细胞计数法
细胞计数法
细胞计数法是用来计数细胞悬液中细胞数量的一种方法。一般利用计数板（血球计数板）进行。即可用于分离（散）细胞培养接种前计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，也可用于对培养物的细胞数量进行计数。不论计数的对象如何，均须制备分散的细胞悬液。
1、制备细胞悬液
对于悬液培养的细胞，可直接进行下面的步骤2（计数与计算过程）。如果计数对象为贴壁生长的细胞，首先需将培养物制备成细胞悬液。
1）、终止培养，将培养液吸出，用PBS洗培养物一次。
2）、给培养瓶内加入1ml 0.25％胰蛋白酶溶液，于37℃消化3～5min 。期间不断在镜下观察。当细胞变圆接近脱壁时，弃消化液。
3）、加入一定量的培养液（如果这些培养细胞不再有用，可加PBS），用吸管吹打，使细胞脱壁而制成细胞悬液。
2、计数与计算过程
1）、在细胞计数板中央放置计数专用的盖玻片。
2）、用玻璃虹吸管吸取细胞，让虹吸管在盖玻片上或下侧的计数板凹蹧处流出悬液，至盖玻片被液体充满为止。
3）、置显微镜下计数四角大方格内的细胞总数。对于压线的细胞只计数在上线和左线者，对于细胞团按单个细胞计数。
4）、按下式计数细胞悬液的密度：
细胞密度＝（4个大格细胞总数/4）×104个/ml
表示不计数：
注意事项：
1）、务必使分散成单个细胞，取样计数前，充分混匀细胞悬液。
2）、显微镜下计数时，遇到2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算。如果细胞团>10％，说明细胞分散不充分; 或细胞数<200个/10mm2或>500个/10 mm2 时，
说明稀释不当，需重新制备细胞悬液。
微生物的计数——血球计数板法
微生物得计数——血球计数板法 【摘要】测定微生物细胞数量得方法很多，有分光光度法、显微直接计数法与平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但就是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小.?显微计数法适用于各种含单细胞菌体得纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质，常不易分辨.菌体较大得酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(PetｒｏｆHausｓｅr)细菌计数板。两种计数板得原理与部件相同，只就是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜，计数板下部得细菌不易瞧清.本实验采用血球计数板法，主要目得就是了解血球计数板法得构造与使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目得与要求 １、了解微生物计数常用得三种方法：分光光度法;平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板得构造与使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，就是一种常用得微生物计数方法。此法得优点就是直观、快速.将经过适当稀释得菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间得计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室得容积就是一定得（０、1mｍ2），所以可以根据在显微镜下观察到得微生物数目来换算成单位体积内得微生物总数目。由于此法计得得就是活菌体与死菌体得总与，故又称为总菌计数法. 血球计数板,通常就是一块特制得载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间得平台又被一短横槽隔成两半，每一边得平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分九个大方格,中间得大方格即为计数室，微生物得计数就在计数室中进行。 计数室得刻度一般有两种规格,一种就是一个大方格分成１６个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种就是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论就是哪种规格得计数板,每一个大方格中
血细胞计数板计算方法
血细胞计数板计算方法 血细胞可以说是人类身体的一种微型结构，而且细胞计数吧，通常是用来计算血细胞数量的一种生物学工具。血细胞计数板计算公方法是怎样的呢？如果你对这个问题感兴趣，不妨跟小编一起来研究一下吧。 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的菌数（即80个小格）。 6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。 7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。 通过上文的介绍，你对血细胞计数板的计算方法是否增加了了解呢？血细胞是存在于我们人体血液中的一种重要组成成分，对人类的健康来说具有举足轻重的影响。而医生通过测量你的血细胞分布状况和数量，对于判断身体的病灶具有重大的作用。因此我们都应该对血细胞的计算方法有所了解。
血球计数法计数原理
一、血球计数板的使用原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接计数，然后推算出含菌数的一种方法。血球计数板是常用的计菌器之一。 血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室。这一大方格的长和宽各为1mm，深度为0.1mm，其容积为0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板；大方格的长和宽各2mm，深度为0.1mm，其容积为0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板。在血球计数板上，刻有一些符号和数字(见图一)，其含义是：XB-K-25为计数板的型号和规格，表示此计数板分25个中格；0.1mm 为盖上盖玻片后计数室的高；1/400mm2表示计数室面积是1mm2，分400个小格，每小格面积是1/400 mm2。 计数室通常也有两种规格：一种是16×25型，即大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是25×16型，即大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。但是不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是由 16×25=25×16=400个小方格组成。 1．16×25型的计数板将计数室放大，可见它含16中格，一般取四角：1、4、13、16四个中方格（100个小方格）计数（见图二）。将每一中格放大，可见25个小格。计数重复3次，取其平均值。计数完毕后，依下列公式计算： 酵母细胞个数／1mL=100个小方格细胞总数/100 ×400×10000×稀释倍数
细胞计数方法细胞计数板法
细胞计数方法——-－-—细胞计数板法 实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。 具体操作: １. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。 ２、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置３miｎ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。 3。计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。然后按公式计算: 细胞数/ｍL=四大格细胞总数/4×1０个／ml (注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有１6 个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数,取平均值m,m×1６即每个格得平均值。所以,细胞密度=m×1６×10个／ml) 说明:公式中除以4,因为计数了４个大格得细胞数。 公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为: １。0mm(长)×1.0mm(宽)×０。１mm(高)=0.1mm 而1ml=1０00ul＝１0０0ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10% 以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。) =========＝===============＝==＝=＝=＝＝===＝=＝＝====＝== 细胞计数板得使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区。计数区得刻度有两种:一种就是计数区分为１６个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成２5个小方格;另一种就是一个计数区分成２5个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成1６个小方格。但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成、
细胞计数实验原理
实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液） 细胞计数与存活测试 1. 原理： 1.1. 计算细胞数目可用血球计数盘或是Coulter counter 粒子计数器自动计数。 1.2. 血球计数盘一般有二个chambers，每个chamber 中细刻9 个1 mm2 大正方形， 其中4 个角落之正方形再细刻16 个小格，深度均为0.1 mm。当chamber 上方 盖上盖玻片后，每个大正方形之体积为1 mm2 x 0.1 mm=1.0 x 10-4 ml。使用时，计 数每个大正方形内之细胞数目，乘以稀释倍数，再乘以104，即为每ml 中之细胞 数目。 细胞计数要点： ①进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于1×107 L-1，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中。 ②要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。 ③取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确。 ④数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照1个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。 ⑤操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。 初学者易犯的错误：计数前未将待测悬液吹打均匀。滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。
血球计数板使用方法
血球计数板介绍 用优质厚玻璃制成。每块计数板由H形凹槽分为2个同样的计数池。计数池两侧各有一支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。计数池画有长、宽各3.0mm的方格，分为9个大方格，每个大格面积为1.0mm.容积为0.1mm（ul），其中，中央大方格用双线分成25个中方格，位于正中及四角5个中方格是红细胞计数区域，用单线划分为16个小方格。四角的4个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16个中方格。根椐国际标准局（NBS）规定，大方格每边长度允许误差为±1%。 使用方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。
3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的 计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见右图：即本格中计数细胞为3个。 6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。 7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。 计数公式 1、16格×25格的血球计数板计算公式： 细胞数/ml=100小格内细胞个数/100×400×10000×稀释倍数 1、25格×16格的血球计数板计算公式： 细胞数/ml=80小格内细胞个数/80×400×10000×稀释倍数
细胞计数方法 细胞计数板法
细胞计数方法------细胞计数板法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml (注：当细胞很多时，可在四个大格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后对选定的小格计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个大格的平均值。所以，细胞密度=m×16×104个/ml) 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。） ================================================ 细胞计数板的使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
微生物的计数_血球计数板法
微生物的计数——血球计数板法 【摘要】测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目的与要求 1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板的构造和使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方
细胞计数
细胞计数 一、实验目的 a)1、掌握血球计数板的正确使用方法及技巧。 b)2、掌握用血球计数板计算细胞浓度的原理及方法。 二、实验原理 a)计数室容积一定，只要将适宜浓度的待测细胞悬液加入计数室并在显微 镜下计数就可算出单位体积内的细胞总数目。 b)血球计数板的计数室结构：大小：3.0mm×3.0mm。分区：9个边长1.0mm 的正方形区；其中四周和中央区为计数区，称之为一个大方格。中央大 方格用双线围成中方格；中方格内再用单线划分成小方格。四周大方格 由单线围成中方格。 c)血球计数板的规格：第一种：中间大方格组成为16×25（16个中方格， 每个中方格内25个小方格）＝400。第二种：中间大方格组成为25×16 （25个中方格，每个中方格内16个小方格）＝400 d)计数板上标识数目含义：1/400mm2：中间大方格共有400个小方格，每 小格面积为1/400mm2。0.1mm：计数板底部到盖玻片的高度。 三、实验仪器及试剂 a)材料：1/1000稀释的抗凝鸡血或绵羊血 b)试剂:肝素钠溶液,0.9%氯化钠 c)用品：普通显微镜、血球计数板、计数用盖玻片、10μL枪及枪头、酒 精棉球、吸水纸等。 四、实验步骤 a)清洁计数板及盖玻片：先用水洗，再用（70%）酒精棉球擦 b)镜检计数室：加盖片一起观察是否干净、格子是否清晰 c)样品浓度检查：加样显微观察，以每小格不超过4~5个细胞为宜，否则
应进行稀释 d)样品稀释：等渗盐水 e)加样：先加盖玻片，再加样；样加在盖玻片边缘，毛细作用吸入 f)选择计数区域：2个或4个周围大方格或全部格子。 g)计数：压线细胞不重复计数 h)计算原始细胞样品浓度：个/mL或个/L i)清洗计数板 五、实验结果 六、实验分析 经过两次计数的统计及平均，最后得到的菌液浓度为3.85*10^6个每毫升。 七、实验注意事项 a)准确稀释及混合细胞样品。 b)计数板要清洁。 c)加样量要准确。 d)计数要准确。每个样品至少计数2次，结果取其平均值；2次计数误差 不应大于10%。 e)压线细胞不能重复计数。
细胞数的测定(血球计数板的使用方法)
、目的与要求了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。 二、原理 用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的厚载玻 片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分为16个小方格（即25X 16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，每一个大方格边长为 1 mm则每一个大方格的面积为 1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片 与载玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容积为0.1 mm3 实磴圈-石血球计弦板杓构jfi 三、血球计数板的使用方法 （一）菌悬液的制备为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5?10个酵母为 宜，可采用10倍系列稀释法。 （二）加菌悬液样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。由盖玻 片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。静置5-10分钟。 （三）显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。当芽抱菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。 （四）计数时若使用刻度为25X 16 （大格）的计数板，则数四角的4个大格（即100小格）内的菌数。如用刻 细胞数的测定 D申決甌裕牧我
手把手教你做细胞计数实验
手把手教你做细胞计数实验 实验用品 0.4% 台盼蓝溶液、无水乙醇或 95% 乙醇溶液、脱脂棉、普通显微镜、试管、吸管、毛细吸管、细胞计数板、绸布。 实验原理 在细胞培养工作中，常需要了解细胞生活状态和鉴别细胞死活，确定细胞接种浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度，如用酶消化制备的细胞悬液中细胞活力的鉴别，冻存细胞复苏后的活力检测等。 细胞悬液制备后，常用活体染料台盼蓝对细胞进行染色，进行细胞计数。台盼蓝不能透过活细胞正常完整的细胞膜，故活细胞不着色。而死亡细胞的细胞膜通透性增高，可使染料进入细胞内而使细胞着色（蓝色）。 细胞计数一般用血细胞计数板，按白细胞计数方法进行计数，便于确定细胞的生活状 况。 实验内容与方法 （一）制备动物细胞悬液 将动物细胞用生物盐水制备成适当浓度的细胞悬液备用。 （二）细胞计数 1.计数板处理 用无水乙醇或 95% 乙醇溶液擦拭计数板后，用绸布擦净，另擦净盖玻片一张，把盖片覆在计数板上面。 2.染色
用滴管吸取 0.4% 台盼蓝染液，按1∶1 比例加入细胞悬液中。从计数板边缘缓缓滴入，使之充满计数板和盖片之间的空隙中。注意不要使液体流到旁边的凹槽中或带有气泡，否则要重做。稍候片刻，将计数板放在低倍镜下（10×10 倍）观察计数。 3.计数方法 按图计算计数板的四角大方格（每个大方格又分 16 个小方格）内的细胞数。计数时，只计数完整的细胞，若聚成一团的细胞则按一个细胞进行计数。在一个大方格中，如果有细胞位于线上，一般计下线细胞不计上线细胞，计左线细胞不计右线细胞。二次重复计数误差不应超过±5%（图 7-1）。镜下观察，凡折光性强而不着色者为活细胞，染上蓝色者为死细胞。
细胞计数方法--细胞计数板法
细胞计数方法------细胞计数板法实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml (注：当细胞很多时，可在四个格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个格的平均值。所以，细胞密度=m×16×104个/ml) 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而 1ml=1000ul=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。）
================================================ 细胞计数板的使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为 1/4000mm3。 使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 二、细胞计数板-使用方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。
细胞计数方法-细胞计数板法
细胞计数方法--—--—细胞计数板法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。 具体操作: 1、将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板． 2、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置3min,注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3、计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。然后按公式计算: 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×１0个/ml （注：当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有16 个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数，取平均值m,ｍ×16即每个格得平均值。所以,细胞密度=m×１6×10个/mｌ) 说明:公式中除以4,因为计数了4个大格得细胞数。 公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为： 1、0mm(长）×1、0mｍ(宽）×0、1mｍ(高)=0、1mm 而1ml＝1000ｕl=1０００ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10% 以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。) ========＝==＝＝=====＝===＝=＝＝＝=====＝======＝====＝=== 细胞计数板得使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区.计数区得刻度有两种：一种就是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开）,而每个大方格又分成2５个小方格;另一种就是一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
实验五、微生物的计数——血球计数板法
实验五、微生物的计数——血球计数板法测定微生物细胞数量的方法很多，有分光光度法、显微直接计数法和平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。本实验采用血球计数板法，主要目的是了解血球计数板法的构造和使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目的与要求 1、了解微生物计数常用的三种方法：分光光度法；平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板的构造和使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0.1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方
血球计数板的使用(有图指导)
血球计数板的构造和使用 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3. 计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.
血球计数板的使用 以计数酵母菌为例 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数. (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央计数室上加盖专用的厚玻片. (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内. (5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.
(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数. 3.计算公式 (1)16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.
细胞培养之细胞计数
细胞培养之细胞计数 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 一.准备工作： 取一瓶传代的细胞，按照《传代细胞培养（消化法）》中的传代方法繁殖细胞，待长成单层后以被使用. 二.细胞悬液制备： 用0.25％的胰蛋白酶液消化、PBS液洗涤后，加入培养液（或Hanks液或PBS 等平衡盐溶液），吹打制成待测细胞悬液。 三.细胞计数： 1.取一套血球计数板，将特制的盖玻片盖在血球计数槽上. 2.制备计数用的细胞悬液：用吸管吸5滴细胞悬液到一离心管中，加入5滴台盼蓝染液（0.4％）或苯胺黑。活细胞不会被染色，加入染液后就可以在显微镜下区别活细胞和死细胞。 3.将细胞悬液滴入计数板：将待测细胞悬液吹均匀，然后吸取少量悬液沿盖片边缘缓缓滴入，要保证盖片下充满悬液，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 4.统计四个大格的细胞数：将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察，并移动计数板，当看到镜中出现计数方格后，数出四角的四个大铬（每个大格含有16个中铬）中没有被染液染上色的细胞数目。 5.计算原细胞悬液的细胞数:按照下面公式计算细胞密度： 细胞悬液的细胞数/ml＝（四个大格子细胞数/4)×2×104 说明：/4因为计数了4个大格的细胞数；×2因细胞悬液：染液=1：1稀释；×104因为计数板中每一个大格的体积为：1.0mm×1.0mm×0.1mm＝0.1mm3而 1ml＝1000mm3 四.细胞计数要点： 1.进行细胞计数时，要求悬液中细胞数目不低于104个/ml，如果细胞数目很少要进行离心再悬浮于少量培养液中； 2.要求细胞悬液中的细胞分散良好，否则影响计数准确性。 3.取样计数前，应充分混匀细胞悬液，尤其时多次取样计数时更要注意每次取样都要混匀，以求计数准确； 4.数细胞的原则是只数完整的细胞，若细胞聚集成团时，只按照一个细胞计算。如果细胞压在格线上时，则只计上线，不计下线，只计右线，不计左线。 5. 操作时，注意盖片下不能有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中，否则要重新计数。 五.初学者易犯的错误： 1. 计数前未将待测悬液吹打均匀。 2. 滴入细胞悬液时盖玻片下出现气泡。 3. 滴入悬液时的量太多，至使细胞悬液流入旁边的槽中。 六.本实验特殊试剂的配制：
红细胞计数、白细胞计数实验报告
.实验原理 用等渗稀释液将血液稀释一定倍数，充入计数池后，在显微镜下计数一定体积内的红细胞数量，经换算求出每升血液中的红细胞数量。用白细胞稀释液将血液稀释一定的倍数，同时破坏溶解红细胞。将稀释的血液注入血红细胞计数板，在显微镜下计数一定体积内的白细胞数，经换算即可求出每升血液中的白细胞数量。 二.实验内容与步骤 1、红细胞计数 （1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板 （2）试剂：RBC稀释液①Hayem稀释液：NaCI, Na2SO4, HgCI2②枸橼酸钠甲醛盐水溶液：枸橼酸钠，甲醛，NaCI③生理盐水或含1%P醛的生理盐水：仅在急诊或无上述两种稀释液时临时使用 （3）标本：外周血或抗凝血（EDTA抗凝） （4）操作步骤：①小试管加RBC ffi释液2.0 ml。 ②采血，取血10卩l。 ③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立 即混匀。 ④混匀后充入计数室，静置3~5 min，高倍镜下计数（用高倍镜依 次计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细 胞数。）
2 、白细胞计数 （1）器材：显微镜、微量吸管、改良Neubauer计数板 （2）试剂：WB（稀释液：冰醋酸3.0 mL （破坏红细胞）；蒸馏水97.0 mL ；亚甲蓝（染色） （3）标本：新鲜全血或末稍血 （4）操作步骤：①小试管加WB（稀释液0.38 mL。 ②采血，微量吸管取血20卩L。 ③擦去管外的血，轻吹入试管底部，再清洗吸管2~3次，立即混 匀。 ④混匀后充入计数室，静置2~3 min，低倍镜下计数（用低倍镜计 数出计数池内四角大方格中的白细胞总数。）三.实验结果 RBC/L = 405/100 X 10 = 4.05 X 10 / L 表二白细胞计数表 9 , WBC/L = 112/20X 109= 5.6X 109/ L 实验结果：RBC 4.05 X 1012/ L 9 WBC 5.6 X 10 / L 四.讨论 1、从实验结果与正常范围比较，实验结果没有超出正常范围，提示被采血 者无病理或生理性异常。
血细胞计数板的构造和使用方法简介
血细胞计数板的构造和使用方法简介 【摘要】人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板（血球计数板），教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。本文简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。 【关键词】血细胞计数板的构造计数方法使用方法 人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板（血球计数板），教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。下面简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。 1.血细胞计数板的构造 血细胞计数板(血球计数板)是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞、细菌等一些微小物体的长度，测量单位体积细胞的数量等。血细胞计数板是由一块比普通玻片大而厚的特制玻璃片制成的，它的两边有两个凸起部分，中间有四条槽沟构成三个平台，中央的平台较宽，而且被一短槽隔成两半，每个半边上各刻有一个方格网，每个方格网共有九大格，中央的大格就是计数室、中央的平台比两边稍低，加盖盖玻片后，中央平台要比两边平台低0.1mm,也就是盖上盖玻片后计数室深度为0.1mm.。（见图A、B、C、D） 1.1 计数室的规格有两种，一种是由25中格组成，每个中格又分为16个小格（共25×16＝400小格）（见图E）；另一种是由16中格组成，每个中格又分成25个小格（共16×25＝400小格）(见图F)。可见，尽管计数室有两种规格，但是，不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是16×25=25×16=400个小方格组成。 1.2 计数室的大小有两种，一种是边长为1mm,则计数室面积为1mm2,每个小格面积为〖SX(〗1〖〗400〖SX)〗mm 2 ，盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm。所以，一个计数室的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗4000〖SX)〗mm 3 ；另一种是边长为2mm，则计数室的面积为4mm2，每个小格面积为〖SX(〗1〖〗100〖SX)〗mm2，盖上盖玻片后计数室的高度为0.1mm，所以，一个计数室的体积为0.4mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗1000〖SX)〗mm3。 〖XC12.TIF；%50%50〗 2.计数方法 2.1 25×16计数室：显微镜下数左上、右上、左下、右下和中央共五个中格，即5×16＝80个小方格的细菌数，若这80个小方格细菌数为A(对每个样品计数三次,取其平均值)。①若计数室的边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX(〗A〖〗80〖SX)〗×400×10×1000=50000A（若菌液被稀释，还要乘以
微生物显微计数--血球计数板法
微生物显微计数-－血球计数板法 一、目的要求 1．了解血球计数板的构造和使用方法。 2．学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（0．1mm2），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。 血球计数板，通常是一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室，微生物的计数就在计数室中进行。 计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，而每个中方格又分成25个小方格；另一种是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论是哪种规格的计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同的，即16×25=400小方格。 每一个大方格边长为1mm，则每一大方格的面积为1mm2，盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为0．1mm，所以计数室的容积为0．1mm3。 在计数时，通常数五个中方格的总菌数，然后求得每个中方格的平均值，再乘上16或25，就得出一个大方格中的总菌数，然后再换算成1ml菌液中的总菌数。 下面以一个大方格有25个中方格的计数板为例进行计算：设五个中方格中总菌数为A，菌液稀释倍数为B，那么，一个大方格中的总菌数 因1ml=1cm3=1000mm3， =50000A·B（个） 同理，如果是16个中方格的计数板，设五个中方格的总菌数为A＇，则 三、器材 酿酒酵母菌悬液，血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管。 四、操作步骤 1．稀释 将酿酒酵母菌悬液进行适当稀释，菌液如不浓，可不必稀释。 2．镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。 3．加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的细口滴管将稀释的酿酒酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。注意不可有气泡产生。 4．显微镜计数 静止5分钟后，将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。
细胞计数板使用方法.
细胞计数板使用方法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3 而1ml=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液） 细胞计数板的使用 血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
计数区边长为1mm，则计数区的面积为1mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用细胞计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 细胞计数板-使用方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的细胞计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将细胞计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央1个大方格的菌数（即80个小格）。为了保证计数的准确性，避免重复计数和漏记，在计数时，对沉降在格线上的细胞的统计应有统一的规定。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。即位于本格上线和左线上的细胞计入本格，本格的下线和右线上的细胞按规定计入相应的格中。见下图：即本格中计数细胞为3个。