斑马鱼胚胎吖啶橙

斑马鱼胚胎吖啶橙（Acridine Orange，AO）染色（from 黄春筱师姐）：

1.原理：

吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种核酸选择性染料，它能够掺入DNA分子或者与RNA分子通过静电吸引作用相结合。掺入了AO染料的DNA分子在525 nm的紫外光照射下，能够激发出绿色荧光。利用这一原理，AO染料被广泛地用于细胞凋亡的检测。

我们实验中，利用AO染料分别处理24 hpf、48 hpf、72 hpf和96 hpf斑马鱼胚胎，检测注射miR-462/731 Morpholinos的胚胎（MO组）、共注射miR-462/731 Mopholinos和Duplex 的胚胎（挽救组）以及Uninjected Control的胚胎（对照组）的ICM区域（24 hpf）、AGM区域（48hpf）和CHT区域（72hpf-96hpf）的细胞凋亡情况。

2.操作步骤：

2.1 试剂配制：

1)AO染液工作液：

AO染液工作液浓度为5 μg/ml；

首先配制AO贮存液浓度为5 mg/ml，使用时1:1000稀释到工作浓度。

2.2 染色步骤：

1)将斑马鱼胚胎（24hpf，48 hpf，72 hpf，96 hpf）手动剥除卵膜，并用超纯水清洗2次。

2)将斑马鱼胚胎转移到含有5 μg/ml AO染料的培养皿中，28.5°C培养15-30 min（避光）。

3)用新鲜的暴气超纯水（超纯水在28.5°C培养箱中放置一会）替换AO染液，摇床轻摇10 min洗涤胚胎，重复2次。

4)胚胎用0.02% MS-222麻醉后，在荧光显微镜下观察、拍照。