流式细胞仪

流式细胞仪论文：流式细胞仪的使用与维护

流式细胞仪论文：流式细胞仪的使用与维护摘要：介绍了流式细胞仪的结构、工作原理及软件的主要功能，在仪器的维护保养方面进行了详细地叙述。结合笔者工作实际，介绍了用流式细胞仪对鸡外周血淋巴细胞亚群分析结果。 关键词：流式细胞仪；流动室；细胞分选系统；淋巴细胞 use and maintenance of flow cytometry wang shujing, hao jianmin, bi jianjie, chang zhongle, cui yanshun shandong agricultural university, tai'an, 271018, china abstract: this article describes the structure of flow cytometry, how it works and the main functionality of the software, in the area of maintenance of the instrument are described in detail. in conjunction with our own actual work, the author analyzed the results by flow cytometric peripheral blood lymphocyte subsets in chicken. key words: flow cytometry; mobile office; cell sorting system; lymphocyte

easycyte mini guava流式细胞仪,适用于各种流式细胞学检测分析,如动物、昆虫、酵母、原代培养、转化细胞、悬浮和贴壁细胞以及荧光微球等。采用固态蓝色或绿色激光,四色、三色或两色荧光检测,前向散射检测,可选配侧向散射；有自冲洗系统,保证流动通路畅通。easycyte mini guava 流式细胞仪采用微毛细管流动技术,无需鞘液,特别适合于 传染性危险生物样品的分析,山东农业大学动物疫病防治重点实验室主要用于细胞绝对计数,cd4/cd8细胞计数,免疫细胞分析,细胞标记蛋白表达检测如gfp等。结合笔者多年使用该仪器的工作经验,对流式细胞仪的工作原理、使用与维护介绍如下： 1流式细胞仪的主要构造和工作原理 流式细胞术(flow cytometry,fcm)是20世纪70年代发展起来的高科技,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体,同时具有分析和分选细胞的功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内dna和rna含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析,在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析；能够分类收集(分选)某一亚群细胞,在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。

流式细胞仪技术参数

一、流式细胞仪技术参数 1 工作条件： 1.1 电源要求: 220V (±10%)、50-60HZ 1.2 环境温度:16-30℃ 1.3 湿度：20-80% 2 用途：免疫分析、淋巴细胞亚群分析；细胞周期分析、凋亡分析；感染分析、肿瘤细胞分析；多重细胞因子分析等。 3 技术规格和参数 3.1 激发系统： 3.1.1 激发光源：405nm紫色固态激光器、488nm蓝色固态激光器和640nm红色固态激光器，固定光路，空间立体激发。 3.1.2 激光塑形：自动的多棱镜塑形系统，光斑大小：9x65um椭圆形光斑 3.1.3 流动室规格：180x430μm 3.2 荧光收集和检测 3.2.1 光胶耦合物镜，数值孔径1.2，大面积收集发射荧光。 3.2.2 每一激发激光对应一个独立检测单元，光胶耦合物镜自动分开汇集每一激光激发的发射荧光进入相对应检测单元，避免光谱交叉。 *3.2.3 配备1个独立八角型全反射检测系统、2个独立三角型全反射检测系统 3.2.4 光学检测系统内部采用全反射检测光路系统，荧光信号到达检测器只经过一个长通滤光片，信号能量损失最小。 3.2.5 检测系统依次优先检测易衰减的长波长信号，保证弱信号灵敏度。 *3.2.6 共计12个信号检测器，包括10个光电倍增和和2个散射光探测器。

3.2.7 荧光通道组合：405nm紫色激光器对应3个检测通道，滤光片包括450/50nm、 525/50nm、 605/40 nm；488nm蓝色激光器对应4个检测通道滤光片包括530/30nm、 575/25nm、695/40nm、780/60 nm； 640nm 红色激光器对应3个检测通道，检测滤光片包括：670/30nm、712/21nm、780/60 nm。通道之间最低光谱交叉，滤光片带有智能芯片，直接插拔，自动识别。 *3.2.8 荧光检测灵敏: FITC<100MESF，PE<50MESF(提供英文原版参数)；CFDA检测结果FITC<5MESF，PE<5MESF（提供检测报告）。 *3.3 样本分析速率：>32,000个细胞/秒(提供英文原版参数)。 3.4 变异系数：全峰宽CV<3% *3.5 采用正压上样系统，非注射泵或蠕动泵。样本残留量<0.2%。 3.6 最小样本量：≤30ul 3.7 检测颗粒大小：0.5-50μm 3.8 数字信号处理：18bit动态范围，符合IEEE 32bit浮点分辨率。3.9 脉冲处理系统:能同时分析脉冲信号峰值、脉冲积分（面积）及脉冲宽度,可区分多倍体细胞、粘连细胞。 3.10 可溶性蛋白分析：具备多重可溶性蛋白分析功能，包括：细胞因子、炎症因子、趋化因子等；可达单管数十重分析，包括：多重定量及动力学分析。 *3.11 液流车：独立液流车，避免振动影响仪器主机光路和液流；自动控制所有压力、鞘液、清洗液等，大体积液体储备保证长时间、稳定工作；鞘液桶20L，废液桶10L，清洗液桶5L，关机液桶5L。开关机自动清洗液路，正常状态鞘液消耗<1.10 L/h，待机状态鞘液消耗<1 mL/h。 3.12 配置淋巴细胞亚群自动分析软件，无需手动设置，实现淋巴细胞亚群分型的全自动化。 3.13 主软件：Windows系统，原版专业化流式数据收集及处理软件, 可按用户需求设置条件进行数据分析和报告。

流式细胞术原理及功能介绍

流式细胞术详解 一. 流式细胞术概述 流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)是七十年代发展起来的高科学技术 ,它集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体, 同时具有分析和分选细胞功能。它不仅可测量细胞大小、内部颗粒的性状,还可检测细胞表面和细胞浆抗原、细胞内DNA、RNA含量等,可对群体细胞在单细胞水平上进行分析, 在短时间内检测分析大量细胞,并收集、储存和处理数据,进行多参数定量分析; 能够分类收集(分选)某一亚群细胞,分选纯度＞95%。在血液学、免疫学、肿瘤学、药物学、分子生物学等学科广泛应用。 国内使用的流式细胞仪主要由美国的两个厂家生产:BECKMAN- COULTER公司和Becton-Dickinson公司(简称B-D公司)。流式细胞仪主要有两型:临床型（又称小型机、台式机）和综合型（又称大型机、分析型）。BECKMAN-COULTER公司最新产品为EPICS ALTRA和EPICS XL/XL-MCL, B- D公司最新产品为FACS Vantage和FACS Calibur。EPICS XL/XL-MCL和FACS Calibur是临床型;EPICS ALTRA和 FACS Vantage是综合型，除具备检测分析功能外,还具有细胞分选功能 ,多用于科学研究。 二.流式细胞仪主要技术指标 1．流式细胞仪的分析速度： 一般流式细胞仪每秒检测1000～ 5000个细胞,大型机可达每秒上万个细胞。 2．流式细胞仪的荧光检测灵敏度：一般能测出单个细胞上<600个荧光分子,两个细胞间的荧光差＞5%即可区分。 3．前向角散射（FSC）光检测灵敏度：前向角散射（FSC）反映被测细胞的大小,一般流式细胞仪能够测量到0.2μm～０.5μm。 4．流式细胞仪的分辨率：通常用变异系数CV值来表示，,一般流式细胞仪能够达到<2.0%,这也是测量标本前用荧光微球调整仪器时要求必须达到的。 5．流式细胞仪的分选速度：一般流式细胞仪分选速度＞1000个/秒，分选细胞纯度可达99%以上。 三.流式细胞仪主要构造和工作原理 流动室及液流驱动系统 流式细胞仪主要由以下五部分构成:①流动室及液流驱动系统②激光光源及光束形成系统③光学系统④信 号检测与存储、显示、分析系统⑤细胞分选系统。 流动室（Flow Cell或Flow Chamber）是流式细胞仪的核心部件，流动室由石英玻璃制成，单细胞悬液在细胞流动室里被鞘流液包绕通过流动室内的一定孔径的孔,检测区在该孔的中心，细胞在此与激光垂直相交，在鞘流液约束下细胞成单行排列依次通过激光检测区。流动室里的鞘液流是一种稳定流动，控制鞘液流的装置是在流体力学理论的指导下由一系列压力系统、压力感受器组成，只要调整好鞘液压力和标本管压力, 鞘液流包绕样品流并使样品流保持在液流的轴线方向，能够保证每个细胞通过激光照射区的时间相等，从而使激光激发的荧光信息准确无误。见图12.1流动室示意图。流动室孔径有60μm、100μm、150μm 、250μm等多种，供研究者选择。小型仪器一般固定装置了一定孔径的流动室。 图12.1流动室示意图(采自Coulter Training Guide) 四. 流式细胞仪主要构造和工作原理 激光光源及光束形成系统

流式细胞仪入门

流式细胞仪入门 ----- 秦华 译

目录 前言 第1章综述 第2章液流系统 第3章散射光信号及荧光信号 3.1 散射光信号 3.2 荧光信号 第4章光电系统 4.1 光平台 4.2 光学滤片 4.3 信号探测器 4.4 阀值 第5章数据分析 5.1 数据采集及显示 5.2 设门 5.3 细胞亚群的数据分析 5.4 流式细胞仪其它应用的数据分析第6章分选 6.1 分选 第7章激光器及光路校正 7.1 激光器的工作原理 7.2 光路校正 第8章习题答案

序论 学习仪器的最好方法是操作仪器，然而在理解原理的基础上进行仪器操作无疑会起到事半功倍的作用。 本书介绍了流式细胞仪的基本知识，并从不同角度详尽阐述了各种台式机（FACScan TM，FACSort TM，FACSCalibur TM，和BD LSR）与大型机（FACS Vantage TM，FACSVantage TM SE，和FACStar PLUSTM）之间的不同，且附习题及答案。阅读本书有助于增强读者操作仪器的动手能力和经验。

第一章综述 流式细胞术是一项快速检测分析单个粒子多物理特性的高技术，通常指细胞通过激光束时在液流中的特性，即粒子的大小，密度或是内部结构，以及相对的荧光强度。通过光电系统记录细胞的散射光信号和荧光信号可得知细胞特性。 流式细胞仪主要由三部分组成：流动室和液流系统；光路系统以及电系统。其作用如下： z液流系统：依次传送待测样本中的细胞到激光照射区。 z光路系统：细胞由激光激发，通过光学滤片产生光信号，并传送到相应的探测器。 z电系统：把光信号转换为电信号。对于有分选装置的仪器，电系统可初始化分选条件。 在流式细胞仪中，细胞被传送到液流中的激光照射区。任何存在于悬液中的直径为0.2-150微米的粒子或细胞都适用于流式分析。在实际工作中，用实体组织进行流式细胞分析往往是不可能的，分析之前必须对其进行分解。被液滴包绕的粒子称为细胞液柱，当粒子经过激光照射区时，通过激光激发产生散射光。含有荧光的粒子就会表现出其荧光特性。散射光和荧光由光路系统（相应的透镜，滤片和探测器）收集。分光器和滤光片引导散射光和荧光至相应的探测器，把光信号转换为电信号。 单个粒子通过其表现出的光散射和荧光属性，通过列表模式（List mode）完成数据采集，并对样本中的细胞亚群进行分析。

流式细胞仪的原理和用途

流式细胞仪(FloｗCytometｒｙ) 1 流式细胞仪得概念及其发展历史 1。1 流式细胞仪得基本概念流式细胞仪（flｏw cｙtｏnleｔｒy,FＣM)就是对高速直线流动得细胞或生物微粒进行快速定量测定与分析得仪器，主要包括样品得液流技术、细胞得计数与分选技术,计算机对数据得采集与分析技术等。流式细胞仪以流式细胞术为理论基础，就是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学与计算机等学科知识综合运用得结晶。流式细胞术就是一种自动分析与分选细胞或亚细胞得技术。其特点就是:测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量,即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性得多参数测量,且在统计学上有效。 １。2 流式细胞仪得发展简史最早得流式细胞仪雏形诞生于19３４年，Moｌｄavan提出使悬浮得单个血红细胞流过玻璃毛细管,在亮视野下用显微镜进行计数,并用光电记录装置测量得设想。1953年Crosｌand-Tayｌor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。其后又经过Ｃｏulteｒ、Parｋer ＆ Hoｒst、Kａmentsky、Ｇohde、Fulｗyｌeｒ、Herｚｅｎberｇ等人得不断改进,设计了光电检测设备与细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪得物理连接及多参数数据得记录与分析、开创了细胞得免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上得应用。近２0年来,随着流式细胞仪及其检测技术得日臻完善,人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面得工作,以扩大FＣＭ得应用领域与使用效果。 宋平根得《流式细胞术得原理与应用》就是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述得最为详尽与透彻得中文著作.这本书非常详细地介绍了流式细胞术得历史、结构、原理、技术指标等,例举了其在医学与生物工程中得应用,非常适合从事此方面专业研究得人。由于这本书就是13年前出版得，所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术。此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识得人士来说,这本书太复杂太深奥。谢小梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中得应用。杨蕊概括了流式细胞仪得工作原理,简单提及了流式细胞仪得应用。本文在分析这三篇论著或文章得优缺点后，用比较通俗得语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术必须了解得一些原理,并对目前市场上得主流型号进行了客观得性能概括。 2 流式细胞仪得工作原理与技术指标 2。1 流式细胞仪工作原理除电源外，流式细胞仪主要由四部分组成：流动室与液流系统:激光源与光学系统;光电管与检测系统;计算机与分析系统,其中流动室就是仪器得核心部件。这四大部件共同完成了信号得产生、转换与传输得任务. 流动室与液流系统

流式细胞仪的基本结构

流式细胞仪主要由以下五部分构成：流动室及液流驱动系统；激光光源及光束形成系统：光学系统；信号检测与存储、显示、分析系统；细胞分选系统(图4-3)。 1．流动室和液流系统是流式细胞仪的核心部件。流动室由样品管、鞘液管和喷孔等组成。常用石英等透明、稳定的材料制作。样品管储放样品，单个细胞悬液在液流压力作用下从样品管射出；鞘液由鞘液管从四周流向喷孔，单细胞悬液在细胞流动室里被鞘液包绕通过流动室内的一定孔径的孔。由于鞘液的作用，被检测细胞被限制在液流的轴线上。检测区在该孔的中心，细胞在此与激光垂直相交，在鞘流液约束下细胞啦单行排列依次通过激光检测区。为了保证液流速度稳定。一般限制液流速度小于10 m／s。流动室孔径有60 μm、100μm、150μm、250 μm等多种。 2．激光源和光学系统经特异荧光染色的细胞需要合适的光源照射激发才能发出荧光供收集检测。常用的激光管是氩离子气体激光管，它的发射光波长488nm，此外可配备氦氖离子气体激光管(波长633nm)和(或)紫外激光管。光源的选择主要根据被激发物质的激发光谱而定。氩离子激光器的发射光谱中，绿光 514nm和蓝光488nm的谱线最强，约占总光强的80％；氪离子激光器光谱多集中在可见光部分，以647nm较强。免疫学上使用的一些荧光染料激发光波长在550nm以上，可使用染料激光器。将有机染料作为激光器泵浦的一种成分，可使原激光器的光谱发生改变以适应需要即构成染料激光器。例如用氩离子激光器的绿光泵浦含有Rhodanline 6G水溶液的染料激光器，则可得到550～650nm连续可调的激光，尤在590nm处转换效率最高，约可占到一半。 为使细胞得到均匀照射，并提高分辨率，照射到细胞上的激光光斑直径应和细胞直径相近。因此需将激光光束经透镜会聚。流式细胞仪的光学系统由若干组透镜、小孔、滤光片组成，大致可分为流动室前和流动室后两组。流动室前的光学系统由透镜和小孔组成，透镜和小孔的将激光光源发出的横截面为圆形的激光光束聚

流式细胞仪的简要介绍与注意事项

流式细胞仪的简要介绍与注意事项(流式细胞仪,注意事项) 2014-07-07 00:26:14来源：https://www.360docs.net/doc/8f10971469.html,评论：0我要评论 [流式细胞仪的简要介绍与注意事项(流式细胞仪,注意事项)] 一、流式细胞仪的检测范围1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。[关键词:流式细胞仪注意事项]… ??一、流式细胞仪的检测范围 1．流式细胞仪可以检测细胞结构，包括：细胞大小、细胞粒度、细胞表面面积、核浆比例、DNA含量与细胞周期、R NA 含量、蛋白质含量。 2．流式细胞仪可以检测细胞功能，包括：细胞表面/ 胞浆/ 核的特异性抗原、细胞活性、细胞内细胞因子、酶活性、激素结合位点和细胞受体。 二、流式细胞仪的临床应用 1．流式细胞术在肿瘤学中的应用：流式细胞术可以检测肿瘤细胞增殖周期、检测肿瘤细胞表面标记、癌基因表达产物、进行多药耐药性分析、检测凋亡； 2．流式细胞术在血液学中的应用：检测白血病和淋巴瘤细胞、活化血小板、造血干细胞（CD34+）计数、白血病与淋巴瘤的免疫分型、网织红细胞计数、细胞移植的交叉配型和免疫状态监测； 3．流式细胞术在免疫学中的应用：可以进行淋巴细胞及其亚群分析、淋巴细胞免疫分型、检测细胞因子。 三、流式细胞仪的科研应用 主要有细胞动力学功能研究、环境微生物分析、流式细胞术与分子生物学研究。 四、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一) 直接免疫荧光标记法 取一定量细胞（约1×106细胞/ml），直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应（如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入），孵育20～60分钟后，用PBS（pH7.2 ～7.4）洗1～2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。 (二) 间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液（约1X106细胞/ml），先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原-抗体-抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。 五、质量控制和注意事项 流式细胞仪并非是完全自动化的仪器，准确的实验结果还需要准确的人工技术配合，所以标本制备需要规范，仪器本身亦需要质量控制。

双激光流式细胞仪参数

双激光流式细胞仪参数 一、设备名称、技术参数及功能要求： 1.设备名称 分析型流式细胞仪 2.设备数量：1套 整套设备应包括：液流系统、光学系统、电子系统、数据采集系统，电脑工作站以及分析软件。 3.设备功能 能够进行细胞周期、细胞凋亡、细胞浓度、细胞绝对计数、免疫分型、药物筛选、抗体测定、细胞活性鉴定等细胞全方位分析。 4.工作条件 4.1 电源：220V, 50Hz交流电 4.2 环境温度：5- 50℃ 4.3 相对湿度：30 % -90 % 4.4 运行：可连续运行。 5.主要技术和性能规格要求 5.1技术指标 5.1.1激光光源：双激光，488nm蓝色固态激光器，640nm红色固 态激光器，同时根据用户需要可以定制375nm、405nm、561nm、730nm 激光器。 5.1.3液流系统：采用流体动力学聚焦技术。

5.1.4液流动力系统：微处理器精确控制的双蠕动泵驱动系统 5.1.5荧光检测通道：FL1：533/30nm；FL2：585/40nm；FL3：>670nm；FL4：675/25nm 5.1.6荧光检测系统，光路稳定，即使搬运也无需调整光路 *5.1.7数据数字采集：不用调电压即可实现一个图上6个数量级的数据动态范围同时显示。信号处理系统:24-bit，并且具有1600万道的数值化数据解析度。 5.1.8样本分析速度：≥10,000事件/秒。 *5.1.9流动室直径：≥200um 5.1.10荧光分辨率:<3% CV 5.1.11荧光线性：2±0.05% (CEN) *5.1.12检测器必须为光电倍增管（PMT） 5.1.13散射光分辨率：可成功分辩人外周血中的粒、单、淋细胞5.1.14单个样本事件收集数：≥100万事件/孔。 *5.1.15细胞流速调节模式，共4种速度模式：低速(14μl/min)；中速(35μl/min)；快速(66μl/min)；用户自定义，样品流速设定：10-100μl/min，可在此范围内自由选择。 5.1.16推荐鞘液：经0.2um过滤器过滤的纯水，无需专门鞘液。 5.1.17光路调校：固定免调校光路设计。 5.1.18管路自动清洗功能：具有，维护方便。 5.1.19试剂与耗材：完全开放,使用通用试剂和耗材,可以使用各种类型的管子，至少能用12x75mm、5ml、2ml、1.5ml、0.5m和PCR

自己总结：流式细胞仪的原理和用途

流式细胞仪（Flow Cytometry） 1 流式细胞仪的概念及其发展历史 1．1 流式细胞仪的基本概念流式细胞仪（flow cytonletry，FCM）是对高速直线流动的细胞或生物微粒进行快速定量测定和分析的仪器，主要包括样品的液流技术、细胞的计数和分选技术，计算机对数据的采集和分析技术等。流式细胞仪以流式细胞术为理论基础，是流体力学、激光技术、电子工程学、分子免疫学、细胞荧光化学和计算机等学科知识综合运用的结晶。流式细胞术是一种自动分析和分选细胞或亚细胞的技术。其特点是：测量速度快、被测群体大、可进行多参数测量，即对同一个细胞做有关物理、生物化学特性的多参数测量，且在统计学上有效。 1．2 流式细胞仪的发展简史最早的流式细胞仪雏形诞生于1934年，Moldavan提出使悬浮的单个血红细胞流过玻璃毛细管，在亮视野下用显微镜进行计数，并用光电记录装置测量的设想。1953年Crosland-Taylor根据牛顿流体在圆形管中流动规律设计了流动室。其后又经过Coulter、Parker & Horst、Kamentsky、Gohde、Fulwyler、Herzenberg等人的不断改进，设计了光电检测设备和细胞分选装置、完成了计算机与流式细胞仪的物理连接及多参数数据的记录和分析、开创了细胞的免疫荧光染色及检测技术、推广流式细胞仪在临床上的应用。近20年来，随着流式细胞仪及其检测技术的日臻完善，人们越来越致力于样品制备、细胞标记、软件开发等方面的工作，以扩大FCM的应用领域和使用效果。 宋平根的《流式细胞术的原理和应用》是迄今为止对流式细胞仪及其技术阐述的最为详尽和透彻的中文著作。这本书非常详细地介绍了流式细胞术的历史、结构、原理、技术指标等，例举了其在医学和生物工程中的应用，非常适合从事此方面专业研究的人。由于这本书是13年前出版的，所以基本上没有涉及植物流式细胞仪检测技术。此外对于只需要对流式细胞仪有些基本认识的人士来说，这本书太复杂太深奥。谢小梅主要介绍了流式细胞仪在生物工程中的应用。杨蕊概括了流式细胞仪的工作原理，简单提及了流式细胞仪的应用。本文在分析这三篇论著或文章的优缺点后，用比较通俗的语言介绍了掌握流式细胞仪检测技术必须了解的一些原理，并对目前市场上的主流型号进行了客观的性能概括。 2 流式细胞仪的工作原理和技术指标 2．1 流式细胞仪工作原理除电源外，流式细胞仪主要由四部分组成：流动室和液流系统：激光源和光学系统；光电管和检测系统；计算机和分析系统，其中流动室是仪器的核心部件。这四大部件共同完成了信号的产生、转换和传输的任务。 流动室和液流系统

Partec流式细胞仪

Partec流式细胞仪介绍 德国PARTEC公司成立于1967，是流式细胞仪的制造鼻祖，目前是专业生产制造流式细胞分析产品的跨国公司。 PARTEC公司早在1968年九生产出第一台商用流式细胞仪，凭借数十年的研制经验和众多流式分析的专利技术，德国PARTEC公司在流式细胞分析设备领域，成为世界上著名的、仪器型号、种类全球最齐的流式细胞仪制造商及供应商。 PARTEC公司在全球流式细胞技术领域已取得数十项关键性专利技术。Partec公司生产的CyFlow型流式细胞仪于2004年1月成为世界上首台升上太空的流式细胞仪，进入太空站进行太空领域的研究工作。这不仅表明Partec公司的产品功能强大与全面，它可以胜任任何将在太空开展的相关试验与研究，同时，也证明了其产品的优良性能及可靠的质量。这些都依赖于Partec公司雄厚的实力与先进的科技水平。 Partec 全球第一台商业化流式细胞仪诞生的公司 全球唯一一家专门流式细胞仪系列产品的生产商 CyFlow 全球唯一一台登上太空的流式细胞仪 全球第一台移动便携式流式细胞仪 产品列表

应用领域 CyFlow流式细胞技术已经应用到医疗健康研究、临床诊断，微生物和工业应用以及农业科学、动植物研究和水产研究等领域 医疗保健——免疫学，血液学，病理学，癌症研究，DNA分析 微生物——细胞计数，生物技术和细胞培养死/活细胞分析，毒理学，生物监测，病毒检测 工业应用——食品业质量控制，酵母分析，发酵控制，工艺优化，颗粒计数，粒度分布 农业——倍体分析，植物基因组大小检测，单性生殖监测 细胞计数——真核细胞培养（哺乳动物细胞培养、植物细胞培养），原核细胞培养，血制品白细胞计数，免疫亚型细胞计数，精子计数 细胞功能分析——细胞周期和细胞增殖，细胞活力、死/活细胞计数，细胞凋亡 酿酒业——快速自动化检测，死/活葡萄酒酵母分析和计数 艾滋病毒监测——艾滋病人的后续治疗诊断专用，针对成人和儿童的、准确的、低成本的CD4和CD4％检测 技术优势

最详细的流式细胞仪实验方法

流式细胞仪实验方法 一、实验准备 1．标本制备： 2．最小化非特异性结合： 二、凋亡 1．凋亡的检测方法：网站和其它 2．PI染色法 3．Annexin V 法 4．TUNNEL法 三、细胞因子 1．激活的细胞因子 2．CBA 四、血小板 1．活化 2．活化检测 3．网织血小板 五、红细胞 1．网织红细胞 2．PNH 3．胎儿红细胞 六、肿瘤学 1．DNA 细胞周期 2．蛋白 3．多药耐药 4．微小残留白血病

第一部分标本处理 一、流式细胞术常规检测时的样品制备 (一)直接免疫荧光标记法 取一定量细胞(约1X106细胞／ml)，在每一管中分别加入50μl的HAB，并充分混匀，于室温中静置1分钟以上(),再直接加入连接有荧光素的抗体进行免疫标记反应(如做双标或多标染色，可把几种标记有不同荧光素的抗体同时加入)，。孵育20-60分钟后，用PBS(pH7．2—7．4)洗1-2次，加入缓冲液重悬，上机检测。本方法操作简便，结果准确，易于分析，适用于同一细胞群多参数同时测定。虽然直标抗体试剂成本较高，但减少了间接标记法中较强的非特异荧光的干扰，因此更适用于临床标本的检测。 (二)间接免疫荧光标记法 取一定量的细胞悬液(约1X106细胞／ml)，先加入特异的第一抗体，待反应完全后洗去未结合抗体，再加入荧光标记的第二抗体，生成抗原—抗体—抗抗体复合物，以FCM检测其上标记的荧光素被激发后发出的荧光。本方法费用较低，二抗应用广泛，多用于科研标本的检测。但由于二抗一般为多克隆抗体，特异性较差，非特异性荧光背景较强，易影响实验结果。所以标本制备时应加入阴性或阳性对照。另外，由于间标法步骤较多，增加了细胞的丢失，不适用测定细胞数较少的标本。 二、最小化非特异性结合的方法 1．荧光标记的抗体的浓度应该合适，如果浓度过高，背景会因为非特异性的相互作用的增加而增加。 2．在使用第一抗体之前，将样品与过量的蛋白一起培育，如小牛血清蛋白（BSA），脱脂干奶酪，或来自于同一寄主的正常血清来作为标记的第二抗体。这个步骤通过阻断第一抗体和细胞表面或胞内结构的非特异性的交互作用来降低背景。 3．在使用第一抗体之后，将样品与5%至10%的来自于同一寄主的正常血清和作为标记的第二抗体一起培育。这个步骤会减少不必要的第二抗体与第一抗体、细胞表面或胞内结构之间的交互作用。 通过用来自于同样的样品的血清稀释标记过的抗体可以略过此步骤。此步骤适用于很多方面，但有时候它也会导致已标记的第二抗体和正常血清中的免疫球蛋白的免疫复合体的形成。这种复合体会优先与一些细胞结构进行结合，或者它们最终会导致期望得到的抗体活性的丢失。 4．使用F(ab’)2片段会使背景决定于第一或第二抗体与FC受体的全分子结合。大多数的第二抗体的F(ab’)2片段容易利用。而第一抗体的F(ab’)2片段一般是不能利用或很难制作。因此，在NaN3存在的条件下，将新鲜组织或细胞

流式细胞仪的原理及应用

山西大学研究生学位课程论文（2013 ---- 2014 学年第一学期） 学院（中心、所）：生物技术研究所 专业名称：微生物学 课程名称： 论文题目：流式细胞仪的原理及其应用 授课教师（职称）：崔晓东 研究生姓名：常姣 年级：研一 学号：201323001003 成绩： 评阅日期： 山西大学研究生学院 年月日

流式细胞仪的原理及其应用 姓名常姣专业微生物学 摘要本文简要论述了流式细胞仪( flowcyt ometry, FCM) 的工作原理, 并对其某些科学领域研究中的应用进行阐述, 包括在生物学、免疫学、临床学中的研究应用。 关键词 FMC；生物学；免疫学；临床学 流式细胞仪( fl o w c y to me tr y, F CM) 研制、发展、革新和应用领域的扩展，都是由生物学、生物技术、计算机科学、电子工程学、流体力学、激光技术、分子生物学、有机化学和物理学等多个学科综合发展和应用而实现的。近代流式细胞仪，由于单克隆抗体技术、定量细胞化学和定量荧光细胞化学的应用，使其在生物学、临床医学等众多研究领域的应用愈来愈广泛和重要，尤其在生物学中对细胞周期的动力学分析、细胞因子、细胞凋亡、信号传导、R N A / D N A 的分析、细胞表面受体及特异性抗原的分析等领域发挥着独特作用，具有操作简单、分析精确、重复性好、费用低廉、分析速度快等优点。 1流式细胞仪的构成及工作原理 流式细胞仪主要由液流系统、光学系统、电子系统、分析系统和细胞分选系统五个部分组成。将待测细胞制成单细胞悬液, 经荧光染料染色后加入样品管, 在一定气体压力下待测样品被压入流动室。待测细胞在鞘液的包裹下单行排列, 依次通过检测区, 被荧光染料染色的细胞受到强烈的激光照射后, 产生散射光和荧光信号。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管(PMT) 接收。散射光分为前向角散射(forwardscatter, FSC) 和侧向角散射(sidescatter, SSC) 。前者主要反映被测细胞的大小, 后者主要反映被测细胞的胞质、胞膜、核膜的折射等, 以及细胞内颗粒的性状。光信号通过波长选择通透性滤片后, 经光电倍增管接收后转为电信号, 再经数/模转换器转换为可被计算机识别的数学信号, 以一维直方图或二维点阵图及数据表或三维图形显示出来[1,2]。 流式细胞仪还可以对分析中的目的细胞进行分选, 它是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。流动室的喷嘴上安装有超高频的压电晶体, 可以产生高频振荡, 使液流断裂为均匀的液滴, 待测细胞就包含在液滴之中。将这些液滴充上正或负电荷, 当带电液滴通过电场, 便会在电场的作用下发生偏转, 然后落入相应的收集器中, 从而实现细胞分选[2]。 2流式细胞仪的应用 流式细胞术的应用，简单用一句话概括就是，凡能被荧光分子标记的细胞或微粒均能用流式细胞仪检测。其中细胞生物学领域是流式细胞术在基础研究中应用范围最广泛的领域，因为最初这个技术就是为此目的而设计的。 2.1流式细胞仪在生物学中的应用 流式细胞仪在生物学中的应用越来越广泛,如在细胞生物学、细胞遗传学、分子生物学、神经生物学、微生物学、分子免役学、植物学等等许多生物学基础学科的应用和在细胞凋亡、细胞周期调控、细胞因子及细胞分型等研究中的应用[3]。 2.1.1 对凋亡细胞的分析 细胞凋亡是生物体生长发育过程中出现的正常现象, 在生物体形态构成、正常细胞更替以及维持

流式细胞仪主要技术参数

流式细胞仪主要技术参数 1.光学系统： 1.1*激光配置:配置488nm和638nm两根全固态激光器，激光功率均大于等于 50mW以上； 1.2检测参数：可同时激发和检测6色荧光. 1.3光路设计：固定校准的光路设计，智能监控确保激光稳定工作。光学滤光 片可由用户根据实际应用自行更换，无需专业人员调校； 1.4采用专利的FAPD（Fiber Array Photo Detector）能够达到5倍于传统高 性能PMT的光电转换效率； 1.5检测器电压可以调节，以适应不同特性样品的检测，提高实验灵活性； 1.6光信号收集系统, 能将大视野范围内的光信号准确地传递到接收光路中， 最多可以支持到7个空间独立的激光同时激发的信号收集； 1.7*系统具备进一步升级的能力，最高可升级至3激光13色。 2.分析性能： 2.1*颗粒检测能力：可准确区分0.1um、0.2um和0.3um的细胞或微粒； 2.2*荧光灵敏度：FITC的荧光灵敏度少于30 MESF，PE的荧光灵敏度少于10 MESF； 2.3荧光分辨率：CV<3%（G0/G1期最高峰）； 2.4无需微球的绝对计数功能，在检测的同时即可自动计算样本浓度，结果准 确。 3.电子系统： 3.1信号处理精度：24比特原始信息量； 3.2高达107的线性动态范围，可以将强信号和弱信号都完全显示在一张图上；3.3*支持多色荧光信号共同采集，信号获取速度（上样速度）达到30,000个/ 秒； 3.4荧光补偿：全矩阵荧光补偿，可脱机补偿，离线分析； 4.液路系统： 4.1半自动化上样系统，具有自动混匀和自动清洗功能，降低样本间交叉污染； 4.2液流系统日常维护简单、清洗简便，自带开关机程序；

BDFACSCantoII流式细胞仪参数

流式细胞仪参数 一、总体要求 1 ,仪器为全新整机进口产品，用于基础医学研究兼顾临床检测分析。 ★2，仪器通过中国SFDA认证，提供注册信息，以符合临床的需要。 ★3，江西省内至少有5家同等型号的用户，以方便学术和临床交流，江西省内有制作厂商的售后服务工程师 二、技术参数 1；光学系统 ★( 1)，标准配置两根激光器同时激发6色及以上荧光，第一激光器：488nm蓝色激光器；第二激光器：633n m红色激光器； ★( 2)，可以升级配置405nm紫色激光器 (3)，荧光信号收集方式：采用八角形和三角形的全反射光路设计，先收集波长最长的弱信号(如PE-Cy7)，再收集波长最短的荧光信号(如FITC)，以保证是最高效的荧光信号收集。 (4)，光信号通过光导纤维传输，非空气传输模式，保证光信号在传导过程中的最小能量损失。 (5)，激光光路固化，无需人工调试校正光路 (6)，多激光配置采用空间立体激发，保证多激光同时激发简便易行 (7)，检测方式：180 X430g m矩形石英流动检测室 (8)，仪器具有激光功率监控系统，在操作界面可以随时监控激光的功率和状态是否处于正常情况，确保激光器处于最佳的状态。| 2;检测分析系统 ★( 1)，荧光灵敏度：提供SFDA检测报告，实测值FITCV12MESF PE<11MESF (2 )，样本交叉污染率<0.1% (3)，最小样本量W 50 g L，适合微量样本和稀有样本的检测(如婴幼儿血液)。 ★( 4)，样本流速范围：10-120g L/分钟 ★( 5)，最大检测颗粒直径为50 (6)，具备单管手动进样和全自动进样两种模式，两种模式独立并存，并可自由切换。 3;信号处理系统 ★( 1),电子系统采用高达32比特的浮点运算，电子死时间为0，以最大程度保证数据检测精度和分辨率。 (2)，最大数据储存量超过10的20次方，确保检测数据的完整和准确。

流式细胞仪主要技术参数

流式细胞仪主要技术参数： 1.光学系统： 1.1激光器配置:配置488nm ,638nm和405nm固体激光器，功率均≥50mw，激光功率可由 软件实时监控，空间独立排列 1.2▲检测通道设置：488nm激光可激发五色荧光，638nm激光可激发三色荧光， 405nm 激光可激发五色荧光，共13色荧光通道，以及前向角散射光检测通道（FSC）和侧向角散射光检测通道(SSC)。 1.3光路设计：固定校准的光路设计，每根激光间信号独立传播。用户可自行安装开机， 无需专业人员调校 1.4采用最新的的FAPD（Fiber Array Photo Detector）检测器，能够达到5倍于传统高 性能PMT的光电转换效率 2.分析性能： 2.1 ▲荧光灵敏度：FITC的荧光灵敏度≤30 MESF，PE的荧光灵敏度≤10 MESF 2.2 荧光分辨率：CV≤2%（G0/G1期最高峰） 3.电子系统： 3.1 信号处理精度：24比特（16,777,21道）数字信号精度 3.2 高达107的线性动态范围，可以将高信号和低信号都完全显示在一张图上 3.3 ▲支持多色荧光信号共同采集，15个参数检测时，信号获取速度（上样速度）达到30,000个/秒以上 4.液路系统： 4.1自动化上样系统，具有自动混匀和内外管壁自动清洗功能，降低样本间交叉污染 4.2可支持多种常用的进样管，如5 mL的聚苯乙烯和聚丙烯流式管,1.5 mL 和 2 mL EP管4.3内置自动化的液流系统维护程序，例如开关机程序、启动（初始化）、每日清洗、排气 泡、反冲等全部由自动软件控制。 5.软件功能： 5.1操作系统：Window 7或以上版本 5.2▲支持中英文操作界面，全部采用图形化参数调节 5.3全自动质控程序：内置的质控程序自动检测仪器配置，激光器功率、激光延迟、每个 通道的rCV值、增益值和平均荧光强度等

流式细胞仪技术参数

流式细胞仪技术参数 一、工作条件 1、环境温度：10-30℃； 2、相对湿度：15-80%； 3、工作电压：220V.50Hz。 二、技术指标 1、激光：488nm蓝色激光器，激光器功率≥50wm。可升级加配638nm、405nm激光器。激光器为全固态，持续非脉冲激发。 2、检测参数：前向散射光、侧向散射光、可以实现5色荧光的同时检测； 3、光路系统：固定光路系统，不用每天调试； 4、荧光检测敏感度：<30分子（FITC）/细胞； 5、全峰宽变异系数:CV<3%； 6、检测颗粒大小: 至少达到0.5um(min)-50um（max）； 7、样本间自动清洗，携带污染率≤1.0% 8、有国家SFDA注册证，仪器同厂家计数微球试剂有SFDA 注册证，可用于CD4绝对计数 9、分析软件：全套分析软件，能终身免费升级； 三、含自动进样器 1、可用于流式细胞仪的自动上样系统； 2、结合工作站电脑中预装的“工作表管理软件”和“自动进样管理软件”，仪器系统可自动完成数据的收集与分析工作；

3、自动进样系统包含一个进样抽屉、电路模块、遥控按键和可容纳32以上个样本管的旋转样本盘。 四、基本配置 1、流式细胞仪主机； 2、全套分析软件； 3、配置电脑：内存≥4 GB，硬盘≥256 GB独立显卡，windows 操作系统，要求与设备相匹配，并可处理存储充足的实验数据；23英寸液晶显示器，附彩色打印机1台； 5、进口微量移液器一套（4只）。 6、稳压电源和变压器；血液混匀器一台 7、技术资料：仪器全套电路图及中文操作手册、中华人民共和国医疗器械注册证； 8、人员培训与技术支持：负责装机与人员培训，享受技术与维修服务。包修一年，终身保修。三年内免费调试校准。

实用流式细胞图

第一章流式细胞仪的结构和原理 第1节流式细胞术发展史 纵观历史，几乎没有哪一门科学技术象流式细胞术这样凝结了众多不同学术背景、不同科研领域科学家的心血。从流式细胞术的发明、改进、革新，到今天在各个领域应用的拓展，每一步都是诸如生物学、生物技术、计算机科学、流体力学、激光技术、高等数学、临床医学、分子生物学、有机化学和生物物理学等学科知识综合运用的结晶。现代流式细胞术更是由于结合了单克隆抗体技术、定量细胞化学技术和定量荧光细胞化学，使其在生物学、临床医学、药物学等等众多研究领域中的应用有了更加突飞猛进的发展。临床流式细胞术发展趋势可归纳为：①流式细胞仪从单纯大型仪器发展为适应各种实际应用的便携式、台式、高分辨率、高质量分选的研究型流式细胞仪；②对流式细胞术检测荧光参数，从采用荧光单色、双色分析发展为多色分析，目前最多可同时检测15 种荧光信号；③从检测参数的相对定量发展为绝对定量；④从检测参数的手动人工分析发展为计算机软件的自动分析；⑤所采用的荧光试剂，从非配套试剂发展为配套的试剂盒试剂。而这一切，就要求我们流式细胞仪使用者和科研人员一定要不断地有意识地学习上述各门学科知识，只有这样才能更好地将流式细胞术应用到生物医学的临床实践和基础科学研究工作中去。 流式细胞术的发展简史： 1930年 Caspersson 和 Thorell 开始致力于细胞的计数； 1934年 Moldaven 是世界上最早设想使细胞检测自动化的人，他试图用光电仪记录流过一根毛细管的细胞数量； 1936年 Caspersson等引入显微光度术； 1940年 Coons 提出用结合了荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白； 1947年 Guclcer 运用层流和湍流原理研制烟雾微粒计数器； 1949年 Wallace Coulter 提出在悬液中计数粒子的方法并获得专利； 1950年 Caspersson用显微分光光度计的方法在紫外线（UV）和可见光光谱区检测细胞：1953年 Croslannd-Taylor应用分层鞘流原理，成功地设计红细胞光学自动计数器； 1953年Parker和Horst描述一种全血细胞计数器装置，成为流式细胞仪的雏形； 1954年 Beirne和Hutcheon发明光电粒子计数器； 1959年B型Coulter计数器问世； 1965年 Kamemtsky等提出两个设想，一是用分光光计定量细胞成份；二是结合测量值对细胞分类； 1967年 Kamemtsky和Melamed在Moldaven的方法基础上提出细胞分选的方法； 1969年Van Dilla，Fulwyler及其同事们在Los Alamos，NM(即现在的National Flow Cytometry Resource Labs),发明第一台荧光检测细胞计； 1972年 Herzenberg 研制出一个细胞分选器的改进型，能够检测出经荧光标记抗体染色的细胞的较弱的荧光信号； 1975年Kochler和Milstein提出了单克隆抗体技术，为细胞研究中大量的特异的免疫试剂的应用奠定了基础。 从此，大量厂家不断研制生产出各具特色的流式细胞仪，流式细胞术进入了一个空前飞速发展的时代。科学家们、仪器制造商们又纷纷将流式细胞仪的研究焦点转向染料的开发、细胞的制备方法和为提高电子信号的处理能力上来。进入21 世纪，流式细胞术作为一门生