分子生物学历年考题

05年分生

一名词解释：

1 SiRNA: 利用双链小片段RNA高效、特异性降解细胞内同源mRNA，从而阻断体内靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。

2 Blue/white screen: 蓝白斑筛选。即β-半乳糖苷酶基因失活筛选。其原理是：某些质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ’基因，该基因含一段编码β-半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸α－肽的DNA片断，IPTG可诱导此片断合成，此片断能与宿主细胞所编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因内α－互补，形成完整的β－半乳糖苷酶。该酶能催化指使剂底物X－gal形成蓝色菌落。当外源基因插入lacZ’基因中MCS(多克隆位点)，lacα－肽基因阅读框架被破坏，细菌内将无β－半乳糖苷酶活性，结果重组克隆呈白色菌落。

3 Knock down: （基因）敲除。是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。基因敲除除可以终止某一基因的表达外，还包括引入新基因及引入定点突变，既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。

4 G-protein : G蛋白。是三聚体GTP结合调节蛋白的简称，位于质膜内胞浆的一侧，由α，β，γ三个亚基组成，βγ二聚体通过共价结合锚定于膜上起稳定α亚基的作用，而α亚基本身具有GTP酶活性。G蛋白在信号转导过程中起着分子开关的作用，当G蛋白α亚基与GDP结合，处于关闭态；当胞外配体与受体结合形成复合物时，导致受体胞内结构域与α亚基偶连，并促使α亚基结合的GDP被GTP交换而被活化，即处于开启状态，从而传递信号。

5 DNA-chip: DNA芯片。指通过微阵列技术将高密度DNA片断阵列通过高速机器人或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如玻璃片等固相表面作为探针，荧光标记的样品DNA/RNA借助碱基互补作用与探针进行杂交，从而进行大量的基因表达及检测等方面的研究。

6 Off-target effect: 脱靶效应。指的是与一个内源性基因某一位点并不完全同源的RNA亦能通过抑制翻译而导致基因表达的静默。

7 Super gene family: 超基因家族。指一个共同的祖先基因通过各种各样的变异，产生了结构大致相同但功能却不尽相似的一大批基因，这一大批基因分属于不同的基因家族，但可以总称为一个超基因家族。

8 Environment genetic project : 环境基因工程，指专门鉴定体积暴露在特定环境下的那些显示易感或抗性基因的DNA多态性。

9 Tumor vaccine: 肿瘤疫苗。肿瘤疫苗的本质是将某一抗原组份作用于生物体，从而激发该机体对该抗原或抗原载体的免疫保护，这种抗原形式或抗原的载体形式即是疫苗。肿瘤疫苗的形式有细胞性疫苗和可溶性抗原疫苗两大类。细胞疫苗是将肿瘤细胞进行某些处理灭活后直接作用于机体。可溶性抗原或多肽疫苗则是在体外通过基因工程的方法制备出已知某肿瘤

的抗原成分，与不同的佐剂联合应用达到免疫激发的目的。

二问答题：

1 请从“一条基因一条蛋白”到“一条蛋白一条基因”说说你对基因概念的变化的理解。

2 基因诊断的优缺点及发展前景。

3 逆转录酶在RNA病毒感染宿主及自身复制中的意义。

4 PCR与细胞内DNA复制的异同点。（不少于5点）

5 试从肿瘤多基因，多机制说明肿瘤的基因筛选。

答1. 基因概念演变过程如下：

基因一次是1909年丹麦生物学家W.Johannsen首先使用，以代替在此之前所用的“遗传因子”这个术语。在开始使用“基因”一词时，基因是遗传性状的符号，并未设计到基因的物质概念。

1926年Morgan发表了“基因论”，指出基因实在特定染色体上，而且是呈直线排列在染色体上的遗传颗粒，位于同源染色体的同一位置的相对基因叫做等位基因；基因是世代相传的，基因决定了遗传性状的表达。

20世纪40年代，Bendle和Tatum用X射线照射链孢霉菌使其产生不同的突变体，发现突变可以影响代谢反应，故认为突变可致催化代谢的酶发生缺陷，因而提出了“一个基因，一个酶”的学说。

20世纪50年代初，Benzer在研究T4噬菌体的一群紧密连锁的突变群时发现了顺反效应，从而提出了“顺反子”概念。一个顺反子即是一个基因。但后来“顺反子”多用于指RNA分子中对应于一个结构基因的序列，现代分子生物学中所称单顺反子RNA和多顺反子RNA,即是由此而来。

20世纪60年代，遗传密码的破译使人们对基因表达的机制有了更多的了解，认识到基因是基因组中的一个区域（一段DNA序列），其转录产物是编码一条多肽链的RNA分子或者是一个有独力功能的RNA分子（tRNA或rRNA）。

20世纪90年代以来，对基因的结构与功能的研究不断深入，许多基因的核苷酸序列被测定，对基因的认识更加丰富，逐渐形成了基因的现代概念。基因的现代分子生物学概念是：基因是核酸分子中贮存遗传信息的遗传单位，是RNA和蛋白质相关遗传信息的基本存在形式，是指贮存RNA序列信息和有功能蛋白质多肽链序列信息、以及表达这些信息所必需的全部核苷酸序列。大部分生物中构成基因的核苷酸物质是DNA，少数生物（如RNA病毒）中是RNA.

题中“一条基因一条蛋白”反应的是20世纪40年代“一个基因，一个酶”的学说，而“一条蛋白一条基因”反应的是基因的现代概念。两种学说都是正确的，体现了对基因概念的理解的不断深化。

基因诊断是指采用分子生物学的技术方法来分析受检者的某一特定基因的结构（DNA水平）或功能（RNA水平）是否异常，以此来对相应的疾病进行诊断。基因诊断有时也称为分子诊断或DNA诊断(DNA diagnosis)。

与传统的方法相比，基因诊断具有下列优点：（1）应用范围广。（2）简便、快速、经济。（3）特异性强，敏感性高，且便于定量操作。（4）可预先诊断。

2 基因诊断的应用：

辅助遗传病的临床诊断

遗传病患病风险分析，如出生缺陷的产前诊断，植入前遗传诊断，遗传筛选等。

其他疾病易感性预测性诊断，如肿瘤或其他家族性疾病（糖尿病、高血压、肥胖和AD等多基因病）的易感性预测。

疗效评价及用药指导，例如评价临床治疗急性淋巴细胞性白血病。

法医学个体认定

病原体诊断，包括病毒、细菌、真菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体以及寄生虫等的诊断。

3 逆转录酶的三种反应活性①RNA指导的DNA合成②RNA水解③DNA指导的DNA合成逆转录酶的意义：（1）用于合成cDNA，建立cDNA文库；（2）获得基因或探针；（3）用于RT-PCR。

4.原理相同，都是利用碱基配对互补的原则而且复制的时候都是半保留复制，都需要引物，底物都是dNTP。

不同点：所处的反应环境不同，复制方式不同，所需酶原料不同，复制起始点不同，聚合酶不同，终止方式不同1。一个体内一个体外2。聚合酶链式反应（PCR）不会产生冈崎片断3。一个细胞只在有丝和减数分裂的时候进行DNA复制而PCR可以反复进行4。细胞中的DNA 复制受到许多复杂的因子的调控5。两者进行的温度不同。6。PCR产物短小，DNA复制不精确; 体内DNA复制是整体染色体的复制

5. 试从肿瘤多基因，多机制说明肿瘤的基因筛选。

07级医学分子生物学考试

医学分子生物学考试题型：名词解释6个（每个5分，30分），问答7个（每个10分，70分）。75分及格。

一名词解释：基因，遗传图，基因表达，基因工程，荧光原位杂交，PCR-SSCP,

1 基因：是指携带有遗传信息的DNA或RNA序列，也称为遗传因子。是控制性状的基本遗传单位。基因通过指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，从而控制生物个体的性状表现。

2 遗传图：以具有遗传多态性的遗传标记为路标，遗传学距离为图距建立给予遗传学功能的图谱

3 基因表达：是指基因转录及翻译的过程

4 基因工程（gene engineering ）：又称为重组DNA技术，是指将外源基因通过体外重组后导入受体细胞，并使其能在受体细胞内复制和表达的技术。

5 荧光原位杂交（fluorescence in-situ hybridization,FISH）：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。

6 单链构型多态性分析法（PCR-SSCP）：将PCR产物双链DNA（dsDNA）变性为单链DNA （ssDNA），加样于变性聚丙烯酰胺凝胶进行电泳，由于DNA分子在凝胶中的电泳迁移率与其分子量和空间结构有关，而空间结构又与ssDNA序列有关。因此，电泳结束后，ssDNA 带位置的差异即可反映出PCR产物序列的差异，从而对DNA中的单个碱基的替代、微小

缺失或插入进行检测。

二问答题：

HBV复制？

答1、是目前已知的感染人类的最小的嗜肝双链DNA病毒。2、结构特别精密浓缩：（1）环状的部分双螺旋结构，长约3.2kb。2/3为双螺旋结构，1/3为单链，两条链不等长。（2）长链为负链，短链为正链。a、长链：5’端与3’端与一种蛋白质共价相连。b、短链：约为长链2/3。短链间的空隙可由DNA聚合酶充填。（3）基因重叠使病毒在很小的基因组中容纳大量的遗传信息。a.重叠的基因序列较多，有4个开放读码框（ORF），分别编码病毒的核壳（C）、包膜（S）蛋白、病毒复制酶、与病毒基因表达有关的蛋白质。b、调节序列位于基因内部：是节约使用遗传物质的一种方式。启动子存在于编码蛋白质序列内；增强子位于聚合酶基因中；polyA附加信号位于ORFC中；GRE位于ORFS和聚合酶基因中。3、逆转录复制。

遗传信息的传递过程？

答central dogma：中心法则：遗传信息从DNA传递给RNA，再从RNA传递给蛋白质的转录和翻译过程，以及遗传信息从DNA传递给DNA的复制过程

对癌基因，原癌基因和抑癌基因的认识？

答癌基因：在人体正常细胞中存在，调控细胞生长和分化的原癌基因被致癌因素激活，发生数量上或结构上的变化转化为癌基因，可致细胞癌变。抑癌基因：正常细胞中对细胞的增殖分化有调节作用，对细胞的异常生长和恶性转化具有抑制作用的基因。

限制性内切酶在分子克隆中的作用，并举例说明？

载体的认识？

答载体（vector）：指能携带外源DNA片段导入宿主细胞进行扩增或表达的工具。本质为DNA。制备的目的基因或外源性DNA片段必须与合适的载体连接形成重组体，才能进入受体细胞并进行复制和表达。包括克隆载体和表达载体。特征：能自我复制并具较高的拷贝数，分子量一般<10Kb；带有遗传筛选标记；有适当的限制酶切位点，便于外源基因的插入和筛选。

结合你的专业，谈谈对基因诊断的认识？

答基因诊断：利用分子生物学和分子遗传学技术，从DNA/RNA水平检测和分析基因的存在和结构、变异及表达状态，从而对疾病作出诊断的方法对疾病或与致病相关的基因（DNA）的表达产物（mRNA、蛋白质）的确定和序列测定，实现疾病的早期诊断。特点:①特异度高。可检测DNA片段的缺失、插入、重排，甚至单个碱基的突变。②灵敏度高。待测标本只需微量,目的基因只需pg水平。③稳定性高。基因的组成是核酸，比蛋白质稳定得多，且被测基因不需为活性状态。④诊断范围广,适用性强。能对某些疾病作出确切诊断,确定与疾病的关联状态。⑤临床应用前景好。途径：1、基因突变的检测：a、限制性核酸内切酶酶谱分析。b、分子杂交：定义。利用探针与靶DNA杂交，可识别靶DNA中的特异核苷酸序列。

c、DNA芯片技术；

d、DNA测序技术2、基因连锁分析：限制酶片段长度多态性连锁分析（RFLP）：DNA序列的多态性如果发生在限制性内切酶的识别位点上，就会造成酶切位点的缺失或新位点的出现，酶切后DNA片段长度发生变化。若某一致病基因与特异的多态性片段紧密连锁，就可用这一多态性片段作为“遗传标记”来判断基因组中是否携带致病基因。

3、mRNA检测：可利用反转录PCR扩增mRNA来研究基因转录。先进行反转录，然后进行常规PCR。

原核生物和真核生物基因组的不同点？

答1、原核生物为裸露的环形DNA；真核生物细胞核中含线性DNA，线粒体也含少量环状DNA。2、原核基因组只有一个复制起点；真核基因组远远大于原核基因组，结构复杂，具有多个复制起点。3、原核基因组中大部分用来编码蛋白质；真核基因组中不编码区域占90％以上。4、前者一般不含内含子，转录和翻译偶联连续进行；真核生物基因不连续，含内含子，转录后要剪接、翻译。5、原核基因组中重复序列不多；真核基因组存在大量重复序列。

6、原核基因组形成多顺反子结构；真核基因由一个结构基因与相关的调控区组成，转录产物为单顺反子。

7、原核生物有基因重叠，即同一段DNA片段能够编码2－3种蛋白质分子。10、真核基因组有自私基因。

8、原核基因组具有操纵子结构；真核基因组中功能相关的基因构成基因家族。

9、原核生物基本上是单倍体，真核基因组是二倍体。

09年分子生物学

名词解释：JunkDNA、基因工程、FISH、ct、laboratory on chip、碱裂解法、酚抽提法、lentivirus vector

1 Junk DNA：处于DNA尾部的重复序列是不编码蛋白质的“垃圾DNA”。

2 基因工程（gene engineering ）：又称为重组DNA技术，是指将外源基因通过体外重组后导入受体细胞，并使其能在受体细胞内复制和表达的技术。

3 缩微芯片实验室（laboratory on a chip），是通过采用类似集成电路制作过程中半导体光刻加工的缩微技术，把样品制备、生化反应和检测分析等复杂、不连续的过程全部集成到芯片上，使其连续化和微型化，构建成所谓的缩微实验室(microlab)。

4 荧光原位杂交（fluorescence in-situ hybridization,FISH）：是一种利用非放射性的荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。

5 碱裂解法：在NaOH提供的高pH（12.0～12.6）条件下，用强阳离子去垢剂SDS破坏细胞壁，裂解细胞，与NaOH共同使宿主细胞的蛋白质与染色体DNA发生变性，释放出质粒DNA。

6 酚抽提法(SDS法）：以含EDTA、SDS及无DNA酶的RNA酶裂解缓冲液破碎细胞，经蛋白酶K处理后，用pH8.0的Tris饱和酚抽提DNA，重复抽提至一定纯度后，根据不同需要进行透析或沉淀处理获得所需的DNA样品。

7 Ct值: PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段时，达到一个人为确定的阈值所对应的循环次数。

慢病毒（Lentivirus）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

8 慢病毒（Lentivirus vector）载体是以HIV-1（人类免疫缺陷I型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

问答：

1 PCR的原理、步骤及操作注意事项，

2 基因诊断和预测医学的看法

3 Southern印迹原理及应用、

4 DNA降解的原因及解决方法、

5 蛋白质分离纯化的注意事项、

6 基因治疗的策略及Germline gene therapy面临的问题、

7 代谢组学概念及检测方法、

8 获取基因蛋白注意事项及设计实验、

9 英文翻译四选一：出自网课作业