siRNA转染常见问题和解答

1. RNA与转染试剂比例不佳

由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。

2. 细胞密度不佳

调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高。由于siRNA沉默时效性的影响，转染后48小时才能进行进行qRT-PCR检测，转染后48-72小时才能进行蛋白检测。如果转染时铺板密度较高，细胞一方面转染效果不理想，直接影响沉默效果和数据可靠性，另一方面，48小时甚至更长时间后，沉默检测最佳点时，过于密集的细胞将影响细胞状态，从而影响实验结果。

3. RNA效率不高

选择最优RNA，并采用已知高效的RNA做对照。siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA，siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。

4.转染试剂不合适

选择专门针对siRNA转染的试剂，如Entranster试剂。

siRNA细胞转染实验操作指南

siRNA细胞转染实验操作指南 siRNA产品的最佳工作浓度、转染后检测时间因不同的细胞类型和研究目的而异。一般推荐的siRNA工作浓度为50nM，检测时间为转染后24~72h。可以通过设置时间梯度和浓度梯度进行组合实验来选择最优的siRNA工作浓度和检测时间。由于siRNA过量会对细胞产生毒性，实验建议的siRNA 工作浓度优化的范围为5~100nM。下面以Lipofectamine 2000转染24孔板的293T细胞为例，选取50nM的siRNA工作浓度，介绍siRNA转染细胞的操作步骤。若使用其他的转染试剂，请参照对应的产品说明书进行操作。 1.在转染前一天，按1×105~5×105个/孔的量将细胞接种于不含抗生素的完全培养基中，使次日转染时细胞融合度30-50%为宜。接种时尽量保证每孔细胞的接种数量一致，使细胞均匀地平铺在生长表面。注意:降低转染时的细胞密度可延长转染和收样的时间间隔，避免细胞过度生长对实验结果造成影响。可根据细胞特性和实验目的等，调整接种时的细胞密度。 2.每个待转染的细胞样品（每个培养孔），按以下体系配置转染所需的siRNA-Lipofectamine 2000复合物: （1）配制稀释液A:取25pmol siRNA于50ul Opti-MEM无血清培养基中稀释，轻轻混匀。（*siRNA的用量计算参照表1）（2）配制稀释液B:使用前先将Lipofectamine 2000轻轻混匀，取出1ul于50ul Opti-MEM无血清培养基中稀释，轻轻混匀，室温下孵育5分钟。注意孵育时间不能超过25min。（3）孵育完成后，将稀释液A与B轻轻混匀得到siRNA-Lipofectamine 2000复合物，在室温下孵育20分钟。此时溶液可能会浑浊，属于正常现象。表1 不同细胞培养板siRNA 转染用量参考表 3.将孵育好的siRNA-Lipofectamine 2000复合物分别加到对应的细胞孔中，轻轻混匀。注意：转染前无需更换新鲜培养基，直接将复合物加到原细胞培养基中即可。如有需要，也可根据情况更换培养基优化该步骤。 4.如果需要进行其他特殊处理，如加药等，可在此时进行。 5.将细胞培养板置于37℃的CO2培养箱中培养24-72h。具体培养时间根据细胞生长特性、实验目的进行调整。注意：加入siRNA-Lipofectamine 2000复合物后一般无需更换培养基，但若脂质体类转染试剂对细胞毒性较大，可根据细胞的状态，在转染4-6小时后更换培养基。 6.进行后续总RNA提取、蛋白提取、细胞活性分析等实验。

常见问题解答

一．“喝了一辈子自来水，活的很好”。有必要安装水机吗？答：人的疾病有一个累计的过程。喝了一辈子自来水，现在没生病，不等于明天不生病。几十年前江河湖畔清澄见底，自来水的水质就好。现在的自来水水源已存在再次污染的状态，失去了原始的功能，如不进行净化、消毒处理是不能作为生活饮用水的，所以水厂在净化杀菌过程中施加了氯气。氯气和自来水中的有机物发生化学反应生成三卤甲烷，三卤甲烷是世界卫生组织公认的强致癌物，所以家庭想要喝好水，必须对自来水进行净化处理，安装一台合适的净水机，应该是一个不错的选择。二．水中的矿物质可以从食物中摄取吗？答：人体摄取矿物质及微量元素的主要途径是食物和水。健康七大营养素中，水被排在首位，可见它的重要性。水对人体的生理功能已在我们的手册里有详细说明。另外，水中的矿物质锶可以软化心脑血管，预防高血压、冠心病。硒元素能抑制癌细胞的生成，清除血管中的有害物质等等。而这些矿物质在食物中很难摄取。三．水的溶解性总固体含量越低越好吗？答：溶解性总固体指水中有益于人体吸收的矿物质和微量元素的总和。用TDS笔测出自来水的数值是包含了有害于人体吸收的重金属等其他物质。测出纯净水的数值是15mg/L以下。属于没有骨架没有营养的软水。西藏冰川水的小瓶装在超市卖6.2元/瓶。标明的溶解性总固含量为482～725mg/L。而这种价位的好水是不适合家庭烧饭煲汤和长期的饮用。2007年7月1日颁布实施的《生活饮用水标准》规定，总固体含量为1000mg/L以下。国内外专家也表明：最理想的溶解性总固体含量为300mg/L左右。所以说水的溶解性总固体含量不是越低越好。四．“RO膜的孔径是万分之一微米，所制出的水是小分子团水”，对吗？答：反渗透膜制出的水不含矿物质和微量元素。而水中的矿物质是水分子团中的骨架，抽去了骨架改变了结构，失去了支撑的水分子会串联成线团，使分子团变大。所以纯净水不是小分子团水，而是大于30以上分子团的大分子团水。这也就解释了为什么在市场上看不到任何一家纯净水厂家有小分子团检测报告。五．为什么万丰水是小分子团水？答：现在国际上公认并且唯一的测定方法是用核磁共振中的氧谱（O - 17）测定水的半幅

电网营业厅无纸化解决方案

电网营业厅无纸化解决方案 2017年3月 1背景随着信息化社会的到来，电子政务和电子商务得到了快速发展，并形成了大量电子文件。在开放的网络信息空间，电子文件是通过计算机网络、服务器或通信线路等进行传输的。电子文件在传送过程中是否已遭窃读、篡改、增删或系冒名传送，传送后是否会出现有人否认收到文件等情况？由此引出了网络办公或网上交易中电子文件的安全性问题。出于确认使用人的身份，确保电子文件的安全保密及完整无缺，保障已进行的各项工作或交易不被推翻的需要，电子签名便应运而生了。电子签名，是指数据电文中以电子形式所含、所附用于识别签名人身份并表明签名人认可其中内容的数据。它是基于数字证书的电子认证技术，通过智通卡、密码或生物测试等多种手段来解决身份认定、信息来源认定、信息完整性和安全性确认等诸多问题，以保证网上办公、电子支付、网上交易、电子合同、网上知识产权等的安全问题的。目前，大规模应用的电子签名技术有两类：一类是数字签章技术，需通过第三方认证机构来确认；另一类是电子化印章技术，通过印章图像电子化、加密等方式实现文件正文与印章的一体化传输。电子签名并非是书面签名的简单数字图像化，它其实是一种电子代码，利用

它收件人便能在网上轻松验证发件人的身份和签名以及文件在传输过程中有无被改变等情况。目前电子签名主要是用于银行的信息交易。而在电力信息化工作流平台中，在流程确认环节也需要签名，本方案试图通过把电子签名信息技术融入到电力行业的信息化中，并在电力行业得到具体的应用。2现状分析 2.1电子化签名在其他公用事业的应用 2.1.1医疗行业近几年医院的信息化建设后来居上，已基本实现数字化建设。各医院建成使用的系统包括EMR、HIS、LIS、PACS、OA、CIS、绩效分析系统、体检系统、病案扫描系统、医保系统等。医院信息化网络管理已由以经济管理为中心向医疗管理、以病人为中心过渡，逐渐建立以病人信息为中心的集医、教、研、管功能于一体的完整医院信息系统。电子签章的应用，在一定程度上可以促进医院管理模式的变革。就诊医生在其日常工作平台上，如门诊、住院医生站，电子病历系统，医技系统中，实现完整的一套病历记录，安排医嘱，开具处方，申请检验检查，给出报告单等各项工作后，自动、安全、准确地加盖当时负责医生的电子签章，优化了工作流程，节约人力，节省时间，提高了工作效率，方便了医生诊疗，有利于提高诊疗效率，减轻医生的作业强度。另一方面，各业务系统中加入电子签章后，一些原来需要纸

一建考试常见问题汇总(共26问)

1. 问：我想报考一级建造师执业资格考试，我是会计专业大专毕业的，能否报考? 答：您不具备一级建造师的报考条件，原因是所学专业不符合。根据一级建造师执业资格考试报名文件规定，报考人员应具备工程或工程经济类专业大专以上学历。会计不属于工程和工程经济类专业，相关专业在报名文件附件的“工程类或工程经济类专业对照表”查询。2. 问：请问第一年考一级建造师报考时盖的是某家单位的公章，没有全部通过，第二年如果继续考的话，如果工作单位已换，是必须盖原单位的公章，还是可以换另外的单位? 答：请问第一年考一级建造师报考时盖的是某家单位的公章，没有全部通过，第二年如果继续考的话，如果工作单位已换，是必须盖原单位的公章，还是可以换另外的单位可以。第二次报名的时候拿着准考证报名剩下的科目即可。网上那个表可以盖上第二家的单位的章。(主要是防止个人的名义报) 3. 问：计算机专业可以报考一级建造师吗? 答：计算机专业一般都可以报考的。你的专业可以报考的。一级建造师报考条件满足： 1.工作年限满足要求; 2.学历满足要求;(国家承认学历) 3.专业是工程类或工程经济类专业;专业满足了，学历和工作年限满足就可以报考了。 4. 问：通过一级建造师考试，二建还可以使用吗? 答：通过考试不代表已经注册的二级建造师的证就没用了。但是你要是注册一级建造师之前，必须注销二级建造师证书，这个直接交到公司办就可以了。要是换家公司注册的话是行不通的，没有注销之前，一级建造师证书是不能办理注册手续的，这个是建造师注册的规定没注销前有记录在案，即使换了家公司应该也注册不了。还会被建设部判为违规注册。建设部建造师注册实施办法六、其他第二十七条一级建造师注册后，在领取注册证书和执业印章时，应当同时向申请地省级建设主管部门交回原建筑业企业一级项目经理资质证书，省级建设主管部门负责证书销毁并报建设部备案。具体办理流程以及步骤还需要你去省建设主管部门办理执业注册的部门去详细询问一下。5. 问：注册一级建造师证书的用处? 答：为了加强建设工程项目管理，提高工程项目总承包及施工管理专业技术人员素质，规范施工管理行为，保证工程质量和施工安全，根据《中华人民共和国建筑法》第14条规定：“从事建筑活动的专业技术人员，应当依法取得相应的执业资格证书，并在执业证书许可的范围内从事建筑活动。” 2003年2月27日国务院规定：“取消建筑施工企业项目经理资质核准，由注册建造师代替，并设立过渡期”。设立一级建造师执业资格考试，由人事部、建设部共同负责。 6. 问：没考二级建造师可以直接报考一级建造师吗? 答：可以，不过你要多等几年了，只要年限要求满足就好了，另外二级建造师考试也不是特别难，可以先考着用起来，然后再换一级建造师。 7. 问：不是建筑工程专业能参加一级建造师考试吗? 对于建造师考试时，对于专业要求的规定是有一定的条例说明的，具体的可以查看当年的建造师考试大纲专业的对照表，且对于建造师考试时并不是说一定需要建筑工程专业才能参加建造师考试的，详细如下分析;对于建造师执业资格考试对于报考专业的限定及要求，主要

siRNA说明书

产品以冻干粉的形式，常温运输。收到产品后，请于-20 C?-80 'C保存，冻干粉可以稳定保存一年。使用前请瞬时离心，用RNase-freeH 2O或者灭菌ddH20，配制成20gM储存液，分装保存，避免反复冻融（尽量不超过5次）。表120 gM储存液的配置参考使用前须知为避免外界因素（包括酶，极端pH或者温度条件等）导致产品降解，所有操作请严格遵循RNA操作规则。实验过程中，产品最好于冰上放置，使用完毕后请于-20 C~-80 C小心保存。细胞实验方法为了降低细胞密度、试剂用量，转染效率等因素导致的孔间差异，保证实验可靠性和可重复性，一般建议： a. 转染实验中每个转染样品至少设置3个以上复孔； b. 接种细胞时，每孔接种的细胞数量尽量保持一致，并且细胞在各孔的表面平均分布。 1. 转染浓度： siRNA产品最佳工作浓度因不同的细胞类型及研究目的而异。推荐初始转染浓度为50nM，转染后检测时间为24?72h。最佳转染效率一般通过设置时间曲线和浓度梯度进行优化，优化的范围建议为5~100nM。 2. 转染步骤：以Iipofectamine2000（简称Iipo2000）转染siRNA于24孔板，转染浓度为50nM为例，其他规格容器转染请参考表2。 1）转染前一天，接种适当数量的细胞至细胞培养板中，每孔中加入不含抗生素的培养基，使转染时的细胞密度能够达到30~50%（不同细胞生长速度不一样，因此，接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验）。注意: 转染时，细胞密度是影响转染效率的关键因素之一，细胞生长过度会削弱细胞活力，降低细胞的转染效率。 2）对于每个转染样品，请按以下步骤准备siRNA-Iipo2000混合液： a. 稀释siRNA :用50 g 不含血清培养基Opti-MEM I （v1）稀释g I20 gM siRNA储存液，轻轻混匀，室温孵育5min ; b. 稀释Iipo2000 :用50 g不含血清培养基Opti-MEM I （v1）稀释1 g Ilipo2000，轻轻混匀并室温孵育5min ; c. 将a与b轻轻混匀，室温孵育20min（溶液可能会有浑浊，但不会影响转染）。注意：稀释好的Iipo2000长时间放置可能导致转染试剂活性的降低，应尽量在25min之内与稀释好的siRNA 混合。另在混合试剂时，请勿剧烈吹打或振荡，手指轻弹管壁即可，过度用力可能会破坏脂质体的结构，甚至影响siRNA-lipo2000 混合物的形成。 3）将siRNA-Iipo2000混合液加入含有细胞的400 gl培养基（v2）的培养孔中，轻轻混匀； 4）（可选）培养4?6h后，将孔中含siRNA-Iipo2000混合液的培养基移去，更换新鲜培养基； 5）（可选）进行其他必要的特殊处理（如加药处理）；

新软极通EWEBS_V5.x故障问题集合

西安新软极通5.0常见问题本问题集应用于新软的极通EWEBS 5.0 是我们继极通EWEBS 4.2之后的最新版本，极通EWEBS 5.0包括四个模块远程接入、本地收藏、即时通讯、网络收藏。下面是极通EWEBS 5.0的最新常见问题可供用户参考，如果遇到此类问题可根据此文档解决。一、极通服务平台 1、可以对企业信息进行保存吗？答：可以保存企业的组织架构图，一种为图片的形式；另外一种为内容的形式可以根据需要导入企业组织架构信息。 2、为什么输入服务器地址加上端口号登陆不上去？答：要看你的端口号正确与否，此端口为远程接入安装时的Web端口。 3、为什么我在客户端测试服务器端口都已做通但外网通过Web还是访问不了？，提示“这台计算机无法找到指定的服务器。请确认服务器的域名或IP地址是否正确，然后重新连接”如图

答：打开控制台后，在‘集控平台→集控设置→组件信息→信息编辑’处，选择‘远程接入’点右上角的‘修改’，如图按说明处填写‘互联网地址’项。 4、以Win2008系统作为服务器安装极通EWEBS 5.0的过程中提示“如果当前系统是作为[Windows2003]以后的操作系统，需要安装终端服务，否则程序不能正常运行。继续安装吗”这里要怎么操作? 答：1、你已经安装了Windows2008的终端服务及授权并做了配置，则选确定继续安装。 2、你没有安装Windows2008的终端服务及授权并做相应设置，则选取消，安装终端服务及授权并做相应配置。具体安装配置参照极通Ewebs5.X安装手册。 5、是否可以在Windows XP和Windiws2008下安装极通EWEBS ? 答：能，极通EWEBS 5.0现在已全面支持WindwosXP 、2003和2008。（注：2008下安装需要安装Windows终端服务和授权）

无纸化办公系统解决方案

武装部打印室集中打印解决方案武装部打印室集中打印解决方案 2014年5月

第一部分前言 1.1概述本方案是根据渭南建设局实际要求来进行阐述的，包括了FORP基础平台、个人办公平台、公共信息平台、行政办公、公文收发、文档管理等多个方面的功能需求，总体构成渭南建设局无纸化OA办公系统。 1.2范围及文档组织形式本方案是对渭南建设局实际要求的技术响应，共分六部分：第一部分前言；第二部分为解决方案综述；第三部分针对渭南建设局机关办公自动化系统提出系统解决方案和流程的详细描述；第四部分对系统运行环境进行介绍；第五部分对售后服务及技术支持体系进行介绍；第六部分对本建议做总结。第二部分综述 FORP柔性运营资源管理平台（英文名Flexible Operation Resource Platform），是面向管理层的集成管理软件平台，以目标管理为核心，以人为本，以业务流程为驱动，以知识和关系管理为重点的新一代管理软件。FORP通过一个基础平台、三大引擎和若干管理应用套件，构建了一个线上生存必须的运行支撑环境。

图1.1FORP管理平台结构示意图 2.1FORP协同管理平台特点 ?以流程为基础，驱动业务协同。做为FORP三大引擎之一的流程引擎，支持公文流转、报销、借款、请假、出差、用车、采购、考核、培训、物资领用等各种流程的审批、管理，规范企业中各项工作执行，驱动团队协同工作，提升总体工作效率。 ?基于PDCA循环的计划任务管理，真正的协同工作平台。围绕企业目标，进行工作目标任务的分解、分配、指导、检查、催办、汇报、验收、总结及模板化，充分体现PDCA循环思想，强化执行，真正协同。 ?广泛应用门户技术，使用操作更方便、直观。应用门户技术，为每一位用户提供个性化的“工作平台”，图表等多种方式展示，让使用操作更方便、直观。 ?平台化设计、自定义报表与业务表单工具，扩展更加灵活。符合SOA设计原则、多层体系结构、灵活的流程与表单工具，节省信息化建设总体成本。 2.2技术特性该解决方案基于西点成熟的柔性运营资源管理平台FORP产品，采用成熟的开发语言(MS .Net )和架构(B/S)进行，保证XX机关无纸化OA办公系统的稳定和安全，其系统技术特性如下：

锐博siRNA产品说明书

siRNA使用说明（2009-08）名称：常规化学合成siRNA。产品简介：常规化学合成siRNA为21-25nt，带有2nt的3'端悬垂的双链小RNA（3'端悬垂通常为dTdT或者UU，也可以选择其他的碱基作为3'端悬垂）。产品剂量经过严格测算，以摩尔数标明。产品剂型为冻干粉，即用型的siRNA已经经过去保护、退火、纯化等处理，只要用灭菌的ddH2O或者RNase-free water溶解并配制成20μM液体即可直接用于细胞转染及其他实验。保存和使用：保存：液体剂型，siRNA的贮存浓度一般为20μM，-20℃或-70℃保存半年以上；冻干粉剂型，-20℃或-70℃保存一年以上。开盖前，请先稍稍离心，将粉末收集管底，再用灭菌的ddH2O或者RNase-free water，配制成20μM的液体剂型。例如：20nmolsiRNA冻干粉，需要加入1ml水溶解（其他剂量可以按照比例计算加水量）。注意：（1）液体剂型产品，应避免反复冻融（尽量不要超过5次），建议溶解后的产品分装保存。（2）如果近期不做实验，产品需要长期放置，最好以冻干粉形式保存。使用：产品使用时（转染过程），siRNA最好冰上放置，使用完毕，请于-20℃或-70℃小心保存; 整个实验过程，要求无RNA酶环境，枪头、EP管都要经DEPC处理；特别提示：荧光标记siRNA要求避光。使用方法： 1. siRNA的转染浓度：推荐的siRNA转染浓度是50nM，客户可根据实验具体情况优化转染浓度，优化的范围可以是10～150nM。（siRNA及转染试剂的建议用量，请参照“实验指导”）。 2. 使用lipofectamine2000（Invitrogen）转染siRNA的步骤（仅供参考）： (1) 转染前一天，接种适当数量的细胞至细胞培养板中，使转染时的细胞密度能够达到30～50％（不同细胞生长速度不一样，因此，接种细胞的数量需要根据细胞培养的经验），请使用无抗生素的培养基。注意：转染时，细胞密度是影响转染效率的关键因素之一，细胞生长过度会削弱细胞活力，从而降低细胞的转染效率。而细胞密度过低则可能达不到生长的要求，也会因此影响转染效率。 (2)对于每个转染样品，按如下步骤准备siRNA- lipo2000混和液（试剂的用量和体积，请参照“实验指导”）： a. 稀释转染试剂lipofectamine2000（以下称lipo2000）：使用前，将lipo2000转染试剂轻轻摇匀，然后取适量，用不含血清的优化培养基（Opti- MEMⅠ）稀释，轻轻混和，室温孵育5min； b. 稀释siRNA：用不含血清的Opti -MEMⅠ稀释siRNA，轻轻混和； c. 稀释好的lipo2000经过5min的孵育后，将之与上述（b）稀释好的siRNA轻轻混和，室温培养20min以形成siRNA-lipo2000 混和物，溶液可能会有浑浊，不过不会影响转染。注意：稀释好的lipo2000，如果长时间放置可能导致转染试剂活性的降低，应尽量在30min之内与稀释好的siRNA混和。 (3) 将siRNA-lipo2000混和液加入含有细胞以及培养液的细胞培养板中，轻轻摇晃，使之混和； (4)将培养板置于37 ℃的CO2培养箱中培养至检测时间（24～96h）。沉默效率的检测一般建议的时间为24～72h。可选操作（并非必要的操作）：转染操作完成，经过37℃培养4～6h后，可以将孔里含有siRNA-lipo2000混合液的培养基移去，更换新鲜的生长培养基，这样也不会影响转染的效率。注意：如果转染时使用的是不含血清的培养基（即血清饥饿的条件下进行转染），4～6h后必须换成完全培养基（含血清、含抗生素），以确保细胞生长。 3. mRNA 水平的检测：siRNA的作用机理在于其引起靶mRNA的降解，因此mRNA的降解水平是siRNA沉默效率的最直接指标。一般在siRNA转染后24h即可以检测到靶mRNA水平的降低。检测方法一般采用RT-PCR（半定量）或Real-time PCR（定量）。 4. 蛋白水平的检测：蛋白水平的检测一般需要借助抗体（针对靶基因蛋白质的抗体或针对融合蛋白的抗体）或报告基因系统检测，检测手段一般有Western-blot、免疫组化等。一般说来，检测时间受细胞内蛋白质表达量、蛋白质本身的半衰期等因素的影响，一般从48h开始检测，在36、48、72、96h，甚至更长时间之后多点采样。

极通远程连接问题处理集锦

极通远程连接问题处理如果客户端电脑登陆sunlike系统时，提示【当前没有可用许可，请稍后登陆】的信息，原因是由于客户端电脑非正常退出远程应用程序，服务器端系统无法释放缓存造成该现象发生。解决方法：双击服务器桌面图标【监控工具】，出现如下信息：在远程登陆不上去的客户机名称上，单击右键将该会话进行注销，注销一分钟后，客户端方可再次登陆。其他出现问题详见如下内容： 1、客户端登录的时候提示“获得的AIP协议参数不完整，请验证客户端与服务器的版本是否一致解决办法： ?把客户端卸载掉重新在网页上下载安装； ?看看是不是用的非windows的ie浏览器，如果不是将其的默认下载工具设置成ie 下载即可。

2、客户端登陆提示： ? ?解决办法： ?检查绑定的系统用户的权限，检查绑定的系统用户密码是否正确。 ?由于极通EWEBS 2008系统用户身份绑定的NT系统用户没有设置密码、密码错误或者系统绑定的用户没有加入到remote desktop users里。 3、客户端登陆时提示：解决办法： ?在服务器上用127.0.0.1的ip登录，确定一下问题出在本机上还是路由器上。 A.如果本机可以登录 ?检查路由器的2700端口映射（映射方法，详见路由器端口映射解析文档）。 B. 如果本机不可以登录请检查一下几点： a)检查我的电脑右键属性，远程，允许远程连接到此计算就的勾打上没（必须勾上）； b)检查EW Multi User Driver服务是否启动状态； c)Windows 2003 server系统可以检查”管理工具”—“终端服务器配置”里面的”AIP-TCP协议”是否启用。 4、正在加载应用程序配置信息解决办法：大多出现aipserver.exe文件丢失或者系统环境变量丢失。 A）Aipserver.exe文件存在极通EWEBS 2008系统服务器安装的bin文件夹下面，若没有此问题，从相同的版本上拷贝到此文件夹下面即可。 B）系统变量，我的电脑右键属性——高级——环境变量打开系统变量里面的path 变量，检查里面有没有极通的安装路径。（默认为C:\Program Files\Gintel\EWEBS Server\bin;）。

挂靠常见问题解答

2016年6月20日之前的帖子被删了,我也不清楚为什么不删除那些明目张胆的广告,反而删我这种帖子,幸好有人帮我存留了内容,不然我又要从头重新编写,既然重发就再写点其他内容吧。对于项目方面,很多人总是问项目补贴的问题,对于挂项目,企业一般有两种付款,一种是一次性给足,给够,这种对于那种项目超级多,应接不暇的企业比较适用,你可以根据单位类型去谈,也可以去当地的招投标网站上去了解这个公司接项目的频率,还有一种是前期正常给你,也就是挂资质的价格,后期中标以后,按照每个月来给你卡里汇款,一般是2-3千块钱每个月,当然这也就变相的承认了项目的风险性质,你需要承担一小部分项目风险,比如真的出了问题,那你要承担单位解决不了的那么一丢丢责任,当然截至目前,这种事情依然是超级少见的那种,每有一次都是相当轰动的,总的来说,也就是没啥事,现在施工质量还可以,单位对于当地政府来说,也依然还是发展主力,会留着ta。 2016年6月2日说个毕业证的问题吧，首先一点，毕业证分两种，一种是函授的也就是成人考试，一种是全日制的，自己正常上学毕业后学校发的。首先的问题是注册时毕业证专业的问题，这个是死的，专业不符的是绝对不能注册成功的，至于怎么看自己专业是否符合标准，就百度一下专业对照表就可以了，上面有的专业都是可以注册的，没有问题，没有的就悬了，还需要给人事考试中心打电话问问，有没有这个专业，是不是刚出的对照表还没更新。再就是毕业后年限的问题，这个也是很多问题证的常见问题，很多人等不及毕业年限足够就去考证了，考下来注册不了，那么当你有这种心理或者碰到这种事情的时候，先看看自己的毕业证是不是函授的，函授毕业证是不考核毕业后年限的，全日制的会考核。这个函授毕业证不需要考核年限是有缘故的，在很久以前，中国刚开始实施建造师的种种制度，那个时候中国嘛，大家都知道，基本上都是那种在工地混了几十年或者一辈子的老头子咯，他们的那个年代上学是和奢侈的，所以国家就出台了这么个政策，鼓励你后期去学习，参加函授考试，他们都是做了一辈子工程了，刚考了个函授毕业证，你再让他们等年限？那显然是不可能的，所以嘛，函授毕业证就不考核年限咯。还有就是身份证换代或者换照片等等，就是换身份证了，和以前报考时的身份证不一致了，这个有问题没，我告诉大家，有问题，碰到这种情况的时候就要去当地的派出所开一份证明，证明这个身份证和以前的身份证是同一个人的身份证。 2016年5月31日最近也有人提问说一级建造师是否可以和职称证书分开来进行注册，给大家讲讲，一般要职称进行使用的企业分两种资质系统的，一种是通过建设系统进行申报的，还一种是通过规划系统进行申报的。好了，知道这两个系统了，这俩系统的不同在于内部系统的差别，通过建设系统的职称，如果有其他证书在外注册（当然不能是同省的，否则社保会查出来，两个证书分开来注册到两个省份）是查不到的，也就是说可以分开注册，如果是通过规划系统的职称，那就不行了，规划系统是可以查得到你外面是否有注册其他证书，这样你懂了么？另外还需要普及个小知识，一般来讲，施工单位都是通过建设系统进行申报的，设计单位都是通过规划系统进行申报的，经验之谈哦。 2016年5月25日有很多建造师所指的三年一个注册周期，我解释一下，大家不要总是被误导，三年一次指的是继续教育，继续教育是一种特殊形式的教育，主要是对建造师的知识和技能进行更新、补充、拓展和提高，进一步完善知识结构，提高创造力和专业技术水平而已，原则上讲，注册满一年就可以调出，也就是转注册，但是现在很多省份都是可以打破这个规则，不满一年的情况下就可以调出了，大家要分清哈。另外还有说主项和增项的问题，这块也比较简单，符合逻辑思维就行，有主项转注，增项初始，那就是先注册转注的，后注册初始的，因为你先注册初始的那不就是同时注册两家单位了嘛，主项是可以变更的，比如房建是主项，水利是增项，可以变更主项给水利，把房建变成增项，另外有人问注册时间的问题，是不是增项没注册满一年无法调出，那么我告诉大家，只要主项注册满一年了，增项就可以跟着主项走，无论增项注册多久，哪怕刚注册上，也是可以跟着主项转出的。 2016年5月16日有蛮多人问初始和转注的流程，我之前有写到，不过添加了预付款和尾款的流程在内，有一些人就看不懂咯，那我就单独写一个。初始注册的注册流程：这个就是比较简单的，拿齐所有证书材料到当地建设局进行注册，没了。

siRNA 中文操作手册(lipo2000)

THE RNAi COMPANY RNAi 产品使用手册上海吉玛制药技术有限公司 Shanghai GenePharma Co.,Ltd.

Ⅰ. RNAi 简介 1 A. RNAi 实验原理 B. RNAi 实验流程 C. RNAi 实验所需试剂 D. 上海吉玛 RNAi 相关产品 Ⅱ. siRNA设计7 A. 哺乳动物siRNA设计 B. 上海吉玛 siRNA 产品特性 C. siRNA oligo 技术数据 Ⅲ. siRNA 对照9 A. 普通阴性对照 B. 荧光标记的阴性对照 C. siRNA阳性对照 D. 转染试剂对照 E. 避免off-target对照 Ⅳ. siRNA 转染10 A.siRNA 转染的方法 B.Lipofectamin2000 转染试剂 C.Lipofectamin2000适用的细胞类型 D.转染前细胞培养 E.Lipofectamin：siRNA/DNA比例 F.贴壁细胞转染程序 G.悬浮细胞siRNA转染程序 H.DNA和siRNA共转染细胞程序 I. 体内siRNA导入方法 J. siRNA转染常见问题与建议 Ⅴ. mRNA水平RNAi效果监测15 A. siRNA细胞转染条件优化 B. Real-Time PCR RNAi 效果检测 C. Real-Time PCR 结果分析 Ⅵ. 蛋白质水平RNAi效果监测20 A. western-blot原理 B.western-blot操作步骤 w C.estern-blot上样液的制备 D.western-blot常用试剂的配制 Ⅶ. RNAi实验常见问题解答22

Ⅰ. RNAi 简介 A. RNAi实验原理 RNA干扰（RNA interfering，RNAi）现象是由与靶基因序列同源的双链RNA（double-stranded RNA，dsRNA）引发的广泛存在于生物体内的序列特异性基因转录后的沉默过程。细胞中的核糖核酸酶III家族成员之一的，dsRNA特异性的核酸酶Dicer将dsRNA裂解成由21-25个核苷酸组成的小干扰RNA (small interfering RNA，siRNA)，随后siRNA作为介导子引起特异性地降解相同序列的mRNA，从而阻断相应基因表达的转录后基因沉默机制。

极通常见问题解6.15

（常见问题解答）： 1．为什么极通客户端登录网页打不开？答：请检查此电脑是否能打开其它网页及QQ是否能正常登录，如正常可能是服务器那边网络有问题，请联系系统管理员处理。否则，则有可能是您电脑网络有问题。 2．远程客户端访问服务器非常慢，是什么问题？答:客户端连接服务器慢有以下原因： a，服务器端或者客户端电脑中毒； b，服务器端的配置，内存达不到客户端连接的需要； c，实际传输的网速不够快。 3．为什么有的用户不能正常使用虚拟打印而其他用户可以？答：客户端若是已经设置好虚拟打印后，在使用应用程序打印的时候必须选择NfEwebs虚拟打印机。4．为什么服务器上安装好虚拟打印后客户端依然不能使用虚拟打印？答：1. 首先确认客户端打印本地文档是否正常，还有本地打印机支持的打印纸张范围是多大，若是软件设置的纸张范围超过打印机的打印范围请重新设置纸张格式； 2，在极通EWEBS中客户端在第一次使用虚拟打印不能进行正常打印时，建议先选择PDF打印，然后在选择虚拟打印就可以了。

注意：在选中虚拟打印后要重新退出应用程序这次的虚拟打印才有效。 5．登录后双击运行程序，显示“该应用程序暂时没有可供使用的服务器或许可，请稍后再试”？答： a.是服务器点少，而且在刚刚退出之前已经占满，然后退出再登录会出现这个情况，稍等会再登录即可。 b.是客户的点数满了，这个情况里包括实际使用人数占满了点数，还有客户端的用户操作时多占用了点数。 c.就是服务器的内存和CPU使用率超过80%，超过了软件负载平衡限制。建议稍后再试或通知管理员。或者 d.进入极通管理平台，查看是注册状态是否已过期。如已过期，请检查加密狗是否插，指示灯是否正常。如已插上，请检查电脑是否已检测到加密狗。然后进入开始程序极通EWEBS应用虚拟化系统授权管理工具，刷新Ukey看是否有加密设备号。如没有则表示未检测到加密狗，请插到其他的USB口试试。否则表示加密狗已损坏或与操作系统不兼容。

无纸化办税签章使用常见问题汇总

无纸化办税电子签章使用常用信息及常见问题汇总（最后更新时间2017-8-22）

目录 1常用信息汇总 (3) 1.1纳税人电子印章注册及审核 (3) 1.2税务人员电子签章注册及审核 (3) 2常见问题汇 (3) 2.1首先确认电脑基本环境 (3) 2.2客户端安装失败 (3) 2.3纳税人注册，下载协议报错 (3) 2.4客户端无法读取印章数据或印章信息 (3) 2.5金税盘部分用户，安装驱动后，无法读取金税盘证书信息 (3) 2.6登录/申报时，点击登录/签章按钮，页面没有反应。 (3) 2.7提示设备证书与系统登录纳税人不符，无法执行签章。 (3) 2.8申报页面，无签章按钮，只有确认申报按钮 (3) 2.9签章时提示“证书未注册”，签章注册提示“证书号有变更”。 (3) 2.10纳税人三证合一问题 (3) 2.11关于证书注册，未知状态的错误 (3) 2.12网上办税平台内电子签章注册,注册时点击完成注册没有反应 (3) 2.13电子签章客户端读取签章提示无法连接服务器或证书没有注册 (3) 2.14企业在税局修改了企业名称，但是在电子印章里还是旧的企业名称 3 2.15签章时提示“文件不存在或者已经损坏！” (3)

1 常用信息汇总 1.1 纳税人电子印章注册及审核注册：网上办税平台：https://www.360docs.net/doc/9916689561.html,:8080/ 注册备用地址：电子签章外网注册： https://www.360docs.net/doc/9916689561.html,:9000/WEB/ 审核：税务电子签章管理系统：http://76.12.97.162:8080/Manage/ 1.2 税务人员电子签章注册及审核注册：http://76.12.97.43:8080/WEB/ 审核：http://76.12.97.43:8080/Manage/ 2 常见问题汇 2.1 首先确认电脑基本环境客户端版本号V8.8；是否将山东国税站点加入可信任站点及兼容性视图； WIN10及IE11情况下，如果读取不到设备或者签章缓慢，试一下管理员身份运行IE，然后登录网报平台；或更新金税盘或税控盘驱动，可联系96005656。电脑上只插一个USB密钥设备，同时插两个usb设备可能会导致未注

全国建造师不予初始注册十种原因处理办法

建造师不予注册的十种原因 1、假身份证或身份证超过有效期。 2、假毕业证或学历为中专及以下。 3、工作年限不够。 4、无社保或社保清单不合格（临时工、挂靠等均不予注册）。 5、一人在两个及以上单位注册。 5、专业非工程类或经济类。 6、一人在同一个单位已有其它的注册证（如造价师、监理师、建筑师、结构师等）也不予注册。 7、网上无电子申报信息。 8、不符合免试两门条件而弄虚作假骗取考试资格。 9、执业资格证姓名与身份证不符。 10、不符合《注册建造师管理规定》（建设部令第153号）、《关于印发〈一级建造师注册实施办法〉的通知》（建市〔2007〕第101号）和《关于建设部机关直接实施的行政许可事项有关规定和内容的公告》（建设部公告第278号）规定。一级建造师注册申报时各市级主管部门需注意的几个问题一、对申报者个人的要求 1、对报考单位与注册单位不一致的，要提供原报考单位出具的解聘证明。 2、对报考时不符合报名条件，但又通过考试取得资格证书的，不得申报注册（注意从学历、工作年限或年龄等方面审核），从建设部公示的情况看，这些资格证书有问题的人员也不予通过。 3、一个人同时拥有两个及以上建设类执业资格证书的，可注册在同一个执业单位。但不可同时注册，只能选其中的一个进行注册！二、对申报材料的要求 1、初始注册申请表要在一级建造师注册管理系统上申报成功后自动生成打印，凡是不通过系统打印的申请表，一律不能上报。 2、资格证书要将带编号页和相片页复印到一张A4纸上；新身份证要将反正两面复印到一张A4纸上；劳动合同要用劳动部门制式合同，复印件统一用A4纸，内容填写要规范，其中自申报注册之日起，原则上聘期不少于一年，不能使用简单的聘用协议。 3、市建设行政主管部门要认真核实原件与复印件是否一致，一致的要在复印件上加盖“与原件一致”的印章。 4、市建设行政主管部门可以通过市级管理锁进入管理系统，看到本区域内上报人员及企业的各项信息。网上材料与书面材料要统一，二者缺一不可。 5、申报专业的问题过去报考时分14个专业，现已合并为10个专业，详见《一级建造师注册管理办法》。 6、同时申报两个专业以上的问题如同时申报建筑、公路工程专业，按上报材料份数多的专业要求申报。三、对材料装订上报的要求 1、将所有专业申请人的申报材料（申请表和附件材料各1份）装订在一起，每个申请人的申请材料单独装在一个档案袋中，按市级建设行政主管部门一级建造师初始注册汇总表（企业）的顺序进行编号打包。 2、将所有专业申请人的申请表1份，按市级建设行政主管部门一级建造师初始注册汇总表（企业）的顺序排列，不用装订，放档案袋中。 3、对申请铁路、公路、港口与航道、水利水电、通信与广电、民航专业注册的，要将每个申请人的申请表和附件材料各1份装订在一起，每个申请人的申请材料单独装在一个档案袋中，按市级建设行政

jetPRIME转染试剂说明

Polyplus-transfection S.A. - Bioparc - 850 Bd S. Brant - 67400 Illkirch - France - Phone: +33 3 90 40 61 80 - Fax: +33 3 90 40 61 81 Polyplus-transfection Inc. - 1251 Ave of the Americas - 34th fl. - New-York - NY 10020 - USA https://www.360docs.net/doc/9916689561.html, jetPRIME? in vitro DNA & siRNA transfection reagent PROTOCOL DESCRIPTION jetPRIME? is a novel powerful molecule based on a polymer formulation manufactured at Polyplus-transfection?. jetPRIME? ensures effective and reproducible DNA and siRNA transfection into mammalian cells. jetPRIME? is extremely efficient on a wide variety of cell lines. This powerful reagent only requires low amounts of nucleic acid per transfection, hence resulting in very low cytotoxicity . 1 Transient DNA transfection protocol (2) 1.1 Cell seeding .......................................................................................................................................... 2 1.2 DNA transfection protocol ................................................................................................................... 2 1.3 Virus production in adherent cells ....................................................................................................... 5 1.4 Optimization guidelines (5) 2 siRNA transfection protocol (6) 2.1 Cell seeding .......................................................................................................................................... 6 2.2 siRNA transfection protocol .. (7) 3 DNA & siRNA cotransfection protocol (7) 3.1 Cell seeding .......................................................................................................................................... 7 3.2 DNA & siRNA cotransfection protocol . (8) 4 Transfection of CRISPR/Cas9 ..................................................................................... 9 5 Stable DNA transfection ............................................................................................. 9 6 Troubleshooting ....................................................................................................... 10 7 Product information (11)