HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理

创作编号：

GB8878185555334563BT9125XW

创作者：凤呜大王*

HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理

HAT培养基是指含有次黄嘌呤（hypoxantin）、氨基蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶脱氧核苷（thymidin）三种物质的细胞培养基。

1.细胞内合成DNA原料的核苷酸形成的途径

（1）起始合成途径（de novo pathway）：

由氨基酸及其他小分子化合物合成核苷酸，为DNA分子的合成提供原料。在此合成过程中，叶酸作为重要的辅酶参与这一过程。

（2）中间合成途径（salvage pa-thway）：

利用次黄嘌呤—鸟嘌呤磷酸核苷转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（TK）催化次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷生成相应的核苷酸。

2.利用HAT培养基筛选杂交瘤细胞

（1）经融合后细胞将以多种形式出现：融合的脾细胞—瘤细胞、融合的脾细胞—脾细胞、融合的瘤细胞—瘤细胞、未融合的脾细胞、未融合的瘤细胞以及细胞的多聚体形式等。正常的脾细胞在培养基中存活仅5～7天，无需特别筛选，细胞的多聚体形式也容易死去。而未融合的瘤细胞则需进行特别的筛选去除。

（2）融合所用的瘤细胞是经毒性培养基选出的中间合成途径缺失株（例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株），即只有起始合成途径。效应B细胞虽不增殖，但有两条DNA合成途径。

（3）氨基蝶呤是叶酸的拮抗剂，可阻碍起始合成途径。HAT培养基中含有氨基蝶呤时，细胞只有中间合成途径，所以必须供给核苷酸。杂交瘤细胞的起始合成途径被氨基喋呤阻断，但可通过中间合成途径利用以培养

基中次黄嘌呤和胸腺嘧啶脱氧核苷为原料进行合成。而缺失中间合成途径的瘤细胞，失去增殖能力。从而选择出杂交瘤细胞。

创作编号：

GB8878185555334563BT9125XW

创作者：凤呜大王*