新型鹅细小病毒VP3抗体特异性ELISA检测方法的建立

目录

第1章文献综述 (1)

1.1 鹅细小病毒流行现状 (1)

1.2 鹅细小病毒的特性 (2)

1.2.1 GPV形态结构和理化特性 (2)

1.2.2 宿主范围和培养特性 (2)

1.2.3 临床症状及病理特性 (3)

1.2.4 GPV的基因结构 (4)

1.2.5 GPV编码蛋白及功能 (6)

1.3 鹅细小病毒诊断方法的研究进展 (8)

1.3.1 病原学诊断 (8)

1.3.2 分子生物学诊断 (9)

1.3.3 血清学诊断 (10)

1.4 鹅细小病毒病的防治 (13)

1.5 本研究的目的和意义 (14)

第2章鹅细小病毒VP3蛋白的原核表达 (15)

2.1 材料与试剂 (15)

2.1.1 菌种和载体 (15)

2.1.2 酶和试剂 (15)

2.1.3 各种溶液及培养基 (15)

2.1.4 主要仪器 (17)

2.2 方法 (18)

2.2.1 鹅细小病毒的分离鉴定 (18)

2.2.2 鹅细小病毒VP3蛋白的原核表达 (18)

2.3 结果 (21)

2.3.1 鹅细小病毒的分离鉴定 (21)

2.3.2 原核表达载体pET32a-VP3的构建 (21)

2.3.3 目的蛋白的表达 (22)

2.4 讨论 (23)

第3章鹅细小病毒VP3蛋白的纯化与鉴定 (24)

3.1 材料 (24)

3.1.1 酶和试剂 (24)

3.1.2 各种溶液 (24)

3.1.3 主要仪器 (24)

3.2 方法 (24)

3.2.1 VP3蛋白包涵体的提取 (24)

3.2.2 包涵体粗纯化 (25)

3.2.3 VP3蛋白Ni柱亲和层析 (25)

3.2.4 重组VP3蛋白Western-blot分析 (25)

3.3 结果 (26)

3.3.1 包涵体粗纯化 (26)

3.3.2 VP3蛋白Ni柱亲和层析 (26)

3.3.3 重组VP3蛋白Western-blot分析 (27)

3.4讨论 (27)

3.4 讨论 (27)

第4章间接ELISA方法的建立及评价 (28)

4.1 材料 (28)

4.1.1 病毒和血清 (28)

4.1.2 试剂及溶液 (28)

4.1.3 主要设备 (28)

4.2 方法 (28)

4.2.1 间接ELISA方法步骤 (28)

4.2.2 间接ELISA方法条件的优化 (29)

4.2.3 间接ELISA方法的评价 (30)

4.2.4 血清样品的检测 (31)

4.3 结果 (31)

4.3.1 间接ELISA方法的建立 (31)

4.3.2 临界值的确定 (33)

4.3.3 特异性试验 (34)

4.3.4 敏感性试验 (35)

4.3.5 重复性试验 (36)

4.3.6 间接ELISA方法敏感性与符合率试验 (37)

4.4 讨论 (37)

结论 (39)

参考文献 (40)

致谢 (49)

攻读学位期间取得的科研成果 (50)