水稻OsVDAC5基因干涉载体的构建和遗传转化

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作者：谌鑫王春台覃永华

来源：《安徽农业科学》2015年第17期

摘要 [目的]构建水稻基因OsVDAC5的RNAi表达载体，遗传转化获得OsVDAC5转基因植株以研究该基因的生物学功能。[方法] 通过PCR扩增OsVDAC5特异片段并克隆到RNA干涉载体pMCG161，以水稻日本晴为受体，将OsVDAC5 RNAi表达载体进行了农杆菌介导的遗传转化，利用PCR和RT.PCR技术检测T0代转基因植株中OsVDAC5的表达水平。[结果] OsVDAC5在绝大多数RNAi转基因植株中的表达量显著降低。[结论]为进一步研究水稻OsVDAC5基因功能提供了重要材料。

关键词水稻；OsVDAC5基因；干涉载体；构建；遗传转化

中图分类号 S188+.1 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2015）17-017-03

Abstract [Objective]To construct and transform the expression vector for RNA interference of rice OsVDAC5 gene， and to obtain transgenic plants in which the expression level of OsVDAC5 was down.regulated for research the biological function of OsVDAC5. [Method] RNAi.special sequence of OsVDAC5 gene was cloned into the plant expression vector pMCG161， and transformed into callus of rice Nipponbare mediated by Agrobacterium. Further， the expression level of OsVDAC5 in T0 generation transgenic plant was checked by PCR and RT.PCR. [Result] The results showed that the expression level of OsVDAC5 in RNAi.transgenic plants was down.regulated obviously. [Conclusion] The study can provide important materials for further research of geneOsVDAC5.

Key words Rice； OsVDAC5 gene； RNAi vector； Construction； Genetic transformation

电压依赖性离子通道蛋白（Voltage.Dependent Anion Channel VDAC）是一种多基因家族

编码的定位于线粒体外膜的离子孔道蛋白，并能同定位在线粒体外膜上的其他蛋白形成复合物，主要功能是介导代谢物在细胞质和线粒体之间的运输[1]。VDAC作为代谢分子进出线粒

体的门户，控制着线粒体与细胞其他结构之间的联系，同时VDAC在线粒体介导的细胞凋亡中也起着重要作用[2]。

VDAC基因在植物生长发育及逆境胁迫应答中扮演着重要角色[3]。拟南芥中的4个VDAC基因在高盐胁迫下，表达量明显下调，但冷胁迫和干旱胁迫对它们的表达没有影响[4]。然而，抑制拟南芥中VDAC2的表达，直接导致幼苗对脱落酸无敏感性，使植株失去应答盐胁迫和干旱胁迫的能力[5]。当水稻经过渗透胁迫、盐胁迫和干旱胁迫后，其VDACs的表达量明显上升[6]。Desai等[7]研究发现珍珠栗中的PgVDAC虽然是盐诱导基因，但在干旱、冷