核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
Cat Number：For Research Use Only
Store at -20℃ for one year
Expire date：
一、 试剂盒说明
本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。
二、 试剂盒组份
组份 KGP150 （50 test） KGP1100 （100 test） 储存温度
Buffer A 25 mL 25 mL ×2 4℃
Buffer B 1.5 mL 3．0 mL 4℃
Buffer C 12.5 mL 25 mL 4℃
DTT 50μL 100μL -20℃
蛋白酶抑制剂 250μL 500μL -20℃
PMSF（100mM）400μL 800μL -20℃
三、操作步骤
Ⅰ 实体组织蛋白的提取
1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ，弃沉淀，小心吸取上清转移至另一
离心管中；
2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；
3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，
5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；
5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后， 4℃离心，16000×g,5min；
6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；
7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，
5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；
8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；
9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
Ⅱ 培养细胞蛋白提取
1、取培养细胞5×106～1×107个/mL，4℃离心，500×g,3 min收集细胞，弃去培养液，用预冷的PBS洗涤两遍；
2、用移液枪尽可能取去上清，勿留残液，估计细胞压积PCV（离心后的紧实细胞体积）；
3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，
5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min；
4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min；
5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后， 4℃离心，16000×g,5min；
6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白；
7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，
5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡15 seconds；
8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管，即得核蛋白；
9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法），分装并保存于-80℃，避免反复冻融。
四、 注意事项
1、 所有的试剂及器具均需预冷后使用；
2、 细胞的数量不应少于0.5×107个/mL；，
3、 以上各缓冲液的使用量是以20μL细胞压积为例，如细胞压积不同，请参考下表加入各缓冲液。
细胞压积PCV Buffer A Buffer B Buffer C
10μL 100μL 5.5μL 50μL
20μL 200μL 11μL 100μL
50μL 500μL 27.5μL 250μL
100μL 1mL 55μL 500μL
4、一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，
则需要将提取的蛋白样品进行透析脱盐，建议使用凯基透析Buffer (Cat: KGB—P001)透析后进行后续分析。
五、 凯基相关产品（详见凯基网站https://www.360docs.net/doc/7116222821.html,）
1、蛋白提取
核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
全蛋白提取试剂盒
膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
线粒体蛋白提取试剂盒
磷酸化蛋白提取试剂盒（简易型）
活性蛋白提取试剂盒
红细胞裂解液
细菌蛋白提取试剂盒
酵母蛋白提取试剂盒
植物蛋白提取试剂盒
蛋白裂解液系列
2、蛋白定量
BCA法蛋白定量检测试剂盒
Bradford法蛋白定量检测试剂盒
Lowry法蛋白定量检测试剂盒
3、蛋白染色
蛋白质银染检测试剂盒
蛋白质考马斯亮蓝染色检测试剂盒
考马斯亮蓝蛋白快速染液
4、蛋白分子量Marker
蛋白分子量Marker（14KD-116KD）
蛋白分子量Marker（10KD-200KD）
预染蛋白分子量Marker（20KD-118KD）
预染彩色蛋白分子量Marker（11KD-250KD）
PH0311 细菌细胞总蛋白提取试剂盒操作手册
PH0311|细菌细胞总蛋白提取试剂盒 (Bacterial Cell Protein Extraction Kit) Catalog No：PH0311Size：?50T Storage：Store@4℃ ◆产品简介 1、总论：经典的细胞蛋白质分离流程由下述主要步骤组成：清洗组织或细胞；裂解细胞；离心去沉淀获得可溶性蛋白质粗提物（可依据目标蛋白质的理化特性特别的调配裂解缓冲液）；通过有机溶剂或盐析等沉淀离心、层析、电泳等方法进一步纯化，得到目的产物蛋白。 2、本试剂使用温和的非离子型去污剂，适用于大肠杆菌表达的重组蛋白的蛋白提取。本产品可应用于从细菌裂解液中提取可溶性蛋白。所提取的蛋白保持了生物学活性，可进行IP，Western Blot，蛋白纯化等下游操作。 ◆产品存储 Store at4℃(本试剂在室温干燥条件下，可保存6个月。溶菌酶贮存液、100×蛋白酶抑制剂和50%甘油2-8℃保存) ◆试剂组成 试剂盒组成PH0311-50 细菌细胞蛋白裂解液50ml 细菌细胞漂洗液120ml 溶菌酶贮存液3ml 100×蛋白酶抑制剂0.6ml 50%甘油10ml 说明书1份 ◆使用说明 1、离心收集细菌细胞,按照每克湿菌取用5-6ml细菌细胞漂洗液的比例，于20℃～37℃将细胞悬浮起来后，4℃，12000g，1-2min离心除去细菌细胞漂洗液，漂洗2次。（离心只是收集细胞，转速、时间可自行调整。） *如果细菌细胞漂洗液不够，也可以用TE buffer（H=7.4--7.6）代替。 2、离心除去细菌细胞漂洗液后，按每克湿菌细胞，加入5ml细菌细胞蛋白裂解液，250ul溶菌酶贮存液和50ul100×蛋白酶抑制剂，混悬细菌细胞样品。
全蛋白提取试剂盒
全蛋白提取试剂盒 Tissue or Cell Total Protein Extraction Kit 产品编号：C510003 包装规格：50 Assays 产品简介 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取全蛋白，用含有蛋白酶抑制剂及磷酸酶抑制剂的裂解缓冲液Lysis Buffer 匀浆裂解组织或细胞，作用温和，提取过程简便高效,可以提取出培养细胞或动物组织中的决大多数蛋白质。获得的全蛋白可 用于Western Blot 、免疫共沉淀，酶活性分析，Pull down 和EMSA 等后续研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀 的研究，因本试剂盒中包括这两种酶的抑制剂，可以每次从107 个培养细胞或200 mg 动物组织提取蛋白质，本试剂盒可以 使用50次。 产品特点 1. 提取的蛋白质包括膜,核,核基质和胞质蛋白,而且最大限度保持蛋白质活性 2. 整个操作过程只需要30分钟左右 3. 即可以用于培养细胞（50x107 个），有可以用于动物组织（50x200 mg ）蛋白质的提取 4. 避免蛋白酶和磷酸酶对蛋白质的降解，保持蛋白质的完整性和天然活性 5. 不需要超速度离心，可以同时处理多个样品 运输和保存条件 常温运输，收到后请将磷酸酶抑制剂，蛋白酶抑制剂和PMSF 于 -20℃保存，其余2-8℃保存，保质期一年。 试剂盒组成 成分 C510003 Lysis buffer 50 mL 蛋白酶抑制剂 50 μL 磷酸酶抑制剂 250 μL PMSF 500 μL 操作步骤 A. 实体组织蛋白的提取 1. 在每1 mL 预冷的Lysis Buffer 加入5 μL 磷酸酶抑制剂,1 μL 蛋白酶抑制剂和10 μL PMSF 混匀。冰上保存数分钟待用。 2. 将100-200 mg 固体组织置于培养皿中，手术剪剪碎成3 mm ×3 mm 左右的小块，尽量去除脂肪组织和结缔组织等非目的组织，用PBS 洗涤两次，离心取沉淀后加入0.5～1 mL 上述配制好的预冷的Lysis Buffer ，4℃玻璃匀浆器上下手动匀浆15-30次。或超声破碎细胞，每次30s ， 3～4次，每次间隔1 min ，置于冰上冷却。均质匀浆或超声破碎细胞后应镜检，细胞破碎率不小于90％，同时没有明显的组织小块。 3. 取组织匀浆液转移到1.5 mL 预冷的离心管，冰上放置10 min 左右, 期间取出剧烈震荡2-3次； 4. 15000 g （13000 rpm)，4℃离心10 min ，取上清转移至新的预冷的离心管中，即为全蛋白提取物，进行蛋白定量和其他蛋白质相关实验。 5. 分装保存于-70℃，避免反复冻融。 s a n g o n b i o t e c h
蛋白质提取与制备的原理和方法
蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。 蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用。将细胞内蛋白质提取出来。并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化硫等）中，可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。水适用于白蛋白类蛋白质的抽提。如果抽提物的pH用适当缓冲液控制时，共稳定性及溶解度均能增加。如球蛋白类能溶于稀盐溶液中，脂蛋白可用 稀的去垢剂溶液如十二烷基硫酸钠、洋地黄皂苷（Digitonin）溶液或有机溶剂来抽提。其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱溶液抽提。 蛋白质类别和溶解性质 白蛋白和球蛋白: 溶于水及稀盐、稀酸、稀碱溶液，可被50%饱和度硫酸铵析出。真球蛋白 : 一般在等电点时不溶于水，但加入少量的盐、酸、碱则可溶解。拟球蛋白: 溶于水，可为50%饱和度硫酸铵析出 醇溶蛋白: 溶于70～80%乙醇中，不溶于水及无水乙醇 壳蛋白: 在等电点不溶于水，也不溶于稀盐酸，易溶于稀酸、稀碱溶液 精蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 组蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 硬蛋白质: 不溶于水、盐、稀酸及稀碱 缀合蛋白(包括磷蛋白、粘蛋白、糖蛋白、核蛋白、脂蛋白、血红蛋白、金属蛋白、黄素蛋白和氮苯蛋白等) : 此类蛋白质溶解性质随蛋白质与非蛋白质结合部分的不同而异，除脂蛋白外，一般可溶于稀酸、稀碱及盐溶液中，脂蛋白如脂肪部分露于外，则脂溶性占优势，如脂肪部分被包围于分子之中，则水溶性占优势。 蛋白质的制备是一项十分细致的工作。涉及物理学、化学和生物学的知识很广。近年来虽然有了不改进，但其主要原理仍不外乎两个方面： 一是利用混合物中几个组分分配率的差别，把它们分配于可用机械方法分离的两个或几个物相中，如盐析、有机溶剂提取、层析和结晶等； 二是将混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于不同区域而达到分离的目的，如电泳、超离心、超滤等。由于蛋白质不能溶化，也不能蒸发，所能分配的物相只限于固相和液相，并在这两相间互相交替进行分离纯化。 制备方法可按照分子大小、形状、带电性质及溶解度等主要因素进行分类。按分子大小和形态
全蛋白提取试剂盒(中)
全蛋白提取试剂盒（中） 货号：BC3711 规格：50T/100T 有效期：至少1年。 产品组成： 名称50T100T Storage 裂解液（中）50ml100ml2-8℃ 磷酸酶抑制剂（100×）0.5ml1ml -20℃ 蛋白酶抑制剂（100×）0.5ml1ml PMSF（100×）0.5ml1ml 产品说明： 本试剂盒用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为温和，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品仅用于科研。 操作方法： 1、组织总蛋白的提取 1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF；混匀，放置在冰上备用； 2)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入 0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作； 3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4℃12000g离心30min； 4)吸取上清至新的管中； 5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。） 2、细胞总蛋白的提取 1)裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml； 2)贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液；在冰上用细胞
刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min。 3)悬浮细胞：4℃400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s， 放置冰上裂解10min，重复3-4次； 4)裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min； 5)将上清移入新的EP管中；进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。 （提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。） 注意事项： 1.实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境。 2.PSMF（有毒）现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解。
酵母蛋白快速提取试剂盒使用说明
酵?母蛋?白质快速微量提取试剂盒 Yeast Protein Miniprep Kit 常温运输、4℃保存（溶液B成分二需-20℃保存），有效一年。 自备酵母培养基 产品及特点 本产品用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法，适合于各种形态的 各种酵母材料。本产品的其主要特点是： 1.破壁效率高，能达到80-90%。 2.可以处理各种酵母样品。 3.操作简单，得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分 析。 规格及成分成份 50次包装 溶液A 100 mL 溶液B成分一 50 mL 溶液B成分二 1.5 g 玻璃珠，400μL 5 g 使用方法准备工作：将溶液B成分二（干粉）全部加到50mL溶液B成分一中，充分摇晃使之全部溶解，成为溶液B，然后分装成小分（体积根据每次实验的样 品数决定）并放-20℃长期保存。
1、 将酵母细胞接种到5mL YPD 培养基中，30℃摇晃（250rpm/分钟）过 夜培养使其OD600达到0.5～2.0。 2、 把酵母细胞培养物转到装有2mL 预冷溶液A 的10-15 mL 离心管中， 混匀。 3、 4℃ 5000g 离心5分钟沉淀酵母细胞，吸出上清液。 4、 用30μL 溶液B 悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5mL 塑料离心管中。 5、 100℃下保温3分钟，使蛋白酶失活，样品存放于-20℃。 6、 加入0.1g 的玻璃珠。 7、 在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。 8、 加入70 μl 溶液B，稍加振荡，置100℃保温1分钟。 9、 取5-20μl 抽提液上样直接进行SDS-PAGE 凝胶电泳。 关联推荐 4X 蛋白上样缓冲液 BCA 蛋白检测试剂盒 蛋白marker ECL 发光检测液
蛋白质提取方法
蛋白质提取方法-------列举10种方法 一、植物组织蛋白质提取方法（summer） 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl（PH8）45ml 2、甘油（Glycerol）75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g 这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！ 二、植物组织蛋白质提取方法(summer) 三氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1 小时），然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。 药品： 提取液：含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮 裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！ 三、组织：肠黏膜（newinbio） 目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达 应用TRIPURE 提取蛋白质步骤： 含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量）倒转混匀，置室温10min 离心：12000 g，10min，4度，弃上清，加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE 用量）振荡，置室温20min 离心：7500g，5 min，4 度，弃上清 重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2 次 沉淀中加入100％乙醇2ml 充分振荡混匀，置室温20 min 离心：7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀，1％SDS溶解沉淀 离心：10000g，10min，4度 取上清-20 度保存（或可直接用于WESTERN BLOT） 存在的问题：加入1％SDS 后沉淀不溶解，还是很大的一块，4 度离心后又多了白色沉定，SDS 结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。 解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，
蛋白提取试剂盒选择指南
蛋白提取试剂盒选择指南 蛋白提取试剂盒选择指南 样本动物细菌植物真菌酵母昆虫应用I II I II I II I II I II I II 蛋白部位应用I：WB、1D电泳、活性检测、纯化；应用II：等点聚焦、2D电泳、质谱 总蛋白3101 3181 3123/8 3182 3124 3183 3127 3189 3125 3185 3126 3193 膜蛋白3103/16 3188 3151 3187 3152 3184 3156 3190 3157 3192 3153 核蛋白3102 3154 3159 3168 胞浆蛋白3113 3180 磷酸化蛋白3105/8 G+菌3129 核/质3169 藻类-总3131 核/质31681 液体-总3133 糖蛋白3107 G-菌3130 叶绿体3179 藻类-膜3170 土壤-总3132 膜/胞浆/核分步提取3104 细菌外膜31512 叶绿体膜3175 血浆3137 膜/胞浆3111 线粒体3172 血清3138 核/胞浆3112 线粒体膜3173 线粒体3176/7 线粒体膜3158 核膜3174 石蜡包埋3164 甲醛固定3165 冻存样品31211 脑组织31227 骨组织总蛋白3161 脂肪组织31226
蛋白提取试剂盒选择指南 相关产品： 蛋白提取 BB-3101 BestBio贝博生物总蛋白提取试剂盒BB-3102 BestBio贝博生物核蛋白提取试剂盒 BB-3103 BestBio贝博生物膜蛋白提取试剂盒BB-3104 BestBio贝博生物膜/胞浆/核蛋白分步提取试剂盒 BB-31042 BestBio贝博生物细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒BB-3105 BestBio贝博生物磷酸化蛋白提取试剂盒 BB-31051 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白提取试剂盒BB-3106 BestBio贝博生物活性蛋白提取试剂盒 BB-3108 BestBio贝博生物磷酸化蛋白富集试剂盒BB-31081 BestBio贝博生物植物磷酸化蛋白富集试剂盒 BB-3109 BestBio贝博生物糖蛋白富集试剂盒BB-3111 BestBio贝博生物膜蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 BB-3112 BestBio贝博生物核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒BB-3113 BestBio贝博生物胞浆蛋白提取试剂盒 BB-3114 BestBio贝博生物细胞跨膜蛋白提取试剂盒BB-3115 BestBio贝博生物细胞核蛋白提取试剂盒 BB-31152 BestBio贝博生物组织核蛋白提取试剂盒BB-3116 BestBio贝博生物细胞膜蛋白提取试剂盒 BB-31161 BestBio贝博生物细胞质膜蛋白提取试剂盒BB-3117 BestBio贝博生物组蛋白提取试剂盒 BB-31171 BestBio贝博生物植物组蛋白提取试剂盒BB-31172 BestBio贝博生物昆虫组蛋白提取试剂盒 BB-31173 BestBio贝博生物酵母组蛋白提取试剂盒BB-3118 BestBio贝博生物胞浆蛋白/核蛋白/组蛋白提取试剂盒 BB-3121 BestBio贝博生物细胞蛋白提取试剂盒BB-31211 BestBio贝博生物冻存细胞蛋白提取试剂盒 BB-3122 BestBio贝博生物组织蛋白提取试剂盒BB-31226 BestBio贝博生物脂肪组织蛋白提取试剂盒 BB-31227 BestBio贝博生物脑组织蛋白提取试剂盒BB-3123 BestBio贝博生物细菌蛋白提取试剂盒 BB-3124 BestBio贝博生物植物蛋白提取试剂盒BB-31241 BestBio贝博生物植物根茎蛋白提取试剂盒 BB-3125 BestBio贝博生物酵母蛋白提取试剂盒BB-3126 BestBio贝博生物昆虫蛋白提取试剂盒 BB-31262 BestBio贝博生物昆虫胞浆蛋白提取试剂盒BB-3127 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒 BB-31272 BestBio贝博生物真菌蛋白提取试剂盒BB-3128 BestBio贝博生物大肠杆菌蛋白提取试剂盒 BB-3129 BestBio贝博生物革兰氏阳性菌蛋白提取试剂盒BB-3130 BestBio贝博生物革兰氏阴性菌蛋白提取试剂盒 BB-3131 BestBio贝博生物藻类蛋白提取试剂盒BB-3132 BestBio贝博生物土壤蛋白提取试剂盒 BB-3133 BestBio贝博生物液体样本蛋白提取试剂盒BB-31332 BestBio贝博生物乳清蛋白提取试剂盒 BB-3134 BestBio贝博生物白细胞蛋白提取试剂盒BB-3135 BestBio贝博生物血液单核细胞蛋白提取试剂盒
蛋白组分抽提试剂盒说明书
Overview ?Description ?References ?Product Information ?Applications ?Biological Information ?Safety Information ?Product Usage Statements ?Storage and Shipping Information ?Supplemental Information ?Prix & Disponibilité Prix & Disponibilité Référence DisponibilitéConditionnement QtéPrix Quantité 539790-1KIT En stock Contacter le Service Clients 1 kit à la validation de la commandePlus d'informations —Ajouter aux favoris Ajouter au panier Description
Overview Fast and reproducible extraction of subcellular proteomes from mammalian cells ProteoExtract? Subcellular Proteome Extraction Kit (S-PEK) is designed for fast and reproducible extraction of subcellular proteomes from adherent and suspension-grown mammalian cells. The S-PEK takes advantage of the different solubilities of certain subce compartments in the four selected reagents. In the case of adherent cells, the procedure is performed directly in the tissue culture dish without the need for cell removal. Cells or the parts of the cells remain attached to the plate during sequential extraction of subcellular compartments, until the appropriate extraction reagent is used. Thus, the early destruction the cellular structure by enzymatic or mechanical detachment of cells from the tissue cultu plate and any mixing of different subcellular compartments is prevented. For suspension-grown cells, extraction starts with gentle sedimentation and washing of the cel The stepwise extraction delivers four distinct protein fractions from one sample: ?Cytosolic fraction (F1) ?Membrane/organelle protein fraction (F2) ?Nucleic protein fraction (F3) ?Cytoskeletal fraction (F4) Proteins are obtained in the native state making the S-PEK suitable for many downstream applications such as 1D and 2D gel electrophoresis, immunoblotting, enzyme activity assa and protein microarrays. Sample size: 3-5x106or 25-50 mg tissue. Catalogue Number 539790 Brand Family Calbiochem? Synonyms S-PEK Kit Features and benefits ?Stepwise extraction resulting in four distinct subcellular proteomes from one sample ?Highly reproducible ?No ultracentrifugation steps ?Fast—needs just 2 hours with 45 minutes hands-on time ?Produces proteins suitable for functional studies
提取蛋白的常规方法
1、原料的选择 早年为了研究的方便，尽量寻找含某种蛋白质丰富的器官从中提取蛋白质。但至目前经 常遇到的多是含量低的器官或组织且量也很小，如下丘脑、松果体、细胞膜或内膜等原材料， - 105 - 蛋白质提取与制备Protein Extraction and Preparation 因而对提取要求更复杂一些。 原料的选择主要依据实验目的定。从工业生产角度考虑，注意选含量高、来源丰富及成 本低的原料。尽量要新鲜原料。但有时这几方面不同时具备。含量丰富但来源困难，或含量 来源均理想，但分离纯化操作繁琐，反而不如含量略低些易于获得纯品者。一般要注意种属 的关系，如鲣的心肌细胞色素C 较马的易结晶，马的血红蛋白较牛的易结晶。要事前调查 制备的难易情况。若利用蛋白质的活性，对原料的种属应几乎无影响。如利用胰蛋白酶水解 蛋白质的活性，用猪或牛胰脏均可。但若研究蛋白质自身的性质及结构时，原料的来源种属 必须一定。研究由于病态引起的特殊蛋白质（本斯.琼斯氏蛋白、贫血血红蛋白）时，不但 使用种属一定的原料，而且要取自同一个体的原料。可能时尽量用全年均可采到的原料。对 动物生理状态间的差异（如饥饿时脂肪和糖类相对减少），采收期及产地等因素也要注意。 2、前处理 a、细胞的破碎 材料选定通常要进行处理。要剔除结缔组织及脂肪组织。如不能立即进行实验，则应冷 冻保存。除了提取及胞细外成分，对细胞内及多细胞生物组织中的蛋白质的分离提取均须先 将细胞破碎，使其充分释放到溶液中。不同生物体或同一生物体不同的组织，其细胞破坏难 易不一，使用方法也不完全相同。如动物胰、肝、脑组织一般较柔软，作普通匀浆器磨研即 可，肌肉及心组织较韧，需预先绞碎再制成匀桨。 ⑴机械方法 主要通过机械切力的作用使组织细胞破坏。常用器械有：①高速组织捣碎机（转速可达 10000rpm，具高速转动的锋利的刀片），宜用于动物内脏组织的破碎；②玻璃匀浆器（用两 个磨砂面相互摩擦，将细胞磨碎），适用于少量材料，也可用不锈钢或硬质塑料等，两面间
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒
凯基核蛋白和胞浆蛋白提取试剂盒 Cat Number：For Research Use Only Store at -20℃for one year Expire date： 一、试剂盒说明 本试剂盒用于从哺乳动物组织和培养细胞中提取核蛋白和/或胞浆蛋白，提取制备过程简便。制备的核蛋白和胞浆蛋白能保持天然活性，并且纯度较高。提取的蛋白可用于进一步的转录因子活性分析、凝胶阻滞实验(gel shift assay)、免疫共沉淀、Western Blotting、酶活性测定等后续蛋白质研究。 二、试剂盒组份 三、操作步骤 Ⅰ 实体组织蛋白的提取 1、组织样本，将组织剪切成小块，加入适量的冰冷PBS均浆后，静置5 min ， 弃沉淀，小心吸取上清转移至另一离心管中； 2、上清4℃离心500×g，3 min，弃上清，估计细胞压积PCV（离心后的 紧实细胞体积）； 3、每20μL细胞压积中，加入200μL预冷的Buffer A【使用前每mL Buffer A加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂】，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上10～15min； 4、加入11μL冷Buffer B，最大转速涡旋剧烈振荡5s，放置冰上1min； 5、再次最大转速涡旋剧烈振荡5s后，4℃离心，16000×g,5min； 6、尽快将上清转入另一预冷的洁净微量离心管，置于冰上，即得胞浆蛋白； 7、在离心沉淀物（细胞核）中加入100μL预冷的Buffer C (使用前每mL Buffer C加入1μL DTT，5μL 100mM PMSF，5μL蛋白酶抑制剂)，最大转速涡旋剧烈振荡15s，放置冰上40min，每间隔10 min涡旋剧烈振荡 15 seconds； 8、4℃离心，16000×g,,10min，尽快将上清转入一预冷的洁净微量离心管， 即得核蛋白； 9、上述提取的胞浆蛋白和核蛋白进行蛋白定量（Braford法或BCA法）， 分装并保存于-80℃，避免反复冻融。 Ⅱ 培养细胞蛋白提取
脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)
脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法) 简介： 脑脊液(Cerebro-Spinal Fluid ，CSF)是存在于脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内的无色透明液体，由脑室中的脉络丛产生，与血浆和淋巴液的性质相似。正常成年人的脑脊液，弱碱性，不含红细胞。正常脑脊液具有一定的化学成分和压力，对维持颅压的相对稳定有重要作用，当中枢神经系统受损时，脑脊液的检测成为重要的辅助诊断手段。总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成。对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比为16%；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。 Leagene 脑脊液总蛋白检测试剂盒(染料结合比色法)其检测原理是在酸性条件下，伊红解离成阴离子型，染料瞌颜色逐渐褪去，使试剂空白吸光度降低；蛋白质多肽中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸、色氨酸残基解离成带有-NH3+基团，与伊红结合成红色蛋白复合物，其吸光度与蛋白浓度呈比例，与同样处理的标准液比较，测得样本中蛋白质的含量。本试剂盒专门用于人或动物脑脊液样本中的总蛋白含量测定。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 离心管、小试管 2、 比色杯 3、 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、 取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成蛋白标准溶液，配制 编号 名称 TC060350T TC0603100T Storage 试剂(A): TP 显色液 A1: Eosinsolution 1ml 2ml RT 避光 A2: Acidic buffer 1ml 2ml RT A3: Eosin buffer 100ml 200ml RT 临用前，A1：A2：A3混合，即为TP 显色液。 试剂(B): TP acidic buffer 3.5ml 7ml RT 试剂(C): 蛋白标准 20mg 20mg RT 试剂(D): 蛋白标准配制液 5ml 5ml RT 使用说明书 1份
蛋白质提取与制备的原理和方法
蛋白质提取与制备的原理和方法 蛋白质提取与制备蛋白质种类很多，性质上的差异很大，既或是同类蛋白质，因选用材料不同，使用方法差别也很大，且又处于不同的体系中，因此不可能有一个固定的程序适用各类蛋白质的分离。但多数分离工作中的关键部分基本手段还是共同的，大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中，少数与脂类结合的蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质和酶。 蛋白质与酶在不同溶剂中溶解度的差异，主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团的比例，其次取决于这些基团的排列和偶极矩。故分子结构性质是不同蛋白质溶解差异的内因。温度、pH、离子强度等是影响蛋白质溶解度的外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用。将细胞内蛋白质提取出来。并与其它不需要的物质分开。但动物材料中的蛋白质有些可溶性的形式存在于体液（如血浆、消化硫等）中，可以不必经过提取直接进行分离。蛋白质中的角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质，只需要适当的溶剂洗去可溶性的伴随物，如脂类、糖类以及其他可溶性蛋白质，最后剩下的就是不溶性蛋白质。这些蛋白质经细胞破碎后，用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂，将蛋白质溶解出来，再用离心法除去不溶物，即得粗提取液。水适用于白蛋白类蛋白质的抽提。如果抽提物的pH用适当缓冲液控制时，共稳定性及溶解度均能增加。如球蛋白 类能溶于稀盐溶液中，脂蛋白可用 稀的去垢剂溶液如十二烷基硫酸钠、洋地黄皂苷（Digitonin）溶液或有机溶剂来抽提。其它不溶于水的蛋白质通常用稀碱溶液抽提。 蛋白质类别和溶解性质 白蛋白和球蛋白: 溶于水及稀盐、稀酸、稀碱溶液，可被50%饱和度硫酸铵析出。 真球蛋白: 一般在等电点时不溶于水，但加入少量的盐、酸、碱则可溶解。 拟球蛋白: 溶于水，可为50%饱和度硫酸铵析出 醇溶蛋白: 溶于70～80%乙醇中，不溶于水及无水乙醇 壳蛋白: 在等电点不溶于水，也不溶于稀盐酸，易溶于稀酸、稀碱溶液 精蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 组蛋白: 溶于水和稀酸，易在稀氨水中沉淀 硬蛋白质: 不溶于水、盐、稀酸及稀碱 缀合蛋白(包括磷蛋白、粘蛋白、糖蛋白、核蛋白、脂蛋白、血红蛋白、金属蛋白、黄素蛋白和氮苯蛋白等) : 此类蛋白质溶解性质随蛋白质与非蛋白质结合部分的不同而异，除脂蛋白外，一般可溶于稀酸、稀碱及盐溶液中，脂蛋白如
脑脊液总蛋白检测试剂盒(比浊比色法)
脑脊液总蛋白检测试剂盒(比浊比色法) 简介： 脑脊液(Cerebro-Spinal Fluid ，CSF)是存在于脑室、蛛网膜下腔和脊髓中央管内的无色透明液体，由脑室中的脉络丛产生，与血浆和淋巴液的性质相似。正常成年人的脑脊液约100~150ml ，弱碱性，不含红细胞。正常脑脊液具有一定的化学成分和压力，对维持颅压的相对稳定有重要作用，当中枢神经系统受损时，脑脊液的检测成为重要的辅助诊断手段。总蛋白(Total Protein ，TP)由白蛋白和球蛋白组成。对于生物体液(血清、尿液、脑脊液)中总蛋白质含量的测定，一般要基于如下两个假设：1、所有蛋白质分子由纯多肽组成，含氮量的质量百分比；2、体液中含有数百个蛋白质分子，每个分子对测定反应都具有非常相似的特性。目前常用的方法有：双缩脲法、紫外分光光度法、染料结合法、凯氏定氮法、沉淀法等。 Leagene 脑脊液总蛋白检测试剂盒(比浊比色法)其检测原理是脑脊液中蛋白质与磺基水杨酸等作用，形成沉淀，用比浊法测定其浊度，与相同处理的标准液比较，求出样本中蛋白质的含量。本试剂盒专门用于人或动物脑脊液样本中的总蛋白含量测定，但易受表面活性剂影响。本试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 自备材料： 1、 离心管、小试管 2、 比色杯 3、 分光光度计 操作步骤(仅供参考)： 1、 取蛋白标准配制液或稀释液加入到蛋白标准中，充分溶解后配制成蛋白标准溶液，配制 后可立即使用，溶解后的蛋白标准溶液应-20℃保存。取适量蛋白标准溶液用蛋白标准配制液或稀释液继续进行稀释。特别提示：待测蛋白溶解于什么样的稀释液中，蛋白标准也宜溶解于什么样的稀释液中。例如待测蛋白溶解于蔗糖中，亦取蛋白标准溶解于蔗糖中。一般也可以用NaCl 或PBS 作为稀释液。 编号 名称 TC059750T TC0597100T Storage 试剂(A): 蛋白标准 20mg 20mg RT 试剂(B): 蛋白标准配制液 5ml 5ml RT 试剂(C): 比浊显色液 100ml 200ml 4℃ 避光 使用说明书 1份
蛋白质的提取方法
沉淀法分级蛋白质： 水溶性蛋白质分子表面带有亲水性基团，因此很容易进行水合作用，顺利进入水溶液中。如果溶液的pH偏离等电点，则所有分子会带相同电荷，这进一步增进了它们的分散能力。因此，凡是能破坏蛋白质分子水合作用或者减弱分子间同性相斥作用的因素，都可能降低蛋白质在水中的溶解度，使其沉淀。常用的方法有盐析法和有机溶剂法。 （一）盐析法向蛋白质水溶液中加入中性盐，可以产生两种影响：一是盐离子与蛋白质分子中的极性和离子基团作用，降低蛋白质分子的活度系数，使其溶解度增加。在盐浓度较低时以这种情形为主，蛋白质表现为易于溶解，称为盐溶现象；二是盐离子也与水这种偶极分子作用，使水分子的活度降低，导致蛋白质水合程度的降低，使蛋白质溶解度减少。在盐浓度较高时这种情形起决定性作用，蛋白质便会沉淀，称为盐析现象。采用加入中性盐的方法使各种蛋白质依次分别沉淀的方法称为盐析法。 各种离子盐析能力的强弱可用Hofmeister序列表示： PO4>SO4>C2O4>(CHOHCOO)2>AC>Cl>NO3, K>Rb>Na>Cs>Li>NH4 实际工作中，常用的盐析剂是硫酸铵，因为它盐析能力强，在水中溶解度大，价格便宜，浓度高时也不会引起蛋白质生物活性的丧失。硫酸铵浓溶液的pH约为5.5，配置硫酸铵饱和溶液时，可在水中加过饱和量的硫酸铵，加温至50℃，至大部分盐溶解，室温放置过夜后，再用NaOH或硫酸调所需pH。 （二）有机溶剂沉淀法在等电点附近，蛋白质分子主要以偶极离子形式存在。这时如果添加有机溶剂，由于有机溶剂有较低的介电常数，会使溶液介电常数减小，根据库伦定律，这样会增强偶极离子之间的静电引力，从而使分子聚集沉淀。另一方面，有机溶剂本身的水合作用会破坏蛋白质表面的水合层，也促使蛋白分子脱水沉淀。选用有机溶剂的原则是：1.必须能与水完全混溶；2.不与蛋白质发生反应；3.要有较好的沉淀效应；4.溶剂蒸汽无毒，且不易燃。丙酮和乙醇是使用最为广泛的两种有机溶剂。在低介电常数环境中，蛋白质分子基团间的作用力会受到影响，超过限度时会使蛋白质变性。因此，有机溶剂沉淀法一般都要在低温下进行。蛋白质分子本身是多价离子，对溶液介电常数有相当贡献。当蛋白浓度太低时，如添加有机溶剂过度会产生变性现象，若这时加入介电常数大的物质（如甘氨酸），可避免蛋白变性。蛋白浓度高时，介电常数也相应提高，可以减少蛋白变性。 （三）有机聚合物沉淀法除了盐和有机溶剂能使蛋白质沉淀外，水溶性中性高聚物也能沉淀蛋白质。分子量高于4000的PEG可以非常有效地沉淀蛋白质。最常用的使分子量6000和20000的PEG。PEG可以看作是聚合的有机溶剂，其作用原理可能与有机溶剂类似。聚丙烯酸可以沉淀带正电蛋白质。聚丙烯酸分子上有相当多的羧基，碱性蛋白质含较多的碱性基团，羧基和碱性基团形成盐键，则把聚丙烯酸和碱性蛋白结成成很大颗粒沉淀下来。沉淀时碱性蛋白与溶液分开，加入钙离子后，聚丙烯酸成钙盐，蛋白质则游离出来。
总蛋白试剂盒双缩脲比色法标准操作程序
总蛋白试剂盒（双缩脲比色法）标准操作程序 1. 摘要 本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中的总蛋白含量。 2. 适用范围 程序适用于AU5811自动生化分析仪检测人血清或血浆中的总蛋白含量。 3. 职责 使用AU5811自动生化分析仪进行测定总蛋白浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行，室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。 4. 检测方法 上海科华生物工程股份有限公司生产的总蛋白试剂盒采用的是双缩脲比色法。 5. 原理 蛋白质中的肽键在碱性条件下，与铜离子反应生成紫红色络合物，并且引起550nm 处吸光度的上升。由于反应所产生的化合物在波长550nm 处有吸收峰,所以在一定底物浓度范围内, 550nm 处吸光度的变化值与样本中总蛋白的含量成正比。 紫红色络合物蛋白质中的肽键碱性条件???→?++2u C 6. 仪器 AU5811自动生化分析仪 7. 试剂 7.1 试剂来源： 上海科华生物工程股份有限公司提供 7.2 试剂瓶内主要成分： 测定：酒石酸钾钠≥5g/L 试剂：硫酸铜≥2g/L 、碘化钾≥1g/L 、NaOH ≥30g/L 校准品：白蛋白 （含量见瓶签） 7.3 试剂稳定性： 未打开试剂在2-8℃避光保存可至失效期。 校准品使用后应密封保存，以免液体挥发。 8. 标准品和质量控制 8.1 校准程序：
使用科华公司的校准品对自动分析仪进行校准。按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品通过合适的数学模型绘制校准曲线。 8.2质控品： 使用罗氏公司提供的生化复合定值质控血清作为室内质控品。每日在测定前做一次质控加试剂后做一次质控。该质控品为干粉包装，在2-8℃冰箱可稳定到失效期，使用前用5ml 去离子水复溶，待质控物充分溶解（大约30分钟）后使用。 8.3质控数据管理： 按程序对检验后的质控后结果进行转换，及时质控数据进行分析处理，如出现失控值，应及时分析失控原因，并填写好相关失控记录。 8.4质控判断规则： 按《Westgard多规则质控方法测定标准操作程序》 8.5室间质评： 分别参加河北省室间质评，对回报的室间质评结果按《室间质量评价程序》进行处理。 9.标本 9.1标本要求： 新鲜无溶血现象的血清，血浆可用肝素或EDTA抗凝。样本于2-8℃避光保存，可稳定7天，或可冰冻保存，但不能反复冻融。 9.2标本拒收： 由实验室人员核收送来标本，如有溶血、已被污染、标识不清或与申请单不符状况，一律要求重新留取标本。 9.3标本处理： 收集编号后离心获取血清/血浆以备检测使用。 10.测定程序： 10.1分析参数： 详见参数表。 10.2操作步骤： 签收样本→离心→上机检测→审核报告→签发报告→标本保存。 10.3获取结果： 在AU5811仪器上或AU5811传送的中文系统电脑上查找相应结果。 10.4结果报告： 对检验后的结果进行审核，系统分析，判断结果的可报告性。可报告的结果直接发报告，
蛋白质的十种提取方法
蛋白质的十种提取方法.txt大人物的悲哀在于他们需要不停地做出选择；而小人物的悲哀在于他们从来没有选择的机会。男人因沧桑而成熟，女人因成熟而沧桑。男人有了烟，有了酒，也就有了故事；女人有了钱，有了资色，也就有了悲剧。蛋白质提取方法-------列举10种方法 [ 来源：绿谷生物网点击数： 4587 更新时间： 2008年05月30日 ][ 收藏本文 ] 一、 植物组织蛋白质提取方法（summer） 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4 小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml 2、甘油（Glycerol）75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g 这种方法针对SDS-PAGE，垂直板电泳！ 二、 植物组织蛋白质提取方法 (summer) 三氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1 小时），然后真空 干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30 分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm 以上1小 时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。 药品： 提取液：含10%TCA 和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮 裂解液：2.7g 尿素0.2gCHAPS 溶于3ml 灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M 的 DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！ 三、 组织：肠黏膜（newinbio） 目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达