关于梅毒的实验室检测 (1)
关于梅毒的实验室检测
成都商报在2007年5月9日第5版中有这样一篇文章—“是梅毒，是没‘毒’女大学生考警蹊跷被刷”。讲的是小梅在淮南市第一人民医院进行考警体检中被误诊（或是错诊）为梅毒的事。其报道中对梅毒的实验室检查部份的叙述存在一定程度的误导，因此我们针对梅毒的病原体、实验室检查及检验方法等相关内容进行了组稿。来进一步加深对梅毒实验室诊断的认识。
一、螺旋体的分类、寄生部位
螺旋体的分类及传播方式
致病性螺旋体种
传播方式或媒介所致疾病属
类
螺旋体
脊螺旋体
密螺旋体梅毒螺旋体性传播梅毒
雅司螺旋体皮肤损伤雅司病
品他螺旋体皮肤损伤品他病
地方性螺旋体粘膜损伤地方性梅毒
疏螺旋体伯氏疏螺旋体硬蜱莱姆病
回归热螺旋体体虱流行性回归热
赫姆疏螺旋体软蜱地方性回归热
奋森疏螺旋体机会感染多种口腔感染
钩端螺旋体问号钩端螺旋体皮肤粘膜钩端螺旋体病
细丝体
短螺旋体
小蛇形螺旋体
二、生物学特性
梅毒螺旋体即苍白密螺旋体的苍白亚种，人是其唯一宿主。直径0.1—0.15μm，全长7--8μm。在电镜下可见有细胞壁和细胞膜。新鲜标本在暗视野显微镜下可观察其形态和活泼的运动方式。
梅毒螺旋体主要有两种抗原：1、密螺旋体抗原即梅毒螺旋体表面的特异抗原，与雅司、地方性梅毒、品他病等3种密螺旋体有共同抗原，可交叉反应。2、非螺旋体抗原即磷脂类抗原，可刺激机体产生反应素，其与牛心肌的心脂质抗原发生反应，此法敏感性高，但有假阳性。
梅毒螺旋体对外界的抵抗力极弱，离体后1—2小时即死亡，对热和干燥特别敏感，在体外干燥环境下1—2小时或加1.5℃经1小即死亡。血液中4℃放置3天可死亡，因此4℃血库存放3天以上的血液无传染梅毒的危险。对肥皂水和常用化学消毒剂亦敏感，1%--2%石炭酸内数分钟就死亡。
梅毒的免疫属感染性免疫，有梅毒螺旋体感染时才有免疫力，一旦螺旋体被杀灭，其免疫力随之消失。机体对梅毒螺旋体感染可产生细胞免疫和体液免疫反应，体液免疫中有两种抗体：一种是梅毒特异性抗体，主要是IgG、IgM，对螺旋体有制动作用，当有补体存在时，可将其杀死和溶解，对机体的再感染有保护
作用。另一种是抗脂质抗体的反应素，为IgG和IgM的混合物，对机体无保护作用。
三、送检标本和检验方法
Ⅰ期梅毒病人取硬下疳渗出液，Ⅱ期梅毒取梅毒疹渗出液或局部淋巴抽出液。对Ⅰ期梅毒末期以后（大约感染3—4周以后）的病人可分离血清检查有无梅毒螺旋体抗体和反应素。
检验方法：
1、显微镜镜检渗出液涂片后可直接用暗视野显微镜检。直接镜检适合
ⅠⅡ期梅毒的检查。（现已经不常用）
2、血清学试验包括非螺旋体抗体和密螺旋体抗体两类
1）非螺旋体抗体试验（NtrAT）用正常牛心肌脂质作为抗原，测定病人血清中的反应素。均为初筛试验。
2）密螺旋体抗体试验（TrAT）采用Nichols株梅毒螺旋体作为抗原，测定血清中梅毒螺旋体特异抗体，特异性强，可用作梅毒证实试验。
试验方法分类
类型试验名称
NtrAT
VDRL（性病研究实验室试验）
（测抗类脂抗体）
RPR（快速血浆反应素试验）
TRUST（甲苯胺红不加热血清试
验）
USR（不加热血清反应素试验）
TrAT
（测抗T.pallidum抗体）
TPHA（梅毒螺旋体血凝试验）
TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集试验）
TP- ELISA（酶联免疫法）
FTA-ABS（荧光密螺旋体抗体吸收试验）
WB（免疫印迹试验）
金标记免疫层析法
四、方法学比较
1.非螺旋体抗体试验（NtrAT）这类方法敏感性高，其抗体滴度与病变活动性有关，病灶出现后1-2周就可测出反应素，Ⅰ期梅毒阳性率约为70%，Ⅱ期梅毒阳性率可达100%，Ⅲ期梅毒阳性率较低，先天性梅毒阳性率可达80%-100%，但此类试验特异性不高，常有假阳性反应。因此，在分析结果时应结合病史和临床症状，并做密螺旋体抗原试验加以确诊。
2.密螺旋体抗体试验（TrAT）
1）TPHA（梅毒螺旋体血凝试验）是一种间接血凝试验，以SRBC为载体，将梅毒螺旋体Nichols株，经纯化后超声击碎成密螺旋体抗原，致敏SRBC，加入待检病人血清作间接血凝试验，具有敏感性高，快速，简便，易于观察等特点。
2）TPPA（梅毒螺旋体明胶凝集试验）与TPHA基本相同。
3）WB（免疫印迹试验）是分子水平的试验，本法综合了SDS-PAGE的高分辩力和ELISA的高特异性和敏感性，对梅毒的确诊，尤其对早期梅毒的确诊具有特殊的价值，对二期，三期梅毒的诊断率很高。
4）FTA-ABS（荧光密螺旋体抗体吸收试验）为间接荧光抗体检测法。本法敏感性和特异性均高，是Ⅰ期，Ⅱ期梅毒首先出现阳性反应的血清学试验，且病人经药物治疗后，反应仍不转阴，可用于确诊但不能用作疗效评价。
密螺旋体抗原试验的特异性虽强，但仍不能区分雅司、地方性梅毒、品他病，也可有1%生物学假阳性存在。因此，这些试验的结果的判定，仍需结合临床资料来分析。
梅毒血清学试验假阳性的原因
原因
非密螺旋体
抗体试验(NTrAT)
密螺旋体
抗体试验(TrAT)
自身免疫病疟疾
新近免疫接种皮肤病
心血管病
结核
麻风
静脉注射毒品病毒感染
热性病＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
＋
－
－
＋
＋
－
＋
－
－
＋
妊娠
HIV感染
其他性传播病
老年人
多次输血
莱娒病
地方性密螺旋体病原因不明
技术误差＋
＋
＋
－
＋
－
＋
＋
＋
－
－
－
＋
－
＋
＋
＋
＋
根据后附论文“梅毒实验室诊断及评价”的资料显示RPR阳性率为94.2%，TRUST阳性率为93.0%, 4种非特异性检测方法敏感性均在95%左右。虽然从数据中看到用进口RPR试剂在对照血清组有10例的假阳性（占8.7%），看似较高。但其准确性也有91.22%，也是令人较满意的试剂。国产的RPR和TRUST 在各项指标上的差异无统计学意义。因TRUST有操作简单，用时短，结果容易观察等特点被临床实验室广范的接受（卫生部门推存用RPR或VDRL）。
RPR、TRUST试剂对不同血清标本的检测结果
组别例RPR（进口）RPR（国TRUST 1TRUST2
数产）
＋－＋－＋－＋－对照血清11410104211221122112Ⅰ期梅毒血清26224224224224Ⅱ期梅毒血清32320320320320Ⅲ期梅毒血清660606060不明期梅毒血清中存
22211202202202检
TPPA法对梅毒患者诊断敏感性为83.72%,TP-ELlSA法敏感性为
87.21%,WB法敏感性为100%。3种特异性抗体检测法特异性均为100%（即假阳性率为0%）。在三种方法的对比中可以看出WB法是最好的，但其操作复杂费时，对实验设备和实验条件要求较高等客观条件约束，因此在临床实验室中运用较少。
3种特异性抗体检测方法对不同血清标本的检测结果
TPPA ELISA WB法
标本份数
＋－＋－＋－
对照血清114011401140114Ⅰ期梅毒血清261971610260
Ⅱ期梅毒血清32275320320
Ⅲ期梅毒血清6606060
不明期梅毒血清中
22202211220
存检
五、梅毒螺旋体实验指标的临床应用
对这些实验指标的临床应用中常会出现以下情况：
1）单独用筛查试验（如：RPR试验、TRUST试验等非密螺旋体抗体试验）进行梅毒的诊断。
2）认为筛查试验不好，没有临床应用价值，就在临床实践中丢弃它。
3）只做确诊试验（密螺旋体抗体试验：TPPA,TPHA，TP- ELISA等），阳性一定就是梅毒现症感染。
目前，RPR试验和TRUST试验主要用于梅毒患者的筛查，虽然对梅毒的诊断缺乏特异性，但其在确诊后对治疗的疗效判定有重要意义。只要了解其造成假阳性的原因，结合病历资料分析，就能尽可能的减少假阳性造成的不良后果。常用的梅毒特异性抗体检测方法是传统经典的TPPA,TPHA, TP- ELISA，
FTA-ABS方法，只做特异性抗体检测无法确定是否现症感染。对于梅毒的确诊需同时做NtrAT和TrAT两种检测，并结合临床表现综合判断。筛选试验和确诊试验实验结果解释如下：
实验结果意义
NTrAT＋TrAT－NtrAT假阳性
NTrAT＋TrAT＋现症梅毒；治愈的晚期梅毒
NtrAT－TrAT＋极早期梅毒；治愈后的梅毒
排除梅毒感染；极早期梅毒；AIDS NtrAT－TrAT－
合并梅毒
现在在梅毒的实验室诊断方面已经比较成熟。我们实验室针对梅毒的实验室诊断运用了三种试验方法（TRUST、TPPA、RPR）。只有根据实验特点、临床需要来选择试验方法，才能充分发挥其优势。为临床诊断提供有力证据。