溶磷检测
溶解磷的检测方法
溶解磷的检测方法
1、磷试液A：称取2.5g钼酸铵溶于25ml水中，然后倒入38ml的硫酸和25ml的水，然后放入冷水中冷却
2、磷试液B：称取0.04g的米妥尔，0.2g的亚硫酸钠加适量水溶解，再加入4.4g偏重亚硫酸钠，使成40ml，酌情滤过。
3、10%三氯醋酸溶液
4、标准曲线绘制
精密称取0.4394g纯KH2PO4溶于水，加入20ml的0.05mol/L硫酸，，稀释成1000ml，即得100ug/ml磷酸二氢钾的水溶液
取上述溶液5ml，加入2ml0.05mol/L硫酸，加水稀释成100ml，即得5ug/ml的磷酸二氢钾溶液。
用精密刻度吸管（最好用吸枪），精密吸取5ug/ml磷酸二氢钾0.5、
1.0、1.5、
2.0、2.5ml，于5支25ml的刻度试管中，分别加入磷试液
A、B各1ml，稀释至10ml，在沸水浴中加热半小时，取出冷却补水至10ml，以同样条件做空白。
在722分光光度计650nm波长进行吸光度检测，，以磷为纵坐标，吸光度为横坐标做回归方程(r≥0.99）。
当磷酸试液更换时，方程曲线重新做。
5、样品测定
取样品0.2g，精密称定，于100ml容量瓶中，加入50ml水，振摇均匀，放置4hr以上，加入10ml10%三氯酸醋酸，放置10min，用水稀释至刻度，摇匀过滤，精密吸取1ml于25ml刻度吸管中，，以下操作同曲线测定，根据测的的吸光度，按照回归方程测出磷含量，计算
公式： 溶磷=1100
ug ⨯⨯G 磷含量 100体积 G 称取的检测品的重量。
复合肥料中有效磷、水溶性磷检测的方法研究
更好的劳作 ， 在 采用有 效复合肥料的情况下 ，获得 更大的收 获。
关键词 ：复合肥料 有效磷 水溶性磷
２ ． 空 白实验
相 对来 说 ，复合 肥料 要 比的单 一 的肥 料具 有更 好的效 果 ，复 合肥 料可 以集结 众 多的 优势 ，一 鼓作 气 的为农 作物 提供 更大 的 帮助 。现 今 的 多数农 民朋 友都 在采 用复 合肥 料 。但是 复合 肥料 也有 假 货 ，为 了防 止 农民朋 友买 到虚 假产 品 ，需要 对复 合肥 料 中的有 效磷 、水溶 性磷 进 行 一定 的检测 ，而 检测 方法 就 是现阶 段 的工 作重 点 。由于 有效 磷 以及 水溶性磷 存在 一定 的共 同点 ，因此 不能 采用 过于 简单 的方 法 ，可是 过 于 复杂 又会影 响检 测报 告 的时 间 ，所 以必 须研 究 出一 种快 速 、精准 的 检 测方 法 。本 文就 复合 肥料 中有效磷 、水溶 性磷检 测 的方 法进 行一 定
的研究 。
一
空 白实 验在 复 合肥 料 中水 溶 性磷 的检 测之 中 ，是 一 个 细节 部 分 。
溶解磷的检测方法
溶解磷的检测方法
1、磷试液A：称取2.5g钼酸铵溶于25ml水中，然后倒入38ml的硫酸和25ml的水，然后放入冷水中冷却
2、磷试液B：称取0.04g的米妥尔，0.2g的亚硫酸钠加适量水溶解，再加入4.4g偏重亚硫酸钠，使成40ml，酌情滤过。
3、10%三氯醋酸溶液
4、标准曲线绘制
精密称取0.4394g纯KH2PO4溶于水，加入20ml的0.05mol/L硫酸，，稀释成1000ml，即得100ug/ml磷酸二氢钾的水溶液
取上述溶液5ml，加入2ml0.05mol/L硫酸，加水稀释成100ml，即得5ug/ml的磷酸二氢钾溶液。
用精密刻度吸管（最好用吸枪），精密吸取5ug/ml磷酸二氢钾0.5、
1.0、1.5、
2.0、2.5ml，于5支25ml的刻度试管中，分别加入磷试液
A、B各1ml，稀释至10ml，在沸水浴中加热半小时，取出冷却补水至10ml，以同样条件做空白。
在722分光光度计650nm波长进行吸光度检测，，以磷为纵坐标，吸光度为横坐标做回归方程(r≥0.99）。
当磷酸试液更换时，方程曲线重新做。
5、样品测定
取样品0.2g，精密称定，于100ml容量瓶中，加入50ml水，振摇均匀，放置4hr以上，加入10ml10%三氯酸醋酸，放置10min，用水稀释至刻度，摇匀过滤，精密吸取1ml于25ml刻度吸管中，，以下操作同曲线测定，根据测的的吸光度，按照回归方程测出磷含量，计算
公式： 溶磷=1100
ug ⨯⨯G 磷含量 100体积 G 称取的检测品的重量。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定溶磷解钾菌是指具有能够分解无机磷、解离钾盐并将其转化为有机物质的细菌。
这类菌株广泛存在于土壤中，对于植物和农业生产具有重要意义，能够促进作物生长和提高产量。
因此，分离出具有溶磷解钾能力的菌株对于土壤生态系统的调节和农业生产的发展具有积极作用。
本实验旨在从土壤中筛选出溶磷解钾菌，并对所得菌株进行鉴定和分类。
实验步骤如下：实验材料：1.土壤样品2.磷酸二氢钾、氯化钾3.高氯酸盐酸铂(IV)4.琼脂、蔗糖、酵母粉、肉汤、营养琼脂培养基实验步骤：1. 采集土壤样品，处理成均匀状态。
2. 在含有磷酸二氢钾和氯化钾的营养琼脂培养基上进行菌落筛选。
将土样涂布在琼脂培养基上，放置温箱中，培养24小时。
3. 筛选出的菌株进行溶磷解钾能力测试。
将每个菌株接种于含有磷酸二氢钾的营养琼脂培养基上，培养48小时。
然后在营养琼脂培养基上加上1%酵母粉，继续培养48小时。
观察菌落中是否有出现溶解带，并记录其直径大小。
4. 对具有溶磷解钾能力的菌株进行分类鉴定。
首先进行生长特性观察，记录菌落特征、颜色、形态、透明度等；然后进行生理生化特性测试，包括淀粉酶、氧化酶、葡萄糖发酵、产气等反应，将结果与相关分类鉴定手册进行对照，确定其菌属和菌种。
结果分析：经过菌落筛选和溶磷解钾能力测试，筛选出44株溶磷解钾菌株。
经过对这些菌株进行分类鉴定，得出以下结果：1. 有34株归属于假单胞菌属，属于γ-变形菌门。
2. 有5株归属于龙门菌属，属于γ-变形菌门。
3. 有2株归属于芽孢杆菌属，属于芽孢杆菌门。
4. 有1株归属于链球菌属，属于革兰氏阳性菌门。
2株未能鉴定出其菌属和菌种。
结论：通过对土壤样品进行菌株筛选和分类鉴定，得到44株具有溶磷解钾能力的菌株，其中绝大部分菌株归属于γ-变形菌门。
该类菌株对于土壤中的化学反应过程和植物的生长发育有着重要的影响，对于农业生产和生态环境的监测都有着重要的意义。
枸溶磷的测定方法及饲料级...（1）
枸溶磷指能被中性柠檬酸铵溶液或用c（EDTA）=0.2mol/L溶液提取的磷。
枸溶磷一般是评价磷酸氢钙质量好坏的指标，通常暗指有效磷，枸溶磷占总磷的百分比越高，说明该磷酸氢钙的质量越好。
枸溶磷的测定方法一.试剂:1.柠檬酸;2.无水乙醇;3.氨水;4.盐酸溶液1+1;5.硝酸溶液1+1;6.•中性柠檬酸铵溶液:溶解74g柠檬酸于300毫升水中,加69毫升氨水,在酸度计上用氨水调节PH值为7.0,用比重计测其比重为1.09(20℃).将溶液贮存于密闭的瓶中备用(如长期使用,用前校正其酸度)7.喹钼柠酮溶液的制备:a.称取70g钼酸钠溶解于150毫升水中;b.称取60g柠檬酸溶解于150毫升水中和85毫升硝酸中;c.在搅拌下将溶液a倒入溶液b中;d.在100毫升水中加入35毫升硝酸和5毫升喹啉;e.•将溶液d倒入溶液c中,放置24小时后,用坩锅式过滤器过滤,再加入280毫升丙酮,用蒸馏水稀释至1000毫升,混匀,并贮存于聚乙烯瓶中.二.测定:称取1g样品,•准至0.0002g,置于250毫升容量瓶中,加入100毫升中性柠檬酸铵溶液,将容量瓶置于(65±1)•℃的水浴中保温1小时,时常打开瓶塞,每隔15分钟摇动一次,每次摇动30秒钟,取出容量瓶,冷却至室温,加水至刻度,摇匀,干过滤,弃去初始的30毫升滤液,用移液管移取20毫升试验溶液置于250毫升烧杯中,•加入10毫升硝酸溶液,加水至总体积100毫升,•加热煮沸5分钟后,加入50毫升喹钼柠酮溶液,盖上表面皿,保温30秒(再加入试剂和加热过程中,•不得使用明火,不得搅拌,以免凝结成块),冷却,在冷却过程中搅拌3-4次,•用预先在(180±5)℃下烘至恒重的玻璃砂坩锅抽滤,先将上层清液过滤,再用倾泻法洗涤沉淀6次,•每次约用水30毫升,最后将沉淀移入玻璃砂坩锅中过滤,再用水洗涤沉淀3次,将玻璃砂坩锅连同沉淀置于干燥箱中从温度稳定时计时,在(180±5)℃下干燥45分钟,取出稍冷后,置于干燥器中冷却至室温,称重;同时做空白试验.三.结果计算:(m1-m2)*0.0014X=───────── * 10020m* ───250式中:m1----试验溶液中生成磷钼酸喹啉沉淀的质量,g;m2----试验空白中生成磷钼酸喹啉沉淀的质量,g;m-----试样的质量,g;0.00140-----磷钼酸喹啉换算成磷的系数.饲料级磷酸氢钙(HG 2636-94)标准规定枸溶磷≥9%即可视为磷酸氢钙。
浅谈复混肥料中水溶性磷含量检测的改进方法
浅谈复混肥料中水溶性磷含量检测的改进方法在复混肥料中水溶性磷检测时，GB/T8573-2010中规定采用瓷蒸发器研磨后定容过滤，文章采用恒温水浴振荡溶解后定容过滤法，可以在一定时间内把肥料中的水溶性磷提取测定，其操作简便、精确度高，可批量分析，提高工作效率标签：恒温水浴振荡法；水溶性磷；恒温振荡器近年来，随着农业现代化水平的提高和化肥用量的增加，肥料种类也越来越多，复混肥料就是应用最普遍的一种。
目前，GB/T8573-2010《复混肥料中有效磷含量测定》中水溶性磷提取是采用瓷蒸发器加水研磨多次，需要手工操作，比较费时费力，并且研磨程度不易掌握，影响测定结果的准确度。
而笔者经过恒温水浴振荡法代替手工研磨法，其操作简便、耗时少、精确度高，而且可批量分析。
1 材料与方法1.1 主要仪器①电子分析天平：FA204。
②水浴恒温振荡器：SHZ-C。
③电热恒温鼓风干燥箱：DHG-9140A。
④真空泵。
⑤玻璃坩埚式滤器：4号，容积30ml。
⑥瓷蒸发器：75ml。
1.2 主要试剂①蒸馏水。
②乙二胺四乙酸二钠（EDTA）溶液：37.5g/l。
③硝酸溶液：1+1。
④喹钼柠酮试剂。
1.3 检测方法按照GB/T8573-2010《复混肥料中有效磷含量测定》中的方法检测。
2检测与结果分析2.1样品制备对备检样品进行四分法处理后，取约1份样品放进粉碎机，粉碎后的试样通过1mm标准筛，混均，用聚乙烯瓶中保存。
2.2检测方法一（瓷蒸发器研磨法）称取1.5g备检样品，精确至0.0002g，置于75ml瓷蒸发器中，加25ml水研磨，将清夜倾注过滤于预先加入5ml硝酸溶液的250ml容量瓶中，继续用水研磨三次，每次用25ml水，然后将水不溶物转移到滤纸上，并用水洗涤不溶物，待容量瓶中溶液达到200ml左右为止。
最后用水稀释至刻度，混匀即可，然后采用GB/T8573-2010《复混肥料中有效磷含量测定》中6.5步骤进行测定水溶性磷。
2.3检测方法二（水浴恒温振荡器法）称取1.5g备检样品，精确至0.0002g，置于250ml容量瓶中，加150ml水，放入水浴恒温振荡器，其往返振荡速度以翻动试样为准，温度设定为40度，振荡1h后取出，冷却至室温，定容。
溶磷细菌固氮细菌生理生化指标具体步骤0
溶磷细菌固氮细菌生理生化指标具体步骤0溶磷细菌和固氮细菌是两种重要的土壤微生物，它们对于土壤养分循环和植物生长有着重要的影响。
了解溶磷细菌和固氮细菌的生理生化指标可以帮助我们更好地了解它们的生物学特性和功能。
下面是溶磷细菌和固氮细菌生理生化指标的具体步骤：1.样品收集：选择合适的土壤样品，并确保样品的新鲜性。
可根据需要选择不同的采集点，并采用土壤钻具等工具进行采集。
为了避免污染，最好使用无菌采集工具，并在采集前将其灭菌处理。
2.样品处理：将采集到的土壤样品进行处理，以提取出微生物。
通常的方法是通过稀释法，将土壤样品与缓冲液混合，然后进行振荡或摇动，以将微生物悬浮在溶液中。
接下来，可以通过离心等方式将微生物分离出来。
3.溶磷细菌的指标检测：a.磷酸酶活性测定：磷酸酶活性是溶磷细菌的一个重要生理指标，可以用来评估溶磷细菌的磷酸解除能力。
该指标的测定通常采用对应底物的颜色变化法或显色法进行。
可以利用安替比色法、菲伯酚法等方法进行测定。
b.磷酸溶解效率测试：该测试是评估溶磷细菌对有机磷的解磷效果的一种方法。
通过添加已知浓度的有机磷底物（如麦芽糖磷酸酯）到培养基中，培养一定时间后，使用测定溶磷细菌解磷效果的指标，如测定溶解磷的浓度等。
4.固氮细菌的指标检测：a.固氮活性测定：固氮活性是评估固氮细菌固氮效率的一个重要指标。
可以使用铋的还原能力测定法或乘敌氧化电位法来测定固氮活性。
这些方法基于固氮细菌通过将N2还原为NH4+来固定氮气的能力。
b.还氮效率的测定：此方法评估固氮细菌在特定条件下固氮的效果。
通常通过添加已知浓度的^15N标记物，然后通过质谱仪等设备测定NH4+、NO3-等形式的^15N，从而确定固氮效率。
以上是溶磷细菌和固氮细菌生理生化指标的具体步骤。
通过这些指标的测定，我们可以更好地了解溶磷细菌和固氮细菌的功能和特性，对于土壤健康管理和农业生产具有重要的意义。
复合肥料中有效磷、水溶性磷检测的方法研究
复合肥料中有效磷、水溶性磷检测的方法研究相对来说，复合肥料要比的单一的肥料具有更好的效果，复合肥料可以集结众多的优势，一鼓作气的为农作物提供更大的帮助。
现今的多数农民朋友都在采用复合肥料。
但是复合肥料也有假货，为了防止农民朋友买到虚假产品，需要对复合肥料中的有效磷、水溶性磷进行一定的检测，而检测方法就是现阶段的工作重点。
由于有效磷以及水溶性磷存在一定的共同点，因此不能采用过于简单的方法，可是过于复杂又会影响检测报告的时间，所以必须研究出一种快速、精准的检测方法。
本文就复合肥料中有效磷、水溶性磷检测的方法进行一定的研究。
一、实验部分复合肥料中有效磷、水溶性磷检测的方法有很多种，需要通过试验来确定哪一种最适合实际应用。
经过一定的讨论和研究，工作人员认为磷钼酸喹啉重量法能够得到一个理想的效果，所以现阶段的多数科研机构都在应用磷钼酸喹啉重量法来检测复合肥料中的有效磷以及水溶性磷。
在本文中，会对复合肥料中有效磷以及水溶性磷检测的方法进行详细的阐述。
1.样品的选定对于样品来说，多数情况下能够代表复合肥料中有效磷以及水溶性磷的含量，但是目前的生产技术较为先进，部分复合肥料的有效磷以及水溶性磷的含量存在一定的差异。
比方说，有些复合肥料的有效磷或者水溶性磷的含量会超过百分之十的比重，但是有些符合肥料则在百分之十以下。
另一方面，原料磷肥的类型也存在很大的差异，市场上的磷铵、过磷酸钙等都是常用的类型。
值得注意的是，样品肥料的工艺也有很大的不同，有些复合肥料会采用圆盘造粒的方式，有些会采用熔融的方法。
根据上述的多种影响因素，本文主要选取了十六个样品，同时这十六个样品涵盖了上述的所有影响因素，相信能够得到一个符合实际的结果。
2.实验原理复合肥料中有效磷、水溶性磷的监测方法并没有想象中的那么复杂，由于是针对性的检测，因此现阶段的工作人员主要采用以下方式来检测复合肥料中有效磷以及水溶性磷：用水和硝酸溶液提取复混肥料中水溶性磷和有效磷，提取液中正磷酸根离子在酸性介质中与喹钼柠酮试剂生成黄色磷钼酸喹啉沉淀，用磷钼酸喹啉重量法测定磷的含量。
真菌的溶磷实验报告
一、实验目的本实验旨在研究真菌对土壤中难溶性磷的溶解能力，并探讨不同真菌菌株的溶磷特性，为提高土壤磷素利用率、促进植物生长提供理论依据。
二、实验材料与方法1. 实验材料- 真菌菌株：从土壤中分离得到的5株真菌菌株，分别标记为A、B、C、D、E。
- 培养基：PDA培养基、土壤浸提液培养基。
- 试剂：钼锑抗显色剂、硫酸铜、硫酸、无水乙醇、磷酸二氢钾等。
2. 实验方法（1）溶磷实验① 将5株真菌菌株分别接种于PDA培养基上，在恒温培养箱中培养至菌丝生长旺盛。
② 将菌丝刮下，用无菌水洗涤，制成菌悬液。
③ 将菌悬液接种于土壤浸提液培养基中，在恒温培养箱中培养一定时间。
④ 每隔一定时间，取一定量的培养液，加入钼锑抗显色剂，测定其磷含量。
（2）溶磷特性分析① 分析不同菌株的溶磷能力，比较其溶磷速率和溶磷量。
② 分析不同菌株的溶磷特性，如最适pH值、最适温度、最适碳源等。
三、实验结果与分析1. 溶磷能力分析实验结果显示，5株真菌菌株的溶磷能力存在差异。
其中，菌株A的溶磷能力最强，其次是菌株B和C。
菌株D和E的溶磷能力相对较弱。
2. 溶磷特性分析（1）最适pH值：实验结果表明，5株真菌菌株的最适pH值在5.0-6.0之间，说明真菌对酸性土壤具有一定的适应性。
（2）最适温度：实验结果表明，5株真菌菌株的最适温度在25-30℃之间，说明真菌在较高温度下具有较强的溶磷能力。
（3）最适碳源：实验结果表明，5株真菌菌株的最适碳源为葡萄糖和果糖，说明真菌对碳源的需求较高。
四、结论1. 从土壤中分离得到的5株真菌菌株均具有一定的溶磷能力，其中菌株A的溶磷能力最强。
2. 真菌的溶磷能力受pH值、温度、碳源等因素的影响，通过优化培养条件，可以提高真菌的溶磷能力。
3. 真菌溶磷技术有望应用于农业生产，提高土壤磷素利用率，促进植物生长。
五、讨论1. 真菌溶磷机制：目前，关于真菌溶磷的机制尚不完全清楚。
研究表明，真菌可能通过产生有机酸、络合剂等物质，降低土壤中难溶性磷的溶解度，从而提高土壤磷素利用率。
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定
一株溶磷解钾菌的分离筛选与鉴定一、分离筛选1. 采集样品分离一株溶磷解钾菌的第一步是采集土壤样品。
在采集土壤样品时，应选择农田、果园或者蔬菜地等农作物生长的土壤。
避免采集林地或者草原等非农作物生长的土壤。
2. 筛选培养基为了筛选出具有溶磷解钾功能的菌株，需要选择适合菌株生长的培养基。
一般来说，可以选择含有磷钾养分的培养基，比如含有三钠憎水性纤维素和磷酸的培养基。
3. 筛选过程将采集到的土壤样品进行稀释，然后在筛选培养基中进行培养。
适宜的温度和湿度有利于细菌的生长。
在培养过程中，通过溶磷解钾功能的鉴定方法，筛选出具有溶磷解钾功能的菌株。
4. 筛选结果筛选出的溶磷解钾菌株，可以进行单菌纯化和鉴定鉴定。
接下来，对所得的溶磷解钾菌株进行鉴定。
二、鉴定1. 形态观察可以通过形态观察对菌株进行初步鉴定。
包括菌落形态、菌体形态、芽生孢和孢子等。
2. 生理生化特性可以进行一系列生理生化特性的鉴定。
包括对菌株的产酶特性、产酸特性、色素特性等的鉴定。
这些特性可以帮助确定菌株的种属和特征。
3. 分子生物学鉴定可以借助分子生物学的鉴定手段对菌株进行鉴定。
通过16S rRNA基因序列分析，可以快速准确地确定菌株的系统发育学地位，确定其种属。
分离筛选和鉴定过程，可以帮助我们选出高效的一株溶磷解钾菌，并对其进行深入的研究。
通过研究，可以进一步探究这一株溶磷解钾菌的生物特性、功能特性和应用前景。
相信在不久的将来，这一株溶磷解钾菌将在农业生产中发挥重要的作用，为提高作物产量和质量提供重要支持。
解磷真菌分离鉴定及其溶磷能力分析
现代农业科技2024年第4期动物科学·生物技术解磷真菌分离鉴定及其溶磷能力分析姜焕焕张嘉敏梁云燕范宇清何洪活（肇庆学院生命科学学院，广东肇庆526061）摘要解磷菌能够溶解土壤中的难溶性磷或不溶性磷，在促进土壤养分循环和植物生长方面起着重要作用，是生物肥料中重要的微生物资源。
本研究采用稀释涂布平板法筛选得到5株解磷真菌（菌株SZ1、SZ2、GZ1、GZ2、HZ1），对菌株进行分子生物学鉴定，并利用液体摇瓶法测量菌株对磷酸三钙的溶磷能力。
结果表明，菌株SZ1、SZ2、GZ1、GZ2、HZ1的溶磷能力存在一定的差异，其中菌株SZ1、GZ2、HZ1的可溶性磷含量分别为58.30、2.69、8.65mg/L，菌株SZ2和GZ1没有溶解磷酸三钙的能力；菌株SZ1、SZ2、GZ1、GZ2、HZ1分别为香港史努基菌（Hongkongmyces snookiorum）、杂色曲霉（Aspergillus versicolor）、香港史努基菌（Hongkongmyces snookiorum）、棘孢木霉（Trichoderma asperellum）、林尼曼菌（Linnemannia exigua）。
关键词根际土壤；解磷真菌；分子生物学鉴定；溶磷能力中图分类号S154.3文献标识码A文章编号1007-5739（2024）04-0170-03DOI：10.3969/j.issn.1007-5739.2024.04.041开放科学（资源服务）标识码（OSID）：磷是植物生长发育所需的矿物质元素之一，但土壤中的难溶性磷占比高达95%，能被植物直接吸收利用的磷占比不足5%[1]。
据相关报道，全世界范围内缺磷耕地占比约为43%，我国缺磷耕地比例约为74%[2]。
传统农业主要通过施用磷肥增加土壤中的有效磷含量，但过量施用磷肥导致磷被进一步固定在土壤中，造成土壤退化、重金属累积、水体富营养化等问题[3]。
随着人们环境保护意识的增强和农业可持续发展战略的实施，开发利用土壤微生物并将其制成微生物肥料用于提高土壤中的有效磷含量成为农业生产研究热点。
溶磷的测定
溶磷含量的测定方法1、磷含量测定的原理：酸性条件下,磷酸根与钼酸铵作用生成的磷钼酸铵经米吐尔作用后,高价钼被还原成低价钼呈蓝色,其吸收符合朗伯-比尔定律，可利用其进行定量分析。
反应式:2H3PO4 + 24(NH4)2MoO4 + 21H2SO4───→ 2(NH4)3PO4·12MoO3 + 21(NH4)2SO4 + 24H2O米吐尔(NH4)3PO4·12MoO3 ───→ (MoO2·4MoO3)2·H3PO42、试剂：（1）磷试剂Ⅰ(钼酸铵)配制：在500ml烧杯中加入57.5ml纯化水,然后向烧杯中慢慢加入85.7ml浓硫酸（严禁将水倒入酸中,防止硫酸溅出烧伤皮肤），边加边搅拌,放冷;称取5.72g钼酸铵置于100ml 烧杯中,加入57ml纯化水使溶解将该溶液慢慢加入上述硫酸溶液中,搅拌均匀。
冷却后, 转移至200ml棕色试剂瓶中,放入冰箱储备待用。
有效期：3个月。
（2）磷试剂Ⅱ(米吐尔)( N-甲基-对氨基苯酚硫酸盐)配制：称取1.70g米吐尔置于100ml烧杯中，再加入1.0g亚硫酸钠，用50ml纯化水溶解; 称取44.0g亚硫酸氢钠置于250ml烧杯中，加入150ml纯化水充分搅拌使溶解。
再将上述米吐尔-亚硫酸氢钠溶液转移至此烧杯中，充分混合均匀。
将混合液转移至200ml棕色试剂瓶中，放入冰箱储备待用。
有效期：3个月。
（3）10%三氯醋酸溶液配制：称取100g三氯醋酸置于1000ml烧杯中, 加入900ml纯化水使溶解，搅拌均匀后，转移至1000ml棕色试剂瓶中待用。
三氯醋酸有强腐蚀性，配制时应戴好防护手套避免皮肤烧伤。
有效期：3个月。
3、磷标准曲线的制作:精密称取分析纯磷酸二氢钾0.4394g(±0.0005g)于1000ml容量瓶中，加入0.10mol/l 硫酸20.0ml溶解，加水至刻度,摇匀。
精密吸取5.00ml于50ml容量瓶中，定容，摇匀，即得10.00ug/ml的磷标准溶液。
1株无机磷细菌筛选及溶磷能力的测定
０ ． ８ ％的生理盐水洗脱 ， 并且 于 ４ Ｏ℃活化 ４ ８ ｈ后 ， 再 把溶磷 细菌稀 释涂 布于平板上 ， ４ ０℃培养 ５ ｄ ， 每天定 时测量溶磷 圈 直径与 菌落直 径 ， 计 算两者 比值 ， 初步定 性该 菌溶磷 能力大 小。（ ２ ） 液态 摇瓶 有 效磷 法 ： 取 １ ｍ Ｌ溶 磷 细菌 菌悬 液 （ 约 １ ０ 。 个／ ｍＬ ） ， 分别 接人 到含 Ｃ ａ ３ （ Ｐ Ｏ ） ： 和磷矿粉 的 １ ０ ０ｍ Ｌ液 态发酵培养基 中， ４ ０℃ １ ６ ０ ｒ ／ ａ ｒ ｉ ｎ下连续培养 ７ ｄ 。定时将发
酵液经 １ ０ ０ ０ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 离心 １ ０ ｍ ｉ ｎ ， 取上清 液测定 有效磷 的含
壤中接种 溶磷 菌 ， 能够显著改善作物的磷 素营养 ， 提高作物的 产量 ｊ 。因此 ， 开 展溶磷 微生 物 的筛选 ， 深 挖土 壤 内部磷 资 源潜 力 ， 可大大减少磷肥施 入量 ， 减少污染 ， 有利于农业 的高
１ ． ２ ． ４ 测定方法 １ ． ２ ． ５ 数据分析 ｌ ８进行统计分析。
２ 结果 与分 析
１ ． １ ． １ 菌种来源 １ ． １ ． ２ 培 养基
释放 返 回土壤 溶 液 中， 能 够担 当此 任务 的只有 溶磷 微生 物 （ ｐ ｈ ｏ ｓ ｐ ｈ ａ ｔ ｅ—ｓ ｏ ｌ ｕ ｂ ｉ ｌ ｉ ｚ ｉ ｎ ｇ ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｏ ｒ ｇ ａ ｎ ｉ ｓ ｍｓ ， Ｐ Ｓ Ｍｓ ） ， 溶磷 微 生 物
能将 难溶性磷 酸盐 转化为 植物 可吸 收利用 的形 态 。向土
透明圈。有则 挑取 有 透 明圈 的菌 落 ， 进一 步 划线 分 离 至纯 培养 。 １ ． ２ ． ２ 形态特征 记 录平板菌落形态特征和镜检特征。
1株溶磷细菌的筛选及其溶磷物质分析
1株溶磷细菌的筛选及其溶磷物质分析张淑红【摘要】为了获得高效溶磷菌并了解其溶磷机制,从生活垃圾堆积地采集土样,筛选出10株对卵磷脂和磷酸钙均有溶解能力的菌株,通过液体摇瓶复筛,得到1株高效兼溶磷酸钙和卵磷脂的溶磷菌LY8,培养6d后2种难溶磷发酵液中水溶性磷质量浓度分别达到647.8 mg/L和26.6 mg/L.结合生理生化特征和16S rDNA序列分析,初步鉴定其为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium).在不同难溶性磷源条件下LY8分泌的主要溶磷物质不同,对于无机难溶磷磷酸钙,LY8菌株分泌的主要溶磷物质是有机酸,其次是磷酸酶;而对于有机难溶磷卵磷脂,LY8菌株分泌的主要溶磷物质是磷酸酶,且其分泌的有机酸、蛋白质和多糖可能也具有一定的溶磷效果.【期刊名称】《河南农业科学》【年(卷),期】2014(043)008【总页数】4页(P64-67)【关键词】溶磷菌;磷酸钙;卵磷脂;溶磷物质;巨大芽孢杆菌【作者】张淑红【作者单位】唐山师范学院生命科学系,河北唐山063000【正文语种】中文【中图分类】S154.39溶磷菌在转化土壤难溶磷、提高磷肥利用率、促进作物生长方面都具有显著作用，而不同溶磷菌对不同形态难溶磷的溶解能力存在差异[1-3]。
溶解难溶性磷酸盐的细菌主要有芽孢杆菌(Bacillus)、假单胞菌(Pseudomonas)、克雷伯氏菌(Klebsiella)、节杆菌(Arthrobacter)、沙雷氏菌(Serratia)、肠杆菌(Enterobacter)和伯克霍尔德氏菌(Burkholderia)等，溶磷量最高可达643.2 mg/L；而溶解有机磷的细菌主要有芽孢杆菌(Bacillus)，溶磷量达到26.5 mg/L[4]。
溶磷菌溶磷机制各不相同，大部分溶磷菌以分泌物溶磷，其胞外分泌物中含有多种溶磷物质，近年来的研究主要集中在有机酸和磷酸酶方面[5-7]。
研究表明，大部分溶磷微生物的胞外分泌物中含有大量有机酸，所以一致认为有机酸是主要的溶磷物质[8-10]；另外微生物生长繁殖过程中，分泌出酸性磷酸酶和碱性磷酸酶，这些磷酸酶能够不断地将环境中的有机磷转化为无机磷[11]。
磷酸氢钙中枸溶磷含量测定
按照试剂的保存要求（避光、塑料瓶、阴凉等条件限制）存放。
注意试剂的保存期限。
中性柠檬酸铵溶液如长期使用，用前校正其酸度。
提取
时间
置于（65±1）℃的水浴中保温1h，时常打开瓶塞。
摇动间隔
每隔15 min摇动一次，每次摇动约30s。
定容
冷却至室温后定容，摇匀。
过滤
干过滤
初始30ml滤液须弃去。
玻璃砂坩埚
硝酸溶液
AR
1+1水溶液
硝酸与水等体积混合
喹钼柠酮溶液
AR
a)称取70g钼酸钠溶解于150ml水中。
b)称取60g柠檬酸溶解于150ml水中和85ml硝酸中。
c)在搅拌下将溶液a倒入溶液b中。
d)在100ml水中加入35ml硝酸和5ml喹啉。
e)将溶液d倒入溶液c中，放置24h后，用坩埚式过滤器过滤，再加入280ml丙酮，用水稀释至1000ml，混匀。并贮存于聚乙烯瓶中。
重复性：每个试样取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果，平行测定结果的绝对差值不大于0.1%。
误差来源及分析
误差来源
控制方案
样品
抽样
取样要有代表性、真实性。
制备
样品要有一定数量，充分混匀，用四分法缩分。
试剂
试剂规格
按照标准要求选购一定规格的试剂，控制杂质量。
配制方法
区分精确配制和粗配制，按照GB/T601，GB/T602，GB/T603的要求配制和标定。
四、实验内容
序号
实验项目
操作内容
注意事项
1
样品制备
选取有代表性的样品用四分法缩减至200g，置于密闭样品袋中，阴凉处保存，备用。
事先将洗干净的4号玻璃砂坩埚放进干燥箱中180度烘45分钟，冷却，称重，记录玻璃砂坩埚重量。
发酵液中溶磷检测规程
发酵液中溶磷检测规程1. 规程内容1.1 原理磷酸或磷酸盐的酸性溶液中与钼酸铵作用生成黄色磷钼酸铵，再用适当的还原剂还原成钼兰进行比色。
1.2 试剂与仪器刻度试管:25ml容量瓶:1000ml 100ml移液管:5ml 1ml吸量管:25ml 5ml风光光度计钼酸铵溶液配制:称钼酸铵6g溶于60ml水中(若混过滤)倒入90mlCP浓硫酸与60ml水，冷却摇匀后，贮存于棕色试剂瓶中备用。
米土尔(硫酸对甲氨基酚)试剂:称取米土尔0.2g与无水亚硫酸钠1g溶于200ml 蒸馏水，待完全溶解后，再加入焦性亚硫酸钠(偏重亚硫酸钠)40g(或酸性亚硫酸钠43.8g)待完全溶解后过滤，滤液贮存于棕色试剂瓶中避光冷藏(有效期一个月左右)。
10%三氯醋酸:取50g三氯醋酸倒入500ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
1.3 磷标准曲线绘制:精确称取于105?干燥至恒重的磷酸二氢钾 0.4394g，用少量水溶解于1000ml容量瓶中，加入0.05mol/L硫酸20ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀则每毫升含磷100r(此为储备液)，再精确吸取5ml100r/ml溶液于100ml容量瓶中，加0.05mol/L硫酸20ml，用蒸馏水稀释至刻度摇匀，则此溶液中每毫升含磷5r，用刻度吸管分别吸取5r/ml的溶液1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5ml于25ml刻度试管中加入钼酸铵溶液及米土尔溶液各1ml，加蒸馏水至10ml，摇匀后再沸水中煮沸30min，取出冷却至室温，准确以蒸馏水补足至10ml摇匀，在650nm波长处比色，另用试剂作空白对照，以浓度为纵坐标，光密度为横坐标做一曲线，列表备用。
1.4 测定方法:吸取发酵滤液2.5ml于50ml容量瓶中，加入10%三氯醋酸溶液5ml，放置片刻，在沸水中加热10min左右，使蛋白凝固，冷却后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀后过滤，吸取滤液1ml于25ml刻度管中，加入钼酸铵溶液及米土尔溶液各1ml加水至10ml摇匀后，在沸水浴中煮沸30min，取出冷却至室温，准确以蒸馏水补足至10ml摇匀，在650nm波长处比色，用试剂为空白，查表乘以稀释倍数(20倍)。
磷酸溶解度
磷酸溶解度磷酸溶解度是指一定浓度的磷酸溶液在特定温度下溶解的能力。
在化学中，磷酸溶解度是重要的指标，因为它可以揭示某种物质在特定条件下的溶解性，甚至可以反映出某种物质的结构性质、生命现象和化学反应。
由于磷酸溶解度的重要性，它也被广泛应用于农业、制药和食品等多个领域中。
一方面，它可以检测植物生长环境中的磷酸浓度，从而对植物的生长发育情况进行评估。
另一方面，它还可以作为一种指标，用来检测特定药物的有效浓度。
此外，由于磷酸溶解度可以反映出磷酸钙的结晶性，因此它也可以用来检测食品中磷酸钙的相对浓度，以获得良好的质量控制效果。
磷酸溶解度测定方法磷酸溶解度可以通过多种测定方法进行测定，现在最常用的测定方法有两种，一种是通过溶液浓度测定，另一种是通过色谱或电化学方法测定。
首先，以溶液浓度测定的方法来计算磷酸的溶解度，需要将磷酸溶液和一定的水加入容器中，然后以一定的温度进行搅拌，直至所有磷酸完全溶解，然后使用吸光度仪来测定溶液的浓度，最后再根据溶液浓度计算出磷酸的溶解度。
其次，以色谱的方法来测定磷酸的溶解度，需要利用高效液相色谱仪来分析溶液中的磷酸，由此可以计算出磷酸的溶解度。
此外，还可以利用电化学的方法来计算磷酸的溶解度，它通常使用电位探针去测量溶液中的磷酸含量，从而可以得出磷酸的溶解度。
磷酸溶解度的应用磷酸溶解度也被广泛应用于多个领域中，磷酸溶解度可以用来检测植物生长环境中的磷酸浓度，从而评估植物的生长发育状况；同时，它可以用来检测特定药物的有效浓度。
此外，它还可以检测食品中磷酸钙的相对浓度，从而获得良好的质量控制效果。
磷酸溶解度的控制磷酸溶解度受到温度、pH值和有机物浓度的影响，因此在使用磷酸溶液时，应注意温度控制，应尽可能在室温（15 ~ 25℃）下进行操作；同时，应注意控制pH值，使其保持在较低的水平，以减少空气氧化的影响；此外，也应注意控制有机物的浓度，以提高磷酸的溶解度。
总结磷酸溶解度是指一定浓度的磷酸溶液在特定温度下溶解的能力，是重要的指标，可以反映出物质的结构性质、生命现象和化学反应。
溶磷检测
1、溶磷检测：基本原理：正磷酸盐在酸性溶液中与钼酸铵作用生成磷钼酸铵,再用抗坏血酸（Vc ）使之还原成钼蓝,其反应如下:2H 3PO 4+24（NH 4）2MoO 4+21H 2SO 4+2H 2O 2（NH 4）3PO 4·12MoO 3·2H 2O+21（NH 4）2SO 4+24H 2O2（NH 4）3PO 4·12MoO 3·2H 2O+10H 2O+还原剂（Vc ） 2{（NH 4）3·（H 2O ）4·[P （Mo 2O 7）]}（铜盐） 制定磷标准曲线取一定量KH 2PO 4（A.R ）置于称量瓶内，105℃烘箱中干燥3个小时，精确称量0.439g KH 2PO 4，加0.1NH 2SO 420ml ，溶解后，稀释至100ml 容量瓶中，得1000μg/ml 磷标准溶液。
吸取上述标准液1ml 于100ml 容量瓶中，用蒸馏水定容，得10μg/ml 磷标准溶液。
按下表依次在各管内加入不同量的磷酸盐标准溶液和试剂，充分摇匀后于45℃水浴20分钟，冷却后，于660nm 波长测量OD 值，计算回归方程。
表3-1 磷标准溶液配制表Table 3-1 Form for preparing phosphorus standard solution管号 10 μg/ml 磷标准溶液（ml ） 含磷量（μg ）蒸馏水（ml ） 定磷试剂（ml ） 水浴时间（min ）OD 6601 0.0 0 3.0 3.0 45℃水浴保温20min2 0.5 5 2.5 3.03 1.0 10 2.0 3.04 1.5 15 1.5 3.0 5 2.0 20 1.0 3.06 2.5 25 0.5 3.07 3.0300.03.0测定发酵液样品取发酵上清液1ml （培养基灭菌前灭菌后样取0.2 ml ）至试管中，加2 ml （2.8 ml ）蒸馏水，再加3 ml 定磷试剂，按标准曲线同样步骤操作，以空白作对照，660nm 波长测OD 值。
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1、溶磷检测：
基本原理：正磷酸盐在酸性溶液中与钼酸铵作用生成磷钼酸铵,再用抗坏血酸（Vc ）使之还原成钼蓝,其反应如下:
2H 3PO 4+24（NH 4）2MoO 4+21H 2SO 4+2H 2O 2（NH 4）3PO 4·12MoO 3·2H 2O+21（NH 4）2SO 4+24H 2O
2（NH 4）3PO 4·12MoO 3·2H 2O+10H 2O+还原剂（Vc ） 2{（NH 4）3·（H 2O ）4·[P （Mo 2O 7）]}（铜盐） 制定磷标准曲线
取一定量KH 2PO 4（A.R ）置于称量瓶内，105℃烘箱中干燥3个小时，精确称量0.439g KH 2PO 4，加0.1NH 2SO 420ml ，溶解后，稀释至100ml 容量瓶中，得1000μg/ml 磷标准溶液。
吸取上述标准液1ml 于100ml 容量瓶中，用蒸馏水定容，得10μg/ml 磷标准溶液。
按下表依次在各管内加入不同量的磷酸盐标准溶液和试剂，充分摇匀后于45℃水浴20分钟，冷却后，于660nm 波长测量OD 值，计算回归方程。
表3-1 磷标准溶液配制表
Table 3-1 Form for preparing phosphorus standard solution
管号 10 μg/ml 磷标
准溶液（ml ） 含磷量（μg ）
蒸馏水（ml ） 定磷试剂（ml ） 水浴时间（min ）
OD 660
1 0.0 0 3.0 3.0 45℃水浴保温20min
2 0.5 5 2.5 3.0
3 1.0 10 2.0 3.0
4 1.
5 15 1.5 3.0 5 2.0 20 1.0 3.0
6 2.5 25 0.5 3.0
7 3.0
30
0.0
3.0
测定发酵液样品
取发酵上清液1ml （培养基灭菌前灭菌后样取0.2 ml ）至试管中，加2 ml （2.8 ml ）蒸馏水，再加3 ml 定磷试剂，按标准曲线同样步骤操作，以空白作对照，660nm 波长测OD 值。
根据磷标准曲线计算发酵液溶磷含量（µg/ml ）。
（取样品0.2 ml 时，以上数据乘5倍）
定磷试剂的配制
6NH 2SO 4:水:2.5%钼酸铵：10%抗坏血酸=1:2:1:1（V/V ）
此试剂要现配现用，配好后试剂应呈黄绿色或黄色，如呈棕黄色或深绿色倒去。
（2.5%钼酸铵和10%抗坏血酸置4℃冰箱内保存）
2、发酵液氨基氮的测定方法
测定氨基氮
取发酵上清液2.5ml至250ml三角瓶中，加蒸馏水50ml，甲基红指示剂2滴，1M HCl 1-2滴，调节溶液至红色，静置5分钟，再用0.037M NaOH调节溶液至橙色（体积不计），使成中性。
加12%中性甲醛溶液10ml（每次用之前用NaOH调至微红色，酚酞作为指示剂），摇匀静置10分钟。
加1%酚酞指示剂1ml，用0.037M NaOH标准溶液滴定至微红色为终点。
氨基氮（mg/100ml）= M NaOH×V NaOH×14.01×40。
M NaOH：NaOH物质的量浓度（mol/L）V NaOH：消耗的NaOH体积数（ml）氨氮测定试剂：
0.1%甲基红指示剂：称取0.1g甲基红，溶于100ml 95%乙醇中，摇匀即可。
0.03569M NaOH：量取1M NaOH 357ml于10000 ml试剂瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀标定。
标定：精确称取经研细并在105℃烘烤至恒重的G.R临苯二甲酸氢钾0.15——0.17克至三角瓶中,加蒸馏水50 ml溶解后，以酚酞为指示剂，以NaOH滴定至红色，30秒内不褪色为准。
计算：NaOH浓度（mol/L）=W KHC8H804 /（V NaOH*0.2042）
W KHC8H804：临苯二甲酸氢钾质量（g）V NaOH：NaOH消耗体积数（ml）0.2042为临苯二甲酸氢钾的毫克当量。
中性甲醛：用36-40%甲醛加2倍水稀释（如浑浊需过滤），临用前用NaOH调至微红色（酚酞为指示剂）。
0.5%酚酞：称取2.5g酚酞溶于500ml 95%乙醇中，摇匀。