌时，我们需要从含有该种细菌的样品中取样。
比如，我们可以从水样、土壤样、食品样、人体样等中取样。
然后，制备稀释液。
我们对取样物进行稀释，使得其中的细菌数目降到一定范围内，以便于后续的细菌分离。
通常我们会选择使用生理盐水、缓冲液等来制备稀释液。
接下来，将稀释液涂布在平板上。
我们通常会使用琼脂平板来进行细菌分离提纯实验。
将稀释液均匀涂布在琼脂平板上，然后用培养皿盖好，放入恒温培养箱中进行培养，通常在适宜的温度下进行培养24-48小时。
培养过程中，我们可以观察到平板上出现的不同形态的菌落。
可以根据菌落的形态、颜色、大小等特征来进行筛选。
一般我们会选择孤立的、圆形的、透明或者白色的菌落作为目标菌落。
当我们筛选出目标菌落后，我们需要进行鉴定。
通常我们可以根据细菌的生理生化特性、抗生素敏感性、分子生物学特征等来鉴定细菌的种属。
可以使用生理生化试剂盒、PCR技术、16S rRNA测序等方法进行鉴定。
最终，根据鉴定结果，我们可以获得目标细菌的纯种菌株。
这些纯种菌株可以用于进一步的实验研究，如基因克隆、发酵生产等。
细菌分离提纯实验需要注意以下几点。
首先，取样要注意无菌操作，避免采样器具的污染。
其次，涂布平板时要注意均匀涂布，以避免菌落的融合。
另外，培养过程中要注意恒温，避免细菌在高温或低温下死亡。
总之，细菌分离提纯是一项重要的实验技术，在微生物学研究中起到了至关重要的作用。
通过细菌分离提纯技术，我们能够从混合菌液中得到纯净的细菌菌落，为后续的实验提供了可靠的菌种资源。
这项技术的应用涵盖了多个领域，对于推动生物科学的发展具有重要的意义。
微生物菌种分离和鉴定技术
在琼脂柱表面倾倒一层灭菌 液体石蜡和固体石蜡的混合物
培养后，菌落形成在琼脂柱的中间
液体培养基分离
不能在固体培养基上生长的微生物仍需要用液 体培养基分离来获得纯培养。
稀释法是液体培养基分离纯化常用的方法。
在同一个稀释度的许多平行试管中，大多数 （一般应超过95%）表现为不生长。
单细胞（孢子）分离
Technology
Erko Stackebrandt, DSMZ, Braunschweig, Germany
微生物菌种鉴定技术
1923(1)、1925(2)、1930(3)、1934(4)、1939(5)、1948(6)、1957(7)、 1974(8)、1994(9)
伯杰氏鉴定细菌学手册
Bergey's Manual of Determinative Bacteriology
Systematic and Evolutionary Microbiology, 2007, 57: 1925–1932
图: Rep-PCR条码系统发育树(DiversiLab平台) Figure 2: Dendrogram of Rep-PCR Barcoding (DiversiLab Platform) . 注：图片来源于Reclassification of ATCC® 16404TM and ATCC® 9642TM as Aspergillus brasiliensis.
Sequence Analysis (MLSA)
基因型鉴定技术水平
不同指纹图谱和DNA分析技术的鉴定水平
多相鉴定实例 ATCC16404黑曲霉 Aspergillus niger
2007年 Aspergillus brasiliensis sp.nov.新种发表 2008年 ATCC 16404 鉴定为 Aspergillus brasiliensis sp.nov. 2010年 WDCM 将ATCC 16404 更名 2010年 USP 将ATCC 16404 更名
预防疾控微生物检验技术：细菌及细菌检验综合题考试题库三
预防疾控微生物检验技术：细菌及细菌检验综合题考试题库三1、单选带菌者是指（）A.病原菌潜伏在体内，不向体外排菌者B.感染后，临床症状明显，并可感染他人者C.体内带有条件致病菌者D.体内正常菌群的数量超（江南博哥）出了正常范围E.感染后，临床症状消失，但体内病原菌未被彻底清除，并不断向体外排菌者。
正确答案：E2、单选为了从患者的标本中分离到单个菌落，应将标本接种到（）A.液体培养基中B.半固体培养基中C.固体培养基中D.含抗生素的培养基中E.高渗透压培养基中正确答案：C3、单选以噬菌体为媒介的基因转移方式为（）A.转化B.转导C.接合D.原生质融合E.以上都不对正确答案：B4、单选如果肥达试验结果是H：1：640、O：1：320、PA：1：80、PB：1：80，该患者可能是（）A.甲型副伤寒沙门菌所致副伤寒B.肖氏沙门菌所致副伤寒C.伤寒沙门菌感染D.回忆反应E.预防注射正确答案：C5、多选正常菌群转化为条件致病菌的因素有（）A.条件致病菌从无毒株变为有毒株B.不适当的抗菌药物治疗C.医源性刺激D.宿主免疫功能降低或缺陷E.定位转移正确答案：B, C, D, E6、多选病原菌被吞噬细胞吞噬后，可能的结局有（）A.病原菌被吞噬细胞杀死B.病原菌不被吞噬细胞杀死C.细菌在体扩散D.造成邻近组织损伤E.杀死吞噬细胞正确答案：A, B, C, D, E参考解析：病原菌被吞噬细胞吞噬后。
其后果随细菌种类、毒力和人体免疫力不同而异。
有的病原菌被吞噬后被杀死，是为完全吞噬。
而胞内寄生菌在免疫力低下的宿主中，虽被吞噬但不被杀死，此为不完全吞噬。
有的病原菌甚至在吞噬细胞内生长繁殖，导致吞噬细胞死亡，或随吞噬细菌经淋巴液或血液扩散到其他部位，造成广泛病变。
此外，在吞噬过程中，溶酶体释放出多种水解酶，破坏邻近的正常组织细胞。
7、多选分离致病性肠杆菌科菌时，应选用的培养基是（）A.营养琼脂平板B.血平板C.选择培养基D.鉴别培养基E.厌氧培养基正确答案：C, D参考解析：粪便标本中常含有很多杂菌，应根据检验目的菌的不同而选用具有选择和鉴别作用的培养基，如SS、伊红-美蓝平板、三糖铁培养基等，尽可能地抑制杂菌，以利于病原菌的检出，并能将致病菌与非致病菌区分开来。
标本中未知细菌的分离和鉴定
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
浓汁标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
咽拭子
分离培养 血平板） （血平板）
革兰染色
革兰染色
胆汁溶菌试验 奥普托辛试验
荚膜染色 石炭酸复红单染） （石炭酸复红单染）
？
粪便标本
SS平板 SS平板
结果观察
1、菌落观察 2、形态学观察
（二）生化反应 触酶试验： 触酶试验： H2o2
氧化氢酶
H2o + o2
(-) (+)
菌种：可疑菌落 菌种： 试剂：3%过氧化氢 试剂：3%过氧化氢 方法： 方法：见右图 结果： 结果：见右图
甘露醇实验
甘露醇生化反应管
药敏实验
浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果 观察
玻片凝集试验
粪便标本可疑菌生长现象及生化、 粪便标本可疑菌生长现象及生化、血清反 应结果观察
SS平板 SS平板 生长现象 形态学 特 征 单糖发酵试验 血清学试验
葡萄糖 乳糖
结论：现象与论点、 结论：现象与论点、论据
粪便标本可疑菌药敏实验结果
药品名称
抑菌圈直径
结论： 结论：
二、标本中未知肠道感染细菌 的分离鉴定程序
脓血便、 脓血便、肛拭子
标本 SS平板,EMB平板 SS平板,EMB平板 平板 选择/ 选择/鉴别培基
克氏双糖铁培养基, 克氏双糖铁培养基, 动力-靛基质动力-靛基质-尿素 半固体琼脂培养基
血清学鉴定 生化反应
玻片凝 集试验
设计性实验
临床标本中病原菌的分离与鉴定
3.尿 3.尿 标本： 标本：尿液 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等 其他：革兰染液、靛基质试剂、 4.粪便 4.粪便 标本：肛门拭子 标本： 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、 动力-靛基质动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、 其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺 菌多价血清、玻片等 菌多价血清、
实验7标本中未知细菌的分离和鉴定
（三）实验方法与检验流程
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性
标本
观察菌落性状、溶血性、色素
血琼脂平板
涂片、染色、镜检
挑取可疑菌落 生化反应测定
纯培养
致病性测定
血液
肉汤增
脑脊液 菌培养
（凝固酶、耐热核酸酶）
涂片染色镜检
（三）实验方法与检接涂片 革兰染色
动力 ± － ＋ ＋ ＋ ＋ －
H2S － － ＋ ＋ ± ＋ －
尿素 － － ＋ － － － －
埃希菌属 克雷伯菌属 变形杆菌
非致病 菌
乙型副伤寒
甲型副伤寒
伤寒杆菌
致病菌
痢疾杆菌
实验十
标本中未知细菌的分离和鉴定
致病菌的检验程序和常用项目
形态学检查
直接涂片 染色镜检
初步诊断
分离培养
形态特征
（常规培养或 生化试验
特殊培养）
血清学诊断
血清学试验 动物实验
药物敏感试验
明 确 诊
（沉淀反应、凝集试验、免疫标记技术等）
断
细菌的快速鉴定
(微生物数字编码分类鉴定法、血培养自动化检测系统、核 酸杂交技术、PCR技术、DNA芯片技术等）
＋/
－
＋/ － ＋
－
沙门菌
＋
－
＋
＋
－
变形杆菌 ⊕
－
＋/ － －
＋/－
肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）
材料
1. 菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物
2. 伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水
方法
血清
生理盐水
肠道杆菌生化反应的结果
病原微生物第5章细菌的遗传与变异习题与答案
第5章细菌的遗传与变异一、选择题A型题1．以下微生物中，不受噬菌体侵袭的是:A．真菌B．细菌C．支原体D．螺旋体E．立克次体2．关于噬菌体的表达，以下哪项是正确的?A．具有严格的宿主特异性B．可用细菌滤器除去C．含DNA和正RNAD．对理化因素的抵抗力比一般细菌弱E．能在无生命的人工培养基上生长3．用来测量噬菌体大小的单位是:A B.mm C.μm D.nm E.dm4.噬菌体的生物学特性与以下哪种微生物相似?A.细菌B.病毒C.支原体D.衣原体E.立克次体5.噬菌体所含的核酸是:A.DNAB.RNAC.DNA和RNAD.DNA或RNAE.DNA或RNA6.溶原性细菌是指:A.带有前噬菌体基因组的细菌B.带有毒性噬菌体的细菌C.带有温和噬菌体的细菌D.带有R质粒的细菌E.带有F质粒的细菌7.能与宿主菌染色体整合的噬菌体基因组称:A.毒性噬菌体B.溶原性噬菌体C.温和噬菌体D.前噬菌体E.以上都不是8.既有溶原期又有裂解期的噬菌体是:A.毒性噬菌体B.前噬菌体C.温和噬菌体D.β噬菌体E.λ噬菌体9.噬菌体感染的特异性取决于:A.噬菌体蛋白与宿主菌外表受体分子构造的互补性B．其核酸组成与宿主菌是否相符C．噬菌体的形态D．细菌的种类E．噬菌体的核酸类型10．毒性噬菌体感染细菌后导致细菌:A．快速繁殖B．停顿繁殖C．产生毒素D．基因突变E．裂解11．细菌的HO变异属于：A.形态变异B.毒力变异C.鞭毛变异D.菌落变异E.耐药性变异12．BCG是有毒牛型结核杆菌经以下哪种变异形成的？A.形态变异B.毒力变异C.抗原变异D.耐药性变异E.菌落变异13．SR变异是指细菌的：A.形态变异B.构造变异C.耐药性变异D.抗原变异E.菌落变异14．细菌的遗传物质包括：A.染色体、核糖体、前噬菌体B.染色体、质粒、异染颗粒C.核质、核糖体、质粒D核质、质粒、转位因子E.染色体、质粒、中介体15．编码细菌对抗菌药物耐药性的质粒是：A.F质粒B.R质粒C.Vi质粒D.Col质粒E.K质粒16．关于质粒的表达，以下哪项是错误的？A.是细菌染色体以外的遗传物质B.具有自我复制的才能C.可自行丧失或经理化因素处理后消除D.是细菌必备的构造E.带有遗传信息，赋予细菌某些形状特征17．关于细菌的耐药性突变，以下表达错误的选项是：A.可以自然发生B.可经理化因素诱导发生C.细菌接触药物之前就已发生D.细菌在药物环境中逐渐适应而变为耐药株E.药物仅起挑选耐药株的作用 , , , , , , , 18．最先发现肺炎链球菌转化现象的科学家是：A. GriffithB. AveryC. LuriaD. LederbergE. Delbruck19．染色体上整合有 F 质粒的细菌称为： A. F + 菌 B. F 菌C. F’菌D. Hfr 菌E. 溶原菌 20．细菌耐药性形成的主要方式是：A. 转化B. 接合C. 转导D. 溶原性转换E. 原生质体交融21．细菌多重耐药性的形成，主要是由于：A. 染色体突变B. R 质粒的转移C. 转座子的转位D. 溶原性转换E. 插入序列的插入22．关于耐药性质粒的表达，错误的一项为哪一项：A. 由耐药传递因子(RTF)和耐药决定子组成B. B.RTF 与 F 质粒的功能相似，编码性菌毛C. 质粒的转移是造成细菌间耐药性传播的主要原因D. 细菌多重耐药性的产生是由于 R 质粒基因突变所致E. 耐药决定子可编码细菌的多重耐药性23．质粒在细菌间的转移方式主要是：A. 转化B. 接合C.转导D.溶原性转换E. 原生质体交融24．转化过程中受体菌获得供体菌遗传物质的方式是：A. 通过鞭毛B. 通过性菌毛C. 通过噬菌体D. 直接摄取E. 细胞交融25．关于转位因子的表达，错误的选项是：A. 包括插入序列、转座子和前噬菌体B. 转座子与细菌的多重耐药性有关C. 前噬菌体与编码某些细菌的毒素有关D.转位因子仅存在于质粒 DNA 上E. 转位因子能在 DNA 分子中挪动26．能将供体菌与受体菌直接沟通而传递遗传物质的构造是：A. 鞭毛B.性菌毛C.中介体D. 核糖体E. 普通菌毛27．细菌的性菌毛：A. 化学成分为多糖B. 与细菌的运动有关C.是接合时的必要构造D. 是转导时的必要构造E.是细菌吸附于易感细胞的必要构造28．Hfr 菌是：A. 含有 R 质粒的细菌B. 含有 Col 质粒的细菌C. 染色体上整合有 F 质粒的细菌D. 染色体上整合有前噬菌体的细菌E. 不产生性菌毛的细菌29．以温和噬菌体为载体，将供体菌的 DNA 转移到受体菌的过程称为：A. 转导B. 接合C. 转化D. 溶原性转换E. 原生质体交融30．细菌的转导和溶原性转换的共同特点是：A. 需 R 质粒参与B. 由温和噬菌体介导 C . 由毒性噬菌体介导 D. 需 F 质粒参 E. 由性菌毛介导31．接合与原生质体交融的共同特点是：A. 需性菌毛介导B. 需温和噬菌体参与C. 需 R 质粒参与D. 需供菌与受菌直接接触E. 需处于感受态32．Hfr 菌与 F 菌进展接合时，转移的遗传物质主要是：A. R 质粒B. 游离的 F 质粒C. F 质粒D. 染色体上的 F 质粒E. 染色体基因 33．F + 菌与 F 菌的主要区别是：A. F + 菌含性菌毛，F 菌不含性菌毛B. F 菌含性菌毛，F + 菌不含性菌毛C. F 质粒可含染色体基因，F + 菌的 F 质粒不含染色体基因D. F + 菌可与 F 菌接合，F 菌不能与 F 菌接合E. F 菌能与 F 菌接合，F + 菌不能与 F 菌接合34．普遍性转导转移的基因包括：A. 染色体及质粒上的基因B. 质粒上的基因C. 染色体上特定部位的基因D. 染色体上任何部位的基因E. 噬菌体基因35．关于流产转导的表达，以下哪项是错误的？A. 是普遍性转导的形式之一B. 外源性 DNA 不能与受体菌染色体整合 , ’ ’ ’ C. 外源性 DNA 不能自身复制 D. 产生的菌落比正常菌落小得多E. 完全转导比流产转导更多见36．以下关于局限性转导，哪项表达是错误的？A. 又称特异性转导B. 仅转导供体菌染色体上特定的基因C. 受菌获得供菌染色体 DNA 特定部位的遗传性状D. 转导发生在温和噬菌体的裂解期E. 转导频率较普遍性转导高37．溶原性转换转移的遗传物质是：A. 细菌染色体基因B. 噬菌体基因C. 转座子D. 插入序列E. 质粒38．白喉棒状杆菌染色体上整合β棒状噬菌体基因后，获得产生白喉毒素的才能，这种基因转移方式属于：A. 转化B. 接合C. 转导D. 溶原性转换E. 原生质体交融39．溶原性转换：A. 由 R 质粒参与B. 由性菌毛介导C. 由温和噬菌体参与D. 由毒性噬菌体参与E. 受菌与供菌直接交融而发生基因转换40．溶原性转换与转导的区别是：A. 前者参与的是温和噬菌体，后者参与的是毒性噬菌体B. 前者转移的是噬菌体基因，后者转移的是供体菌基因C. 前者可引起受体菌耐药性改变，而后者不能D. 前者需供菌与受菌直接接触，后者以噬菌体为载体进展基因转移E. 前者进展基因转移需受菌处于感受态，后者那么否41．细菌的转导和溶原性转换的共同特点是：A. 需质粒参与B.需处于感受态C. 需温和噬菌体参与D. 需毒性噬菌体介导E. 需性菌毛介导42．关于 R 质粒的特点，不包括以下哪一项？A. 含编码细菌耐药性的基因B. 一种 R 质粒只含有针对一种抗菌药物的耐药基因C. 为接合性质粒D. 由耐药传递因子和耐药决定子组成E. 耐药决定子上的转座子可编码细菌的多重耐药性43．原生质体交融：A. 发生于亲缘关系很近的细菌之间B. 是两细菌的细胞壁发生交融C. 交融细胞的胞质混合，但无遗传物质交换D. 细菌通过该方式传递耐药性非常常见E. 是一种人工基因转移系统44． 临床上预防耐药菌株产生和扩散的主要措施是：A. 早期、足量使用抗生素B. 少量屡次使用抗生素C. 尽量使用广谱抗生素D. 长期、大量、结合使用多种抗生素E. 在细菌药敏试验指导下使用抗生素45．以下哪种方式不能转移质粒基因？A. 转化B. 溶原性转换C. 普遍性转导D. 原生质体交融E. 接合46．以下哪种实验可用来测定致癌物质？A. Aems testB. transformation testC. fluctuation testD. replica plating testE.Widal test47．关于接合的表达，以下哪项是错误的？ A. F + 菌与 F 菌接合,转移的是 F 质粒B. Hfr 菌与 F 菌接合,转移的主要是染色体基因C. F 菌与 F 菌接合，转移的是 F 质粒D. F + 菌与 F 菌接合后, F + 菌并不失去 F 质粒E. F 菌与 F 菌接合后，F 菌失去 F 质粒48．细菌 L 型变异的特点，不包括以下哪一项？A. 属于细菌的形态变异, B. 是由于细菌的细胞壁合成受阻C. L 型细菌多为革兰染色阴性D. L 型细菌呈多形性，可通过细菌滤器E. L 型细菌在低渗高琼脂含血清的培养基上能缓慢生长49．流产转导是指噬菌体携带的供体菌 DNA 片段：A. 不能进入受体菌B. 进入受体菌后被降解C. 进入受体菌后能自身复制，但不能与染色体整合D. 进入受体菌后既不能自身复制，也不能与染色体整合E. 与受体菌染色体整合后不能表达相应的性状50．决定细菌耐药性的遗传物质是：A. R 质粒B. F 质粒C. 细菌染色体D. 噬菌体E. 插入序列51．关于接合的表达，以下哪项是错误的？A. 细菌间通过性菌毛进展接合B. 接合转移的基因主要是质粒 DNAC. R 质粒为接合性质粒D. F 质粒丧失，细菌接合的才能随之消失E. 接合是革兰阴性菌中 F 质粒的特征，革兰阳性菌中尚未发现52．关于细菌遗传变异的实际意义，以下哪项表达不正确？A. 临床别离的非典型菌株，要从细菌变异的角度去分析、鉴别B. 临床别离的致病菌，须进展药敏试验以正确选择抗生素C. 可利用细菌遗传变异的原理制备疫苗D. 可利用细菌遗传变异的原理来测定致癌物质E. 细菌的耐药质粒与耐药性有关而与毒力及致病性无关53．转位因子不包括以下哪种成分？A. 转座子B. 插入序列C. 转化因子D. 前噬菌体E. 转座噬菌体X 型题1．噬菌体的特点是:A.非细胞型微生物B.严格活细胞内寄生C.分别以细菌、真菌、螺旋体及放线菌等为 宿主D.可通过滤菌器E.对人致病2.电子显微镜下，噬菌体的形态有:A.蝌蚪形 B ．微球形C ．棒形D ．砖形E ．丝形3．溶原性细菌的特点是:A ．能正常繁殖，不产生噬菌体，但能将产噬菌体的才能传递给后代B ．溶原状态有时 自发地终止C ．能抵抗相应噬菌体的侵袭作用D ．溶原性细菌某些性状可发生改变E ．能产生细菌素4．以下细菌中，产生毒素与噬菌体有关的是:A ．大肠杆菌B ．白喉棒状杆菌C ．金黄色葡萄球菌D ．破伤风梭菌E ．肉毒梭菌5．噬菌体用于细菌的鉴定和分型是由于噬菌体:A ．能诱导细菌变异B ．能寄生在细菌内C ．寄生作用具有种、型特异性D ．能裂解 细菌E ．能使细菌成为溶原状态6．噬菌体的应用包括:A ．分子生物学研究的重要工具B ．细菌的鉴定和分型C ．检测标本中的未知细菌D ．用 于治疗某些部分感染性疾病E ．用于追踪传染源7.可产生性菌毛的细菌有： A. F + 菌 B. F 菌 C. Hfr D. 含 R 质粒的细菌 E. 雄菌8．以下基因转移与重组的方式中，哪些与细菌的耐药性形成有关？A. 转化B. 转导C. 接合D. 溶原性转换E. 原生质体交融C. F 菌与 F 菌接合时，F 质粒及染色体基因一起被转移 , ’ ’ 9．关于普遍性转导的特点，以下哪些表达是正确的？A. 由温和噬菌体介导B. 能转导供体菌染色体 DNA 的任何部位C. 能转导质粒D. 发生在温和噬菌体的裂解期E. 转导频率比局限性转导高10．以下哪些属于细菌的遗传物质：A. 染色体B. 质粒C. 插入序列D. 转座子E. 前噬菌体11．以下哪些遗传物质可通过接合的方式转移？A. 染色体基因B. F 质粒C. F 质粒D.Col 质粒E. R 质粒12．非接合性质粒可通过以下哪几种方式在细菌间转移？A. 转化B. 转导C. 接合D. 溶原性转换E. 原生质体交融13．耐药性突变的特点是：A. 产生耐药性突变的是菌群中的个别细菌B. 是由于细菌接触药物后引起的C. 突变是自发的、随机的D. 突变率可因理化因素诱导而增高E. 回复突变不一定会恢复原来的基因型14．为防止耐药菌株的出现及扩散，临床用药应采取哪些措施？A. 治疗前做药物敏感试验B. 足够剂量用药C. 几种抗生素结合使用D. 少量屡次用药E. 使用广谱抗生素15．关于转位因子，下述正确的选项是：A. 分为插入序列、转座子和前噬菌体三类B. 是细菌基因组中能改变自身位置的一段特异性 DNA 序列C. 可存在于细菌染色体或质粒 DNA 分子上D. 可在染色体与质粒、质粒与质粒之间进展转移E. 转位因子的转位可引起细菌基因突变或基因转移16．SR 变异可伴有以下哪些变异？A. 抗原变异B. 毒力变异C. 构造变异D. 耐药性变异E. 生化反响的变异17．与噬菌体有关的基因转移和重组的方式有：A. transformationB. transductionC. conjugationD. protoplast fusionE. lysogenic conversion18. 关于接合的表达，以下哪些是正确的？ A. F + 菌与 F 菌接合时，F 质粒被转移B. Hfr 菌与 F 菌接合时，染色体基因被转移 ’ D. F + 菌与 F 菌接合后，F + 菌失去 F 质粒而变为 F 菌E. F 菌与 F 菌接合后，F 菌不变为 F 菌19．以下关于转化的表达，哪些是正确的？A. 被转化的 DNA 片段称为转化因子B. 转化转移的 DNA 片段比转导要小C. 转化比转导的效率高D. 只有受体菌处于感受态才能进展转化E. Ca 2+ 与 Mg 2+ 处理，可增加感受态细菌摄取 DNA 的才能20．关于流产转导，下述正确的选项是：A. 外源性 DNA 片段不能进入受体菌B. 外源性 DNA 片段不能与受体菌染色体整合C. 外源性 DNA 片段不能自身复制D. 流产转导是普遍性转导的一种类型E. 流产转导的菌落大小与正常菌落一样21．关于局限性转导，以下表达正确的选项是：A. 由温和噬菌体介导B. 由毒性噬菌体介导C. 所转导的只限于供体菌染色体上特定的基因D. 受体菌获得供体菌 DNA 特定部位的遗传特性E. 转导频率较普遍性转导低22．关于原生质体交融的表达，正确的选项是： A. 两种细菌经溶菌酶或青霉素处理而形成B. 交融后的原生质体缺乏细胞膜C. 交融细胞的胞质可互相混合D. 交融细胞的遗传物质可互相交换E. 交融仅发生于亲缘关系很近的细菌之间23．关于质粒的表达，以下各项哪些是正确的？A. 是细菌核质外的遗传物质B. 能在胞浆中自行复制C. 一个细菌内只能含有一种质粒D. 可自行丧失或经人工处理后消除E. 是细菌生命活动必需的构造24．细菌间进展基因转移和重组的外源性遗传物质包括：A. 核质B. 核糖体C. 质粒 DNAD. 转座子E. 噬菌体基因二、填空题1．噬菌体有 、 和 三种形态，大多数噬菌体呈形。
实验十标本中未知细菌的分离和鉴定
实验十标本中未知细菌的分离和鉴定实验目的：（1）了解细菌的分离培养方法和染色技术。
（2）掌握未知细菌的分离与鉴定方法。
（3）使用基本的鉴定技术确定未知菌株的种属。
实验原理：细菌的分离和鉴定是微生物学领域中的研究重点之一，它是一项极其重要的技术，可以用于从环境中分离出未知细菌，或者为疾病的诊断和治疗提供依据。
分离和鉴定的基本步骤包括准备标本、分离、纯化、染色、形态学特征观察、生理生化特征鉴定等。
（2）菌落计数菌落计数是一种比较简单、实用的微生物数量统计方法。
其基本原理是在相应培养基中培养所需数量的细菌，将其种在匀质培养基表面上，等待一定时间后，通过肉眼观察和计数器计数，得出单位体积菌落数的统计数据。
（3）清洁措施实验室的卫生和清洁非常重要，工作区域要每日进行消毒。
要使用消毒剂擦拭实验台面和灭菌设备，保持实验环境的清洁卫生。
实验步骤：1. 标本处理：将未知标本放入对应的生长基内，摇晃并在恒温箱内培养48小时，使菌落生长到适当的大小。
2. 细菌分离：采用计数板分别涂抹标本样品，摇晃平板均匀扩散，培养48小时。
3. 排除细菌：对分离出的单个菌落进行传代培养，过渡培养10天，如果单个菌落都是一种细菌，即为纯菌。
4. 细菌染色：染色是确定未知菌株种类的重要步骤。
首先进行革兰氏染色以区分细菌的细胞壁特征。
5. 形态学特征观察：观察页面。
6. 生理生化鉴定：(1)对产酸细菌进行发酵测试，对氧化细菌进行氧化测试。
(2)对氧化酶进行试验。
(3)对盐耐性进行测试。
(4)对温度和气氛的适应性进行测试。
实验结果：通过上述步骤，我们成功地分离出未知细菌，对其进行染色、形态学特征观察和生理生化鉴定，最终确定了它的种属为大肠杆菌。
通过实验，我们掌握了未知细菌的分离和鉴定方法，成功地确定了未知细菌的种属，这对于深入研究细菌的生物学及其应用具有重要意义。
同时，本实验也提醒我们实验室的消毒及环境卫生的重要性。
临床细菌室要加强少见细菌的分离和鉴定
卡 菌外 还 有短 链 奴 卡 菌 、 疽 奴 卡 菌 、 色 奴 卡 菌 、 鼻 肉 巴西奴 卡 菌 、 越桔 奴 卡 菌 、 鼠奴 卡 菌 、 非 奴 卡 菌 豚 南
和苦 味奴 卡 菌 。 实 验 室诊 断 注 意点
标 本 直接 镜 检 ， 见革 兰 阳性 念 珠状 分 支 菌丝 。 可 抗 酸染 色 时应 用 硫 酸 脱 色 。盐 酸脱 色 常 出现抗
（ 用于艰难梭菌分离 ） 万古霉 素斯 氏琼脂 ； 建立厌氧
菌鉴 定 系统 ， 可采 用 自动化 鉴定 仪 的厌 氧 鉴定 系统 ， 如 Ｖｉ ｋ的 Ａ 卡 或 其 他 自动 化 细 菌 鉴 定 仪 ， ｔ ｅ ＮＩ 或 Ａ 鉴定 系统 或 用传 统 鉴定 系统 。在 无 鉴 定 条 件 的 ＰＩ 实验 室 可 在确 定 厌 氧 菌 存 在 的 前 提 下 ， 涂 片 革 兰 经
例 。新 型 隐球 菌 有 ３个 变种 ， 既新 生 变种 、 格特 变 种
染 的 主要 原 因之 一 ， 当深部 脓 肿 、 血症 等 常 规 细菌 败 学检 查 阴性 时 ， 往 源 于厌 氧 菌 感 染 。厌 氧 菌 感 染 往 是一 种 内源性 感 染 。病 种 遍 及 临 床 各 种 、 体 各 部 人
丢 弃 培养 物 是实 验 室 漏检 奴 卡 菌 的原 因。新 型 奴卡
菌在 ３ ℃ 、５ 均可 生 长 。 ７ ４℃ ３ 厌 氧 菌 【 ３］ ， 近年 来无 芽 胞 厌 氧杆 菌 及球 菌 已成 为细 菌性 感
道浅 黄 隐球 菌 、 白 隐球 菌 和 罗 伦 隐球 菌 引 起 的 病 浅
位 ， 种器 官 的感 染 均 可有 厌 氧 菌感 染 。 文献 报 道 ， 各
微生物检验竞赛试题及答案
微生物检验竞赛试题及答案一单项选择1.根据对所操作生物因子采取的防护措施，将实验室生物安全防护水平分为（）级。
A.一B・=C.三D.四2.（）级生物安全防护水平的实验室适用于操作能够引起人类或者动物严重疾病，比较容易直接或间接在人与人、动物与人、动物与动物间传播的微生物。
A.-B. C.3D.四3.HIV抗体检测、抗原检测和相关的免疫学检测应在符合（）级安全实验室要求的艾滋病检测实验室中进行A.I B.II C.III D.IV4.穿戴个人防护用品程序正确的是（）。
A.口罩一帽子一内隔离衣一防护服一防护眼镜一手套一胶靴B.口罩一帽子一防护眼镜一内隔离衣一防护服一手套一胶靴C.口罩一帽子一内隔离衣一防护服一防护眼镜一胶靴一手套D.防护眼镜一口罩一帽子一内隔离衣一防护服一胶靴一手套5.采集标本过程中最重要的是（）A.快速B.及时C.无菌D.填写检验单6.下列属于生物样本采样装备的是（）A.咽拭子及其密闭容器B.便携式浮游菌采样器C.深井采样器D.土壤样本收集瓶7.标本采集和运送过程中不正确的是（）。
A.标本采集后应尽快送检B.脑膜炎奈瑟菌标本要冷藏运送C.应用抗菌药物前采集标本，采集病皮明显部位的标本。
D标本采集时注意无菌操作，尽量避免杂菌污染。
8.有关细菌学检验标本采集和送检的方法，正确的是（）。
A.女性淋病患者采集标本进行细菌培养时，最佳采样部位为阴道壁B.采集血液培养病原菌应在抗生素使用前进行C.脑膜炎奈瑟菌的咽拭子可在常温、干燥条件下送检D.尿标本最好采集前段尿9.用于霍乱弧菌的强选择性培养基是（）。
A.巧克力血琼脂平板B.血琼脂平板C.庆大霉素培养基D.罗氏培养基10.应用悬滴法在显微镜下观察患者米淋水样粪便，可见穿梭运动的细菌是（A.变形杆菌）。
B.铜绿假单胞菌C.霍乱弧菌D.钩端螺旋体11.肥达试验不用于辅助诊断（）。
A.伤寒B.甲型副伤寒C.鼠型副伤寒D.乙型副伤寒12.用于流感病毒分离与鉴定的患者标本（）。
项目10标本中未知细菌的分离和鉴定
项目10：标本中未知细菌的分离和鉴定【目的要求】熟悉临床标本中常见的病原性细菌的分离鉴定方法。
【实验内容】一、脓汁、咽拭子等标本中病原性细菌的分离与鉴定（一）标本采集1．脓拭子：用无菌棉签蘸取患处深部脓液或分泌物少许，置入无菌空试管内，送检。
2．痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用无菌棉签挑取脓稠痰块，置入无菌空试管内，送检。
3．咽拭子：嘱病人把口张大，用压舌板压住舌根，用无菌棉签迅速蘸取咽部分泌物，置入无菌空试管内，送检。
4．血标本：疑为败血症患者，在严格无菌操作下，静脉采血，床旁直接加入含50ml的肉汤瓶内，立即摇匀后送培养。
5．脑脊液：对疑似流脑患者，作腰椎穿刺取脑脊液，立即行直接床旁接种(送检过程中应注意保温)。
6．尿道、阴道分泌物：对可疑淋病患者，男性可从尿道取材，取材时导尿管应进入尿道1cm～2cm，如为刚排尿，应等待1h左右；女性则可以从宫颈口取分泌物，当内窥器插入宫颈口后应稍等片刻，再旋转取出，取材应立即送检，不可放置冰箱。
（二）分离鉴定程序待检标本可直接做涂片染色检查鉴定，必要时可做分离培养、生化反应及致病性鉴定。
常见的致病性球菌检查程序如下。
直接涂片、革兰染色、镜检（形态、排列、染色性）脓、痰、咽拭子分泌物、脑脊液观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板→↑挑取可疑菌落生化反应血液、穿刺液→肉汤培养基纯分离致病性测定↓药敏试验如培养液混浊时可涂片、染色、镜检（三）常见临床标本的检查方法1．脓拭子在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。
【材料】（1）标本：脓拭子（2）培养基：血琼脂平板（3）兔血浆、白色滤纸片、无菌生理盐水、载玻片【方法】脓汁→革兰染色→镜检↓↑血琼脂平板→观察菌落形态及溶血情况↓致病力试验(1)将脓拭子作革兰染色，镜检(先作培养再涂片以免污染)。
预防疾控微生物检验技术：细菌及细菌检验综合题题库考点三
预防疾控微生物检验技术：细菌及细菌检验综合题题库考点三1、单选外斐反应结果为OX19阳性和OXk阴性，支持的诊断是（）A.流行性斑疹伤寒B.恙虫病C.Q热D.甲型副伤寒E.乙型副伤寒正确答案：A2、（江南博哥）单选紫外线杀菌的最适波长为（）A.242nmB.255nmC.265nmD.286nmE.以上都不对正确答案：C3、单选消毒外科手术包应采用的消毒方式是（）A.焚烧B.高压蒸气灭菌法C.干烤D.煮沸E.间歇灭菌正确答案：B4、单选用于饮水、游泳池水消毒的常用消毒剂是（）A.高锰酸钾B.生石灰C.氯D.臭氧E.漂白粉正确答案：E5、单选病原体侵入人体后，临床上不显示出任何症状、体征，但可产生特异性免疫，被称为（）A.潜伏性感染B.病原体被清除C.隐性感染D.显性感染E.病原携带状态正确答案：C6、单选与细菌耐药性有关的质粒是（）A.F质粒.B.R质粒C.Col质粒D.产毒性质粒E.非接合质粒正确答案：B7、单选对肠热症患者进行细菌分离培养，从第1周-第3周均可采集的临床标本是（）A.静脉血B.粪便C.尿液D.骨髓液E.十二指肠引流液正确答案：D8、多选专性需氧生长的细菌是（）A.结核分枝杆菌B.霍乱弧菌C.伤寒杆菌D.绿脓杆菌E.链球菌正确答案：A, B9、单选有关“菌毛”的叙述，哪一项是正确的（）A.多见于革兰阳性菌B.不能直接用光学显微镜观察C.性菌毛与细菌的致病性有关D.普通菌毛与细菌的接合有关E.是细菌的运动器官正确答案：B参考解析：菌毛是许多革兰阴性菌、少数革兰阳性菌菌体表面存在的比鞭毛纤细、短而直的丝状物，须用电子显微镜观察才能看见。
按其功能，菌毛可分普通菌毛与性菌毛两种。
普通菌毛具有粘附宿主细胞的作用，细菌借此可牢固粘附在人体粘膜上皮细胞表面定居，进而侵入细胞内。
无菌毛的细菌则易被排出体外。
因此普通菌毛与细菌致病力有关。
性菌毛由F因子编码产生，供体菌能通过性菌毛，将遗传物质传递给受体菌，故与细菌接合和某些遗传性状的传递有关。
实验7标本中未知细菌的分离和鉴定资料
(-)
(+)
（甘—露）醇发（酵+试）验
二、标本中未知肠道感染细菌 的分离和鉴定
（一）实验目的
1、掌握肠道杆菌分离和鉴定的一般步骤 2、熟悉肠道杆菌鉴定生化反应和血清学反应
（二）实验器材
1、待检的粪便标本； 2、培养基：SS平板，生化反应管；普通
琼脂平板； 3、试剂：革兰染色液，生理盐水；药敏纸
箱、显微镜、载玻片等
（三）实验方法与检验流程
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性
标本
观察菌落性状、溶血性、色素
血琼脂平板
涂片、染色、镜检
挑取可疑菌落 生化反应测定
纯培养
致病性测定
血液
肉汤增
脑脊液 菌培养
（凝固酶、耐热核酸酶）
涂片染色镜检
（三）实验方法与检验流程
脓拭子
分离培养 （血平板）
直接涂片 革兰染色
一、标本中未知病原性球菌 的分离和鉴定
（一）实验目的
1、掌握脓汁标本中常见病原菌分离和鉴定方 法
2、掌握药物敏感试验
（二）实验器材
1、待检的脓汁标本； 2、培养基：血琼脂平板，生化反应管；普
通琼脂平板； 3、试剂：革兰染色液，生理盐水；药敏纸
片，3%过氧化氢； 4、其它：接种环、接种针、酒精灯、培养
＋/
－
＋/ － ＋
－
沙门菌
＋
－
＋
＋
－
变形杆菌 ⊕
－
＋/ － －
＋/－
肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）
材料
1. 菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物
2. 伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水
细菌的遗传与变异 精品题库及答案
第十三章细菌的遗传与变异二、填空题1、细菌的变异分为——和——·2、细菌性状变异实例有——、——、——和——。
3、细菌变异的物质基础是菌体内的——和——，其化学本质都是——。
4、医学上重要的质粒有——、——、——和——。
5、噬菌体是感染细菌、真菌等微生物的——，它具有一定的形态、结构和——。
6、基因突变的机理包括——、——、——以及——因子的转位。
7、细菌的遗传性变异主要通过——、——两种方式实现。
8、普遍性转导是将供体菌染色体上——基因转导给受体菌，局限性转导是将供体菌染色体上——基因转导给受体菌。
9、侵袭细菌、真菌、螺旋体的病毒是——。
10、细菌的基因转移与重组的方式有——、——、——、——。
1l、L型细菌指——细菌，培养应选用——培养基。
12、卡介苗是用失去毒力的——菌制成的活疫苗，可预防——病。
13、溶原性细菌的特征是——、——、——、——。
14、温和噬菌体既有——周期又有——周期。
毒性噬菌体只有——周期。
15、介导细菌间遗传物质转移的噬菌体是——。
16、噬菌体参与重组的方式有——和——。
l7、基因突变规律有——、——、——、——。
18、有F质粒的细菌有——，亦称——。
19、F—菌亦称——，可经——方式变为F+菌。
20、发生接合性传递的R质粒的基因是由——和——组成。
2l、转座噬菌体可在遗传物质转移过程中起——作用。
三、最佳选择题1．H—O变异属于( )A．毒力变异B．菌落变异C．鞭毛变异D．形态变异E．耐药性变异2．关于耐药性突变，下列叙述错误的是( )A．可以自然发生B．可以诱导发生C．具有相对稳定性D．可由噬菌体介导发生E．是在接触抗生素之前已经发生3．细菌突变的发生是由于( )A．基因重组B．基因交换C．质粒丢失D．溶原性转换E．核质基因发生突然而稳定的结构改变4．溶原性转换( )A．由R质粒参与B．由性菌毛介导C．由毒性噬菌体参与D．由温和噬菌体参与E．是受体菌直接摄取供体菌的DNA片段5．能产生外毒素的白喉杆菌，是因为其有( )A．R质粒B．F质粒C．Vi质粒D，Col质粒E．前噬菌体6．细菌转导和溶原性转换的共同特点是( )A．需质粒参与B．需性菌毛介导C．需毒性噬菌体介导D．需温和噬菌体参与E．供体菌与受体菌直接接触7．关于R质粒，下列叙述错误的是( )A．R质粒是编码细菌耐药的基因B．一种R质粒只含有针对一种抗生素的耐药基因C．R质粒可分为接合性R质粒和非接合性R质粒D．接合性R质粒是由耐药传递因子和耐药决定因子组成E．非接合性R质粒可经转化或转导方式进人受体菌8．细菌的性菌毛( )A．化学成分为多糖B．与细菌的运动有关C．是接合时必要的结构D．是转导时必要的结构E．是细菌吸附易感细胞的结构9．介导细菌间接合的物质是( )A．鞭毛B．普通菌毛C．性菌毛D．中介体E．核糖体10．Hfr菌是( )A．溶原性细菌B．含有R质粒的细菌C．整合有F质粒的细菌D．整合有前噬菌体的细菌E．不产生性菌毛的细菌11．关于L型细菌的特性下列哪项是错误的( )A．呈多形态性B．在固体培养基中形成“油煎蛋”菌落C．仍保留亲代特性D．除去抑制物可以返祖E．分离L型细菌必须用高渗培养基12．“流产转导”指噬菌体携带的外源DNA( )A．未能进入受体菌B．进入受体菌后复制C．进入受体菌后未能与染色体重组D．进人受体菌与染色体重组后未能表达其特性E．进入受体菌后被降解13．携带β一棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌能产生白喉毒素，这种现象称为( )A．转导B．转化C．基因转换D．溶源性转换E．以上都不是14．不属于基因转移与重组方式的是( )A．转化B．转导C．接合D．溶原性转换E．L型变异15．下述除哪项外，均为噬菌体的特性( )A．通过细菌滤器B．严格宿主特异性C．只含有一种核酸D．有溶原性周期与溶菌性周期E．抵抗力比细菌繁殖体弱16．下述除哪项外，均为噬菌体的应用范围( )A．细菌的鉴定B．细菌的分型C．检测标本中未知的细菌D．分子生物学研究的工具E．测定细菌的相容性17．下列除哪项外，都是细菌变异在医学实践上的意义( )A．病原菌诊断、治疗B．基因工程C．制造活疫苗用于预防D．测定致癌物质E．以上都不是18．下列错误的是( )A．R质粒为耐药性因子B．Col质粒编码大肠菌素C．Vi质粒编码细菌毒力D．F质粒编码性菌毛E．以上都不对19．关于质粒的叙述，下述不正确的是( )A．是细菌核质外的遗传物质B．能在胞浆中自行复制C．可以丢失D．是细菌生命活动所必需的结构E．与某些细菌的耐药性有关20．关于转位因子，下述不正确的是( )A．是细菌基因组中能改变自身位置的DNA序列B．可从染色体的一个位置转移至另一个位置C．转座子不携带信息D．分为插入序列、转座子、转座噬菌体三类E．转位因子的转移可引起细菌基因突变或基因转移21．不产生性菌毛的细菌有( )A．F+菌B．Hfr菌C．雌性菌D．雄性菌E．有接合性R质粒的细菌22．关于细菌变异，下述错误的是( )A．H—O变异属于鞭毛变异D．R—S变异属于菌落变异C．BCG的制备属于毒力变异D．细菌L型属于荚膜变异E．芽胞变异属于形态、结构变异二、填空题1、遗传性变异，非遗传性变异2、形态结构变异，菌落变异，毒力变异，耐药性变异3、染色体，质粒，DNA4、F质粒，R质粒，细菌素质粒，毒力质粒5、病毒，特异性6、碱基置换，插入，缺失，转位因子7、基因突变，基因转移与重组8、任何一个或数个，个别特定9、噬菌体10、转化，转导，溶原性转换，接合11、细胞壁缺陷，高渗低琼脂12、牛型结核杆菌，结核病13、溶原菌正常分裂，产生免疫力，表达新的遗传性状可终止溶原状态14、溶原，溶菌，溶菌15、温和噬菌体16，转导，溶原性转换17、自然突变，诱导突变，突变选择，回复突变18、性菌毛，F＋菌19、雌性菌，接合20、耐药决定因子，耐药传递因子2l、载体三、最佳选择题1．C 2．D 3．E 4．D 5．E 6．D 7．B 8．C 9．C 10．C 11．C 12．C 13．D 14．E 15．E 16．E 17．E 18．E 19．D 20．C 21．C 22．D第十四章细菌的感染和免疫二、填空题1、正常菌群的组成和数量发生明显改变时，可出现——。
高中生物细菌分离实验教案
高中生物细菌分离实验教案实验目的：通过本实验，学生将学会如何从混合菌群中分离出单一种类的细菌，并学会使用无菌技术和培养基的制备方法。
实验材料：1. 不同种类的细菌混合溶液2. 琼脂培养基3. 火焰灼烧器4. 细菌培养皿5. 培养箱6. 培养基接种环7. 酒精灯实验步骤：1. 首先，准备好所有实验所需的材料和设备，确保所有器材都经过高温消毒处理。
2. 用火焰灼烧器将细菌培养皿的口部加热杀菌，使其无菌。
3. 用培养基接种环在混合细菌溶液中采集细菌样本，然后在无菌的琼脂培养基上均匀涂抹。
4. 将接种好的琼脂培养基培养皿放入培养箱中，设置适当的温度和湿度，在培养箱内培养一段时间。
5. 定期观察培养皿的生长情况，观察细菌的形态和颜色。
6. 当发现单一种类的细菌开始生长时，使用培养基接种环将其转移到新的琼脂培养基培养皿上，继续培养。
7. 最终得到单一种类的纯种菌落。
实验注意事项：1. 实验过程中要做到无菌操作，严格控制外部环境的污染。
2. 注意实验材料和设备的消毒和清洁工作。
3. 操作过程中要注意火焰灼烧器的使用安全。
4. 注意安全防护措施，避免细菌传播及误伤。
拓展实验：1. 利用不同培养基和培养条件，观察不同种类细菌的生长情况。
2. 进行抗生素敏感性测试，比较不同细菌对抗生素的敏感性。
3. 探究细菌对环境的适应性，如对不同pH值、温度和氧气浓度的适应能力等。
实验总结：通过本实验，学生将学会分离和鉴定不同细菌种类的方法和技术，加深对细菌的了解，培养实验操作技能和实验观察分析能力。
临床微生物实验室细菌鉴定指南汇总
临床微生物实验室细菌鉴定指南(续)温州医学院附属第一医院实验诊断中心潘钦石一．细菌的鉴定步骤1．鉴定的概念：将一个未知的菌株按其生物学特性，经过与所有已知菌种进行比较后划归到一个已知菌种的分析过程。
2．对待鉴定的菌种要明确已经获得纯化培养或者该菌种在血平板上生长良好，有单个菌落可以进行生化试验。
（我们这里一般都是预先纯化培养）3．对待鉴定的菌种进行革兰染色，观察形态（G+c，G–b，G–c，G+b），做触酶，氧化酶实验，然后按科，属，种逐步鉴定。
要注意对待鉴定的菌种选择一个合适的鉴定系统，临床常见细菌的快速简单的鉴定系统我们都已经设计好，参考鉴定质控单。
4．按鉴定质控单的要求填写好病人姓名，年龄，性别；标本类型，标本编号，送检日期等。
另外最重要的是要填写好该菌种的菌落形态以及有无溶血。
5．复习革兰染色，触酶实验，氧化酶实验。
⑴．革兰染色：是细菌鉴定过程中最常用最基本最重要的染色方法。
首先要将待鉴定的细菌涂片，固定（目的：杀死细菌，改变细菌对染料的通透性）。
第一步：以结晶紫初染（染色液Ⅰ）第二步：以卢戈氏碘液媒染（染色液Ⅱ）第三步：用95%乙醇脱色（染色液Ⅲ）第四步：最后用稀释复红复染（染色液Ⅳ）⑵．触酶实验(H2O2实验)：a.原理：具有过氧化氢酶的细菌能催化双氧水生成水和初生态氧，继而形成氧分子出现气泡。
b.方法：一般用玻片法，就是挑取菌落在洁净的玻片上涂开，滴加3%过氧化氢数滴，观察结果（立即有大量气泡产生者为阳性，不产生气泡者为阴性）。
要注意不能在血平板上进行实验，这样易出现假阳性；另外陈旧菌落要是进行实验可能会导致假阴性结果；还有不能在接种针或环上进行实验。
c.阳性对照用金黄色葡萄球菌，阴性对照用链球菌；试剂要避光置4℃冰箱保存。
d.应用：绝大多数含细胞色素的需氧和兼性厌氧细菌触酶实验阳性，链球菌属阴性。
临床常见细菌鉴定实验中我们一般用于区别葡萄球菌属（+），微球菌属（+），链球菌属（－）。
粪便标本中肠道致病菌的的分离鉴定
实验十粪便标本中肠道致病菌的的分离鉴定实验目的和要求1、掌握脓汁标本中常见病原菌分离和鉴定方法2、掌握药物敏感试验3、掌握肠道杆菌分离和鉴定的一般步骤4、熟悉肠道杆菌鉴定生化反应和血清学反应实验内容一、脓汁标本中未知病原菌的分离和鉴定二、粪便标本中肠道致病菌的分离和鉴定一、标本中未知病原性球菌的分离鉴定程序直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性观察菌落性状、溶血性、色素血琼脂平板涂片、染色、镜检挑取可疑菌落生化反应测定纯培养致病性测定（甘露醇、凝固酶等）标本血液脑脊液肉汤增菌培养涂片染色镜检二、标本中未知肠道感染细菌的分离鉴定程序标本脓血便、肛拭子选择/鉴别培基生化反应血清学鉴定克氏双糖铁培养基,动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基玻片凝集试验SS平板,EMB平板设计性实验临床标本中病原菌的分离与鉴定设计性实验1.脓汁标本：脓拭子培养基：血琼脂平板其他：3%H2O2、（兔血浆）、生理盐水、革兰染液、玻片等2.痰标本：咽拭子培养基：血琼脂平板其他：生理盐水、10%胆盐、革兰染液、玻片等3.尿标本：尿液培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：革兰染液、靛基质试剂、玻片等4.粪便标本：肛门拭子培养基：伊红美兰琼脂平板、克氏双糖铁斜面培养基、动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基其他：生理盐水、靛基质试剂、沙门菌多价血清、志贺菌多价血清、玻片等脓拭子分离培养革兰染色（血平板）革兰染色触酶实验甘露醇实验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：浓汁标本，用分离划线方法接种血平板，37℃培养18-24h以后观察结果。
重点：色素和溶血现象•2、革兰染色、观察形态学特征：取可疑菌落少许涂片，革兰染色、镜检。
结果观察•1、菌落观察•2、形态学观察（二）生化反应•触酶试验：(-) (+)H 2o 2H 2o o 2氧化氢酶+菌种：可疑菌落试剂：3%过氧化氢方法：见右图结果：见右图甘露醇实验•甘露醇生化反应管药敏实验浓汁标本可疑菌生长现象及生化反应结果观察形态学特征血平板生长现象触酶试验甘露醇试验结论：现象与论点、论据浓汁标本可疑菌药敏实验结果药品名称抑菌圈直径结论：咽拭子革兰染色革兰染色胆汁溶菌试验奥普托辛试验荚膜染色（石炭酸复红单染）分离培养（血平板）？粪便标本SS平板克氏双糖铁斜面培养基动力-半固体培养基生化反应管观察结果糖发酵试验玻片凝集试验革兰染色H2S试验尿液离心沉淀1500转，10分钟分离培养（EMB平板）革兰染色革兰染色克氏双糖铁斜面培养基动力-靛基质-尿素半固体琼脂培养基观察结果观察结果观察结果完成靛基质试验方法：•1、分离培养、观察菌落特征：粪便标本，用分离划线方法接种SS平板培养基37℃培养18-24h以后观察结果。
医学微生物测试题库及答案
医学微生物测试题库及答案医学微生物测试题库及答案1.不属于细菌的致病物质的组分是（）A．脂质A 12页B．肠毒素C．荚膜多糖 16页D．核糖体 15页【正确答案】E．细菌分泌系统 15页2.不属于细菌细胞膜功能的是（）14页A．抗吞噬【正确答案】B．呼吸作用C．分泌胞外酶D．形成中介体E．生物合成3.具有黏附作用的细菌特殊结构是（）A．鞭毛B．芽胞C．荚膜D．性菌毛E．普通菌毛【正确答案】4.与内毒素有关的细菌结构是（）11页A．外膜【正确答案】B．核膜C．线粒体膜D．荚膜E．细胞膜5.关于质粒的叙述错误的是（）15页A．细菌染色体外遗传物质B．可自行丢失C．可在细菌间转移D．具有自我复制的能力E．细菌生命活动所必需物质【正确答案】6. G-菌细胞壁含特有的成分是（）11页A．蛋白质B．异染颗粒C．外膜【正确答案】D．膜磷壁酸E．中介体7. 下列描述的微生物特征中，不是所有微生物共同特征的是（）A．体型微小B．分布广泛C．种类繁多D．可无致病性E．只能在活细胞内生长繁殖 1页【正确答案】8. 青霉素的抗菌作用机理是（）超纲 14页A．破坏细胞膜结构B．抑制细菌核酸代谢C．影响细菌分泌系统D．干扰细菌蛋白质合成E．竞争性结合细菌转肽酶【正确答案】9. 具有异染颗粒的细菌是（）了解15页A．布氏杆菌B．炭疽杆菌C．白喉杆菌【正确答案】D．伤寒杆菌E．百日咳杆菌10. 与动物细胞相比，细菌所特有的一种重要结构是（）8页A. 核糖体B. 线粒体C. 细胞壁【正确答案】D. 细胞膜E. 高尔基体11. 有关细菌荚膜的描述不正确的是（）16页较难A．化学成分大多数为多糖B．细菌的重要侵袭因素C．可抵抗吞噬细胞吞噬作用D．多在机体内或营养丰富时形成E．可抑制菌体的分裂增殖【正确答案】12. 细菌细胞壁的主要功能是（）12页A．生物合成B．维持细菌外形【正确答案】C．参与物质交换D．呼吸作用E．能量产生13. 与细菌在宿主体内定居有关的结构是（）18页A．普通菌毛【正确答案】B．性菌毛C．葡萄球菌A蛋白D．DNA酶E．核蛋白体14. 测量细菌的常用单位是（）20页A．mmB．μm【正确答案】C．nmD．pmE．cm15. 有关细菌芽胞的描述不正确的是（）19页A．是细菌的一种特殊结构B．是细菌的一种特殊繁殖方式【正确答案】C．是细菌对不良环境抵抗力最强的结构D．能形成芽胞的细菌一般为革兰阳性菌E．细菌在机体外营养缺乏时才易形成芽胞16. 一患儿因腹泻来医院就诊，粪检分离出大量革兰阴性菌，请问不宜首选青霉素治疗的原因是该菌（）10页A．细胞壁肽聚糖缺少五肽交联桥【正确答案】B．细胞壁肽聚糖骨架不完整C．细胞壁外缺少脂多糖D．细胞壁外缺少外膜E．细胞壁肽聚糖突变1.除去热原质最好的方法是（）27页A.蒸馏法【正确答案】B.高压蒸汽灭菌法C.滤过法D.巴氏消毒法E.干烤法2.干热灭菌法中，破坏性大，灭菌最彻底的方法是（）31页A．焚烧【正确答案】B．烧灼C．干烤D．微波E．红外线3.灭菌效果最好，应用最广的灭菌方法是（）A．间歇灭菌法B．巴氏灭菌法C．紫外线灭菌法D．红外线灭菌法E．高压蒸汽灭菌法【正确答案】4.不属于细菌生化反应的试验是（）26页A．VP试验B．外斐试验【正确答案】C．甲基红试验D．枸橼酸盐利用试验E．糖发酵试验5.研究细菌性状应选用的细菌群体生长繁殖期是（）25页A．稳定期B．迟缓期C．稳定期D．对数期【正确答案】E．衰退期6.下列不属于抗生素的特点描述是（）A．可由真菌产生B．可由放线菌产生C．可由细菌产生D．只对产生菌有近缘关系菌有杀伤作用【正确答案】E．对微生物有抑制作用7.IMViC试验常用于鉴别（）26页A．葡萄球菌B．肺炎球菌C．脑膜炎球菌D．肠道杆菌【正确答案】E．厌氧菌8.一次性医用塑料制品的大量消毒可采用（）32 A．煮沸B．巴氏消毒法C．电离辐射【正确答案】D．干热灭菌法E．高压蒸汽灭菌法9.巴氏消毒法主要用于（）A．乳制品【正确答案】B．抗生素消毒C．血清的消毒D．液体培养基消毒E．注射用水的消毒10.细菌代谢产物中与致病性无关的是（）27页A．外毒素B．内毒素C．侵袭性酶D．热原质E．细菌素【正确答案】11.对血清，抗生素等生物制品消毒灭菌时，应选用（）32页A．高压蒸汽灭菌法B．滤过除菌法【正确答案】C．流通蒸汽灭菌法D．煮沸法E．巴氏消毒法12.患者女，80岁，因感冒发热收入院。
病原菌分离培养与鉴定
细菌分离培养与鉴定
细菌学诊断的一般程序
脓/痰/尿
涂片、染色、镜检
标本
分离培养
纯培养
血、脑脊 液等
增菌
生化反应 血清学鉴定 药敏试验 动物实验
11
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
性能特点
自动化程度较高 、检测速度快、 可鉴定细菌种类 及药敏试验种类18
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
动物试验：细菌毒力的测定 * LD50 * ID50
小 鼠
豚鼠
家兔
细 菌 专性厌氧菌
细菌感
细 菌 专性厌氧菌
纯
培
养 兼性厌氧菌 物
鉴 定
的
鉴
需氧菌
定
形态和染色 菌落特征 生化试验 药物敏感试验 毒力试验 病原菌抗原 生物芯片检测
（四）生物芯片技术
将核酸片段、蛋白质或酶、抗原或抗体、细胞及组织 等生物样品有序地固定于硅片、尼龙膜等固相支持物上 在一定的条件下进行生化反应。 用化学荧光法、酶标法或同位素法显示反应结果， 通过特定的仪器读取与收集数据，并用软件进行数据 分析，从而判断样品中靶分子的种类和数量。
Staphylococcus aureus
G- Neisseria meningitidis Escherichia 7coli
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＋/
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沙门菌
＋
－
＋
＋
－
变形杆菌 ⊕
－
＋/ － －
＋/－
肠道杆菌的血清学试验（玻片凝集试验）
材料
1. 菌种：伤寒杆菌培养物、痢疾杆菌培养物
2. 伤寒杆菌的诊断血清，志贺菌诊断血清、载玻片、生理盐水
方法
血清
生理盐水
肠道杆菌生化反应的结果
葡萄糖 ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ⊕ ＋ ＋
乳糖 ⊕ ＋ ± － － － －
革兰染色
纯培养 生化反应
触酶试验
甘露醇试验
药敏试验
革兰染色的操作步骤
涂片制作
染色 镜检
革兰染色的操作步骤
初染
结晶紫1分钟
媒染
卢戈氏碘液1分钟
脱色
95%酒精30秒
复染
稀释复红30秒
脓汁标本的生化反应
1.触酶试验：区别葡萄球菌与链球菌； 2.甘露醇分解试验：区别葡萄球菌的致病菌株
与非致病菌，致病菌分解甘露醇产酸,使培养 基由紫色变黄色.
一、标本中未知病原性球菌 的分离和鉴定
（一）实验目的
1、掌握脓汁标本中常见病原菌分离和鉴定方 法
2、掌握药物敏感试验
（二）实验器材
1、待检的脓汁标本； 2、培养基：血琼脂平板，生化反应管；普
通琼脂平板； 3、试剂：革兰染色液，生理盐水；药敏纸
片，3%过氧化氢； 4、其它：接种环、接种针、酒精灯、培养
动力 ± － ＋ ＋ ＋ ＋ －
H2S － － ＋ ＋ ± ＋ －
尿素 － － ＋ － － － －
埃希菌属 克雷伯菌属 变形杆菌
非致病 菌
乙型副伤寒
甲型副伤寒
伤寒杆菌
致病菌
痢疾杆菌
(-)
(+)
（甘—露）醇发（酵+试）验
二、标本中未知肠道感染细菌 的分离和鉴定
（一）实验目的
1、掌握肠道杆菌分离和鉴定的一般步骤 2、熟悉肠道杆菌鉴定生化反应和血清学反应
（二）实验器材
1、待检的粪便标本； 2、培养基：SS平板，生化反应管；普通
琼脂平板； 3、试剂：革兰染色液，生理盐水；药敏纸
实验十
标本中未知细菌的分离和鉴定
致病菌的检验程序和常用项目
形态学检查
直接涂片 染色镜检
初步诊断
分离培养
形态特征
（常规培养或 生化试验
特殊培养）
血清学诊断
血清学试验 动物实验
药物敏感试验
明 确 诊
（沉淀反应、凝集试验、免疫标记技术等）
断
细菌的快速鉴定
(微生物数字编码分类鉴定法、血培养自动化检测系统、核 酸杂交技术、PCR技术、DNA芯片技术等）
片；沙门菌、志贺菌多价诊断血清； 4、其它：接种环、接种针、酒精灯、培养
箱、显微镜、载玻片等。
（三）实验方法与检验流程
粪便标本
SS平板
克氏双糖铁斜 面培养基
观察结果
纯培养
革兰染色
生化反应管
玻片凝集试验
药敏试验Biblioteka 肠道杆菌五管糖试验菌名
葡萄糖 乳糖
大肠埃希菌 ⊕ ⊕
志贺菌
＋
－
麦芽糖 甘乳糖 蔗糖
＋
＋
箱、显微镜、载玻片等
（三）实验方法与检验流程
直接涂片染色镜检：观察细菌形态、排列、染色性
标本
观察菌落性状、溶血性、色素
血琼脂平板
涂片、染色、镜检
挑取可疑菌落 生化反应测定
纯培养
致病性测定
血液
肉汤增
脑脊液 菌培养
（凝固酶、耐热核酸酶）
涂片染色镜检
（三）实验方法与检验流程
脓拭子
分离培养 （血平板）
直接涂片 革兰染色