免疫法测定内源激素
激素水平测定方法比较
激素水平测定方法比较激素是人体内分泌系统中起关键作用的化学物质，有助于调节身体的各种生理过程。
因此，准确测定激素水平对于研究和诊断多种疾病具有重要意义。
随着科学技术的发展，现代医学领域涌现出多种方法用于测定激素水平。
本文将比较和评估常用的激素水平测定方法，旨在为研究者和临床医生提供选择合适方法的依据。
首先，传统的放免法是测定激素水平的常用方法之一。
放免法通过特定抗体与靶激素结合，利用酶标记或放射性标记物来测量结合后的信号。
这种方法具有操作简便、灵敏度高、准确度较高的特点。
然而，放免法的特异性和准确性仍然存在一定局限性。
例如，患者可能存在与所用抗体的交叉反应，导致测定结果的偏差。
此外，放免法对样本中的干扰因素也比较敏感，如血清中的脂质和蛋白质等，可能会影响测定结果的准确性。
其次，液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）是近年来广泛应用于激素水平测定的方法。
与传统放免法相比，LC-MS/MS具有更好的特异性和准确性。
该方法通过对样本进行提取和净化，然后使用高效液相色谱将激素分离，并通过串联质谱仪检测其浓度。
LC-MS/MS的优点在于可以同时测定多种激素，并且能够在较低水平下进行灵敏度检测。
此外，LC-MS/MS的检测结果不受样本中其他成分的影响，能够更加准确地测定激素水平。
然而，LC-MS/MS技术的设备和维护成本较高，且操作相对复杂，需要高水平的技术支持。
另一种常用的激素水平测定方法是放射免疫分析法（RIA）。
RIA利用放射性标记激素和特异性抗体的结合来测定激素水平。
该方法具有较高的灵敏度和特异性，并且可以同时测定多种激素。
然而，由于涉及到放射性物质的使用，RIA方法的操作和废物处理过程需要特殊的安全措施。
此外，由于放射性标记物的衰变，测定结果容易受到时间因素的影响。
最后，近年来，基于生物传感器和纳米技术的新型激素水平测定方法不断涌现。
这些新兴技术利用生物传感器和纳米材料的特性，通过检测激素与生物传感器或纳米材料之间的相互作用来测定激素水平。
磁分离酶联免疫检测激素的方法学评价
磁分离酶联免疫检测激素的方法学评价
磁分离酶联免疫检测（MCIA）是一种检测激素的技术，通常用于检测激素水平，并被认为是一种有效的技术，它具有灵敏度高、高分辨率和高可靠性的优势。
MCIA的方法学评价可在几个方面进行。
第一，研究可以评估MCIA的灵敏度和特异性，以证明其检测激素水平的准确性和可靠性。
第二，可以比较不同MCIA 试验系统，例如适用于耐酸之类的试验，来评价方法学特性和比较特异性。
第三，可比较MCIA法与以往采用的其他免疫检测技术，例如流式细胞免疫检测法，以评价其具有的优势。
第四，可以比较MCIA技术能否准确推断实验对象的健康状态，及是否可应用于实际情况中。
MCIA技术在检测激素水平时也有一些潜在的缺点，例如体积较小、可靠性较差和高成本等。
此外，MCIA还存在某些试验因素，例如实验细节和试剂质量，这些因素也将影响试验的准确性和可靠性。
因此，应在应用MCIA检测激素水平时仔细考虑所有可能的影响因素，以确保安全、准确的检测结果。
临床免疫检验分析前的质量控制措施
临床免疫检验分析前的质量控制措施作者：王振佳来源：《健康必读·下旬刊》2011年第12期【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A 【文章编号】1672－3783(2011)12－0495－01【摘要】在临床免疫检验的质量控制过程中，检验准备阶段中质量控制作为一个关键却又经常不被人们重视。
基于此，本文主要对临床免疫检验分析前的质量控制措施进行了探讨。
【关键词】临床免疫；检验分析前；质量控制措施在进行免疫检验质量的控制工作过程中，临床的免疫检验分析前的质量控制中，最关键的环节就是采集与加样标本之前的工作。
所以，检验结果是否有效且可靠性密切关系着其过程。
1 对临床标本进行采集以及保存对于采集免疫测定标本的流程而言，此环节使标本质量得到保障。
影响标本质量相关的方面有：何时进行采集、用何种姿势进行采血、何时使用止血带、如何选择使用稳定剂于抗凝剂等。
在收集激素类以及利用治疗药物对血清的标本进行测定时，一定要仔细观察收集的时间以及体位方面的变化是如何影响测定结果的。
所以，在对该类激素进行测定的时候，一定要在时间间隔最适合的情况下对一系列血样本进行采集，其测定值为平均值。
又如以站立位取代卧位的时候，将显著提高其血清内的肾素活性。
再如检测治疗药物时，要按照药代动力学，在抽血检测时应在服药后最佳的时间。
在进行收集传染性病原体方面的抗体、抗原以及特种蛋白与肿瘤标志物等血清标本检测方面不受体位或者时间因素的影响。
在选择抗凝剂的时候，通常采取肝素钠负压储血管，而ECLIA对癌胚抗原CEA进行检测的时候，检测结果因枸橼酸钠以及肝素钠的因素降低了大约10％［1］。
所以检验工作者一定要认真研究分析前阶段质量一系列的影响原因，同临床医生以及护理人员进行及时的沟通，对采集标本的情况进行认真研究。
并进行相应的指导工作。
在采集完标本以后，一定要将保存以及运输的时间努力降低，并及时进行处理以及检测工作。
特别是采取ECLIA电化学发光免疫测定对NSE神经元特异性烯醇化酶进行检测时，标本检测的最佳时间为采集之后的2h内，不然标本内红细胞以及血小板由于代谢而持续释放出NSE，进而提高了检测的结果。
酶联免疫法(ELISA)测定植物激素含量
酶联免疫法（ELISA）测定植物激素含量姓名：李希东专业：植物学学号：200808201 日期：09.5.10 成绩：一、实验目的：掌握间接法测定植物激素的原理和方法；了解逆境对玉米根系ABA和IAA含量的影响。
二、实验原理：酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbert assay，简称ELISA)是在免疫酶技术(immuno enzymite technique)的基础上发展起来免疫测定技术。
其建立在两个重要的生物化学反应基础之上的，即①抗原抗体反应的高度专一性和敏感性；②酶的高效催化特性。
ELISA把这二者有机地结合在一起，即被分析物先与其相应的抗体或抗原反应，然后再检测抗体或抗原上酶标记物的活性，从而达到定性或定量测定的目的。
间接法是将过量的与蛋白质连接的待测植物激素(实验前将该激素与牛血清白蛋白等蛋白质连接成[激素一蛋白质复合物])吸附在固相支持物上，然后加入待测植物激素和相应抗体，使抗体与待测植物激素及激素蛋白质复合物结合，再加入酶标抗体(标记酶与非特异第二抗体的复合物)，就形成〔蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物〕，加入底物后就生成有色产物，测定其吸光率，可计算待测抗原的量。
如果抗体、激素一蛋白质复合物和酶标抗体的量一定，并且[激素·蛋白质复合物]和待测激素的总量超过抗体的量，那么生成的[蛋白质·激素·第一抗体·第二抗体·酶复合物]的量就受待测激素含量的限制，因此待测抗原的量将与吸光率成反比。
图A表示间接酶联免疫方法的基本原理：A.间接酶联免疫原理示意图示反应板（固相载体）示激素特异抗体（一抗）示激素（抗原）示非特异二抗示蛋白质·激素复合物示标记酶本实验所采取的方法，则是利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体的竞争性结合反应，它的原理可用下式表示:Ab十H十HP=AbH十AbHP其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素一蛋白质复合物。
激素检测免疫课件
03 化学发光免疫分析（CLIA）： 利用化学发光反应进行检测
04 流式细胞术（FCM）：利用荧 光标记抗体进行检测
2
激素检测免疫应 用
临床应用
01
内分泌疾病诊断：如甲状腺功能亢进、糖尿病等
02
肿瘤标志物检测：如乳腺癌、前列腺癌等
03
检测结果分析
检测结果与实 际症状不符： 可能存在假阳 性或假阴性
01
检测结果与标 准值不符：可 能存在实验误 差或样本污染
03
02
检测结果与预 期不符：可能 存在实验误差 或样本污染
04
检测结果与临床 表现不符：可能 存在实验误差或 样本污染
谢谢
感染性疾病诊断：如病毒性肝炎、细菌性肺炎等
04
自身免疫性疾病诊断：如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎等
科研应用
01
激素检测免疫技术在 科研领域的应用
03
激素检测免疫技术在生 物制药研究中的应用
02
激素检测免疫技术在生 物医学研究中的应用
04
激素检测免疫技术在生 物工程研究中的应用
检测项目
1. 甲状腺激素检测：包括T3、T4、 TSH等
响激素水平
避免服用药物： 药物可能会影
响激素水平
保持情绪稳定： 情绪波动会影
响激素水平
检测过程
准备样品：采集血液、尿液或其他体液样本
提取激素：使用免疫试剂盒提取样本中的激素
检测方法：使用酶联免疫吸附试验（ELISA）或 其他免疫检测方法进行检测 结果分析：根据检测结果，判断激素水平是否正 常，并给出相应的建议和治疗方案
0 4 免疫荧光法（IFA）：利用荧光 标记抗体进行检测
实验32酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量
实验17 酶联免疫吸附检测法（ELISA）测定植物激素含量一、原理植物激素（planthormone）免疫定量主要有放射免疫分析（RIA）和酶联吸附免疫分析（ELISA），由于前者操作上欠安全等原因，目前常采用后一种类型。
在ELISA中，抗原抗体反应的检测依靠酶标记物来实现，常用的酶有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酯酶。
酶可直接标记激素分子，称为酶标植物激素，也可标记于第二抗体（识别抗激素抗体Fc片段的抗体或金黄色葡萄球菌A蛋白），称为酶标二抗。
这两类标记物分别用于固相抗体型和固相抗原型ELISA。
A.固相抗体型ELISA：将抗激素的单克隆抗体（Mab）与已吸附于固相载体上的兔抗鼠Ig抗体（RAMIG）结合，然后加入激素标准品或待测样品，使其与固相化的Mab结合，再加入辣根过氧化物酶（HRP）标记激素（酶标激素）。
通过测定酶标激素的被结合量，可换算出未知样品中激素的数量。
B.固相抗原型ELISA：将“激素-蛋白”复合物（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）包被于固相载体，加入待测激素（样品或标准品）和抗IAA多克隆抗体（Pab）反应，进行竞争反应。
然后让HRP标记羊抗兔Ig抗体（HRP-GARIG）与结合在固相上的Pab反应，通过测定与固相结合的酶量，换算出未知样品中激素的含量。
二、材料、仪器设备及试剂（一）材料：高等植物、真菌、藻类等组织或器官。
（二）仪器设备：1. 酶联免疫检测仪；2. 高速冷冻离心机；3. 恒温箱；4. 连续进样器；5. 涡旋仪；6. 96孔微孔板；7. 离心管；8. 研钵或匀浆器；9. 试管。
（三）试剂1. 洗涤缓冲液：0.01mol/L pH7.4磷酸缓冲液（PBS），含0.05％Tween-0；2. RAMIG 溶液，或“激素-蛋白”复合物；3. 0.1％封闭蛋白（该蛋白应不同于免疫原中的载体蛋白）；4. 抗激素Mab，或Pab；5. 激素标准品母液，及参比系列溶液（按双倍或四倍系列稀释）；6. HRP标记激素，或HRP-GA RIG；7. 邻苯二胺（OPD）基质液：5mgOPD溶于12.5ml0.01mol/L pH5.0PBS，用前加入30％H2O212.5μl。
植物内源激素的分析方法
植物内源激素的分析方法作者：孙宽莹,陈彦来源：《湖北农业科学》2011年第18期摘要：综述了植物内源激素的分析方法，主要包括酶联免疫吸附测定法、气相色谱法、高效液相色谱法、光谱法和毛细管电泳法，并对样品预处理方法进行了阐述。
关键词：植物内源激素；分析方法；预处理中图分类号：Ｑ９４６．８８５；０６５７文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０11）18－3681-03Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ MｅｔｈｏｄｓｏｆＥｎｄｏｇｅｎｏｕｓＰｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅＳＵＮＫｕａｎ－ｙｉｎｇａ，ＣＨＥＮＹａｎｂ（ａ．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，ｂ．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＬｉａｏｃｈｅｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌｉａｏｃｈｅｎｇ２５２０５９，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｍｅｔｈｏｄｓｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｅｎｚｙｍｅ－ｌｉｎｋｅｄｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔａｓｓａｙｓ，ｇａｓｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ，ｃａｐｉｌｌａｒｙｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ were reviewed．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｓａｍｐｌｅｐｒｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓ were ａｌｓｏｓｕｍｍａｒｉｚｅｄａｎｄｔｈｅｆｕｔｕｒｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆａｎａｌｙｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅｗｅｒｅforecast．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｐｈｙｔｏｈｏｒｍｏｎｅ；ａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ；ｐｒｅｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ植物内源激素是指一些在植物体内合成，并从产生之处运送到其他器官，对生长发育产生显著作用的微量（１μｍｏｌ／Ｌ以下）有机物。
其含量虽少，但是每种激素都是不可或缺的，它们同时存在，并且其生理效应相互促进，或者相互拮抗。
磁分离酶联免疫检测激素的方法学评价
磁分离酶联免疫检测激素的方法学评价激素是调节人体生理功能的重要物质，在临床诊断中占有重要地位。
磁分离酶联免疫检测法（Magnetic Separation Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，MSELISA）是激素检测的一种现代技术，它结合磁性颗粒技术和免疫技术，可以快速、准确地测定体内激素水平，具有良好的特异性和灵敏性，并且可以应用于多种不同的激素，如睾酮（Testosterone）、孕酮（Progesterone）、甲状旁腺激素（Parathyroid hormone）、垂体激素（Thyroid hormone）和类固醇激素（Steroid hormones）等。
磁分离酶联免疫检测激素的方法学可以从三个方面来进行评价。
首先，MSELISA的磁性标记方法是一种新的技术，可以提供更快、更准确的结果，实验过程中磁颗粒可以帮助快速提取检测激素，而其他方法则需要长达几个小时才能得到结果。
其次，MSELISA有良好的特异性，允许检测激素水平变化的微小变化，比如睾酮的血液水平，这使它可以探测激素的小变化，反映人体生理功能的变化，起到辅助诊断或治疗的作用。
最后，MSELISA有较高的灵敏度，允许检测激素水平变化很小的细微变化，这有助于提前发现病变，预防疾病发生及发展。
总之，MSELISA是一种高效、准确的激素检测方法，具有快速性、特异性和灵敏度等优点，可以用于检测多种不同的激素，具有良好的临床应用前景。
因此，MSELISA是一种有效的用于检测激素的新技术，可以更准确地反映激素的变化，为临床诊断提供良好的支持。
虽然MSELISA是一种准确的检测方法，但它也存在一些弊端。
首先，它的成本比传统的激素检测方法更高；其次，这种技术检测激素时，需要大量实验室技术人员，而且实验过程往往比较复杂、繁琐；最后，MSELISA检测到的结果虽然准确，但仍受到外界因素的影响，比如温度变化等，可能会影响测定结果的准确性。
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内源激素测定方法
1、内源激素测定种类：生长素（IAA），细胞分裂素（CTK）测定玉米素核苷（ZR）和二氢玉米素核苷（DHZR）两类，赤霉酸（GA3），脱落酸（ABA）和茉莉酸（JA）。
2、免疫法测定，试剂盒购自北京农业大学化控研究室。
3、试剂
1）包被缓冲液：称取1.5g Na2CO3，2.93g NaHCO3，用量筒加1000ml蒸馏水，pH为9.6。
2）磷酸缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl，0.2g KH2PO4，2.96g Na2HPO4·12H2O，用量筒加1000ml 蒸馏水，pH为7.5。
3）样品稀释液：100ml PBS 中加0.1ml Tween-20，0.1g 明胶（稍加热溶解）。
4）底物缓冲液：称取5.10g C6H8O7·H2O（柠檬酸），18.43g Na2HPO4·12H2O，溶解定容至1000ml，再加1ml Tween-20，pH为5.0。
5）洗涤液：PBS加1ml Tween-20。
6）终止液：2mol/L H2SO4。
7）提取液：80%甲醇，内含1mmol/L BHT （二叔丁基对甲苯酚，为抗氧化剂，先用甲醇溶解BHT，在配成80%的浓度）。
8）激素包被抗原、各激素抗体和标准物。
9）酶标二抗：辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔抗体。
4、样品中激素的提取
1）称取0.5—1g 新鲜植物材料（若取样后材料不能马上测定，用液氮速冻后保存在-20℃的低温冰箱中），分三次加入3ml 样品提取液，在冰浴下研磨成匀浆，摇匀后放置在4℃冰箱中。
2）4℃下提取4h，1000g 离心15min，取上清液。
沉淀中加1ml 提取液，搅匀，置4℃下再提取1h，离心，合并上清液，残渣弃去。
3）上清液过C-18固相萃取柱。
具体步骤是：80%甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100%甲醇（5ml）洗柱→100%乙醚（5ml）洗柱→100%甲醇（5ml）洗柱→循环。
4）将过柱后的样品转入离心管中，用氮气吹干提取液中的甲醇，用样品稀释液定容（一般1g鲜重用1.5ml左右样品稀释液定容）。
5、样品测定
1）包被：在10ml 包被缓冲液中加入一定量的包被抗原（激素蛋白质复合物），混匀（最适稀释倍数预先测定，如稀释倍数为1：2000，则加5微升），在酶标板每小孔中加100µl（酶标板可先用蒸馏水冲洗数次但必须甩干）。
然后将酶标板放入内铺湿纱布的带盖磁盘内，置于37℃下3h。
2）洗板：将包被好的板取出，放在室温下平衡。
然后甩掉包被液，将下口瓶内的洗涤液通过乳胶管均匀加入板上，是每孔充满洗涤液，放置约0.5min，再甩掉洗涤液。
重复3次，将板内残留洗涤液在吸水纸上甩干。
3）竞争：即加标准物、待测样和抗体
加标样级待测样：取样品稀释液0.98ml，内加20µl激素的标样试剂（100µg/ml），即
为2000ng/ml 标准液，然后再依次稀释1000ng/ml，500ng/ml，250ng/ml，125ng/ml…，0ng/ml。
不同的激素可预先选择各自的最佳标准曲线范围（一般包括0ng/ml在内有8个浓度）。
将系列溶液加入96孔酶标板的前三行，每个浓度加3孔，每孔50µl，其余孔加待测样，每个样品重复三孔，每孔50µl。
加抗体：在5ml 样品稀释液中加入一定量的抗体（预先测定稀释倍数，如稀释倍数为1：1000，则加5微升），混匀后每孔加50µl，然后将酶标板加入湿盒内开始竞争。
竞争条件：37℃左右0.5h。
4）洗板：方法同包被后的洗板。
但要注意一下两点：1·加洗涤液是一定要从标准曲线的低浓度一边向高浓度一边加，并且酶标板要向高浓度的一边倾斜。
2·第一次加入洗涤液后要立即甩掉。
然后在接着加第二次。
注意这两点的目的是防止各孔的交叉反应。
5）加二抗：将一定量的酶标羊抗兔抗体，加如10ml 样品稀释缓冲液中（稀释倍数预先测定，如稀释倍数为1：1000，则加10微升），混匀后，在酶标板每孔加1000µl，然后将其放入湿盒内，置30℃下，温育0.5h。
6）洗板：方法同竞争后的洗板（步骤4），洗板5次。
7）加底物显色：称取10-20mg 邻苯二胺（OPD）溶于10ml底物缓冲液中（小心勿用手接触OPD），完全溶解后加2-4µl 30% H2O2，混匀，在每孔中加100µl（在暗处操作），然后放入湿盒内，当显色适当后（即0ng/ml孔与2000ng/ml孔的OD差值为1.0左右时），每孔加入50µl 2mol/L 硫酸终止反应。
8）比色：用2000ng/ml浓度孔（即标准曲线最高浓度孔）调0，在酶联免疫分光光度计上依次测定标准物各浓度和各样品490nm处的OD值。
6、结果计算与分析
用激素标样各浓度（ng/ml）的自然对数与各浓度显色值的logit值的回归方程计算样品激素的浓度。
求得样品中激素的浓度后，样品中激素的含量（ng/g·fw）可用下式计算：
A=
W
V B
V
V
N
⋅⋅
⋅⋅
13
2
其中，A表示激素的含量（ng/g·fw）；
V2表示提取液的总体积；
V1表示进行真空浓缩干燥的上清液体积；
V3表示真空浓缩后用样品稀释液定容的体积；
W表示样品的鲜重；
N表示样品中激素的浓度（ng/ml）；
B表示样品的稀释倍数（样品稀释液定容以后的稀释倍数）。
7、数据分析
对测定结果采用DPS软件用Duncan新复极差法进行方差分析及多重比较。