血清葡萄糖测定
血清葡萄糖测定
1.实验原理
在己糖激酶（HK）催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸（G6P）与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）催化下脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸（6PG），同时使NADP还原成NADPH。NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。NADPH在波长340nm有吸收峰，可监测吸光度升高速率，计算血清中葡萄糖浓度。
2. 标本：
2.1 病人准备：12小时禁食。
2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。
3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天
内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。
4. 标本运输：常温条件下保存运输。
5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。
6. 试验材料：
6.1 欧泰克血糖测定试剂盒，罗氏复合定标液，罗氏质控品I、II。
6.1.1 试剂组成：
磷酸缓冲液，PH7.6 100 mmol/L
三磷酸腺苷（ATP） 4 mmol/L
醋酸镁10 mmol/L
NAD+ 3 mmol/L
己糖激酶（HK）≥25 KU/L
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）≥75 KU/L
6.1.2试剂准备：
6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为24个月。试剂不可冰冻。开盖后应避免污染。
6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。
6.1.5 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。
6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
6.3 质控品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
7. 仪器：日立7060全自动生化分析仪
8. 操作步骤：
8.1 项目基本参数：参见7060生化分析仪项目测定参数.SOP文件
8.2 仪器操作步骤：参见7060生化分析仪操作规程.SOP文件
9. 检验结果的判断与分析
10. 质量控制：在每一批标本中都应把非定值血清水平I与II质控做为未知标本进行分析，以2S为质控警告限，3S为失控限，绘制质控图，判断是否在控。质控规则参见室内质控操作规程.SOP文件。
11. 计算方法：以用罗氏复合定标物校准仪器后，在病人结果可报告范围内，仪器直接报告可靠的检测结果，以mmol/L报告。
12. 参考值范围：（mmol/L）
血清： 3.9－6.1 mmol/L
尿液： 24h尿样 <2.8mmol/day**
脑脊液：成人：2.5－4.5 mmol/L
儿童：2.8—4.5 mmol/L
13. 临床意义：检测血清或血浆中葡萄糖主要用于糖尿病的诊断和治疗监视，还可用于检出新生儿低血糖
症、排除胰岛细胞癌以及评估各种疾病碳水化合物代谢状况。血清葡萄糖水平可能会异常高（高血糖）或异常低（低血糖）。葡萄糖测量用于诊断和治疗碳水化合物代谢紊乱，包括糖尿病，新生儿低血糖，自发性低血糖，郎格罕氏岛细胞癌等。
葡糖尿（存在葡萄糖化尿）在健康，怀孕的妇女中很常见。妊娠葡糖尿的最主要的特征就是每天之间或一天之中有一个显著的变化。
脑脊髓液（CSF）葡萄糖的测定帮助区别病毒性脑膜炎与细菌性脑膜炎；细菌性脑膜炎和结核性脑膜炎中的葡萄糖值通常很低（不到的40%至50%血清葡萄糖），病毒性脑膜炎中的葡萄糖值通常是正常的。癌性脑膜炎（肿瘤细胞在脑膜中广泛渗透）也使CSF葡萄糖值在正常值以下。
14. 线性范围：血清 1.00－38.9 mmol/L；尿液、脑脊液1.11－36.08 mmol/L。
14.2 精密度：在日立7060生化仪上用质控液来测精密度。结果反映了该方法的精密度。当仪器维护，周围环境，干片处理和保存，质控液的复溶以及样品处理等方面发生变化都会影响结果的重复性。
14.3 方法学比较：
14.4 灵敏度：本试剂的检测限为1.11 mmol/L。
14.5 特异性：
14.6 病人结果可报告范围：1.11-38.9 mmol/L
15. 超出范围结果处理：本法线性上限为38.9mmol/L。如果样品中GLU浓度超出系统的测试线性范围，请按下列步骤进行稀释：血清、血浆或尿液用生理盐水稀释，重新测试。将测试结果乘以稀释倍数，就得到原始样品中GLU的浓度。
16. 病危报警值的处理：女性及婴儿的血糖测定值<2.2mmo/L或者>22.2mmol/L；男性的血糖测定值<2.7mmo/L或>22.2mmol/L；新生儿的血糖测定值<1.6mmo/L或>16.6mmol/L时，应在复查该标本检测结果后，报告上级检验医师（或科主任）后，及时报告临床医生，必要时可以再抽血复查。
血清葡萄糖GLU测定
血清葡萄糖GLU测定 1 检验目的 指导本室工作人员规范操作本检测项目，确保检测结果的准确。 2 实验原理 本试剂基于在精密度和准确性方面具有很高可靠性的Trinder’S方法，在防止已知化合物（如尿酸、谷胱甘肽和肌酐等）的干扰进行了进一步的改良。 GOD 葡萄糖+ H2O+ O2 H2O2+葡萄糖酸 POD H2O+AAP + HBA 醌亚胺（红色）H2O 式中：AAP 为4-氨基安替比林；HBA 为4-羟基苯甲酸上述反应中，红色醌亚胺色素的生成量与样本中葡萄糖的浓度成正比，通过在波长500nm波长处测定吸光度的变化值，即可测得样本中葡萄糖的浓度。 3 标本：
3.1 病人准备：12小时禁食。 3.2 类型：血清，标本最好不要溶血。迅速分离血清或，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。 3.3 标本存放：血清应在血液采集1小时内，尽早分离。加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。 3.4 标本运输：常温条件下保存运输。 3.5标本拒收标集：细菌污染、超时送检的的标本。 4 实验材料 4.1 试剂：上海复星长征医学科学有限公司GLU试剂盒（沪食药监械（准）字2014第2400166号 YZB/沪 1546-40-2014）4.1.1 试剂组成
试剂1（R1）：过氧化物酶 375U/L 4-羟基苯 甲酸 15mmol/L 4-氨基安替比林0.75mmo l/L 磷酸盐缓 冲液 110mmol/L 试剂2（R2）：葡萄糖氧化 酶 6000U/L 磷酸盐缓 冲液 110mmol/L 4.1.2 试剂稳定性与贮存：在2～8℃避光、密封的储存条件下，试剂盒自生产之日起有效期为12个月 4.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 4.1.4 注意事项：试剂中含有防腐剂叠氮化钠，可能存在一定的刺激作用，请勿直接接触皮肤、眼睛。一旦接触，即用大量清水冲洗。请勿吞服。 4.2 校准品：使用上海复星长征医学科学有限公司提供的GLU校准品对自动分析仪进行校准。 4.3 质控品：使用正常值、病理值复合控制品。
食物中葡萄糖的测定
食物中葡萄糖的测定 葡萄糖氧化酶法 1.原理 葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下产生葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物质，此有色物质在625nm 波长下与葡萄糖浓度成正比。通过测定蓝色物质的吸光度可计算样品中葡萄糖的含量。 2.适用范围 适用于谷类、乳类、饮料、酒类等食物样品和血液样品。检出量为0.02 mg。 3.仪器 722分光光度计。 4.试剂： 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 （1）乙醇。 （2） 40% 三氯乙酸：称取40g 三氯乙酸，用水溶解并稀释至100ml。 （3） 2 mol/L NaOH 溶液：称取8g NaOH，用水溶解并稀释至100ml。 （4） 1 % 邻联甲苯胺溶液：称取0.1 g 邻联甲苯胺溶解于10 ml无水乙醇中，倒入棕色瓶中，4 ℃冰箱保存。 （5）乙酸缓冲液（pH 5.0）：称取14.28 g 乙酸钠（CH3COONa?3H2O）溶于水中，加入2.7 ml 冰乙酸，并调节pH 5.0，用水定容至1 L。 （6）葡萄糖氧化酶溶液：称取一定量的葡萄糖氧化酶（Sigma 公司）用水溶解，使酶含量为100 U/ml。4 ℃冰箱保存一周。 （7）过氧化物酶溶液： 0.010 g 辣根过氧化物酶溶于10 ml 水中，4 ℃冰箱保存一周。（8）酶溶液：取100 ml 乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、葡萄糖氧化酶溶液、过氧化物酶溶液各1 ml，混匀。4℃冰箱可保存七周。 （9）酶空白液：取100 ml 乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、过氧化物酶溶液各1 ml，混匀。4℃冰箱保存一周。（注意酶空白液中不含葡萄糖氧化酶） （10）葡萄糖标准液：将葡萄糖标准品（纯度大于99%）于80 ℃干燥至恒量。精确称取0.050 g，用水移入100 ml 容量瓶中，定容至刻度线。相当于浓度为0.5 mg/ml。 5.操作步骤： 5.1样品处理： （1）固体样品：称取0.5～5g已粉碎的样品于锥形瓶中，加入50ml水后沸水浴15min。冷
氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖
葡萄糖氧化酶法测定操作规程 1实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。在500nm处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。GOD 葡萄糖+O2→葡萄糖酸+H2O2 POD H2O2+4-AAP+酚→红色醌类化合物+H2O 2临床意义1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。 2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。 4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。 3实用仪器蓝韵200（L Y-C200） 4储存条件及有效期试剂盒应避光密封储存在2--8℃环境中，有效期为12个月。开封后，上机在2--8℃避光保存其有效期为28天。
5操作步骤 5.1、全自动生化分析仪操作步骤：参数设置→试剂装载→校准→质控→样品加载→测定→结果审核→报告。 5.2、校准：采用纯化水或生理盐水和校准品两点校准。当试剂更换批号、出现质控漂移、仪器做完保养后及重要零件更换时，须重新校准。 5.3、结果计算：全自动生化分析仪会自动给出检测结果。 5.4、质控程序：建立质控体系，选用适当的质控品进行质量控制。测定结果在质控范围内，方可进行样本测定。 6参考范围 3.89—6.11 mmol∕L 7方法评价本法线性范围0.10 mmol∕L—25.00mmol∕L，精密度批内CV ≤3.00%，批间CV≤4.00%。准确度相对偏差在±10.0%。 8注意事项1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 2.严重黄疸.溶血及乳糜烂血清应先制备无蛋白血滤液，然后再进行测定。
葡萄糖含量测定——碘量法
实验十三 葡萄糖含量的测定——碘量法 一、实验目的 1、 学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法原理，进一步掌握返滴定法技能。 2、 进一步熟悉酸滴定管的操作，掌握有色溶液滴定时体积的正确读法。 二、实验原理 I 2与NaOH 作用可生成次碘酸钠(NaIO)，次碘酸钠可将葡萄糖(C 6H 12O 6)分子中的醛基定量地氧化为羧基。未与葡萄糖作用的次碘酸钠在碱性溶液中歧化生成NaI 和NaIO 3，当酸化时NaIO 3又恢复成I 2析出，用Na 2S 2O 3标准溶液滴定析出的I 2，从而可计算出葡萄糖的含量。涉及到的反应如下： 1、I 2与NaOH 作用： I 2+2NaOH=NaIO+NaI+H 2O 2、C 6H 12O 6和NaIO 定量作用： C 6H 12O 6+ NaIO=C 6H 12O 7+NaI 3、总反应式： I 2+C 6H 12O 6+2NaOH=C 6H 12O 7+2NaI+H 2O 4、C 6H 12O 6作用完后，过量的NaIO 发生歧化反应： 3NaIO=NaIO 3+2NaI 5、在酸性条件下NaIO 3和NaI 作用： NaIO 3+5NaI+6HCl=3I 2+6NaCl+3H 2O 6、析出过量的碘用Na 2S 2O 3标准溶液滴定： I 2+2Na 2S 2O 3=Na 2S 4O 6+2NaI 实验还涉及到Na 2S 2O 3和 I 2溶液的标定 1、Na 2S 2O 3的标定 Cr 2O 72-+6I -+14H +=2Cr 3++3I 2+7H 2O I 2+2S 2O 32-=S 4O 62-+2I - Cr 2O 72-~3I 2~6S 2O 32- 32232272232200.256)(6O S Na O S Na O Cr K O S Na V c V cV c ??=?= 2、碘的标定 I 2+2S 2O 32-=S 4O 62-+2I - V V c 322322O S Na O S Na c 2/1= 3、葡萄糖注射液中葡萄糖的含量 计算式：%100506126?=L g O H C W 标示量葡萄糖含量 三、实验仪器及材料 1、 仪器 称量瓶、电子台秤、分析天平、容量瓶（250ml ）、移液管（25ml ）、量筒（10ml ）、锥形瓶（25ml ，3个）、酸式滴定管（50ml ）、烧杯（50ml ）、玻璃棒、碘量瓶 2、 药品 K 2Cr 2O 7（S ）、盐酸（6mol/L ）、KI 溶液（100g/L)、淀粉（5g/L)、Na 2S 2O 3溶液（0.1mol/L ）、I 2溶液（0.05mol/L ）、NaOH 溶液（1mol/L ）、葡萄糖注射液（5%） 四、 实验步骤 1、 0.1mol/L Na 2S 2O 3标准溶液的标定 ()()()()())(100000.25100021101612632232222-??????????-?L g O H C M O S Na v O S Na c I v I c 葡萄糖含量＝
葡萄糖含量测定
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定 摘要 运用氧化还原滴定的原理设计葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定方案并具体实施。从而进一步掌握Na 2S 2O 3及I 2标准溶液的配制和标定方法，巩固氧化还原滴定的操作技能。学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法和原理，进一步掌握返滴定法技能。其中，葡萄糖分子中含有醛基，能被IO -定量地氧化为羧基。故可将一定量过量的I 2在碱性条件下加入葡萄糖溶液中，使醛基完全转化为羧基。再将其酸化，用Na 2S 2O 3标准溶液滴定析出的I 2。所用指示剂为淀粉。根据所加I 2标准溶液的量及滴定所耗Na 2S 2O 3标准溶液的量结合反应式中各物质之间的计量关系，便可计算葡萄糖的含量。该方法简便易行且准确度高，基本符合实验要求。 关键词 葡萄糖注射液 间接碘量法 返滴定法 1引言 葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定目前有以下几种方法 方案一：旋光测定法 根据葡萄糖分子结构中的五个碳都是手性碳原子，具有旋光性，可采用旋光法测定含量。取出旋光计的测定管，先用蒸馏水为空白对仪器进行校正。用供试液体（5％葡萄糖注射液）冲洗数次，缓缓注入供试液体适量（注意勿使发生气泡）。置于旋光计内，读取旋光度，连续测定3次，取平均值。 方案二：间接碘量法。 碘与NaOH 作用能生成NaIO ，而C 6H 12O 6能定量地被NaIO 氧化。在酸性条件下，未与C 6H 12O 6作用的NaIO 可转变为I 2析出，只要用标准Na 2S 2O 3溶液滴定析出的I 2，便可计算C 6H 12O 6的含量。 本实验采用第二种方案进行葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定。 2实验原理 在碱性溶液中，碘与氢氧化钠作用可生成次碘酸钠（NaIO),葡萄糖能定量的被次碘酸钠氧化成葡萄糖酸（C 6H 12O 7）。过量的NaIO 可以转化为NaIO 3和NaI 。在酸性条件下，NaIO 3和NaI 作用析出I 2，然后用Na 2S 2O 3标准溶液滴定析出的I 2，便可计算出葡萄糖的含量。其反应如下： 1、I 2与NaOH 作用： I 2+2NaOH=NaIO+NaI+H 2O 2、C 6H 12O 6和NaIO 定量作用： C 6H 12O 6+ NaIO=C 6H 12O 7+NaI 3、总反应式： I 2+C 6H 12O 6+2NaOH=C 6H 12O 7+2NaI+H 2O
实验一葡萄糖含量测定
实验一、果蔬样品中葡萄糖含量的测定（碘量法） 一、目的要求 1、复习碘量法的原理及操作。 2、掌握还原糖的测定方法。 3、学习样品的前处理方法。 二、原理 果蔬中的葡萄糖可用水提取，除去干扰物质后，其中的葡萄糖可用碘量法测定。 碘与NaOH 作用能生成NaIO （次碘酸钠），而C 6H 12O 6（葡萄糖）能定量地被NaIO 氧化。在酸性条件下，未与C 6H 12O 6作用的NaIO 可转变成I 2析出，析出的I 2可用Na 2S 2O 3标准溶液滴定。反应示意如下： 46应用2: 碘量法测定葡萄糖含量 (返滴定法) 基本单元：1/2(葡萄糖） 三、试剂 I 2标准溶液（0.05 mol ·L -1） Na 2S 2O 3标准溶液(0.1 mol ·L -1) NaOH 溶液（2 mol ·L -1）； HCl 溶液（6 mol ·L -1）；淀粉指示剂(w 为0.01)。 四、实验步骤 1、样品准备 水果样品去皮、去核后搅碎、匀浆；称量适量的匀浆于250 mL 容量瓶中定容。于40~50 ℃ 的水浴中提取30 min 后用干滤纸抽滤，弃去前面的少量滤液，保留后面的滤液。 2、葡萄糖含量的测定 用移液管吸取25 mL 滤液置于碘量瓶中，准确加入25 mL I 2 标准溶液。一边摇动，一边慢慢滴加2 mol /L NaOH 溶液，直至溶液呈淡黄色（加碱速度不能过快，否则过量NaIO 来不及氧化C 6H 12O 6而歧化为不与葡萄糖反应的NaIO 3和NaI ，使测定结果偏低）。将碘量瓶加塞于暗处放置10~15 min 后，加2 mL 6 mol ·L -1 HCl 溶液酸化，立即用Na 2S 2O 3标准溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1 mL 淀粉指示剂，继续滴定到蓝色消失。记录读数。再重复测定二次。计算样品中葡萄糖的质量分数。
葡萄糖检测方法
葡萄检测方法汇总 与葡萄糖检测相关的国家地方标准汇总： GB/T 30390-2013 油料种籽中果糖、葡萄糖、蔗糖含量的测定高效液相色谱法 DB41/T 321-2003 食品添加剂.?葡萄糖含量测定方法 NY/T 2279-2012 食用菌中岩藻糖、阿糖醇、海藻糖、甘露醇、甘露糖、葡萄糖、半乳糖、核糖的测定离子色谱法 GB/T 淀粉水解产品还原力和葡萄糖当量测定 GB/T 20379-2006 淀粉衍生物葡萄糖浆、果糖浆和氢化葡萄糖浆成分的测定 GB/T 16285-2008 食品中葡萄糖的测定酶-比色法和酶-电极法 CNS 2874-N5083 葡萄糖浆及干葡萄糖浆 GB/蜂蜜中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖含量的测定方法液相色谱示差折光检测法 GB/T22221-2008食品中果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖的测定高效液相色谱法 YC/T252-2008烟用料液?葡萄糖、果糖、蔗糖的测定?离子色谱法 国家地方标准检测方法汇总表
葡萄糖的应用范围 葡萄糖作为人体的基本元素和最基本的医药原料，其作用和用途十分广泛。尤其是随着广大人民生活水平的提高，葡萄糖作为蔗糖的替代用糖应用于食品行业，为葡萄糖的应用开拓了更广阔的领域。 （一）发酵工业 微生物的生长需要合适的碳氮比，葡萄糖作为微生物的碳源，是发酵培养基的主料，如抗生素、味精、维生素、氨基酸、有机酸、酶制剂等都需大量使用葡萄糖，同时也可用作微生物发酵多聚糖和有机溶剂的原料。 1.抗生素发酵 葡萄糖是医药工业的重要原料，尤其是抗生素发酵必不可少的原料，抗生素中最主要的品种是青、链霉素，而这两种抗生素发酵都是以葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液)为碳底物。链霉素发酵以结晶葡萄糖为主，也可用高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液)；其他如利福平也以葡萄糖或者高DE值的淀粉水解液(即葡萄糖液)为主要碳源；沽霉素、红霉索、麦迪霉
葡萄糖注射液的含量测定
葡萄糖注射液的含量测定 一、目的要求 ? 1.掌握旋光法测定葡萄糖注射液含量的原理、方法及计算。 ? 2.学会使用自动旋光仪。 二、仪器与试剂 ? 仪器 自动旋光仪，旋光管，移液管（50ml ），容量瓶(100ml)。 ? 试剂 葡萄糖注射液（含量在16%以上）， 氨试液（取浓氨溶液400ml ，加水使成1000ml ）。 三、方法原理 ? 葡萄糖分子结构中有多个不对称碳原子，具有旋光性，为右旋体。一定条件下的旋光度是旋光性物质的特性常数，测定葡萄糖的比旋度，可以鉴别药物，也可以反映药物的纯杂程度。 ? 旋光度（α）与溶液的浓度（c ）和偏振光透过溶液的厚度（L ）成正比。当偏振光通过厚1dm 且每1ml 中含有旋光性物质1g 的溶液，使用光线波长为钠光D 线（589.3nm ），测定温度为t ℃时，测得的旋光度称为该物质的比旋度，以[α]Dt=α/Lc 。 ? 2.0852的由来：+52.75为无水葡萄糖的比旋度，按下式计算无水葡萄糖的浓度： ? 无水葡萄糖浓度（c ）=100 α /[α]D20l ? 如果换算成一水葡萄糖浓度（c ˊ）时，则应为： ? c ˊ = c × = α× × =α×2.0852 ? 所以，测定葡萄糖溶液的旋光度可以求得其含量。 四、旋光仪的工作原理 1.光源 2.小孔光栏 3.物镜 4.滤光片 5.偏振镜 6.磁旋线圈 7.样品室8.偏振镜9.光电倍增管10.前置放大器 11.自动高压12.选频放大器13.功率放大器 14.伺服电机15.蜗轮蜗杆16.计数器 ? 使用方法 （1）将仪器电源插头插入220V 交流电源，并将接地脚可靠接地。 （2）打开电源开关，这时钠光灯应启亮，需经5min 钠光灯预热，使之发光稳定。 （3）打开电源开关（若光源开关打开后，钠光灯熄灭，则再将光源开关上下重复打开1到2次，使钠光灯在直流下点亮，为正常）。 （4）打开测量开关，这时数码管应有数字显示。 （5）将装有蒸馏水或其他空白溶剂的试管放入样品室，盖上箱盖，待示数稳定后，按清零按钮。试管中若有气泡，应先让气泡浮在凸颈处。通光面两端的雾状水滴，应用软布揩干。试管螺帽不宜旋得过紧，以免产生应为，影响读数。试管安放时应注意标记的位置和方向。 （6）取出试管，将待测样品注入试管，按相同的位置和方向放入样品室内，盖好箱盖。仪器数显窗将显示出该样品的旋光度。 （7）逐次按下复测按钮，重复读几次数，取平均值作为样品的测定结果。 （8）如样品超过测量范围，仪器在±45 处来回振荡。此时，取出试管，打开箱盖按箱内回零按钮，仪器即自动)(16.180)(17.198无水葡萄糖的分子量一水葡萄糖的分子量175.52100 16.18017.198
血清葡萄糖GLU己糖激酶HK法测定法
血清葡萄糖GLU己糖激酶HK法测定法 1.实验原理 己糖激酶紫外比色测定法。 HK 葡萄糖+ ATP -------------﹥G-6-P+ ADP Mg2+ G6PDH G-6-P + NAD+-------------﹥6-磷酸葡萄糖+NADH + H+ 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。 3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。血清中的
葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。 6. 实验材料 6.1 试剂威特曼血糖测定试剂盒试剂1 ＋试剂2 6.1.1 试剂准备：试剂为即用式。 6.1.2 试剂稳定性与贮存：试剂保存于2～8℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂不可冰冻。 6.1.3 变质指示：当试剂有看得见的微生物生长，有浊度，或者未开盖的液体有沉淀时，表明试剂已变质，不能继续使用。 6.1.4 注意事项：此试剂为体外诊断用。不要入口，吞下有害。保护剂为叠氮钠，避免接触皮肤及粘膜，与下水管中的铅反应形成爆炸性化合物，即使只含有少量的
血清中葡萄糖含量检测的方法研究进展
血清中葡萄糖含量检测的方法研究进展 【摘要】血清葡萄糖含量是临床生化检验中重要的指标，其的准确测定对糖尿病等疾病的诊断、治疗都有重大意义。本文介绍了近几年血清中葡萄糖含量检测的主要方法以及这些方法的一些研究结果。 【关键词】血清；葡萄糖；检测方法 血清中葡萄糖是人体内各组织细胞活动所需的物质。人体内的血糖必须保持一定的水平才能维持体内各器官和组织的需要。正常人在空腹血糖浓度为3.9～6.0mmol/L。空腹血糖浓度超过6.0mmol/L称为高血糖而血糖浓度低于3.9mmol/L 称为低血糖。血清中葡萄糖是临床生化检验中的重要指标，可以为糖尿病、高血压以及心脑血管系统等疾病的诊断、治疗用药、病情监测以及疾病预防等方面提供客观依据。因此，对其进行准确的测定具有极其重要的意义。 1血清中葡萄糖的主要检测方法 目前，血清中葡萄糖的检测方法主要有：葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法、己糖激酶法（HK法）、葡萄糖脱氢酶法（GDH法）、气相色谱-同位素稀释质谱法（GC-IDMS法）以及无创血糖测量法等。下面就对以上方法进行简要的介绍。 1.1葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法 葡萄糖氧化酶(glucose oxidase，GOD)将葡萄糖氧化成葡萄糖酸，同时释放过氧化氢。过氧化物酶(peroxidase，POD)在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。通过测定吸光度就能计算出血液中葡萄糖的含量。 该法的优点有：操作简便，用血量少，成本低，多见于便携式血糖仪，是我国卫生部推荐的血糖测定的常规方法。但缺点是：过氧化酶的特异性较差，尿酸、维生素C、胆红素等可与色原性物质竞争过氧化氢而抑制反应，引起结果偏低。且该法线性范围较窄（0.1~20.0mmol/L）。同时，葡萄糖氧化酶对β-D-葡萄糖高度敏感，而新配制的葡萄糖标准溶液主要为α-D-葡萄糖，为使检测结果准确，需静置溶液2h以上（最好过夜）待其完全转化为β-D-葡萄糖再使用。 1.2己糖激酶法（HK法） 己糖激酶是六碳糖的磷酸化酶，可催化使葡萄糖从稳定状态变为活跃状态，使葡萄糖和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)催化下脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸(6-GP)，同时使NADP还原成NADPH。反应式如下： 葡萄糖+ATP■G-6-P+ADP G-6-P+NADP+■6-GP+NADPH+H+ 根据反应方程式，NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比，在波长340nm 监测吸光度升高速率，可计算出血清中葡萄糖浓度。 该法的优点有：对含有轻度溶血、脂血、黄疸、维生素C、氟化钠、肝素、EDTA和草酸盐等的样本也能够进行准确的测定，因此该法多见于自动生化分析仪，是目前国际上公认的血糖测定参考方法。但缺点是：从红细胞中释放出的有机磷酸酯和一些酶会消耗NADP，因此会使结果产生偏差。 1.3葡萄糖脱氢酶法（GDH法） 葡萄糖脱氢酶是一种以NAD+或NADP+为受体、作用于供体CH-OH基团
血清葡萄糖测定
血清葡萄糖测定 1.实验原理 在己糖激酶（HK）催化下，葡萄糖和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖-6-磷酸（G6P）与ADP。前者在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）催化下脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸（6PG），同时使NADP还原成NADPH。NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。NADPH在波长340nm有吸收峰，可监测吸光度升高速率，计算血清中葡萄糖浓度。 2. 标本： 2.1 病人准备：12小时禁食。 2.2 类型：血清或血浆（EDTA，肝素或氟化钠），标本最好不要溶血。迅速分离血清或血浆，减少红细胞糖酵解时葡萄糖的损失。随机收集尿样。 3. 标本存放：血清、血浆应在血液采集1小时内，尽早分离。加入糖分解抑制剂（NaF，KF）后的稳定性：15～25℃保存可稳定1天,4～8℃保存可稳定7天。血清中的葡萄糖，无溶血，无细菌污染，没有添加的防腐剂，在25℃下可稳定8个小时，在4℃下可稳定72小时。尿样应保存在2～8℃下并尽快进行分析。脑脊髓液如果避免蒸发可在2～8℃下稳定至少5天，5天
内不检验的标本应在收集后立即储存在-20℃的条件下。 4. 标本运输：常温条件下保存运输。 5. 标本拒收标准：细菌污染、超时送检的的标本。 6. 试验材料： 6.1 欧泰克血糖测定试剂盒，罗氏复合定标液，罗氏质控品I、II。 6.1.1 试剂组成： 磷酸缓冲液，PH7.6 100 mmol/L 三磷酸腺苷（ATP） 4 mmol/L 醋酸镁10 mmol/L NAD+ 3 mmol/L 己糖激酶（HK）≥25 KU/L 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）≥75 KU/L 6.1.2试剂准备： 6.1.3 试剂稳定性与贮存：试剂避光保存于2～25℃，若无污染，可稳定至失效期。试剂有效期为24个月。试剂不可冰冻。开盖后应避免污染。 6.1.4 变质指示：当试剂有浊度时，表明有细菌污染，不能继续使用。 6.1.5 注意事项：避免试剂与皮肤及粘膜接触。 6.2 校准品：参见生化检验校准品和质控品.SOP文件
葡萄糖氧化酶法测定血清(浆)葡萄糖背景知识讲解
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 实验原理葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并成成过氧化氢。过氧化物酶在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解喂水和氧，并使色原性氧受体4-氨基安替比林（4-AAP）和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即Trinder反应。在500nm 处测得的吸光度与葡萄糖含量成正比。 临床意义 1.生理性高血糖可见于餐后或高糖饮食.情绪紧张肾上腺分泌增加等。 2.病理性高血糖（1）糖尿病患者。（2）内分泌腺功能障碍：甲状腺功能亢进，肾上腺皮质及髓质功能亢进等。升高血糖的激素增多引起的高血糖，现已归入特异性糖尿病中。（3）颅内压增高：颅内压增高刺激血糖中枢，如颅外伤.颅内出血.脑膜炎等。（4）脱水引起的高血糖：如呕吐.腹泻和高热等也可使血糖轻度增高。 3.生理性低血糖见于长期饥饿和剧烈运动后。 4.病理性低血糖（特发性功能性低血糖最多见，依次是药源性.肝源性.胰岛素瘤等）。（1）胰岛β细胞增生或胰岛β细胞瘤等，使胰岛素分泌过多。（2）对抗胰岛素的激素分泌不足，如垂体前叶功能减退.肾上腺皮质功能减退和甲状腺功能减退而使相应的激素分泌减少。（3）严重肝病患者，由于肝脏存储糖原及糖异生等功能低下，肝脏不能有效地调节血糖。 注意事项 1.葡萄糖氧化酶对β-D葡萄糖高度特异，溶液中的葡萄糖约36%为α型，64%为β型。葡萄糖的完全氧化需要α型到β型的变旋反应。目前某些商品葡萄糖氧化酶试剂盒含有葡萄糖变旋酶，可加速这一反应，但在终点法中，延长孵育时间可达到完全自发变旋过程。新配制的葡萄糖标准液主要是α型，故须放置2h以上（最好过夜），待变旋平衡后方可应用。 2.葡萄糖氧化酶法可直接测定脑脊液葡萄糖含量，但不能直接测定尿液葡萄糖含量，这是因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高，可干扰过氧化物酶反应，造成结果假性偏低。 3.测定标本以草酸钾-氟化钠为抗凝剂的血浆较好。取草酸钾6g，氟化钠4g，加水溶解至100ml。吸取0.1ml到试管内，在80摄氏度以下烤干使用，可使2~3ml 血液在3~4d内不凝固并抑制糖分解。 4.本法用血量甚微，建议使用微量加样器进行加样。如果使用吸管加样，应直接
葡萄糖含量的测定——碘量法
实验九葡萄糖含量的测定——碘量法 一、实验目的 1、学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法原理，进一步掌握返滴定法技能。 2、进一步熟悉酸滴定管的操作，掌握有色溶液滴定时体积的正确读法。 二、实验原理 I2与NaOH作用可生成次碘酸钠(NaIO)，次碘酸钠可将葡萄糖(C6H12O6)分子中的醛基定量地氧化为羧基。未与葡萄糖作用的次碘酸钠在碱性溶液中歧化生成NaI和NaIO3，当酸化时NaIO3又恢复成I2析出，用Na2S2O3标准溶液滴定析出的I2，从而可计算出葡萄糖的含量。涉及到的反应如下： 1) I2与NaOH作用生成NaIO和NaI： I2 + 2OH- = IO- + I- + H2O 2) C6H12O6和NaIO定量作用： C6H12O6 + IO- = C6H12O7 + I- 总反应式为：I2 + C6H12O6 + 2OH- = C6H12O7 + 2I- + H2O 3) 未与葡萄糖作用的NaIO在碱性溶液中歧化成NaI和NaIO3： 3IO- = IO3- + 2I- 4) 在酸性条件下，NaIO3又恢复成I2析出： IO3- + 5I- + 6H+ = 3I2 + 3H2O 5) 用Na2S2O3滴定析出的I2 I2 + 2S2O32- = S4O62- + 2I- 因为1mol葡萄糖与1molI2作用，而1molIO-可产生1molI2从而可以测定出葡萄糖的含量。 三、仪器与试剂 分析天平、台秤、烧杯、酸式滴定管、碱式滴定管、容量瓶(250mL)、移液管(25mL)、锥形瓶(250mL)、碘量瓶(250mL) I2(s)(A.R.)、KI(s)(A.R.)、Na2S2O3(s)(A.R.)、Na2CO3(s)(A.R.)、K2Cr2O7(s)(A.R. ，于140℃电烘箱中干燥2h，贮于干燥器中备用)、KI(20%)、HCl(6mol·L－１)、淀粉溶液(0.5%)、NaOH(2mol·L－１)、葡萄糖试样(0.05%)。 四、实验步骤
(推荐)实验 血糖测定(葡萄糖氧化酶法)
实验血糖测定（葡萄糖氧化酶法） 【目的】 体外测定血清或血浆中葡萄糖含量。 【临床意义】 葡萄糖的准确测定对于诊断高血糖症是十分重要的。通常在查找这些病症的起因时，还将各种耐量试验和抑制试验与葡萄糖测定一同进行。葡萄糖含量增高见于：糖尿病、葡萄糖摄入过量、柯兴氏综合症、脑血管意外。葡萄糖含量减少见于：胰岛瘤、胰岛素过量、先天性碳水化合物代谢障碍。 【原理】 样本中的葡萄糖经葡萄糖氧化酶作用生成葡萄糖酸和过氧化氢，后者在过氧化物酶的作用下，将还原性4-氨基安替比林与酚偶联缩合成可被分光光度计测定的醌类化合物。 【器材】 紫外分光光度计，恒温水浴箱，移液器（枪），枪头，试管 【药品】 葡萄糖测定试剂盒，试剂盒主要成分与浓度： 【样本】 新鲜无溶血血清。
【步骤】 将10ml R1与90ml R2混合均匀，即为工作液。 空白管校准管样品管工作液 1.50 ml 1.50 ml 1.50 ml 蒸馏水0.01 ml ———— 校准液——0.01 ml —— 样品————0.01 ml 分别混合均匀，37℃水浴10～15分钟（避免太阳光直射），用波长505nm、比色杯光径1.0cm，用空白管调“零”点测定各管的吸光度（A）值。 【计算】 【参考值】 血清/血浆：3.89—6.11 mmol/L (70—110 mg/dl)。 此范围仅供参考，各实验室须建立本室的参考值范围。 【参考文献】 1．全国临床检验操作规程（第二版），主编：叶应妩，王敏三，1997，P616. 2．Trinder P. Ann Clin Biochem，1969，6: 24-27. 血糖测定实验所需器材： 1.紫外分光光度计（比色杯光径1.0cm）， 2.恒温水浴箱（能调温度的，37℃）， 3.移液器（枪）（规格1.0ml 6个，20μl 6个），枪头各100个 4.试管50支，6个试管架 5.烧杯100ml一个，50ml（或25ml）6个 6.记号笔6支
葡萄糖测定
葡萄糖测定 标准化操作程序（SOP）文件测定单位：故城县计划生育技术服务站 编写者：宿金涛 日期：2012年5月28日 一、方法学原理 在葡萄糖氧化酶的作用下，β-D-葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖酸。过氧化氢在过氧化物酶的存在下与苯酚、4-氨基安替比林氧化缩合成红色醌式染料。此染料在500nm处有最大吸收峰，其吸光度值与葡萄糖含量成正比。 GOD β-D-葡萄糖+ H2O + O2 ----------- H2O2 + D-葡萄糖酸 POD H2O2 + 4-氨基安替比林+ 苯酚---------- 醌亚胺（红色）+ H2O 二、试剂 深圳迈瑞规格：R1：4*40mL，R2：2*20mL，S：1*1.5mL 试剂文号：粤食药监械（准）字2011第2400475号 主要组成成分： 试剂1（R1）：磷酸盐缓冲液100mmol/L 抗坏血酸氧化酶4700U/L 葡萄糖氧化酶4000U/L 试剂2（R2）：磷酸盐缓冲液100mmol/L 过氧化物酶6700U/L 4--氨基安替比林0.7mmol/L 对羟基笨甲酸钠 1.3mmol/L 校准品： 葡萄糖溶液。校准品最终可溯源至参考方法GC-MS。 不同批号试剂盒各组分请勿混用。 三、仪器 迈瑞BS-390生化分析仪 四．标本采集与处理 1 、受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。注意有无应用影响测试项目的药物。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
试验八血糖的测定葡萄糖氧化酶法
实验十 血糖的测定 血液中的葡萄糖称血糖。正常人血糖浓度较恒定，维持在3．9mmol ／L ～6．1mmol ／L 之间。血糖浓度的相对恒定是机体进行正常生理活动的前提条件之一，有着双重实际意义：其一，维持稳定的能源供给，满足机体在各种生理状态下对能量的需求。其二，保证机体不因进食致血糖浓度过高，导致糖的丢失。 因此，血糖的测定是临床生化检验实验室的常规检测项目。血糖测定按其发展过程及反应原理的不同，大致分三类：氧化还原法 ，缩合法（主要有邻甲苯胺法），酶法（主要有己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法）。下边介绍两种方法供选择。 一、葡萄糖氧化酶法 【目的】 1. 了解葡萄糖氧化酶法测定血糖的原理，能进行血糖测定的操作。 2. 掌握血糖测定的临床意义。 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ，GOD) 能将葡萄糖氧化为葡萄糖酸和过氧化氢。后者在过氧化物酶 (peroxidase ，POD)作用下，分解为水和氧的同时将无色的4-氨基安替比林与酚氧化缩合生成红色的醌类化合物，即 Trinder 反应。其颜色的深浅在一定范围内与葡萄糖浓度成正比，在505nm 波长处测定吸光度，与标准管比较可计算出血糖的浓度。反应式如下： 2H 2O 2+4-氨基安替比林+酚 红色醌类化合物 POD 2H 2O 2H 2O 2 O 2葡萄糖+葡萄糖酸+ GOD + 【器材】 试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、分光光度计 【试剂】 1. 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.0） 称取无水磷酸氢二钠8.67g 及无水磷酸二氢钾5.3g 溶于800ml 蒸馏水中，用1mol/L 氢氧化钠（或1mol/L 盐酸）调节pH 至7.0，然后用蒸馏水稀释至1L 。 2. 酶试剂 称取过氧化物酶1200U ，葡萄糖氧化酶1200U ，4-氨基安替比林10mg ，叠氮钠100mg ，溶于上述磷酸盐缓冲液80ml 中，用1mol/L NaOH 调pH 至7.0，加磷酸缓冲液至100ml 。
葡萄糖含量的测定
？用还原糖含量—果糖含量=葡萄糖含量？（硕士论文：赵树堂李果实发育过程中糖_酸_Vc 及矿质元素含量变化.nh） 葡萄糖含量的测定： 1实验仪器：分光光度计，恒温水浴锅，电子天平，烘箱，刻度离心管，带塞试管，漏斗。2实验试剂：10mol/L的硫酸，酶制剂【10mg邻联茴香胺—HCl（注意有毒性），10mg辣根过氧化物酶和0.1ml葡萄糖氧化酶（1000U/ml，溶于0.1mol/L醋酸缓冲液,pH 5.5），加水至100ml】，200μg/ml 葡萄糖标准液【去无水葡萄糖（80℃烘至衡重）20mg，用80%乙醇配置成100ml，放入冰箱中保存，使用前1h取出回升至室温】。 3实验材料：植物样品 4实验步骤： （1）植物提取液的制备：在110℃烘箱烘15min，然后调制70℃过夜。干叶片磨碎后，秤取50mg样品倒入10ml刻度离心管内加入4ml 80%乙醇，至于80℃水浴中不断 搅拌40min ，离心，收集上清液，其残渣加2ml 80%乙醇重复提2次，合并上清 液。在上清液中加入10mg活性炭，80℃脱色30min，80%乙醇定容至10ml，过滤 后去滤液测定。 （2）绘制标准曲线：先将葡萄糖标准液用80%乙醇稀释成0、15、30、50、75、100、150、200μg/ml不同浓度的溶液。取25m m×200mm大试管8支，分别加入4ml酶 制剂，一起放在30℃水浴中，带管中酶液温度上升达到平衡，各加入2ml不同质 量浓度葡萄糖标准液，摇匀，保温5min（注意掌握时间），再各加入8ml 10mol/L 的硫酸停止反应，当温度于是问平衡后，测定460nm处OD值，以0浓度管调零。 测定OD值，绘制标准曲线。 （3）测定：以植物提取液代替葡萄糖标准液，按上述步骤进行葡萄糖含量的测定，读取OD值，从标准曲线得到提取液中的葡萄糖含量，然后在进行计算样品中的葡萄 糖含量。 注：10mol/L的硫酸制备 0.1mol/L醋酸缓冲液,pH 5.5的制备 制备液A：0.2mol/L醋酸（冰醋酸11.55ml稀释至1000ml） 制备液B：0.2mol/L醋酸钠（C2H3O2Na 16.4g或C2H3O2Na·3H2O 27.2g配成1000ml） 醋酸钠相对分子质量：82.03
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定
葡萄糖注射液中葡萄糖含量的测定 一、实验目的 1、学会间接碘量法测定葡萄糖含量的方法原理，进一步掌握返滴定法技能。 2、进一步熟悉酸滴定管的操作，掌握有色溶液滴定时体积的正确读法。 二、实验原理 I2与NaOH作用可生成次碘酸钠(NaIO)，次碘酸钠可将葡萄糖(C6H12O6)分子中的醛基定量地氧化为羧基。未与葡萄糖作用的次碘酸钠在碱性溶液中歧化生成NaI和NaIO3，当酸化时NaIO3又恢复成I2析出，用Na2S2O3标准溶液滴定析出的I2，从而可计算出葡萄糖的含量。涉及到的反应如下： 1) I2与NaOH作用生成NaIO和NaI： I2 + 2OH- = IO- + I- + H2O 2) C6H12O6和NaIO定量作用： C6H12O6 + IO- = C6H12O7 + I- 总反应式为：I2 + C6H12O6 + 2OH- = C6H12O7 + 2I- + H2O 3) 未与葡萄糖作用的NaIO在碱性溶液中歧化成NaI和NaIO3： 3IO- = IO3- + 2I-
4) 在酸性条件下，NaIO3又恢复成I2析出： IO3- + 5I- + 6H+ = 3I2 + 3H2O 5) 用Na2S2O3滴定析出的I2 I2 + 2S2O32- = S4O62- + 2I- 因为1mol葡萄糖与1molI2作用，而1molIO-可产生1molI2从而可以测定出葡萄糖的含量。 三、仪器与试剂 分析天平、台秤、烧杯、酸式滴定管、碱式滴定管、容量瓶(250mL)、移液管(25mL)、锥形瓶(250mL)、碘量瓶(250mL) I2(s)(A.R.)、KI(s)(A.R.)、Na2S2O3(s)(A.R.)、Na2CO3(s)(A.R.)、K2Cr2O7(s)(A.R. ，于140℃电烘箱中干燥2h，贮于干燥器中备用)、KI(20%)、HCl(6mol·L－１)、淀粉溶液(0.5%)、NaOH(2mol·L－１)、葡萄糖试样(0.05%)。 四、实验步骤 （一）葡萄糖含量的测定 移取25.00mL葡萄糖试液于碘量瓶中，从酸式滴定管中加入25.00mL I2标准溶液。一边摇动，一边缓慢加入2mol·L-1NaOH溶液，直至溶液呈浅黄色。将碘量瓶加塞放置10～15min后，加2mL 6mol·L-1HCl使成酸性，立即用Na2S2O3溶液滴定至溶液呈淡黄色时，加入2mL淀粉指示剂，继续滴定蓝色消失即为终点。平行测定三次，计算试样中葡萄糖的含量(以g·L-1表示)，要求相对平均偏差小于0.3%。
葡萄糖测定-葡萄糖氧化酶法
葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。 2 ．酶试剂称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。 3 ．酚溶液称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。 5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。2h 以后方可使用。 7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1 ．自动分析法按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。 【临床意义】 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。