微生物限度与无菌 内毒素区别
无菌检查与微生物限度检查
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对照品培养基
? 经适用性检查合格的培养基是否可以作为对照培养基 使用？
山东省药品检验所
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? 对照培养基系指按培养基处方特别制备、质量优良的 培养基，用于培养基适用性检查。由中国药品生物制 品检定所研制及分发。
山东省药品检验所
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稀释液、冲洗液的问题
? 如何选择稀释液和冲洗液？ ? 薄膜过滤法中规定总的冲洗量不得超过1000ml，而对
山东省药品检验所
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验证用菌种的问题
? 验证试验用菌种及菌液制备在培养基灵敏度所用菌 种的基础上，删除了铜绿假单胞菌，增订了大肠埃 希菌。
在验证试验的实践中，发现作为革兰氏阴性杆 菌代表的铜绿假单胞菌在验证试验中对大部分抗生 素不敏感，而大肠埃希菌对抗革兰氏阴性杆菌为主 的抗生素敏感性较好。
山东省药品检验所
山东省药品检验所
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企业生产区域环境菌库的建立
当企业产品的灭菌条件和产品稳定性之间产生矛盾 时，该如何处理？
山东省药品检验所
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解决方案： ? 建立生产过程中关键区域的微生物监控体系，通过长期监控，找
出关键区域常见抗性菌株，并据此建立新的灭菌条件。 ? 否则，如果环境中监测到更强的耐热菌株，则应立刻停止生产，
自2002年微生物专业委员会成立至今，我国药品微生 物检验有了革命性的进步， 2005版药典明确了对检测 环境的要求、对标准的制订原则做了科学的修订及引 入验证理念等； 2010版药典增加对培养基适用性检查、 新增了药品微生物实验室规范指导原则等 4个附录。从 人员、培养基、菌种、实验室的布局和运行、设备、 文件、实验记录、结果的判断等方面提出了明确的要 求。
? 核心实验区可按具体工作需要划分为数个试验单元，核心区各实验单元最 好独立运行 ，核心区与PII级生物安全区不得共用一套换风系统，严格控制 交叉污染的发生。
微生物限度3篇
微生物限度第一篇：微生物限度的概念和意义微生物限度是一种质量控制方法，用于确保制药、食品和化妆品等产品中微生物的数量不超过一定限度。
微生物限度的主要目的是确保产品的安全性和稳定性，防止因微生物污染导致的品质问题和健康问题的发生。
本文将探讨微生物限度的概念和意义。
概念微生物限度是指微生物在一定量的样品中的可接受数量范围。
它是用来评估和规定一种产品是否符合微生物质量要求的标准。
微生物限度的标准和方法在各个行业之间可能有所不同，但通常都基于该行业的相关规定和标准。
微生物限度测试可用于监测产品中可能存在的各种微生物，如细菌、真菌和酵母等。
在制药和医疗行业中，微生物限度测试通常用于检验药品、生物制品和医疗器械等产品的微生物质量。
在食品和饮料行业中，微生物限度测试通常用于检验各种食品和饮料的微生物数量。
在化妆品行业中，微生物限度测试通常用于检验各种化妆品的微生物数量，例如面霜、洗发水、护肤品等。
意义微生物限度测试对于各行业的产品质量和安全性有着重要的意义。
下面列举了微生物限度测试的几个方面的重要性：1.保证产品的安全性微生物污染对于医药、食品、化妆品等产品的安全性是一个很大的威胁。
微生物限度测试能够监测产品中可能存在的各种微生物，并评估其数量是否达到安全标准。
如果产品中微生物数量超出安全标准，就会导致产品不安全，可能会对人们的健康造成危害。
因此，微生物限度测试对于确保产品的安全性至关重要。
2.控制产品的质量微生物限度测试可用于监测产品的微生物质量，并确保产品符合质量规定。
如果产品中微生物数量达到或超出了可接受范围，就说明产品质量不佳。
这可能是由于制造或存储过程中的污染导致的，或者可能是产品本身存在质量问题。
微生物限度测试可帮助制造商识别这些问题并采取行动来改进产品。
3.确保产品的稳定性微生物限度测试可用于监测产品的微生物质量，并确保产品的稳定性。
如果产品中微生物数量达到或超出了可接受范围，就说明产品的稳定性可能受到影响。
药品微生物限度检查和食品微生物检验的异同
药品微生物限度检查和食品微生物检验的异同微生物限度检查是对药品和食品中微生物污染的程度进行评价的关键检验项目之一。
药品微生物限度检查和食品微生物检验有一些相似之处，但也有一些不同之处。
一、相同之处：1. 目的相同：药品微生物限度检查和食品微生物检验的目的都是确保药品和食品的微生物质量符合卫生标准和相关法规，保障消费者的生命财产安全。
2. 进行方法相似：药品微生物限度检查和食品微生物检验的检验方法主要包括菌落总数检查、大肠菌群检查、产气肠杆菌检查等。
这些检查方法涉及样品的制备、菌落计数、菌的鉴定等步骤。
1. 检验对象不同：药品微生物限度检查主要针对药品产品，包括原料药、制剂等；而食品微生物检验主要针对各类食品，包括肉、蔬菜、水果、奶制品等。
2. 监控要求不同：药品微生物限度检查对于控制微生物的数量要求更严格。
对于一些长期在人体内使用的药品，在限度检查中通常要求完全不含细菌、真菌等微生物污染。
而食品微生物检验对于不同食品的微生物指标有一定的容限要求。
3. 范围不同：药品微生物限度检查通常涵盖一系列微生物指标，如大肠菌群、产气肠杆菌、金黄色葡萄球菌、霉菌等；而食品微生物检验涵盖的微生物指标根据食品类型的不同也会有所差异。
4. 工艺条件不同：药品的生产工艺通常经过高温灭菌等处理，以确保药品的微生物质量；而食品的生产工艺因食品类型不同，通常在烹调、加工过程中通过高温或低温处理来达到灭菌或抑菌的目的。
药品微生物限度检查和食品微生物检验在目的、方法和受控标准等方面有相似之处，但在检验对象、监控要求、范围和工艺条件等方面存在一定的不同。
对于保障消费者健康和产品质量安全，两者都是必不可少的检验项目。
微生物限度检查法名词解释(一)
微生物限度检查法名词解释(一)微生物限度检查法1. 介绍微生物限度检查法（Microbiological Limit Test）是用于评价药品、食品和化妆品等产品中微生物质量的检验方法。
它能够确定样品中是否存在对人体有害的微生物，并对其数量进行定量评估。
2. 相关名词以下是与微生物限度检查法相关的一些常见名词：•微生物限度：指产品中允许存在的微生物或菌群的数量上限。
不同产品类型有不同的微生物限度标准，例如菌落数、霉菌数和大肠菌群数等。
–例如，某药品的微生物限度为每克不超过10个细菌。
•菌落总数：指在特定培养基上，某一样品中培养出的微生物菌落的总数。
–例如，通过菌落总数检验，发现某食品样品中每克菌落总数为100个。
•霉菌数：指在特定培养基上，某一样品中培养出的霉菌菌落的数量。
–例如，某化妆品样品中每克霉菌数为5个。
•大肠菌群数：指在特定培养基上，某一样品中培养出的大肠菌群的数量。
–例如，某食品样品中每克大肠菌群数为0。
3. 检验流程微生物限度检查法的具体流程包括以下几个步骤：1.样品准备：从被检测产品中取样，按照一定的方法进行样品的准备和处理，以便进行后续分析。
2.菌落计数：将样品分别接种在适当的培养基上，并在一定的条件下孵育。
孵育结束后，利用显微镜和计数板等设备，对培养出的微生物菌落进行计数和记录。
3.菌种鉴定：根据菌落的形态、生理特性和生化反应等，对菌落进行鉴定，以确定菌落的种类和数量。
4.结果评价：根据相关的微生物限度标准，将检测结果与标准进行比较，评价样品是否符合质量要求。
5.结果记录：将检测数据和结果进行记录，并生成相应的报告。
4. 应用领域微生物限度检查法广泛应用于以下领域：•药品：验证药品是否符合微生物限度，确保药品的安全和有效性。
•食品：检测食品中是否存在致病菌乃至变质微生物，保障食品的卫生和质量。
•化妆品：评价化妆品中的细菌、霉菌等微生物是否超过限度，确保产品的质量和安全性。
以上就是关于微生物限度检查法的相关名词和解释，以及检验流程和应用领域的简要介绍。
无菌、微生物限度检查及方法验证
此法为实验室工作用菌种的最常用的保藏方法，仅能用于工作用菌种的短期保藏。
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琼脂斜面低温保藏法保藏法（厂家常用）
保藏芽胞液对
产芽胞的微生物宜制成芽胞菌悬液后再保藏， 无菌操作，取1ml孢子液接入茄形瓶或培养皿内，轻轻转动使菌液均匀分布于培养基表面。 将培养皿在适当的温度下培养。一般需要7天或更长时间 在层流台下，取3~5ml氯化钠磷酸盐缓冲液（pH7.0）加入培养皿内 用无菌玻璃L棒轻轻刮下菌苔，注意不要划破培养基。 用无菌注射器或无菌吸管吸取菌悬液，收集于试管中。 将收集的芽胞液放在80~90℃水浴中加热15分钟，冷却。 做好标记，放至2~8℃冰箱中保藏。原始芽胞液可保存1年。 每次使用前用平皿法重新标定其浓度。
微生物实验室的质量管理
设施—洁净室、净化工作台、生物安全柜。 设备—高压蒸汽灭菌器、电热恒温干烤箱、培养箱、冰箱。 实验仪器—全封闭薄膜过滤装置、电动匀浆仪、电热恒温水浴箱、离心机、显微镜，及刻度吸管、试管、三角烧瓶、培养皿等。 建立主要设施、设备、仪器的明细记录，内容包括名称、型号、生产厂家、购买日期。 质量保证档案：购买发票、安装验收或开箱验收记录、调试记录、计量检定或运行校验合格证、指定专人负责、制订标准操作规程（SOP）、建立使用登记册，维修、保养记录、改造或更新记录、直至报废记录。
记录温湿度是否在规定的范围内，每次实验时，对操作室和层流台做微生物沉降菌落计数并记录；如发现问题应找原因，及时报修和报告并将报修原因和结果记录归档。如遇停电，应立即停止实验，重新进入无菌室前，至少开启机房运转1小时以上。
实验室使用管理
微生物实验室的质量管理
平时实验室内应尽可能减少人员的走动或活动，通向洁净室的门要关闭或安装自动闭门器使其保持关闭状态。
枯草芽孢杆菌 [CMCC（B）63501] 金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26003] 生孢梭菌 [CMCC（B）64941] 铜绿假单胞菌 [CMCC（B）10104] 大肠埃希菌 [CMCC（B）44102] 乙型副伤寒沙门菌 [CMCC（B）50094] 白色念珠菌 [CMCC（B）98001] 黑曲霉 [CMCC（B）9 003]
微生物限度和无菌检查法验证PPT教学课件
2020/12/09
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中国药典2005年版对微生物限度检查法和无菌 检查法进行了修订完善，明确规定进行药微生物 限度和无菌检查法验证目的是确认试验中应选择 药典收载的何种供试液制备方法、何种测定方法， 以及验证确定的检测系统是否适用于该药品的检 验。如果供试品有抑菌性，影响测定结果，则应 采用适当的方法消除供试液的抑菌活性后再进行 检查。也就是说，只有通过方法验证，才能确定 针对具体品种的具体的检验方法，保证采用的方 法的科学性和检验结果的准确性。
适宜、简单有效的消除抑菌性的方法是当前验证 工作的关键。Βιβλιοθήκη 2020/12/096
方法验证的步骤与内容 1、制备验证试验用菌液 按药典无菌检查法中培养基灵敏度检查项中试验用 菌液的制备方法将规定需用的试验菌分别制成每毫 升中含10～100个菌（CFU）的供试菌液。 2、样品的前处理方法 样品的前处理方法是验证试验的一部分，需证明所 用的处理方法对各试验菌的生长无影响。
微生物限度和无菌检查法验证
2020/12/09
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微生物限度和无菌检查法验证意义：
中国药典2000年版及以前的版本虽然收载了微生 物限度检查法和无菌检查法，但在如何保证检验方 法的科学性及检验结果的准确性方面存在一些问题， 与国外药典的相关要求比较有一定差距，关键是未 明确对检验方法进行必要的方法学验证。以前品种 的申报资料中一般仅提供微生物限度检查或无菌检 查的检查结果，无方法学验证内容。但从保证药品 安全性的实际出发，不同品种需要选择建立各自适 当的检查方法，即使是仿制药，由于不同生产企业 采用的工艺、辅料等的不同，其产品可能表现出不 同的抑菌特性，进行微生物限度检查或无菌检查时， 具体的检查方法也不能简单地照搬，需要通过试验 验证核实已有的试验方法和检测系统是否适用，因 此，也需要进行必要的方法验证。
微生物限度与无菌内毒素区别
微生物限度-无菌-内毒素区别与联系微生物检测基本就这3项了。
微生物限度：用营养琼脂、玫瑰红钠培养。
洁净度中等操作台内进行（B级)无菌：硫乙醇酸盐、改良马丁在无菌套筒里操作并培养。
洁净度要求较高(A级）内毒素：鲎试剂稀释不同浓度来判定。
洁净度要求不高，D级情况下即可。
我的理解微生物泛指细菌和霉菌酵母菌等等、应该是包罗万象，各种杂菌都有无菌则也是各种杂菌与微生物限度检测的微生物有什么区别？内毒素是一种热源，服用没什么关系，在注射后容易导致人体发热。
内毒素是革比如说注射液产品用气接触产品，他应该用滤器过滤其他吧。
用膜直径改用0.45（过滤）的好还是0.22（除菌）的好？滤膜泡点肯定要做的，高风险产品应该要最少2层滤膜吧。
用了这滤膜可以不用检这3项还是要检其中项目？而且有的企业只是一年验证一下，不对气体日常可行吗？求大神详解3者的联系与区别，各什么时候需要检这3项及为什么。
答：微生物限度针对非无菌产品无菌和内毒素针对无菌产品。
微生物限度，无菌检验，内毒素检验均为供试品安全性检测。
主要区别是微生物限度，无菌检验是检验活的微生物方法，内毒素检验可以检验死去的微生物中内毒素含量。
什么时候选用不同的检验方法，主要参见药典要求，例如口服制剂选择微生物限度，注射剂和眼用制剂选择无菌检验，注射剂也需要做内毒素检验。
选择不同实验方法主要依据是供试品生物风险级别和供试品用途。
例如纯化水检验中不需做内毒素实验，注射用水检验中不需做无菌实验。
依据是纯化水主要用途为清洗，注射用水用途是配液，所以注射用水的微生物风险更高，需要做内毒素实验，控制风险。
微生物限度和无菌实验用具要求无菌，内毒素实验用具要求去除内毒素。
检验环境要求现行药典微生物限度和无菌实验均是C级下局部A级，微生物限度在超净工作台，无菌实验在生物安全柜内操作。
也可以选择D级下隔离系统中操作。
内毒素实验对环境无要求，在普通操作台上操作即可。
浅谈目前无菌检查和微生物限度检查存在的问题
浅谈目前无菌检查和微生物限度检查存在的问题李玉芹(江苏省常州药品检验所,常州 213002)摘要: 中国药典 2005年版增订了无菌检查、微生物限度检查方法验证试验,本文对目前无菌检查、微生物限度检查存在的问题加以探讨,并提出了建议。
关键词: 无菌检查;微生物限度检查;方法验证中图分类号:R927 33 文献标识码:A 文章编号:1002 7777(2007)12 1011 02Discussion on the Problem Existed in Sterility Test and Microbial Limit TestLi Yuqin(Changzhou Institute for Drug Co ntro l,Chang zhou213002)ABSTRAC T Chinese Pharmaco poeia2005has revised and enlarg ed the v alidation of sterility test and micro bial lim it test.T his article discusses the pr oblems ex isted in sterility test and microbial limit test at present,and gives som e sugg estions at this po int.KEY WORDS sterility test;m icrobial limit test;validation mo thed根据国家药典会国药典发[2005]98号文 关于执行 中国药典 2005年版微生物限度检查法和无菌检查法有关问题的说明 的规定:当进行药品无菌检查或微生物限度检查时,应进行方法验证,否则决不能出具 符合2005年版 中国药典 的规定 的结论。
方法验证的目的是为了确认试验中供试品应选择 中国药典 收载的何种供试液制备方法及何种测定方法,含抑菌成分的药品进行无菌检查、微生物限度检查时,必须消除供试品的抑菌作用或使其抑菌作用可以忽略不计,才能根据 中国药典 规定的方法进行检查。
药典微生物限度标准
药典微生物限度标准
药典微生物限度标准是指药典（如中国药典、美国药典等）规定的药品中允许存在的微生物数量的限制。
微生物限度是为了保证药品的质量和安全所设立的，合理的微生物限度可防止和减少可能在药品生产和贮存过程中引入的微生物污染。
药典微生物限度标准通常需要考虑以下几个方面：
1. 总微生物数：药典规定了应当检测的总微生物数的限制，表示制备过程中可能存在的各种微生物的总数量。
不同类别的药品对总微生物数的限制可能有所不同。
2. 霉菌和酵母菌：霉菌和酵母菌是一类常见的微生物，它们生长迅速，可以在药品中引起变质和腐败。
因此，药典通常规定了对霉菌和酵母菌的数量限制。
3. 大肠菌群：大肠菌群是常见的肠道致病菌，它们存在于环境中，如食品、水源等，可能通过生产过程中的污染进入药品中。
药典通常规定了对大肠菌群的数量限制。
4. 特定致病菌：药典对某些具有危害性的致病菌也可能设置了数量限制，如沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等。
药典微生物限度标准的设定是为了确保药品的质量和安全，各国的药典对微生物限度标准可能会有所不同。
生产药品时，企业需要按照药典要求的微生物限度标准进行检测，并确保药品符合规定的标准。
热源、无菌、细菌内毒素、微生物限度检查
热源、无菌、细菌内毒素、微生物限度检查的关系前面看到过关于无菌和内毒素区别的帖子。
那么请问各位，热源、无菌、细菌内毒素和微生物限度检查究竟有什么区别，又有什么联系呢？本人我在微生物方面比较白，只是觉得这四项都和细菌有关，都需要培养基，都要在无菌台里做…… 汗~~ 其他的实在不知了。
头都大了，希望各位指点迷津，谢谢。
[楼主] | Posted:08-09-09 10:22|珊瑚礁级别: ★会员发帖: 292威望: 6财富: 95注册时间:2008-03-06最后登陆:2010-11-25无菌，最终灭菌产品和百级生产非灭菌产品需要检测的项目，一般采用薄膜过滤法；如，粉针剂、大输液产品。
微生物限度，允许结果有菌落，但有限度，是一定范围，一般采用半封闭薄膜过滤法和平皿法。
指非灭菌产品，如口服制剂和食品、外用药。
热源，目前很多品种采用细菌内毒素检测方法代替，简单，成本低。
但必须按照国家标准。
内毒素和热源一般是大输液产品的检测项目。
想了解很多，应该多看看专业书籍啊[1 楼] | Posted:08-09-09 12:21|洲际捣蛋级别: 论坛版主发帖: 2500威望: 315财富: 42注册时间:2008-03-15最后登陆:2010-11-08热原---不需要培养基兔法看药典就知道是怎么回事了细菌内毒素----不需要培养基一般工作环境也可以做无菌----需要培养基薄膜过滤法直接接种法也可以参照药典微生物限度检查----需要培养基薄膜过滤法梯度稀释图布平板法区别：热原和细菌内毒素检验方法的不同但检验的东西在本质上其实是一样的另外细菌内毒素检查法要比热原检查法灵敏10倍，根据各种药物的特性，规定检查热原还是细菌内毒素。
注册时间:2008-03-10最后登陆:2010-10-11zyb3421060级别: ★会员发帖: 65威望: 3财富: 1注册时间:2008-03-10最后登陆:2010-11-12还不是很明白[5 楼] | Posted:08-12-25 08:26|shabb007级别: ★★会员发帖: 649威望: 20财富: 20注册时间:2007-12-14最后登陆:2010-12-03这么说吧。
药品微生物限度检查和食品微生物检验的异同
药品微生物限度检查和食品微生物检验的异同药品微生物限度检查和食品微生物检验是两种不同的微生物检测方法，它们在检测对象、标准要求、检测方法等方面存在许多异同之处。
本文将就这两种检验方法进行详细比较，帮助读者更好地理解它们的异同之处。
一、检测对象药品微生物限度检查主要针对药品中的微生物进行检测，包括细菌、酵母菌、霉菌等。
药品微生物限度检查是针对药品的使用要求而设立的，其目的是确保药品在生产过程中不受微生物污染，保证药品的质量和安全性。
从检测对象上来看，药品微生物限度检查重点关注药品的生产过程和产品质量，而食品微生物检验则主要关注食品的卫生安全和消费者健康。
二、检测标准药品微生物限度检查的标准是由国家药典委员会或药品生产企业依据国家药典等制定的，主要包括细菌总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、霉菌和酵母菌等指标。
药品微生物限度检查和食品微生物检验的标准内容有部分相似之处，但也存在一定的差异，具体的差异体现在检测指标的种类和要求上。
三、检测方法药品微生物限度检查的常用方法包括菌落总数检测、大肠埃希菌检测、霉菌和酵母菌检测等。
这些方法主要是针对不同类型的微生物进行检测，通过不同的培养基和条件培养出不同的微生物，并进行相关的计数和鉴定。
在检测方法上，药品微生物限度检查和食品微生物检验存在许多相似之处，两者的检测方法都是基于微生物在适当环境下生长和繁殖的特性，通过培养和检测来确定微生物的存在数量和种类。
四、检测要求药品微生物限度检查和食品微生物检验在检测要求方面也存在一些差异。
药品微生物限度检查对微生物的要求较为严格，例如对于细菌总数的限度是1000个/g，大肠菌群的限度是不得检出，而食品微生物检验对微生物的要求相对较宽松，例如对细菌总数的限度是10000个/g，大肠菌群的限度是100个/g。
从检测要求上来看，药品微生物限度检查对微生物的要求更为严格，这主要与药品的使用环境和用途相关，而食品微生物检验对微生物的要求相对宽松，主要考虑到食品原料和加工过程中微生物的自然存在。
药品微生物限度与无菌检查
洁净室/台工作原理
层流 Laminar flow 混流 Conventional (mixed flow) cleanroom
Luzhou Institutes for Food and Drug Control
相关洁净标准比较
ISO 14644讨论了洁净室和受控环境的设计与建设
按ISO 14644的分类是建立在环境中每单位体积的总体粒子数的基础上
有效的方法
方法验证
药品洁净实验室微生物 检测和控制指导原则
有效的结果
药品微生物检验替代 方法验证指导原则
结果判断
可靠的结论
微生物鉴定 指导原则
案例
阳性结果与玻璃安瓿表面采样菌高度相似
al Institutes for Food and Drug Control
Nation
无菌检查过程微生物控制
空气微生 物 浮游菌 沉降菌
7月
8月
9月
10月
近8年无菌室C级浮游菌高限图
90 80 70 60
硬件差异
7月 8月 9月
50
40 30 20 10 0 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014
软件差异
Luzhou Institutes for Food and Drug Control
洁净区微生物监测水平
titutes for FoodAl.faecalis and Drug Control 粪产碱杆菌（ ）
洁净环境常见菌： 头状葡萄球菌（Staphylococcus capitis） 溶血葡萄球菌（Staphylococcus haemolyticus） 缓症链球菌（Streptococcus mitis） 科氏葡萄球菌（Staphylcus luteus） 山羊葡萄球菌 （Staphylococcus caprae）
药品无菌检查和微生物限度检查有关问题的解答
无菌与微生物限度试验用试验用菌种生物学特征一、金黄色葡萄球菌1、学名：细球菌属化脓性细球菌种。
金黄色变种（Micrococeus pyogens Var.aureus）试验用菌种金黄色葡萄球菌（26003）是经过人工驯育的无毒菌株，但亦可能变异，在传代接种中应注意安全。
2、形态与染色圆球形排成典型的葡萄串状，直径0.4~1.2μ，平均0.8μ，致病性者直径一般较非致病性者的直径为少。
无鞭毛，不能运动，不产芽胞，G+阳性，当衰老、死亡或对青霉素产生抗性的某些菌株亦复染成G-3、培养特性：肉汤培养基上生产良好，28~38℃生长较好，pH4.5~9.8以pH7.4最好。
肉汤平板24~48小时形成圆形凸出，边缘整齐，表面光泽且金黄色，直径1~2毫米（应挑光滑型菌种）血平板，有或无，A溶血性太多具致病性4、色素的产生：以22℃较37℃时为多，当37℃培养后，移致室温（22℃）一定时间，色素可见增加。
氧有利于色素产生。
培养基中含糖，牛乳时色素产生较多。
色素属酯溶性色素。
5、抵抗力：6、生化反应：葡萄糖、果糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖、产酸不产气、甘露醇+、甲基红+、VP弱阳性、吲哚－、尿素+、硝酸盐还原+、明胶液化+、分解精氨酸产氨。
生检用途：抗生素效价测定用生物指示菌。
二、枯草芽胞杆菌：1、学名：杆菌属枯草杆菌（Bacillun Subtilis）一般无致病性（63501）2、形态与染色：菌体细短棒状，0.7~0.8μm－2.0~3.0μm，单个或成链状，二端半圆形,，染色均匀，芽胞0.6~0.9－1.0~1.5μ，为椭圆形或圆柱形。
常产生于菌体中央或接近中央。
G+能运动。
3、培养特性：兼性厌氧或需氧。
肉汤平板，呈粗糙型，变异时可出现光滑型。
液体表面形成皱状原膜，粘附于试管壁上。
最适温度30~37℃，生长范围15~55℃。
明胶+、淀粉+、VP+、硝酸还原+、卵磷酯-、C盐+、G.蔗糖，甘露醇+、乳糖-。
生检用途：抗生素效价测定用生物指示菌。
无菌检查和微生物限度检查知识
取规定量，加适宜的稀释液溶解或按 标签说明复溶，然后照水溶液供试品项下 的方法操作。
3
非水溶性制剂
4
可溶于十四烷酸异丙酯的 膏剂和粘性油剂供试品
取规定量，直接过滤；或混合溶于含 聚山梨酯80或其他适宜乳化剂的稀释液中， 充分混合，立即过滤。用含0.1～1%聚山 梨酯80的冲洗液冲洗滤膜至少3次。
取规定量，混合至适量的无菌十四烷 酸异丙酯中，充分溶解后迅速过滤（可根 据需要适当加热）。若仍无法过滤，将上 述溶液振摇萃取，静置，取下层水相照非 水溶性制剂供试品项下的方法操作。
金黄色葡萄球菌
大肠埃希菌 枯草芽孢杆菌
生孢梭菌
白色念珠菌 黑曲霉
每一试验菌应逐一进行验证
方法学验证方法
制备供试液
稀释
过滤
冲洗
最后一次冲 洗液中加小 于100cfu的 试验菌
培养3-5天
加培养基
常用术语
常用冲洗液：
pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液
供试液经薄膜过滤后，用冲洗液冲洗滤膜，以 降低供试品在滤膜上的残留。 一般每次 冲洗100ml，每张滤膜上总冲洗量不 得大于1000ml。药典规定，过滤抑菌性检品后必须 冲洗，冲洗次数一般不小于3次。
注培养基，转移至阳性对照室，使
在与供试品无菌检查方法相同的基础上，加入 小于100cfu的阳性对照菌菌液，再加培养基培养。 阳性对照管培养48～72小时应生长良好。
意义： 证明无菌检查方法的有效性，对微生物无抑制 作用。
用注射器穿刺杯体空气滤膜后注入 阳性菌。
常用术语
假阴性
无菌检查未检出产品包含的微生物 原因：消毒剂、灭活剂残留；
剂的特性选择滤膜材质。抗生素供试品应选择低吸附
2008 无菌_微生物限度及细菌内毒素检查方法学验证中常见问题及分析_国明
中国药品标准 2008年第 9卷第 1 Nhomakorabea 47以减少膜的吸附, 对于抑菌性较强的注射用无菌粉 末或固体原料, 一定要充分溶解、混合均匀。 114 加菌时机不一致
验证试验主要考虑滤器中残留抗菌物质对阳性 菌生长的影响, 应与对照滤器比较而作出判断, 所以 验证试验中加菌时机要与对照一致 [ 2] 。
115 薄膜过滤法滤膜材质选择不正确, 直接影 响试验结果
20 05年 版药 典执 行以 来药 品 生 产企 业 、科 研 单 位等 在药品质量标准建立及检验工作中困难和问题较多 的项目。我们在药品注册品种的审核检验中, 发现 有的申报单位对方法学验证的意义理解不够, 验证 试验的科学性、完整性及可操作性均存在着很多问 题。为尽快提高方法学验证水平, 更好地保证用药 的安全性, 现将方法学验证工作中常遇到的问题进 行分析、讨论。 1 无菌检查方法学验证问题及分析 111 验证菌株选择不正确 11111 敏感菌株与阳性对照菌不一致, 降低了阳性 对照菌的意义。有些药品选择了敏感菌株进行方法 学验证试验, 但是无菌检查时阳性对照菌不是验证 试验选定的敏感菌株。实际工作中抑制枯草芽孢杆 菌的样品很多, 可用此作为敏感菌株, 但药典规定无 菌检查时以金黄色葡萄球菌作为阳性对照菌, 使金 黄色葡萄球菌失去了阳性对照菌的意义。应在此类 无菌检查时也增加敏感菌株作为阳性对照菌。 11112 2005年版药典无菌检查中规定 / 抗革兰阴 性菌为主的供 试品以大肠埃希菌为对照菌 0, 但方 法学验证规定用菌株没有大肠埃希菌, 缺少了验证 此类药物抗菌作用的代表菌株。建议对抗菌作用中 明确具有抗革兰阴性菌的药品进行无菌检查方法学 验证时, 应增加大肠埃希菌作为验证菌株。 112 验证时取样量不符合要求 11211 无菌检验量与验证试验的取样量不同, 与中 国药典 2005年版方法学验证要求不符。进行供试 品检查时, 所采用的检验方法和检验条件应与验证 的方法相同, 应按照规定的检验数量和检验量取样。 11212 有的生产单位无菌检查方法学验证仅按抽 验产品检验数量进行验证, 药典规定应按照批出厂 产品最少检验数量进行试验 [ 1] 。 113 方法选择错误或不恰当, 不符合 2005 年版中 国药典要求 11311 有的申报单位无菌检查时无论什么药品都 用直接接种法。 2005年版中国药典规定, 只要供试 品性状允许, 应采用薄膜过滤法 [ 1] 。 11312 有些申报单位对非抑菌性供试品也用大量 的冲洗液冲洗, 如每次 100 mL, 10次 /膜, 既增加了 对膜的损伤和对微生物生物特性的破坏机会, 也增 加了检验繁琐性和检验人员的工作量。所以薄膜过 滤时尽 可能 减少 冲 洗量, 冲 洗 不一 定 为每 次 100 mL, 可少量多次, 并注意充分振摇。对于抑菌性较 强的供试品, 可以先用适宜的稀释液稀释后再过滤,
无菌检查和微生物限度检查知识
取规定量，混合至适量的无菌十四烷 酸异丙酯中，充分溶解后迅速过滤（可根 据需要适当加热）。若仍无法过滤，将上 述溶液振摇萃取，静置，取下层水相照非 水溶性制剂供试品项下的方法操作。
常见供试品的处理方法
5 预装药物的注射器
6 具有导管的医疗器具
取规定量，排出注射器中的内容物 （根据需要稀释或用溶剂溶解），直接过 滤，或混合至含适量稀释液的无菌容器内， 过滤，然后按水溶性供试品项下方法操作。
同时应采用直接接种法检测针头。
取规定量，每个最小包装用50 ～ 100ml冲洗液分别冲洗内壁，收集冲洗液 于无菌容器中，然后照水溶液供试品项下 方法操作。同时应采用直接接种法进行包 装中所配带的针头的无菌检查。
检验环境：环境洁净度 10000 级下的局部洁净度 100 级 的单向流空气区域内。
微生物限度检查
制备供试液
稀释 过滤 冲洗
培养、计数
细菌30 ～35 ℃ 培养3天 霉菌、酵母菌 23 ～28 ℃培养5天
加培养基
营养琼脂培养基 （测细菌）
玫瑰红钠培养基 （测霉菌、酵母菌）
常用术语
方法学验证试验菌：
一般每次 冲洗100ml，每张滤膜上总冲洗量丌 得大于1000ml。药典规定，过滤抑菌性检品后必须 冲洗，冲洗次数一般丌小于3次。
pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液 0.1%蛋白胨水溶液 0.9%氯化钠溶液
必要时可以添加丌大于1% 的吐温80作为乳化剂。
常用术语
供试品无菌检查时，应取相应溶剂和稀释液、 冲洗液同法操作，作为阴性对照。
当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验 证，以证明所采用的方法适合于该产品的无菌检查。 若该产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方 法应重新验证。
清洁验证中的微生物限度
清洁验证中的微⽣物限度关于清洁验证中的微⽣物限度，⼤多数企业在做清洁验证时都不把此作为重点关注项⽬，所以对于这个问题的相关资料⽐较少。
对于⽆菌产品，清洁验证中的微⽣物限度⾃然是必不可少的，甚⾄还会根据实际需要增加内毒素、热原等项⽬。
但是对于⾮⽆菌产品，清洁验证中的微⽣物限度如何来确定呢？在2010版GMP实施指南中清洁验证中是这样描述这个问题“企业制定清洁验证的微⽣物限度时可以考虑产品、剂型、清洁⽅法的特点以及环境级别等因素。
如果没有其他特殊考虑因素，建议根据⽣产区域的洁净级别选⽤新版中国GMP附录1中的表⾯微⽣物限度。
”即接触碟(55mm)：A级<1cfu/碟，B级<5,C级<25,D级<50。
以上提到的考虑产品的因素，主要是要考虑产品质量指标中是否有⽆菌的指标，微⽣物限度指标为多少？剂型因素，主要是要考虑是否为⽆菌制剂，是否为⽆菌⼯艺等。
清洁⽅法的特点因素主要是要考虑清洁⽅法中是否有灭菌消毒的过程，是否使⽤了抑菌剂等。
环境级别因素主要是考虑是所处的⽣产环境是否有微⽣物控制的要求。
综合以上⼏个因素，可以看出并⾮所有⽣产⽤的设备的清洁验证需要定微⽣物限度，⽐如原料药⽣产⽤的⾮洁净区设备，就⽆需制定微⽣物限度指标。
还有⽐如中药提取设备如果在⼀般区的也⽆需定微⽣物限度指标。
这类在⼀般区⽣产⽤的设备，⼀⽅⾯本⾝⽣产过程并⽆微⽣物限度的要求，如果有要求就需要在洁净区⽣产了。
另⼀⽅⾯即使制定了微⽣物限度要到达⼀定要求也⾮常困难，环境本⾝就⽆微⽣物限度控制，那么这个环境⾥的设备要严格控制微⽣物也⽐较困难。
这种情况下可以采取⼀些特殊的处理⽅法，⽐如使⽤前⽤蒸汽或注射⽤⽔冲洗、或者使⽤抑菌剂⽐如碱来抑制细菌的滋⽣。
总之，需要考虑企业⾃⾝产品的特点和实际情况来确定是否需要制定微⽣物限度指标，⽽不要⼈云亦云。
微生物限度和无菌检查法验证
确定供试品是否有抑菌性、抑什么菌？ 通过文献资料或申报资料中的药效学资料，了解其对不同细菌的 MIC，参考已经验证过的品种、抗菌药物可根据抗菌谱确定敏感菌、 中成药抗菌谱不清楚，至少需选择一株细菌和一株真菌来试验。也 可以直接通过验证试验确定抑菌性。 试验确定抑菌性的方法：在规定量的供试液中加入试验用微生物 10～100个，如微生物生长良好，说明供试品对该种微生物无抑菌 活性。如已用药典规定的各试验菌进行了试验，结果均能生长良好， 说明供试品无抑菌性，可用常规方法检验。如加入的微生物不生长 或生长缓慢，说明供试品有抑菌性；如加入的微生物中有某一种菌 最不能生长或生长最缓慢，这一种菌就是该样品的敏感菌。
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微生物限度检查中的控制菌检查属定性试验。验证试验应同时设置：（1） 目标菌阳性对照管；（2）供试品＋目标菌管；（3）阴性对照管；（4） 非目标菌对照管。验证试验和对验证结果的判断：（1）目标菌阳性对照 管菌必须生长良好；（2）供试品＋目标菌管生长良好；（3）阴性对照 管必须无菌生长；（4）阴性菌对照必须无菌生长。上述试验成立，则说 明所用方法已消除或充分减低了供试品的抑菌性；可以按该方法进行该 品种的控制菌检查。如出现（2）供试品＋目标菌管生长缓慢、或不生长， 则说明供试品仍有抑菌性，应进一步考虑采取适宜的措施以消除其抑菌 性，并进行重新验证，直至验证结果中（2）供试品＋目标菌管与（1） 目标菌阳性对照管相同，证明已充分消除或有效降低供试品的抑菌性为 止。如出现（3）阴性对照管有菌生长；（4）阴性菌对照管有菌生长； 则说明试验不成立，所用方法不专属，应寻找原因并重新进行验证试验。
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试验操作方法 中国药典2005年版无菌检查法包括薄膜过滤法和直接接种法，微 生物限度检查法包括平皿法和薄膜过滤法。薄膜过滤法采用大取样 量集菌的方法，具有代表性，不易漏检，仪器操作简单；全封闭的 过滤系统，避免了操作过程中外源性细菌的污染，对试验结果可信 性影响较小。故尽量采用全封闭的薄膜过滤法。 3、样品的前处理 样品的前处理可采用溶解、乳化、破乳、稀释、离心等方法，也可 几种方法联用，但需说明采用的处理方法的理由，并证明所用处理 方法对各试验菌的生长无影响。 对非水溶性的供试品，如果溶解冲洗不完全，会影响试验结果；故 应注意使用加入适量的聚山梨酯80或其它适宜的乳化剂和稀释剂， 或用十四烷酸异丙酯处理油类供试品等。
无菌室、阳性对照室、微生物限度室区别
无菌室、阳性对照室、微生物限度室区别无菌检查、微生物限度检查的所有操作均需在严格控制微生物污染的环境下进行，操作环境的无菌保证程度将直接影响无菌检查结果，为了保证无菌检查用洁净室（区）环境的稳定性，确保检查结果的可靠性，对洁净室（区）的环境质量采取合理的控制措施和评价方法是必要的。
无菌检查、微生物限度检查应在环境洁净度10000级和局部洁净度100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止微生物污染。
单向流空气区、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。
隔离系统按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌检查的要求。
无菌室应采光良好、避免潮湿、远离厕所及污染区。
面积一般不超过10平方米，不小于5平方米；高度不超过2.4m。
由1~2 个缓冲间、操作间组成（操作间和缓冲间的门不应直对），操作间与缓冲间之间应具备灭菌功能的样品传递箱。
在缓冲间内应有洗手盆、毛巾、无菌衣裤放置架及挂钩、拖鞋等，不应放置培养箱和其他杂物；无菌室内应六面光滑平整，能耐受清洗消毒。
墙壁与地面、天花板连接处应呈凹弧形，无缝隙，不留死角。
操作间内不应安装下水道。
无菌操作室应具有空气除菌过滤的单向流空气装置，操作区洁净度100级或放置同等级别的超净工作台，室内温度控制18~26℃，相对湿度45%~65%。
缓冲间及操作室内均应设置能达到空气消毒效果的紫外灯或其他适宜的消毒装置，空气洁净级别不同的相邻房间之间的静压差应大于5Pa，洁净室（区）与室外大气的静压差大于10Pa。
无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，室内光照应分布均匀，光照度不低于300lx。
缓冲间和操作间所设置的紫外线杀菌灯（2~2.5W/平方米），应定期检查辐射强度，要求在操作面上达40/μW/平方厘米，不符合要求的紫外杀菌灯应及时更换。
无菌室应每周和每次操作前用0.1%新洁尔灭或2%甲酚液或其他适宜消毒液擦拭操作台及可能污染的死角，开启无菌空气过滤器及紫外灯杀菌1小时。
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微生物限度-无菌-内毒素区别与联系
微生物检测基本就这3项了。
微生物限度：用营养琼脂、玫瑰红钠培养。
洁净度中等操作台内进行（B级)
无菌：硫乙醇酸盐、改良马丁在无菌套筒里操作并培养。
洁净度要求较高(A级）
内毒素：鲎试剂稀释不同浓度来判定。
洁净度要求不高，D级情况下即可。
我的理解微生物泛指细菌和霉菌酵母菌等等、应该是包罗万象，各种杂菌都有
无菌则也是各种杂菌与微生物限度检测的微生物有什么区别？
内毒素是一种热源，服用没什么关系，在注射后容易导致人体发热。
内毒素是革兰氏阴性中的一种成分，叫做脂多糖。
脂多糖对宿主是有毒性的。
内毒素只有当死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以叫做内毒素。
耐高温
比如说注射液产品用气接触产品，他应该用滤器过滤其他吧。
用膜直径改用（过滤）的好还是（除菌）的好？滤膜泡点肯定要做的，高风险产品应该要最少2层滤膜吧。
用了这滤膜可以不用检这3项还是要检其中项目？而且有的企业只是一年验证一下，不对气体日常可行吗？
求大神详解3者的联系与区别，各什么时候需要检这3项及为什么。
答：微生物限度针对非无菌产品
无菌和内毒素针对无菌产品。
微生物限度，无菌检验，内毒素检验均为供试品安全性检测。
主要区别是微生物限度，无菌检验是检验活的微生物方法，内毒素检验可以检验死去的微生物中内毒素含量。
什么时候选用不同的检验方法，主要参见药典要求，例如口服制剂选择微生物限度，注射剂和眼用制剂选择无菌检验，注射剂也需要做内毒素检验。
选择不同实验方法主要依据是供试品生物风险级别和供试品用途。
例如纯化水检验中不需做内毒素实验，注射用水检验中不需做无菌实验。
依据是纯化水主要用途为清洗，注射用水用途是配液，所以注射用水的微生物风险更高，需要做内毒素实验，控制风险。
微生物限度和无菌实验用具要求无菌，内毒素实验用具要求去除内毒素。
检验环境要求
现行药典微生物限度和无菌实验均是C级下局部A级，微生物限度在超净工作台，无菌实验在生物安全柜内操作。
也可以选择D级下隔离系统中操作。
内毒素实验对环境无要求，在普通操作台上操作即可。