基因工程实验
《基因工程》实验教学教案
《基因工程》实验教学教案一、实验教学目标1. 让学生了解基因工程的基本概念、原理和操作步骤。
2. 培养学生运用基因工程技术解决实际问题的能力。
3. 帮助学生掌握基因克隆、基因编辑等实验技能。
二、实验教学内容1. 基因克隆实验：让学生通过PCR扩增目的基因，并进行琼脂糖凝胶电泳分析。
2. 基因编辑实验：让学生利用CRISPR/Cas9系统对目标基因进行编辑，并通过PCR和琼脂糖凝胶电泳验证编辑效果。
3. 基因表达实验：让学生将目的基因插入到表达载体中，转化大肠杆菌，并通过IPTG诱导表达。
4. 抗原-抗体反应实验：让学生利用基因工程方法制备重组抗原，并进行抗原-抗体特异性反应检测。
5. 基因工程应用实例：让学生了解基因工程在生物制药、农业、环保等领域的应用。
三、实验教学方法1. 讲授法：讲解基因工程的基本原理、操作步骤和实验技巧。
2. 演示法：演示基因克隆、基因编辑等实验操作，让学生直观地了解实验过程。
3. 实践操作：让学生动手进行实验，培养实验操作能力和团队协作精神。
4. 讨论法：引导学生针对实验结果进行分析和讨论，提高解决问题的能力。
四、实验教学准备1. 教材和参考资料：准备《基因工程》等相关教材和参考资料，为学生提供理论支持。
2. 实验器材：准备PCR仪器、琼脂糖凝胶电泳设备、表达载体、大肠杆菌等实验所需的器材和试剂。
3. 实验指导：制定详细的实验步骤和操作指南，方便学生查阅。
五、实验教学评价1. 过程评价：评价学生在实验操作过程中的规范性和团队协作精神。
3. 应用评价：评价学生运用基因工程知识解决实际问题的能力。
4. 学生互评：鼓励学生互相评价，提高自我认知和沟通能力。
六、实验教学流程1. 实验前准备：讲解实验原理、目的和操作步骤，检查实验器材和试剂。
2. 实验操作：按照实验指导进行基因克隆、基因编辑等实验操作。
3. 实验结果分析：对实验结果进行分析和讨论，解释实验现象。
5. 实验总结：总结实验收获和不足，提出改进措施。
基因工程转化实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解基因工程转化实验的基本原理和方法。
2. 掌握基因工程转化实验的操作步骤和技巧。
3. 通过实验，验证基因转化效果，为后续研究提供基础数据。
二、实验原理基因工程转化实验是将目的基因导入受体细胞的过程。
根据受体细胞的不同，转化方法也有所区别。
本实验采用农杆菌介导转化法，将目的基因导入植物细胞。
三、实验材料1. 受体植物：小麦植株2. 转化质粒：含目的基因的质粒3. 农杆菌：具有转化能力的农杆菌菌株4. 实验试剂：氯化钙、CaCl2溶液、IPTG（异丙基-β-D-硫代半乳糖苷）、抗菌素等5. 实验仪器：超净工作台、无菌操作箱、移液器、离心机、培养箱、显微镜等四、实验步骤1. 农杆菌活化与扩大培养（1）将冻存的农杆菌菌株复苏，在含有抗菌素的LB培养基中扩大培养。
（2）将培养好的农杆菌转移到无菌条件下，用移液器吸取适量菌液，加入含有转化质粒的LB培养基中。
（3）将菌液在摇床上振荡培养过夜。
2. 农杆菌转化（1）将小麦叶片进行表面消毒，用无菌移液器吸取适量菌液，滴在叶片表面。
（2）将叶片放入无菌培养皿中，在黑暗条件下共培养3-5天。
3. 农杆菌侵染与再生（1）将共培养后的叶片转移到含有抗菌素的培养基上，进行再生培养。
（2）待再生植株长出后，进行筛选，去除未转化植株。
4. 转化植株PCR检测（1）提取转化植株的总DNA。
（2）设计目的基因的引物，进行PCR扩增。
（3）观察PCR产物，判断转化效果。
五、实验结果与分析1. 农杆菌活化与扩大培养实验中，农杆菌菌株在LB培养基中生长良好，菌液呈均匀浑浊状。
2. 农杆菌转化共培养后，小麦叶片出现明显的不定芽，表明农杆菌已成功侵染植物细胞。
3. 农杆菌侵染与再生再生培养过程中，部分植株长出不定芽，表明农杆菌已成功转化植物细胞。
4. 转化植株PCR检测PCR检测结果显示，部分转化植株扩增出目的基因片段，表明基因转化成功。
六、实验结论本实验采用农杆菌介导转化法，成功将目的基因导入小麦植株。
基因工程实验-biochemlab
实验二 基因组总ＤＮＡ提取
一、实验目的
掌握酚氯仿法提取ＤＮＡ的原理和操作。
生物的大部分或几乎全部ＤＮＡ都集中在细胞核或类核中。DNA在体内通常都与蛋白质结合，蛋白质对DNA制品的污染常影响到以后的DNA操作过程，因此需把蛋白质除去，一般采用酚氯仿抽提法。苯酚、氯仿对蛋白质有极强的变性作用，而对DNA无影响。经苯酚、氯仿抽提后，蛋白质变性而被离心沉降到酚相与水相的界面，DNA则留在水相，少量的或与DNA紧密结合的蛋白质可用蛋白酶予以去除。DNA制品中少量的RNA无影响，必要时可加入不含DNase的RNase去除RNA污染。
生物化学资料网
五、思考题
生物化学资料网
如果实验对照组本不该长菌落的平板上长出了一些菌落，你将如何解释这种想象？
01
实验目的
02
掌握重组质粒的转化方法
03
生物化学资料网
实验六 重组质粒的转化
转化是将外源DNA 分子引入受体细胞，使之获得新的遗传性状的一种手段。
化学转化法 利用Cacl2处理感受态受体细胞，然后通过热休克处理，即置于42℃高温热激90s，热休克后，是受体菌在不含抗生素的培养液中生长至少半小时以上，使其表达足够蛋白质，以便能在含抗生素的平板上生长菌落。
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ＤＮＡ重组、转化 ＭＨＣ与pMD18-T连接 DH5a感受态细胞制备
转化、平板涂布、培养
筛选与鉴定 抗生素抗性筛选 挑单菌落培养 提取质粒 质粒酶切、电泳检测
2.微量移液器的使用
将微量移液器按钮轻轻压在第一挡 垂直握持微量移液器，使吸头浸入页面下几毫米，千万别将吸头直接插到液体底部 缓慢、平稳地松开控制按钮，吸上样品液。否则液体进入吸头太快，导致液体倒吸入移液枪内部，或吸入体积减少。 等1s后将吸头提高液面，并使吸头在容器壁擦过 平稳把按钮压到第一停点，在把按钮压到第二停点以排出剩余液体、 提起微量移液器，使吸头在容器壁擦过 然后按吸头弹射器除去吸头
对基因工程实验的认识
对基因工程实验的认识一、基因工程实验的概念基因工程实验是指通过人为干预生物的基因组，改变其遗传信息和表达方式，从而实现对生物性状的调控和改良的一种技术手段。
二、基因工程实验的发展历程1. 1972年，保罗·伯格率先开展了基因重组实验。
2. 1975年，斯坦利·科恩和赫伯特·博耶尔成功构建了第一个重组DNA 分子。
3. 1978年，美国成功制备出第一只转基因小鼠。
4. 1983年，首个人类蛋白质被大肠杆菌表达出来。
5. 1990年代初期，克隆技术得到广泛应用。
三、基因工程实验的应用领域1. 农业领域：改良作物品种、提高农产品产量和品质。
2. 医学领域：研发新药、治疗遗传性疾病、癌症等。
3. 工业领域：生产高附加值化学品、酶类和蛋白质等。
四、基因工程实验的优点1. 可以精准地定位到目标位点进行遗传改良。
2. 可以大幅度提高生物的产量和品质。
3. 可以研发新药、治疗遗传性疾病等。
五、基因工程实验的风险1. 可能引发基因突变，导致生物不可预测的变异或异常。
2. 可能导致生态环境受到污染，从而影响生态平衡。
3. 可能导致人类健康受到威胁，如过敏反应、免疫系统失调等。
六、基因工程实验的伦理问题1. 是否应该进行人类基因工程实验？2. 是否应该将转基因产品投入市场？3. 如何保障公众对转基因产品的知情权和选择权？七、结语尽管基因工程实验有着广泛的应用前景，但其风险和伦理问题也需要引起我们的高度关注。
在推进基因工程实验的同时，我们也需要认真思考如何平衡科技发展和社会责任，确保科技进步与人类福祉之间的平衡。
基因工程试验设计
基因工程试验设计基因工程是指通过基因操作技术对生物体的遗传信息进行改造和调控的一种技术手段。
在基因工程中，通过对目标生物体的基因进行剪接、插入、删除等操作，可以实现对生物体性状的改变和遗传特征的调控。
基因工程技术在医学、农业、环境保护等领域具有广阔的应用前景。
1.实验目的：明确实验的目的和预期结果，例如改变生物体的特定性状、提高生物体的产量或抗病性等。
2.选择目标生物体：根据实验目的选择适合的目标生物体，可以是细菌、真菌、植物、动物等。
3.确定基因操作的方式：基因工程技术有多种操作方式，如基因剪接、基因插入、基因删除等。
根据实验目的和目标生物体的特点选择合适的操作方式。
5.确定基因传递方式：确定基因将如何传递到目标生物体中，可以采用转染、转化、转基因等方式。
6.制备实验材料：根据实验设计制备所需的实验材料，包括目标生物体的培养基、基因操作所需的酶、载体等。
7.设计对照组和实验组：根据实验目的设计对照组和实验组，对照组不进行基因操作，实验组进行基因操作。
8.确定实验条件和时间：确定实验的条件和时间，包括温度、湿度、光照等条件，以及实验的持续时间。
9.设计实验步骤：根据实验目的和操作方式设计实验步骤，包括基因操作、培养、鉴定等。
10.实验数据的分析和解读：根据实验结果进行数据分析和解读，判断实验是否成功，预测实验结果对生物体的影响。
基因工程试验设计需要综合考虑实验的科学性、技术可行性和安全性等因素。
在设计过程中，需要进行充分的文献调研和数据分析，确保实验的有效性和可靠性。
同时，也需要遵循伦理规范和相关法律法规，保证生物安全和环境保护。
总之，基因工程试验设计是对基因工程技术进行验证和探索的重要过程。
通过合理的设计和操作，可以实现对生物体的遗传信息进行改造和调控，为生物科学研究和实践应用提供重要支持。
基因工程实验流程
基因工程实验流程1.选择目标基因：首先，确定要研究或改造的目标基因。
这个基因可以是来自任何生物的DNA序列，包括原核生物和真核生物，甚至可以是合成的DNA片段。
2.基因分离：将包含目标基因的DNA从生物体中分离出来。
这可以通过提取目标生物体的基因组DNA，然后使用特定的酶切酶将目标基因从DNA中剪切出来。
3.DNA克隆：将目标基因插入到合适的载体中，形成重组DNA分子。
常用的载体包括质粒、病毒或人工染色体。
重组DNA分子可以通过转化、感染或转染等方法导入到宿主细胞中。
4.转化宿主细胞：将重组的DNA分子导入到适当的宿主细胞中。
这可以通过热冲击、电穿孔、化学方法或用载体病毒感染的方式实现。
在这一步中，多个宿主细胞可能被转化，以增加目标基因的表达量。
5.分子鉴定：通过PCR反应、限制性酶切、DNA测序等方法，对导入宿主细胞的重组DNA分子进行鉴定和验证。
这可以确认目标基因是否被正确克隆和定位在宿主细胞的基因组中。
6.蛋白质表达：通过转录和翻译，使目标基因在宿主细胞中转录成mRNA，然后翻译成蛋白质。
这个过程可以通过合适的启动子和转录因子来调控。
7.蛋白质纯化：通过细胞裂解和各种分离技术，获得纯度较高的目标蛋白质。
这包括离心、超滤、电泳等技术，可以去除其他细胞组分和杂质。
8.蛋白质功能研究：对纯化的目标蛋白质进行功能研究，了解其生物学功能和相互作用。
这可以通过基因敲除、突变、结构分析、生物活性检测等方法进行。
9.结果分析和确认：对实验结果进行数据分析和统计，确保实验结果的可靠性和重复性。
这包括基因表达水平、蛋白质功能、相互作用准确性和可靠性的验证。
10.应用和进一步研究：根据实验结果，根据需要对目标基因进行进一步改造或利用。
这可能涉及到设计新的实验和技术，以满足具体的应用需求。
总结：基因工程实验流程是一个复杂的过程，需要多个步骤和技术的相互协作。
这个过程涉及到基因选择、分离、克隆、转化、鉴定、蛋白质表达和纯化等多个关键步骤。
基因工程实验的一般步骤
基因工程实验的一般步骤嘿，朋友们！今天来给大家讲讲基因工程实验的那些事儿。
咱先来说说目的的确定吧。
就好比你要去一个地方，得先想好为啥要去呀，是去看风景还是找宝藏呢。
做基因工程实验也一样，你得清楚自己到底要干啥，是想让某种生物有个特别的性状，还是解决个啥难题。
这可重要得很呐，不然你稀里糊涂地开始，那不就像没头苍蝇一样乱撞啦！然后呢，就是获取基因啦。
这就像去寻宝，得找到那个宝贝基因才行。
可以从各种生物材料里找，就像在一个大宝藏库里翻呀翻。
有时候找起来还真不容易呢，就跟大海捞针似的，但咱可不能放弃呀！找到基因后，就得把它弄出来呀。
这就好比把宝贝从宝藏库里拿出来，得小心翼翼的，别给弄坏咯。
这可是个技术活，得用合适的工具和方法。
接着，得有个载体来装这个基因呀。
就像给宝贝找个合适的盒子装起来，好带着它到处走。
这个载体就像是基因的小座驾，带着基因去它该去的地方。
然后把基因装进载体里，让它们组合在一起。
这就像把宝贝放进盒子里，得放得稳稳当当的。
接下来就是把这个带着基因的载体送进受体细胞啦。
这就好比把装着宝贝的盒子送到目的地。
受体细胞就像是个大仓库，基因进去后就可以发挥作用啦。
然后就等着看效果啦！看看基因是不是真的在受体细胞里好好工作啦，是不是达到了我们想要的结果。
这就跟等开奖似的，紧张又期待呢！你说这基因工程实验像不像搭积木呀，一块一块地搭起来，最后搭出个我们想要的形状。
在这个过程中，每一步都得仔细认真，一个小差错可能就会前功尽弃呢。
做基因工程实验可不能马虎，得有耐心，有细心，还得有创新精神。
就像盖房子，一砖一瓦都得垒好，才能盖出坚固漂亮的房子。
咱做实验也是一样，每一个步骤都得做好，才能得到我们想要的成果呀。
所以啊，朋友们，基因工程实验可不简单，但也超有趣的！只要我们认真去做，就一定能在这个神奇的领域里发现好多好多的惊喜呢！。
基因工程实验报告
基因工程实验报告引言基因工程是现代生物技术的一个重要分支，通过对生物体基因的修改和重组，可以创造出具有特定功能的生物体。
本次实验旨在探究基因工程在农业、医学等领域的应用，以及可能带来的潜在风险和争议。
实验方法1. 筛选目标基因：首先，我们在实验中选择了对叶绿体功能有重要影响的一个基因作为目标基因。
2. 基因克隆：通过PCR技术，将目标基因从细菌DNA中放大，然后将其插入载体DNA中。
3. 转化目标生物体：将重组的载体DNA转入植物叶片细胞中，借助几丁质体、热激冲击等方法促使基因转化成功。
4. 筛选阳性转化率：通过筛选培养基中的抗性选择制剂，筛选出转化成功的阳性细胞。
5. 验证目标基因的表达：通过PCR扩增和基因芯片技术验证目标基因在转化植物中的表达情况。
实验结果1. 实验结果显示：我们成功将目标基因插入到植物叶片细胞的染色体中，并且获得了一定比率的阳性转化植株。
2. 鉴定转化植株：对转化植株进行证实鉴定，确保目标基因已经整合到植株基因组中，且稳定表达。
3. 表达验证：通过PCR扩增和基因芯片分析，确定目标基因在转化植物中得到了表达，并且表达量较高。
4. 性状鉴定：对转化植物进行生长发育、形态结构、生理生化等方面的综合性状鉴定，结果显示转化植物与野生型无显著差异。
讨论基因工程技术的应用：本次实验展示了基因工程技术在农业生产中的应用前景，通过将具有耐逆性、抗病虫害等功能基因导入植物，可以提高植物的产量和抗逆性。
潜在风险和争议：但是，基因工程也伴随着一系列争议和风险，如转基因植物可能对环境造成影响，转基因食品可能对人体健康产生潜在影响，因此需要严格的监管和评估。
结论通过本次实验，我们成功地验证了基因工程技术的可行性，展示了其在农业和生命科学领域的广阔应用前景。
然而，我们也要看到基因工程技术所带来的潜在风险和争议，需要谨慎评估和监管。
基因工程是一把双刃剑，只有正确使用才能实现其最大的利益。
愿基因工程技术为人类带来更多福祉。
《基因工程》实验教学教案
《基因工程》实验教学教案一、实验背景基因工程是一种现代生物技术，通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。
本实验旨在让学生了解基因工程的基本原理和操作步骤，掌握PCR扩增、DNA连接、转化等关键技术，并应用于实际问题的解决。
二、实验目标1. 理解基因工程的基本原理及操作步骤。
2. 掌握PCR扩增、DNA连接、转化等关键技术。
3. 学会分析实验结果，并能够对实验问题进行解决。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：DNA模板、引物、dNTPs、Taq酶、DNA连接酶、感受态细胞等。
2. 仪器设备：PCR仪器、凝胶成像系统、电泳仪、离心机、DNA提取仪、显微镜等。
四、实验内容与步骤1. PCR扩增目的基因：a. 设计引物，并进行合成。
b. 配置PCR反应体系，包括DNA模板、引物、dNTPs、Taq酶等。
c. 进行PCR扩增，观察扩增曲线。
d. 扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳分析。
2. DNA连接：a. 准备连接反应体系，包括目的基因、载体、DNA连接酶等。
b. 将目的基因与载体连接，并进行转化。
c. 转化感受态细胞，筛选阳性克隆。
3. 转化与筛选：a. 配置转化反应体系，包括连接产物、感受态细胞等。
b. 进行转化，观察转化效率。
c. 筛选阳性克隆，并进行鉴定。
4. 实验结果分析：a. 分析PCR扩增产物，判断扩增效果。
b. 分析转化子，判断连接效果。
五、实验注意事项1. 实验操作过程中要严格遵循无菌操作原则。
2. 实验材料要进行质控，确保实验的准确性。
3. 实验过程中要记录详细的数据和观察结果，便于分析。
4. 实验结果要进行多次重复，以验证实验结果的可靠性。
六、实验拓展与思考1. 讨论基因工程在生物制药、农业、环保等领域的应用。
2. 分析基因工程所面临的伦理、法律和社会问题。
3. 探索基因工程技术在未来的发展趋势。
七、实验报告要求1. 报告内容：实验目的、实验原理、实验材料与仪器、实验步骤、实验结果及分析、实验拓展与思考等。
基因工程实验
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五、实验注意事项
1 用微波煮胶时，胶液的量不应超过三角瓶容量的 1/3，否则易溢出
2 煮好的胶应冷却至50℃左右时再倒，以免制胶板变 形，并减少漏胶的机会
加入等体积的氯仿， 12000rpm，离心5分钟，取上清
加入1/10体积的3MNaAc，加2倍体积的预冷的无水乙 醇，混匀。
置于-70℃冰箱约10min以上或者-20℃冰箱30min至 数个小时
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12000rpm离心15分钟（4℃），倒掉酒精，离心几秒，
用移液枪尽可能除去酒精
用0.5ml70 %酒精洗DNA沉淀一次，离心2分钟，倒掉 酒精
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当加入中性缓冲液调和时，变性的质粒 DNA又恢复到原来的构型，而染色体DNA 不能复性，它们之间交联形成不溶性网状 结构，并与细胞碎片、蛋白质、SDS等结 合沉淀下来。
通过离心沉淀，细胞碎片、染色体DNA 及大部分蛋白质等可被除去，而质粒DNA 及小分子量的RNA则留在上清液中。混杂 的RNA可用RNaseA消除。再用酚／氯仿 处理，可除残留蛋白质
真核生物的基因组DNA为双螺旋结构，在在碱性溶 液中，双链DNA氢键断裂，双螺旋结构遭破坏而发生 变形，而基因组DNA分子量相对较大，在碱性PH条 件下其线性的大分子量基因组DNA不能复性，而形成 缠连的网状结构与蛋白质等共沉淀。
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2 异丙醇和无水乙醇对核酸沉淀的优缺点 答：异丙醇和乙醇都能与与任意比例的水相混合。异 丙醇比较疏水，能很更好地沉淀核酸，乙醇可以去 盐，它比异丙醇更亲水，所以能去掉一些盐离子。 异丙醇沉淀量多，但杂质也多，增加了后续实 验风险。其优点为：所需容积小且速度快，适用于 浓度低，而体积大的DNA样品的沉淀。一般不需要 在低温条件下长时间放置。缺点为：易使盐类（如 NaCl、蔗糖）与DNA共沉淀；在DNA沉淀中异丙 醇难以挥发除去 乙醇是沉淀DNA乙醇是首选的有机溶剂，对盐 类沉淀少，DNA沉淀中所含的衡量乙醇易蒸发去处， 不影响以后的实验。在适当的盐浓度下，2倍样品 容积的95％乙醇可有效沉淀DNA。其缺点是总体积 较大。需在-20放置很长时间，30分钟-1小时，同 时DNA微溶于乙醇，使用乙醇沉淀会使部分DNA溶 解损失
基因工程实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握基因工程的基本原理和操作技术；2. 熟悉基因克隆、表达、检测等实验操作；3. 培养实验操作技能和科学思维能力。
二、实验原理基因工程是利用分子生物学和生物化学原理，通过人工手段对生物的遗传物质进行改造，以达到改变生物特性、提高生物产量、生产新生物制品等目的的技术。
实验中主要涉及以下原理：1. 限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease）：能够识别特定的核苷酸序列，并在该序列的特定位置切割DNA链；2. DNA连接酶（DNA ligase）：能够将两个DNA片段连接起来；3. 转化：将外源DNA片段导入受体细胞；4. 转录和翻译：将目的基因转录成mRNA，再翻译成蛋白质。
三、实验材料1. 质粒载体：pET-28a、pUC19等；2. 限制性核酸内切酶：EcoRI、HindIII等；3. DNA连接酶：T4 DNA连接酶；4. 转化试剂：钙离子、转染试剂等；5. 实验试剂：Tris-HCl缓冲液、NaCl、KCl、MgCl2、DNA模板、引物、dNTPs、PCR试剂等；6. 实验仪器：PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统、离心机、移液器、超净工作台等。
四、实验步骤1. 设计实验方案：根据实验目的，设计实验步骤，包括目的基因的克隆、表达、检测等。
2. DNA提取：采用CTAB法提取质粒DNA。
3. 限制性核酸内切酶酶切：将质粒DNA和目的基因片段分别进行EcoRI、HindIII酶切，酶切产物进行电泳鉴定。
4. DNA连接：将酶切后的质粒DNA和目的基因片段进行连接，连接产物进行电泳鉴定。
5. 转化：将连接产物转化到大肠杆菌感受态细胞中，筛选阳性克隆。
6. 阳性克隆的鉴定：通过PCR、测序等方法对阳性克隆进行鉴定。
7. 重组质粒的提取：提取重组质粒，进行电泳鉴定。
8. 重组质粒的表达：将重组质粒转化到大肠杆菌表达系统中，进行诱导表达。
9. 目的蛋白的纯化：采用离子交换层析、亲和层析等方法对目的蛋白进行纯化。
《基因工程》实验教学教案
《基因工程》实验教学教案一、实验背景基因工程是一门应用生物学的分支，通过对基因的操作和重组，实现对生物性状的改良和功能的研究。
本实验教学旨在让学生了解基因工程的基本原理，掌握基因克隆、表达和检测的方法，培养学生动手实践能力和创新思维。
二、实验目标1. 了解基因工程的基本原理及实验步骤；2. 掌握PCR扩增、DNA提取、酶切、连接、转化等实验技术；3. 学会分析实验结果，提高学生解决实际问题的能力；4. 培养学生团队合作精神和创新思维。
三、实验内容1. 基因克隆：利用PCR扩增目的基因，并进行酶切、连接，将目的基因插入到载体中；2. 基因转化：将重组载体导入受体细胞，筛选转化成功的细胞；3. 基因表达：对转化成功的细胞进行诱导表达，检测目的蛋白的表达情况；4. 实验结果分析：分析实验数据，探讨实验过程中可能存在的问题，并提出改进措施；四、实验材料与仪器1. 材料：大肠杆菌、质粒、PCR试剂、酶切酶、连接酶等；2. 仪器：PCR仪器、电泳仪、离心机、恒温培养箱、显微镜等。
五、实验步骤1. 实验前的准备工作：了解实验原理，阅读相关文献，准备实验材料和仪器；2. 基因克隆：设计引物，进行PCR扩增，酶切目的基因和载体，连接目的基因与载体，转化大肠杆菌；3. 基因转化：将重组载体导入受体细胞，筛选转化成功的细胞；4. 基因表达：对转化成功的细胞进行诱导表达，检测目的蛋白的表达情况；5. 实验结果分析：分析实验数据，探讨实验过程中可能存在的问题，并提出改进措施；注意事项：1. 严格遵循实验步骤和操作规范，确保实验安全；2. 实验过程中遇到问题，及时与教师沟通，寻求帮助；3. 注重团队合作，共同完成实验任务。
六、实验教学安排1. 理论讲解：2课时2. 实验操作：4课时3. 实验结果分析与讨论：2课时七、实验评价1. 实验操作的正确性和熟练程度；2. 实验结果的准确性及分析的深度；4. 团队合作与沟通能力的展现。
基因工程设计实验方案
基因工程设计实验方案摘要：基因工程是一种能够改变生物体遗传信息的技术，利用基因工程技术可以对生物体进行基因改造，以期望获取新的性质或功能。
本实验旨在利用基因工程技术对细菌进行基因改造，使其产生一种特定的推动力物质，以期望将其应用于工业生产或环境修复等领域。
实验过程分为以下步骤：1）设计目标基因序列；2）构建表达载体；3）转染目标细菌；4）检测目标基因的表达情况；5）鉴定生产的推动力物质。
通过以上实验步骤，可以实现基因工程技术在实际应用中的有效性和可行性，为生物技术领域的发展提供实践基础。
一、实验目的1. 利用基因工程技术对细菌进行基因改造，使其具有产生一种特定的推动力物质的能力；2. 验证基因改造后细菌是否能够表达目标基因，并产生需要的推动力物质；3. 探讨基因工程技术在工业生产或环境修复等领域的应用前景。
二、实验材料1. E. coli DH5α细菌2. LB培养基3. PCR试剂盒4. DNA琼脂糖凝胶5. DNA酶6. 质粒抽提试剂盒7. DNA连接试剂盒8. 基因组DNA提取试剂盒9. 干冰10. 离心管11. 热平台12. 琼脂糖凝胶电泳仪三、实验步骤1. 设计目标基因序列目标基因序列为一种推动力物质合成酶基因，可以通过生物数据库或文献检索获取。
根据目标基因序列，设计引物进行PCR扩增。
2. 构建表达载体将目标基因的PCR产物与表达载体连接，构建重组质粒。
通过琼脂糖凝胶电泳和DNA连接试剂盒进行质粒构建的验证。
3. 转染目标细菌将构建好的表达载体导入E. coli DH5α细菌中，利用热激转化技术进行转染。
4. 检测目标基因的表达情况通过PCR和实时荧光定量PCR技术，检测转染细菌中目标基因的表达情况。
5. 鉴定生产的推动力物质利用生化方法，检测生长在含有目标基因的E. coli DH5α细菌培养基中是否产生了需要的推动力物质。
四、实验步骤详解1. 设计目标基因序列目标基因是一种合成推动力物质的酶基因，可以通过生物数据库或文献检索获取。
基因工程实验方案实验
基因工程实验方案实验一、实验目的本实验旨在利用基因工程技术对大肠杆菌进行基因改造，使其能够表达外源蛋白。
具体来说，我们将利用质粒载体将感兴趣的外源基因导入大肠杆菌，并通过PCR、酶切、连接、转染等技术，构建表达载体，使其能够在大肠杆菌中表达外源蛋白。
通过本实验，我们希望能够探究基因工程技术在微生物工程中的应用，并为后续的基因改造研究提供实验基础。
二、实验材料1. 大肠杆菌菌种2. 质粒载体3. PCR试剂盒4. 酶切试剂盒5. 连接试剂盒6. DNA电泳仪7. 热循环仪8. 紫外可见分光光度计9. 转染试剂三、实验步骤1. 质粒载体提取首先，从实验室常用菌株中提取质粒载体。
我们选择一株质粒带有多克隆位点的大肠杆菌附着菌株，通过菌株复苏、培养、质粒提取等步骤，从中提取目标质粒载体。
2. PCR扩增外源基因根据我们感兴趣的外源基因序列，设计相应的引物，利用PCR技术扩增目标基因。
在PCR反应过程中，我们需要控制PCR反应的条件和时间，确保外源基因能够被充分扩增。
3. 酶切及连接将目标基因和质粒载体分别进行酶切处理，然后进行连接。
酶切及连接过程中需要保证实验操作无菌、操作准确，以确保目标基因能够成功插入质粒载体中。
4. 构建表达载体通过连接实验，成功将外源基因插入质粒载体中，构建表达载体。
之后，通过DNA电泳、酶切鉴定等技术手段，对构建的表达载体进行验证和鉴定。
5. 大肠杆菌转染将构建的表达载体转染至大肠杆菌，使其内源化。
转染过程中需要严格控制转染条件，保证外源基因能够成功表达。
6. 蛋白表达检测经过转染后，我们将进行蛋白表达检测。
通过蛋白印迹、Western blot、质谱等技术手段，对外源蛋白的表达情况进行检测和分析。
7. 结果分析最后，对实验结果进行分析，包括目标基因的扩增情况、质粒构建情况、大肠杆菌转染情况以及蛋白表达情况等，总结实验结果。
四、实验注意事项1. 实验操作需严格遵守无菌操作规范，确保操作台面、设备、试剂均处于无菌状态。
基因工程实验报告的实验步骤
基因工程实验报告的实验步骤引言基因工程是一种通过改变生物体遗传物质的工艺来改变其性状的技术。
基因工程在医药、农业和环境保护等领域有广泛的应用。
本实验旨在通过简单的基因工程实验，介绍基因工程的基本原理和实验步骤。
材料与方法1.实验材料：-选择性培养基：含有特定抗生素、激素或其它附加物质的培养基，以选择或鉴别特定的细胞。
-质粒：小的DNA分子，通常用来将外源基因导入宿主细胞。
-酶：用于限制性内切酶切割DNA。
-细胞培养物：用于细胞培养和基因转染。
-DNA提取试剂盒：用于提取DNA。
-PCR试剂盒：用于DNA扩增。
-DNA凝胶电泳仪：用于分离DNA。
2.实验步骤：（1）提取DNAa.收集样本，如细菌培养物或植物叶片。
将样本细胞裂解并使用DNA提取试剂盒提取DNA。
b.检测DNA浓度和质量，并分装为合适的体积备用。
（2）DNA限制性酶切割a.根据研究目的选择正确的限制性酶。
将DNA与限制性酶一同加入反应管中，按照供应商说明的条件进行酶切反应。
b.将反应产物进行电泳分离，观察并记录DNA切割情况。
（3）DNA连接a.选择合适的酶切产物进行连接实验。
将DNA和相应酶与连接试剂进行反应，在恰当的温度下进行连接反应。
b.将反应产物进行电泳分离，观察并记录连接后的DNA条带。
（4）DNA扩增a.根据连接后的DNA序列设计引物，在PCR试剂盒中将DNA进行扩增反应。
b.将PCR反应产物进行电泳分离，观察并记录扩增结果。
（5）基因转染a.准备转染细胞，并将质粒导入细胞。
按照转染试剂盒说明进行操作。
b.观察转染细胞的表型变化，并进行相关分析。
结果与讨论在本实验中，我们成功完成了DNA提取、限制性酶切割、DNA连接、DNA扩增和基因转染的操作。
通过电泳分离，我们观察到了DNA切割、连接和扩增的结果。
此外，转染细胞的表型变化也支持基因导入的成功。
实验结论本实验展示了基因工程的基本步骤，并介绍了DNA提取、限制性酶切割、DNA连接、DNA扩增和基因转染等关键技术。
基因工程的实验技术方案
基因工程的实验技术方案基因工程是一种将基因改变和转移到另一个生物体中的技术，它广泛应用于医学、农业和工业等领域。
基因工程技术的发展使得人们可以对生物体进行精准的基因改造，以实现各种目的。
下面将介绍一种基因工程实验的技术方案，包括实验目的、材料与方法、实验步骤、结果与分析等内容。
实验目的本实验的目的是利用基因工程技术，将外源基因转移到靶细胞中，并观察外源基因在靶细胞中的表达情况。
通过本实验的设计与实施，将考察基因工程技术在基因转移与表达方面的应用效果，并为进一步的研究与应用提供实验基础。
材料与方法1. 材料- 靶细胞：选择目标细胞，如细菌、酵母、哺乳动物细胞等。
- 载体DNA：质粒或病毒载体，用于携带外源基因。
- 外源基因：感兴趣的基因序列。
- 转化试剂：如钙磷酸钠、聚乙烯亚胺等。
- 培养基与培养设备：提供细胞生长所需的养分、温度和湿度等条件。
2. 方法- 基因克隆：将外源基因克隆到适当的载体DNA中。
- 载体构建：将所得的重组载体构建好，确保外源基因的稳定性和表达性。
- 细胞培养：培养靶细胞，确保细胞状态良好。
- 转化：利用转化试剂将构建好的载体DNA与外源基因转移到靶细胞中。
- 筛选：用适当的筛选方法筛选转化后成功表达外源基因的细胞。
实验步骤1. 基因克隆首先，从适当的来源中提取感兴趣的基因序列，然后通过PCR等方法将基因扩增。
接着，将扩增的基因与载体DNA连接，构建重组载体，并进行鉴定和纯化。
2. 载体构建将构建好的重组载体经过鉴定，确保外源基因插入正确，并且载体的完整性与稳定性能满足后续的转化与表达需求。
3. 细胞培养准备好靶细胞，并进行细胞培养，确保细胞在培养基中状态良好。
4. 转化将构建好的重组载体与外源基因与转化试剂一起处理靶细胞，促使外源基因转移到细胞内。
5. 筛选用适当的筛选试剂或方法，对转化后的细胞进行筛选，筛选出成功表达外源基因的细胞。
结果与分析通过上述实验步骤，我们可以获得成功表达外源基因的细胞。
基因工程实验项目化教程
基因工程实验项目化教程1. 前言：基因工程的奇妙世界嘿，大家好！今天我们要聊聊一个听起来有点复杂，但其实特别酷的东西——基因工程。
可能你会想，基因是什么鬼，工程又是什么？别担心，咱们就像聊家常一样，慢慢来！基因就像是咱们身体里的“小蓝图”，它决定了你长得像谁、爱吃什么，还有那些小细节，比如你是不是容易过敏。
基因工程呢，就是科学家们拿着这些“小蓝图”，做一些“改造”的工作，让它们更完美、更健康。
想象一下，你家的花盆里种了一朵娇艳的花，但它总是容易被虫子咬。
这个时候，基因工程就像是一位优秀的园丁，帮你把花的基因改造得更强壮，虫子都不敢靠近了。
这是不是有点神奇？所以，今天我们就来一起看看，怎么把这个“神奇”的过程变得简单易懂，甚至还能动手实践哦！2. 基因工程的基本概念2.1 什么是基因工程？说白了，基因工程就是把生物的基因进行“剪辑”和“粘贴”，就像在电脑上编辑文档一样。
科学家们可以通过一些方法，像是基因剪刀CRISPR，把特定的基因剪掉或者替换掉，从而改变生物的特性。
这样一来，原本不耐寒的植物，经过“改造”后就能在寒冷的环境中顽强生存，简直是“生存的勇士”！2.2 基因工程的用途基因工程的用途可真是多得数不胜数。
比如说，农业上可以培育出抗病虫害的作物，减少农药的使用；医疗上可以制造出针对特定疾病的药物，甚至有些疾病可以通过基因治疗来治愈。
想想看，如果你有一个罕见的遗传病，通过基因治疗能让你恢复健康，那简直就是“重获新生”啊！这就是基因工程的魔力。
3. 基因工程的实验流程3.1 准备工作那么，咱们如何开展一个基因工程实验呢？首先，你得准备一些基本的设备和材料。
这就像是做饭前需要把锅碗瓢盆都准备好。
你需要一些细胞样本，比如植物细胞或者动物细胞；一些试剂，比如酶和载体；还有像PCR仪这样的小家伙，帮助你“复制”基因。
记得在实验室里一定要注意安全，穿上实验服，别让你的牛仔裤沾上那些试剂哦！3.2 实验步骤接下来，我们就进入“动手”环节啦！第一步，提取基因。
基因工程实验流程
基因工程实验流程基因工程是一种通过改变生物体的遗传物质（DNA）来改变其性状的技术。
基因工程实验通常包括以下步骤：1.确定研究目标：在进行任何基因工程实验之前，首先确定研究目标。
这可能涉及到改变特定基因的表达水平、插入新的基因、修改现有基因等。
2.选择宿主生物体：选择适合进行基因工程实验的宿主生物体。
常用的宿主包括细菌、酵母、植物和动物细胞。
3.分离目标基因：从源生物中分离出含有目标基因的DNA。
这可以通过多种方法实现，如PCR（聚合酶链式反应）或基因文库筛选。
4.构建基因载体：将目标基因插入到一个适当的载体中，如质粒或病毒。
载体在宿主生物体中用于传递目标基因。
5.转化宿主生物体：将经过构建的基因载体导入宿主生物体中。
这可以通过多种方法实现，如细胞转化、植物转化或动物胚胎注射。
6.筛选和鉴定转化体：经过一定时间培养后，使用合适的筛选方法选择和鉴定转化体。
筛选方法可能包括在选择培养基中添加抗生素来筛选携带特定基因的细胞。
7. 验证目标基因的表达：使用分子生物学技术，如PCR、南方杂交、Northern杂交、Western印迹等方法来验证目标基因的表达。
8.分析和评估改变：对转化体进行进一步的分析和评估，以确定目标基因的功能和影响。
这可以通过表型分析、蛋白质组学、代谢组学等方法实现。
9.优化和改进：根据实验结果，进一步优化和改进基因工程实验的步骤和条件。
10.伦理和安全考虑：在进行基因工程实验之前，必须遵守伦理和安全准则，确保实验过程和产生的转化体对人类和环境没有负面影响。
（整理）基因工程试验.
（整理）基因⼯程试验.基因⼯程实验流程实验⼀丹参总DNA的提取实验⽬的：掌握从植物或动物的组织（细胞）中抽提DNA的⽅法。
实验材料：丹参叶⽚实验器材：台式离⼼机，恒温⽔浴锅，电泳仪，研钵和杵，离⼼管，微量移液器，枪头实验步骤：第⼀次使⽤前请先在漂洗液WB和结合液PQ中加⼊指定量的⽆⽔⼄醇，充分混匀，加⼊后请及时在⽅框打钩标记已加⼊⼄醇，以免多次加⼊!取所需适量裂解液PL放置在65℃预热，使⽤前加⼊β-巯基⼄醇到终浓度2%。
1.取适量植物组织（新鲜组织100mg 或⼲重组织30 mg）在研钵中加⼊液氮充分碾磨成细粉。
2.转移细粉到⼀个1.5ml离⼼管，不要解冻，加600µl 65℃预热的裂解液PL (确认已加⼊β-巯基⼄醇⾄2%)，剧烈涡旋振荡混匀，⽤⼤⼝径枪头轻柔吹打帮助裂解。
如果组织裂解困难，可根据需要加⼀个轻柔匀浆10秒的步骤帮助裂解。
3.65℃⽔浴20-60分钟，在⽔浴过程中颠倒离⼼管以混合样品数次。
可选如果组织⼲燥或者产量低，可以适当延长⽔浴时间。
如RNA残留多，可在⽔浴前加⼊6µlRNA酶（20mg/ml）。
4.加⼊700µl氯仿/异戊醇（体积⽐24：1混合），颠倒充分混匀⼏分钟（或者涡旋混匀），13,000rpm 离⼼5分钟。
若提取的植物组织富含多糖多酚，可以在第4步前⽤等体积酚/氯仿（1：1）抽提⼀遍。
5.⼩⼼吸取上清到⼀个新的1.5ml离⼼管，注意不要吸到界⾯物质。
如上清⽐较浑浊，则需要重复步骤4⼀遍，直到得到透亮上清。
6.较精确估算上清量，加⼊1.5倍体积结合液PQ （请先检查是否已加⼊⽆⽔⼄醇!）后⽴刻涡旋，充分混匀。
此时可能出现沉淀，但不影响实验结果。
7.将上⼀步所得混合物（包括可能出现的沉淀）加⼊⼀个吸附柱AC中，（吸附柱放- 5 - ⼊收集管中）13,000rpm离⼼30秒，倒掉收集管中的废液（先加700µl离⼼，弃废液，再加⼊剩余的溶液，再次离⼼）。
基因工程实验原理
基因工程实验原理
基因工程实验的原理是基于对生物体基因组的修改和重组，旨在增加或改变生物体的特性。
下面将介绍几种常见的基因工程实验原理：
1. 基因克隆：该实验原理是将所需基因从一个生物体中剪切并插入到另一个生物体的染色体上，使目标基因能够在新宿主中表达。
2. 限制性内切酶消化：该实验原理是利用限制性内切酶切割目标DNA，创建具有粘性末端的DNA片段。
然后，可以通过连接这些片段来构建重组DNA。
3. 反转录和cDNA合成：这个实验原理是利用逆转录酶将RNA转录成DNA，即cDNA（互补DNA），然后将其克隆到表达载体中。
4. 基因敲入和敲除：该实验原理是通过CRISPR/Cas9系统或其他方法，有针对性地切割或改写目标基因，从而敲除或敲入特定的DNA片段。
5. 转基因技术：这是将外源基因导入到目标生物体中，使其表达或增强特定的功能。
转基因技术的原理可以是通过基因枪、农杆菌介导的转化等手段。
这些实验原理是基因工程研究中常用的方法，可以用于改良农
作物、生产药物、开发生物燃料等领域。
在实验过程中，研究人员需要仔细设计实验方案，并根据具体需求选择适当的方法。
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实验一大肠杆菌基因组DNA的提取及电泳鉴定
一、琼脂糖凝胶电泳注意的问题：
1. 缓冲系统：在没有离子存在时，电导率最小，DNA不迁移，或迁移极慢，在高离子强度的缓冲液中，电导很高并产热，可能导致DNA变性，因此应注意缓冲液的使用是否正确。
长时间高压电泳时，常更新缓冲液或在两槽间进行缓冲液的循环是可取的。
2. 琼脂糖：不同厂家、不同批号的琼脂糖，其杂质含量不同，影响DNA的迁移及荧光背景的强度，应有选择地使用。
3. 凝胶的制备：凝胶中所加缓冲液应与电泳槽中的相一致，溶解的凝胶应及时倒入板中，避免倒入前凝固结块。
倒入板中的凝胶应避免出现气泡，影响电泳结果。
4. 样品加入量：一般情况下，0.5cm宽的梳子可加0.5ug的DNA量，加样量的多少依据加样孔的大小及DNA中片段的数量和大小而定，过多的量会造成加样孔超载，从而导致拖尾和弥散，对于较大的DNA此现象更明显。
5. 电泳系统的变化会影响DNA的迁移，加入DNA标准参照物进行判定是必要的。
6. DNA样品中盐浓度会影响DNA的迁移率，平行对照样品应使用同样的缓冲条件以消除这种影响。
7. DNA迁移率取决于琼脂糖凝胶的浓度，迁移分子的形状及大小。
采用不同浓度的凝胶有可能分辨范围广泛的DNA分子，制备琼脂糖凝胶可根据DNA分子的范围来决定凝胶的浓度。
小片段的DNA电泳应采用聚丙烯酰胺凝胶电泳以提高分辨率。
二、如果提取的DNA中含有蛋白质和RNA污染,应如何解决?
蛋白污染可以考虑用酚氯仿多抽提几次,记得吸上清的时候小心点,宁可浪费也别吸到界面.一般后续还需要用氯仿/异戊醇抽提来去除酚.这样基本蛋白污染就可以去干净.实在不行,抽提一次后,就用蛋白酶K消化30min,再抽提.
如果DNA多,RNA污染就添加RNase A消化,你可以中途取少量跑胶检测,RNA去干净了再抽提,再沉淀DNA.
三、如果提取的DNA产量较低，分析原因并提出解决办法。
1）样本材料老化或反复动容导致DNA含量下降。
解决：应选择新鲜的材料样品，不能及时处理的样品应立即放入液氮或-70℃低温保存，以避免DNA降解。
2）样品破壁或裂解不完全，DNA未充分释放。
解决：动植物材料应在液氮中充分研磨匀浆，G+细菌就、酵母等破壁较困难的样品应用溶菌酶、Lyticase酶或机械协助破壁。
3）样品过多导致细胞裂解不充分
解决：不同来源样品根据查阅资料，加量不同。
4）DNA吸附不充分
解决：如在上吸附柱前未加入无水乙醇，或用低浓度乙醇代替无水乙醇，则导致DNA不能充分沉淀，与硅胶膜吸附不彻底，因此在样品裂解后加适量无水乙醇，在加上吸附柱使DNA 与硅胶模充分吸附。
5）DNA洗脱不当
解决：洗脱缓冲液pH值过低会阻碍DNA从硅胶模上洗脱下来，应确保洗脱液pH在7.0~8.5之间。
实验二PCR扩增大肠杆菌甘露-1-磷酸脱氢酶基因及PCR产物的纯化
一、简述PCR扩增技术的原理及各种试剂的作用（Mg离子、dNTP、引物DNA、缓冲液、Taq DNA聚合酶）
二、如果检测结果中出现了很多非特异性条带，可能有哪些原因？
①引物特异性不强；②Mg2+浓度过高；③引物二聚体形成；④退火温度过低；⑤循环次数过多
三、PCR过程中预变性3min，最后保温10min的目的分别为
3min是为了使母链被充分打开，10min是为了充分延伸
实验三碱性裂解法提取表达质粒载体PET-28a及电泳鉴定
一、质粒的基本性质有哪些
1,环状DNA分子能够自我复制,或整合到染色体上,随染色体复制.(最重要一点,可复制)
2,有多个限制酶切点(便于切割)
3,有标记基因(便于进行检验)
二、碱裂解细胞抽提质粒的基本原理是什么？
三、操作时应注意的问题
1、溶液一、溶液三冰浴效果好
2、溶液二现用现配
3、溶液三加入后,注意复性时间,太长太短都不行.
4、转管吸取上清液时,不要带入蛋白沉淀,宁缺勿滥.
5、最后干燥时,时间也不宜过长.
6、提取过程应尽量保持低温.
7、提取质粒DNA过程中除去蛋白很重要,采用酚/氯仿去除蛋白效果较单独用酚或氯仿好,要将蛋白尽量除干净需多次抽提.
8、沉淀DNA通常使用冰乙醇,在低温条件下放置时间稍长可使DNA沉淀完全.沉淀DNA也可用异丙醇（一般使用等体积）,且沉淀完全,速度快,但常把盐沉淀下来,所以多数还是用乙醇.
四、多克隆位点
多克隆位点（multiple cloning site, MCS），是包含多个（最多20个）限制性酶切位点
（restriction site）的一段很短的DNA序列。
也称为多位点接头（polylinker），是基因工程中常用到的载体质粒的标准配置序列。
实验四载体质粒、PCR产物的双酶切及酶切产物的纯化
一、使用工具酶时应注意些什么
首先酶都是具有专一性的，对待不同的操作均要选择相适应的酶的种类。
其次在使用工具酶的时候还要注意环境的温度，PH值等环境。
否则会影响酶的活性
二、酶切反应中添加酶的量应该控制在什么范围内?为什么
常规的酶切一般要维持在10-50ul,酶切鉴定10-20ul就可以
三、如果一个DNA 酶解液在电泳后发现DNA 未被切动,你认为可能是什么原因
1.酶失活.
2.DNA序列有问题
实验五、载体片段与PCR产物的连接
一、
二、
不同限制性内切酶处理DNA片段之间可以进行连接吗？为什么
可以，只要都是平端，就都可以
实验六、感受态细胞的制备和重组质粒的转化
一、如何培养宿主菌
根据菌株的不同，选择不同的培养基；根据质粒的不同，选择不同的选择压力，比如抗生素，缺陷培养基等等。
二、制备感受态细胞的原理
感受态细胞（competent cell）：理化方法诱导细胞，使其处于最适摄取和容纳外来DNA 的生理状态。
主要原理就是通过处理使细胞的通透性变大，直观的说，使得细胞膜表面出现一些孔洞，便于外源基因或载体进入感受态细胞。
由于细胞膜的流动性，这种孔洞会被细胞自身所修复。
三、为提高转化率，要考虑哪些重要因素
1．细菌的生长状态：实验中应密切注视细菌的生长状态和密度,尽量使用对数生长期的细胞（一般通过检测OD600来控制.DH5α菌株OD600为0.5 时细胞密度是5 ×107/ml ）；2．所有操作均应在无菌条件和冰上进行；
3．经CaCl2处理的细胞,在低温条件下,一定的时间内转化率随时间的推移而增加,24小时达到最高,之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）；
4．化合物及无机离子的影响：在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如Mn2+或Co2+）、DMSO 或还原剂等物质处理细菌,可使转化效率大大提高（100-1000 倍）；5．所使用的器皿必须干净.迹量的去污剂或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率；
6．质粒的大小及构型的影响：用于转化的应主要是超螺旋的DNA ；
7．一定范围内,转化效率与外源DNA 的浓度呈正比；
实验七重组子的鉴定
一、质粒转化后得到的阳性克隆有哪些方法可以鉴定?并说明鉴定的依据。
1. 菌落PCR。
设计引物扩增质粒特有的目的片段，如果阳性克隆里面有改片段，则说明转化成功。
2 快抽质粒。
将阳性菌落划平板，几个小时后，富集菌，然后快速抽提。
看质粒大小有没有插入目的片段。
3 提质粒，酶切鉴定。
4 提质粒测序。
二、说明在重组子鉴定实验中要分别得到怎么样的电泳结果才能说明重组质粒中具有真正确的有甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因
将重组质粒进行酶切,然后电泳,最后分析条带,如果重组质粒酶切后的一条电泳条带与甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的电泳条带在同一直线上,则说明重组成功。