武汉生物工程学院免疫学实验答案

1、绘中性粒细胞示意图。

按自己的实验报告上画。

2、瑞士染色为什么不能加热干燥

避免加热干燥，否则细胞会因为受热脱水而皱缩，影响吞噬实验现象的观察。

3、非特异性免疫的基本特征是什么

个体出生就已经形成，作用广泛而非针对特定抗原。

4、中性粒细胞吞噬功能检测在临床诊断中有何应用

定量测定细胞吞噬功能，对于研究患者的免疫功能及指导临床具有意义。

5、静脉注射时为什么不能有空气注入

注射时若有空气注入，就会导致血管中有一段空隙，使这段血液无法运输氧气，若是这段血液是通向肺部，则会使机体窒息死掉，影响实验结果。

6、实验动物的正确抓取与固定有何重要意义

正确抓取与固定可以防止实验人员和实验动物免受不必要的伤害，从而获得更加正确可靠地实验结果，更加便于观察。

7、同一种抗原可用哪些途径免疫动物哪些途径免疫原性最强，为什么

途径：静脉注射，腹腔注射，皮下注射，肌肉注射，皮内注射，皮肤划痕，吸入，口服等。其中皮内注射免疫的免疫应答最强，因为抗原在体内滞留时间长，作用时间也长。

8、耳缘静脉注射因注意哪些细节

（1）选静脉较粗而清晰处，剪掉拟采血耳缘不细毛。可以用手指弹兔耳或电灯照射兔耳，使耳部血管充盈，然后用酒精消毒。

（2）注射时不能有空气注入。

（3）采血完毕用干棉球压迫止血。

9、兔台固定要注意什么问题

（1）固定好四肢，防止实验过程中挣脱，影响实验观察，避免人员划伤。（2）头部颈部应充分暴露在外,方便操作。

（3）不能让大耳白兔在固定过程中死亡。

10、遇血管为什么要用钝器分离

用钝器分离是防止气管附近的神经及血管受损，影响实验结果观察。

11、剪颈动脉切口时为什么不能将整个动脉剪断

若剪断血管，血管会收缩，不利于血管的插入。

而且会造成大量出血，影响实验结果的观察。

12、机体抗血清的主要功能是什么

中和作用，活化补体，被动免疫，ADCC，调理作用。

13、抗原抗体特异性结合的化学基础的什么

抗原抗体空间结构互补。

14、环状沉淀操作过程中为什么不能产生气泡或者摇动

操作过程中若是产生气泡或者摇动两液界面处的界面就会不明显，导致不易观察实验现象，甚至产生大量絮状沉淀。

15、环状沉淀长时间静置会导致什么结果

由于液体分子的布朗运动，环状沉淀长时间静置则会使絮状浑浊。

16、直接凝集反应有哪几种各有何用途

分为玻片凝集和试管凝集两类。

玻片凝集常用于细菌的鉴定和ABO血型分型。

试管凝集实验多用于协助临床真多或进行流行病学调查研究。

17、怎样判定试管凝集反应中抗体的效价

通常以产生明显凝集（++）现象的血清最高稀释度作为血清中抗体的效价。

18、直接凝集反应中，抗原抗体加入后为什么要充分混匀

使抗原抗体充分接触，产生特异性反应。

19、ELISA操作中洗涤的目的是什么洗涤不彻底有什么影响

洗涤是洗去游离的酶联复合物。

洗涤不彻底则会使抗原，酶联复合物未被洗涤干净，此时，显色剂仍然会显色，使实验结果造成假阳性。

20、饲养场中的大耳白血清中为什么含有针对豆粕蛋白的特异性抗体

因为饲料的成分中含有豆粕。

1、请设计实验制备针对大肠杆菌的多克隆抗体（实验书P98）

实验名称：制备针对大肠杆菌的多克隆抗体

实验目的：制备针对大肠杆菌的多克隆抗体

实验原理：抗体主要存在体液尤其是血液中，大耳白兔为常用的免疫实验动物。为达到最佳的免疫的效果，采用皮内注射

实验用品：大肠杆菌菌悬液，大耳白兔，注射器，注射器，镊子，酒精棉球，动物解剖台，剪刀，剪毛剪等。

实验步骤：

1，抗原的制备

制备大肠杆菌颗粒性抗原，制备成大肠杆菌菌悬液，60℃水浴1h，再稀释达9亿个/ml,再进行无菌检查

2，免疫动物，

大耳白兔皮内注射大肠杆菌菌悬液，免疫动物，24h后再次加强免疫。

3，上劲动脉采血制备血清

将血液4℃静置过夜或6-8小时，然后高速离心，上清即为抗血清

2、请用一种免疫标记技术检测禽流感病毒感染的细胞（课本P217）

实验名称：荧光素标记的抗血凝素抗体

实验目的：直接荧光法检测禽流感病毒感染的细胞

实验原理：待检标本（固定在玻片上）+荧光素标记的抗血凝素抗体→洗去游离的荧光素标记的抗血凝素抗体→干燥后，荧光显微镜下观察。

实验用品：荧光素，荧光显微镜，样本，玻片，洗脱液，荧光素标记的抗凝血素抗体

实验步骤：

1，固定

把待测细胞固定在玻片上

2，孵育细胞

把荧光素标记的抗血凝素抗体加到待检测样本的细胞涂片上进行孵育细胞

3，洗脱

经抗原抗体反应后，洗去未结合的荧光抗体

4，检测

将待检测标本在荧光显微镜下观察，有荧光的部位即为有流感病毒存在，即为被感染的细胞

3、如何利用E花环实验对T细胞进行计数（实验书P75课本P222）

计数T细胞的方法称E花环形成实验，即取外周血淋巴细胞与绵羊红细胞混合，在一定温度下作用一定时间，使绵羊红细胞与T细胞表面的E受体结合，形成以T细胞为中心，绕有绵羊红细胞的花环样细胞集团。光学显微镜下可见，根据E花环形成细胞的多少即可推测T细胞的总数。

4、单向免疫扩散实验的基本步骤是什么如何利用单向免疫扩散测定某一抗体

的浓度（课本P215）

适当浓度的已知抗体加入融化（45℃）的琼脂中，混匀后浇注于玻璃板，制成凝胶板。隔适当的距离打孔，加入被测可溶性抗原，使其向四周扩散，经一定时间后，生成白色沉淀线。

根据不同的抗体浓度得到不同直径的沉淀线，制作标准曲线，然后根据未知抗体的反应沉淀线直径大小，在标准曲线上计算出抗体浓度

5、肥达氏反应的基本原理和主要用途是什么(课本P213)

基本原理：是直接凝集反应中，细菌和红细胞与相应抗体结合产生细菌凝集和红细胞凝集的现象

主要用途：诊断伤寒病

6、酶联免疫吸附试验中，对标记酶的选择应注意哪些原则

要能与标记的抗原或抗体结合紧密

易洗脱

易检测

7、如何抓取实验动物狗

未经训练用于急性实验的狗性凶恶，能咬人，因此进行实验时第一个步骤就是要绑住狗嘴。驯服的狗绑嘴时可从侧面靠近轻轻抚摸其颈背部皮毛，然后迅速用布带缚住其嘴。方法是用布带迅速兜住狗的下颌，绕到上颌打一个结，再绕回下颌下打第二结，然后将布带引至头后颈项部打第三个结，并多系一个活结（以备麻醉后解脱）。注意捆绑松紧度要适宜（如图），倘若此举不成，应用狗头钳夹住其颈部，将狗按倒在地，再绑其嘴。如实验需要静脉麻醉时，可先使动物麻醉后再移去狗头钳，解去绑嘴带，把动物放在实验台上，然后先固定头部，再固定四肢。

狗嘴捆绑法

（1）头部固定：固定狗头需用一特制的狗头固定器，狗头固定器为一圆铁圈，圈的中央有一弓形铁，与棒螺丝相连，下面有一根平直铁闩。操作时先将狗舌拉出，把狗嘴插入固定器的铁圈内，再用平直铁闩横贯于犬齿后部的上下颌之间，然后向下旋转棒螺丝，使弓形铁逐渐下压在动物的下颌骨上，把铁柄固定在实验台的铁柱上即可。

（2）四肢固定：如采取仰卧位，四肢固定方法与家兔相同。

8、设计实验证明新鲜血清中的补体有辅助抗体的溶菌功能。

新鲜血液+细菌——细菌溶解。

加热的新鲜血液+细菌——细菌不溶解。

发现血清中有两种物质，抗体使细菌凝集，补体则使凝集的细菌溶解。

9、免疫标记技术中应用标记抗抗体即二抗有什么优点

制备一种荧光素标记的二抗可以检验同一种物种针对不同抗原的某一类Ig

价格便宜，容易操作，应用广泛。

10、乙肝病毒的五项检测是什么如何判定基本原理是什么

五项检测有：1.表面抗原(HBsAg)2.表面抗体(抗HBs)3.е抗原(HBeAg)4.е抗体(抗HBe)5.核心抗体(抗HBc）

判定：患者体内必须要有乙肝病毒的抗原抗体才能确定被乙肝病毒感染

乙肝表面抗原检查乙肝抗体

乙肝抗体检查乙肝表面抗原

基本原理：抗原抗体的特异性结合

11、现有甲型链球菌和乙型链球菌各一株，请基于抗原抗体特异性反应的原

理设计实验进行区别鉴定。

实验名称：玻片凝集反应

实验目的：甲型链球菌和乙型链球菌的鉴定

实验原理：用甲型链球菌抗体和乙型链球菌抗体与待测细菌表面的相应抗原特异性结合，在玻片上直接出现肉眼可见的凝集现象

实验用品：甲型链球菌，乙型链球菌，甲型链球菌抗体，乙型链球菌抗体，

玻片，生理盐水

实验步骤：

1，取两块玻片，分别分为AB两个格，在A格分别涂上待测菌液，在B格涂上生理盐水。

2，在两块玻片上滴加甲型链球菌抗体和乙型链球菌抗体。

3，轻摇玻片，静置1~2分钟后室温下观察结果。

12、某养殖场对猪群进行了猪瘟疫苗、猪流感疫苗、口蹄疫疫苗、蓝耳病疫

苗免疫，请设计实验检测猪体内含有哪种或哪几种抗体。

实验名称：酶联免疫吸附实验

实验目的：间接法检测猪体内经猪瘟疫苗、猪流感疫苗、口蹄疫疫苗、蓝耳病疫苗免疫后，含有哪种或哪几种抗体。

实验原理：酶联免疫吸附实验室酶免疫测定技术中应用最广泛的技术。其基本方法是，将已知的抗原媳妇在固相表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗涤。

实验用品：猪瘟疫苗、猪流感疫苗、口蹄疫疫苗、蓝耳病疫苗，猪血清，

酶标板，洗涤液，显色液，酶联复合物（用酶标记针对血清中抗体的二抗）

实验步骤：

1，取4个已经用猪瘟疫苗、猪流感疫苗、口蹄疫疫苗、蓝耳病疫苗分别标记好的酶标板，加入猪血清用封纸片覆盖好，置37℃孵育30min。

2，取出反应板，撕去封片，每孔加入酶联复合物，手工震荡

3，再次用封片纸覆盖好，37℃孵育15min，取出后洗涤

4，加入显色剂，混匀，15min内观察结果

13、青霉素导致机体过敏的机制是什么（课本P109）

青霉素属于半抗原，进入体内后，其降解产物与组织蛋白或血清蛋白结合，刺激免疫系统产生免疫应答，可能使人发生过敏反应。

14. 对一个疑似正常的病人是否有结核病该如何用免疫检测方法来确诊

结核病是结核杆菌，是细菌，玻片法检测

实验名称：

实验目的：

实验原理：

实验用品：

实验步骤：

15. 某地发生食物中毒，怀疑是沙门氏菌污染，该如何确诊

沙门氏菌是颗粒性抗原，直接用凝集反应玻片法检测食物中的沙门氏菌

实验名称：

实验目的：

实验原理：

实验用品：

实验步骤：

16. 验血型用的是单克隆抗体，你能写出抗A、抗B单克隆抗体的制备过程。

类似单抗的制备过程

人类红细胞表面抗原免疫

17. 该如何确定某人对某种传染病是否有抵抗力

即确定某人是否含有针对这种传染病的抗体ELISA

实验名称：

实验目的：

实验原理：

实验用品：

实验步骤：

18. 为什么提倡母乳喂养请从免疫角度予以分析。

产妇可通过初乳讲分泌型IgA传递给婴儿，是一种重要的自然被动免疫。

19. 机体将蛋白质（如蛋清）食用或注射进体内，机体会发生怎样的不同反应请分析可能的原因。

食用蛋白质，相当于抗原口服，在消化过程中被降解成小分子物质，而小分子物质不易引起免疫应答。

注射入体内相当于抗原皮下皮内或者静脉注射，直接引起机体的免疫应答。

20. 常说用“生物导弹”治疗癌症，请分析其机理。

即单克隆抗体的靶向作用。

“生物导弹”是免疫导向药物的形象称呼，它由单克隆抗体与药物、酶或放射性同位素配合而成，因带有单克隆抗体而能自动导向，在生物体内与特定目标细胞或组织结合，并由其携带的药物产生治疗作用。单克隆抗体具有高度专一性，能够识别细胞表面抗原、各种受体、各种体液成分及细胞内和组织内的各种成分，能精确地瞄准和捕获靶细胞，特异性地与靶目标发生反应，因而有“生物导弹”之称。