GE SDS marker kit说明书

LMW-SDS marker kit (17-0446-01)

SDS低分子量标准试剂盒

SDS低分子量标准试剂盒是由六种高纯度的已鉴定蛋白(分子量：14,400-97,000)的干粉混合物组成，用于SDS－PAGE电泳中分子量的测定。通过比较待测蛋白和试剂盒中已知分子量蛋白的电泳迁移率，推出未知蛋白的分子量。每瓶含有 576μg 蛋白混合物。该试剂盒储存于2－8°C 。

SDS 低分子量标准 (14 000?97 000)

蛋白

分子量 来源 量（ug) Phosphorylase b 97 000 rabbit muscle 67 Albumin 66 000 bovine serum 83 Ovalbumin 45 000 chicken egg white 147 Carbonic anhydrase 30 000 bovine erythrocyte

83 Trypsin inhibitor 20 100 soybean 80 α-Lactalbumin

14 400

bovine milk

116

两倍稀释后每个泳道上样3ul，采用自制的15％T，2.7%C凝胶在SE260电泳槽上20mA恒流电泳1小时55分钟,考染结果。

1. 重溶：

按下述方法直接重溶，六种标准蛋白将溶于25％蔗糖溶液中，所以样品缓冲液中不必加入密度增强剂。为了更好的重复性，避免反复冻溶蛋白溶液，最好将其分装，于-80oC可保存3个月。

考马斯亮兰染色：

对于Laemmli 胶,每支瓶加入 200 μl标准的1x样品缓冲液[0.0625 M Tris-HCl,2% SDS,10% (v/v) 甘油(可选的),0.1 M DTT 和 0.01% 溴酚蓝,pH 6.8]。

对于 PhastGel T M , ExcelGel T M 和 CleanGel T M 预制胶，每支瓶加入 200μl[10 mM Tris-HCl,2% SDS, 0.1 M DTT,0.01% 溴酚蓝和 1 mM EDTA, pH 8.0]。

银染：

像上述考染一样，每支瓶加入200ul相应的溶液，然后用1x样品缓冲液稀释50倍。

2.蛋白变性

将重溶的蛋白溶液于 95–100°C 加热 5 分钟。

3. 上样

从表中选择合适的上样量：

凝胶类型

上样量（ul)

小型垂直电泳（8 x 10cm) 1-8 标准垂直电泳（14x16cm)

2-8 Multiphor II 水平电泳 1-3 PhastSystem 水平电泳

0.3-4