光合细菌的培养及应用方法-em菌种养殖专用em菌种种植专用em菌
光合细菌的培养及应用方法
光合细菌(简称PSB)是地球上最早出现具有原始光能合成体系的原核生物，是一大类在厌氧条件下进行不放氧光合作用的细菌的总称，广泛存在于地球生物圈的各处。光合细菌在水产养殖上的应用主要有以下五个方面：作为养殖水质净化剂；作为饲料添加剂；用于鱼、虾、贝幼体的培育；作为动物性生物饵料的饵料；防治鱼病。
一、培养工具的消毒方法
1．加热消毒法：利用高温杀死微生物的方法。
（1）直接灼烧：此法可直接把微生物烧死，灭菌彻底，但只适用于小型金属或玻璃工具的消毒。
（2）煮沸消毒：一般煮沸5～10分钟，适用于小型容器、工具的消毒。
（3）烘干箱消毒：亦称为恒温干燥箱消毒法。
2．化学药品消毒法：适用在批量培养中，大型容器、工具、玻璃钢水槽和水泥池中。
（1）酒精：浓度为70％的酒精常用于中、小型容器的消毒。用纱布蘸酒精在容器、工具的表面涂抹，10分钟后，用消毒水冲洗两次即可。
（2）高锰酸钾：按300ppm配成高锰酸钾溶液，把洗刷洁净的容器、工具放在溶液中浸泡5分钟，取出，再用消毒水冲洗2次～3次即可。
二、光合细菌的培养条件
1、营养条件
光合细菌细胞体构成元素主要有：碳、氢、氧、氮、磷、钾、钠、镁、钙、硫和一些微量元素等，它们也是所有生物细胞构成的主要物质。一般情况下，比重：水占80％-90％、无机盐1％-1.5％、蛋白质7％-10％、脂肪1％-2％、糖类和其它有机物1％-1.5％。其中干细胞含碳45％-55％、氢5％-10％、氧20％-30％、氮5％-13％、磷3％-5％、其它矿物元素3％-5％。光合细菌的细胞膜具有半透性，能选择性地让营养成分按一定需要进细胞内，在酶的作用下合成自己的细胞组分并促进分裂新的个体。
营养元素的全面合理的搭配,是培养高产光合细菌的关键。根据这一要求,郑州@@@@生物材料公司选用多种光合细菌生长必需的原料，科学配方，经特殊加工而成的"光合细菌发生剂（培养基）"，
基本符合光合细菌生长繁殖所需的营养要求，无毒无副作用，使用安全，固状结晶体便于包装和运输，而且有2年的保质期。
光合细菌培养基是光合细菌生长繁殖所需各种营养元素的复合体。每种原料都能得以充分利用，最大限度地生产高浓度的菌液，因此，单位效价的光合细菌菌液生产成本低、质量好，这无论是对于用户、经销商还是厂家都有很大的益处，对在工农业生产中的推广和普及将产生深远的影响。
2.环境条件
有了营养全面的光合细菌培养基，只是满足了其生长的内在条件，并不能培养出光合细菌菌液。还需有适宜光合细菌生长的环境条件，才能培养出优质的菌液。环境条件具体有以下几个方面：（1）.培养介质：含菌量低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水。从经济、实用的角度考虑，地下水含菌量低，为最佳水源；清洁的地表水也可使用；含氯量较高的自来水应敞口放置两三天或调pH值至偏碱后使用；蒸馏水及纯净水固然很好，但成本太高，可用于提纯菌种。
（2）.酸碱度（pH）值：7.5-8.5最佳（适应范围6-10）。
（3）.水硬度：pH值中性时10度以下。即调节pH值至8.0左右时，培养介质中的乳白色沉淀物不宜过多。
（4）.温度：25℃-34℃最佳（适应范围15℃-40℃）。
（5）.光照强度:3000LX-4000LX最佳。即每25千克菌液需用60瓦左右的电灯泡进行光照，当然，太阳光最好且无需成本。
（6）.透气性：密闭、敞口皆可培养，密闭效果更好。
（7）.容器：透明或白色容器；大规模培养可用土池、水泥池等，菌液深度30厘米以下为
佳。
三、接种
培养基配制好后，应立即进行接种。光合细菌生产性培养的接种量比较高，一般为20％～50％，即菌种母液量和新配培养量之比为1：4（20％）～1：1（50％），且不应低于20％，尤其微气培养接种总量应高些，否则，光合细菌在培养液中很难占绝对优势。
四、光合细菌的生产工艺
1、培养液的配制
将光合细菌培养基取一小包（0.5公斤），放入一个干净的容器中，加入100公斤水，搅拌均匀，直到培养基溶化为止。
注意事项：水源一定要选择好，含菌量较低的清洁淡水、海水或加粗食盐的淡水。从经济、实
用的角度考虑，地下水（井水）含菌量低，为最佳水源，另外，若当地自来水含氯较低，也可用，效果很好；清洁的地表水也可使用；含氯量较高的自来水应敞口放置两三天或调pH值至偏碱后使用。
容器：少量生产可用透明度较高的白色或透明塑料桶、玻璃容器。大量生产可用水泥池、水泥船，也可临时开挖土池，垫上双层塑料膜防漏防浑浊，培养液的深度为30厘米最佳。
2、培养方式有以下二种：
（1）做小规模培养
①容器为：1.25升的饮料瓶，即小规模生产方法，由于饮料瓶的量小，瓶子透明度好，又密封，所以培养环境好，需要的接种量也少，比较简单。
②设备为：光照箱，用一个大的纸箱，放1个40瓦的白炽灯悬挂在箱子的顶部？（注意防火），纸箱内壁四周，摆装好了培养液并接了种的饮料瓶，这样，既达到了保温到25—40度的效果，又达到了光照的效果。较大的箱子要用60瓦的白炽灯，一般一个箱子，可放这种饮料瓶8个以上，即一次可生产约10公斤/箱。灯泡与瓶子的距离不超过20厘米。夏天，可撤去纸箱，以防温度过高，并在纸箱四周钻孔以散热。
③操作规程如下：
配料：培养液和液体菌种4：1
培养：在箱子内，打开白炽灯，照几天即可，一般可达到温度在35度，控制在30--40度之内，第一次培养可能需要5天以上，每天早晚摇晃两次，一般只需要2天即可长成深红色。
成熟标准：以培养液长成深红色为准，这时一般成品的光合细菌浓度可达到30--50亿/毫升。
（2）大规模培养：利用太阳能大规模培养（以培养2吨菌液为例）：
选择阳光充足的地方，开挖一土池（长5米、宽1.8米、深0.4米），垫上塑料薄膜，然后再铺上桶状塑料薄膜，并将其一端密封，从另一端加入1.8吨配制好的培养液，和0.2吨的菌种，一共2吨，排尽薄膜中空气后，再将该端密封。保持适当的温度，冬天如果温度过低，搭建透明塑料薄膜棚增温。5天后，菌液培养成熟。
五、培养管理
光合细菌的培养日常管理包括测试、观察和分析处理等三个方面。
1.测试
（1）搅拌：光合细菌培养过程中必须搅拌或充气，其作用是帮助沉淀的光合细菌上浮获得光照，保持菌细胞的良好生长，每天至少摇动3次，定时进行。
（2）调节光照度：培养光合细菌需要连续进行照明，白天可利用太阳光源培养，晚间则需人工光源照明，或完全利用人工光源培养。人工光源一般使用碘钨灯或白炽灯泡。一般培养光照强度控制在2000lx～5000lx之间。
（3）调节温度：在光合细菌的培养过程中，一般在23℃～39℃均能正常生长繁殖，但如果温度过低，可以把培养容器放在箱子里，利用白炽灯炮散发的热提高箱内温度，并根据需要调整箱子的密封程度达到调节温度的目的。
（4）酸碱度的测定和调整为了延长光合细菌的指数生长期，提高培养基的利用率和单位水体的产量，测定和调整pH值是一项重要措施。一般采用加酸的办法降低菌液的酸碱度，醋酸、乳酸均可使用，而最常用的是醋酸。在日常的管理工作中，必须每天测定菌液的pH值，当pH值上升超出最适范围，即加酸调整。
（5）测定光密度（O.D.）值光密度值和细胞干重之间是近似线性关系，这种相关关系常用来测定培养物的浓度。首先根据测定的数据画出相关的标准曲线图，然后测定菌液的光密度值，即可根据标准曲线大致估算出菌细胞的浓度。光密度值常用分光光度计测定。在日常管理工作中，通过测定菌液的光密度，可以了解光合细菌的生长繁殖情况。
2.生长情况的观察和检查在培养过程中，可以通过观察菌液的颜色及其变化来了解光合细菌生长繁殖的大致情况。菌液的颜色是否正常，接种后颜色是否由浅迅速变深，均反映光合细菌生长是否正常以及繁殖速度的快慢。此外，通过测定菌液的光密度值及其变化情况，能更准确地了解菌体的生长繁殖情况。接种后，光密度值迅速加大，表示生长正常、繁殖迅速。如果光密度值不增加以及菌液颜色不正常、出现菌体附壁等现象，说明培养效果不良。必要时还可以通过显微镜检查，了解细菌生长情况。
3.问题的分析和处理：通过日常管理、检测、观察和检查，了解光合细菌的生长情况，就可以结合当时环境条件的变化进行分析，找出影响光合细菌正常生长的原因，采取相应的对策。影响光合细菌生长的原因很多，从内因看菌种本身是否优良，即接种的母种的质量是否优良；从外因看，不外乎是光照、温度、营养、敌害、厌气程度等方面。
六、光合细菌的培养液颜色解析
平时，在我们培养光合细菌的生产实践中，经常会遇到培养液出现不同的颜色，自然界的光合细菌分别属于红螺菌科、着色菌科、绿杆菌科、和绿色丝状菌科等四个科目，一共23属，
80余种菌侏。目前水产养殖上用得最为广泛的种类是红螺菌科，特别是红色假单孢菌属中的种类。这类光合细菌在净化水质、防治疾病和促进水产动物生长方面有着较明显的效果。
1、光合细菌培养液的颜色。
光合细菌的光合色素包括细菌叶绿素和胡萝卜素，菌体因各种色素含量的不同而呈现出不同的颜色。一般红螺菌科和着色菌科的菌呈现出红色、粉红色、橙色、紫色或茶褐色；绿杆菌科和绿色丝状菌科的菌呈现出绿色。
但由于培养条件的不同，其颜色在此基础上仍会有变化：如球形红色假单孢菌和荚膜红色假单孢菌的厌氧液体培养液呈茶褐色，而在半好氧（微厌氧）状态下培养液呈红色。这是因为由于氧的存在，对光合细菌色素的合成有十分明显的抑制作用。
下表为水养殖中常用的红色假单孢菌属的几个种在不同培养条件下的呈色反应：
表一、红螺菌科红假单孢菌属中的几个种在厌氧条件与半好氧条件下液体培养物的颜色比较
2、生产实践中光合细菌培养液颜色变化的分析：
很多客户一般在培养的开始期，如头几天会出现黄褐色，或浅黄色，如果坚持培养下去，而不是就此倒掉，最终仍可以培养出外观质量较好的红色菌液来。从上表也可以看出，往往是最后才变成红色。
很多客户往往出现，同样的操作，同一批产品，为什么有的培养容器中会产生绿色的溶液颜色。
这时，您可能要检查一下，是否容器密封得太死，最好是有一点氧气进入会更好。从上表也可以看出，在半好氧的条件下，往往可以得到比较鲜艳的红色产品。所以培养时，最好能进入一次空气，或在容器中留一部分空气，一来可以保持半好氧状态，二来也便于摇晃均匀。
如果最终培养成为了绿色的液体，这时，培养液中的营养也已消耗殆尽了，只是不能作为商品出售，可以自用（也是光合细菌）。
另外，温度高，光照强的条件下，容易得到绿色菌，这是因为此时的条件容易造成水体缺氧，从而引起绿色菌的生长优势。
总之，要得到颜色鲜艳的红色菌，就必须注意以下几个条件，1、注意要保持半好氧培养的条。
2、温度光照不要太强。
3、出现一点绿色也不要灰心，要及时采取措施，如增加供氧，遮荫降温等，并坚持培养下去。
4、平时注意用灯泡和纸箱的培养方式，不间断地培养一些菌种，因为必竟这种培养的方式得到的培养液的质量好，菌体稳定。
七、光合细菌在水产养殖中的应用技术
1、净化水质
由于高密度水产养殖的水体中含有大量的鱼类粪便和残饵，以及鱼药的残留物，它们腐败后产生的氨态氮、硫化氢和一些有害物质，直接污染水体和底泥。轻度污染可造成鱼类生活不适，饵料系数增高，生长缓慢，积累到一定程度后，可使水体底部缺氧的情况下，PSB能有效地将氨态氮、硫化氢等有害物质吸收，组成菌体本身，从而提高水体中溶氧含量，调节pH。水体的富营养化亦可滋生大量的病原微生物，使鱼类感染发病。施用PSB后，还能抑制其它病原菌的生长，从而达到净化水质，使鱼类健康生长的目的。
2、维护水体微生态平衡
水产养殖场的水体中存在着各种各样的微生物，有些是有益的，有些是有害的；也有些是处于中间状态的叫“条件致病微生物”，即正常情况下，这类微生物不致病，遇水质污染，鱼类免疫功能下降时，它们便大量繁殖危害鱼类。
通常人们采用消毒杀菌剂来控制，但随着施用次数的增加，病原微生物的耐药性也相应地增强，为了达到预防和治疗的效果，每次施用的剂量不得不逐渐加大，这不仅增加了用药成本，而且还污染了水体，造成水产品质量下降，甚至不能食用。
如何控制病原微生物的生长繁殖，又不使其不产生抗药性，不污染水体呢？答案是现成的，用光合细菌预防鱼病，完全可克服消毒杀菌剂的缺点，它不仅可降解或清除水体中包括鱼药在内的有害化学物质，占绝对优势的光合细菌还可与病原微生物争夺营养、空间，使其无法进行大量生长繁殖，
同时还不存在病原微生物耐药性问题，从而不易形成致病的环境条件，鱼类也就不易发病。
鱼类的病害防治原则是：防重于治。只有在日常的渔业生产中，维持水体中微生态系统平衡，使有益微生物始终占绝对优势，尽量不给病原微生物有大量生长繁殖的机会，才是健康养殖的出路之一，如果平时不能有效地预防，到了出现症状再去治疗，包括鱼药成本在内的重大生产损失将是不可避免的。
3、培养蜉蝣动物作饵料
PSB的菌体细胞营养很丰富，这正好是蜉蝣动物的优质饵料，实践证明，水体中的PSB越多，蜉蝣动物生长也就越旺盛，以蜉蝣动物为食的鱼类增产效果也就越明显
4、作为饲料添加剂
PSB的菌体细胞营养丰富，并含有大量的生理活性物质，可直接拌入饲料中投喂，除增加营养，降低饲料系数外，还可起到刺激动物免疫系统，增强消化和抗病能力，促进生长的作用。
5、间接增氧作用
PSB生长繁殖时，不需要氧气，也不释放氧气，它是通过吸收水体中的耗氧因子，而产生了间接地增加氧气的作用。
八、光合细菌在养殖和种植上的用法用量
（一）PSB在水产及畜禽养殖中的应用剂量及注意事项。
PSB对各种水产养殖动物都有益，尤其是育苗阶段的效果特别地明显，具有成活率高于对照20—60%，用于成鱼育肥，增产20%左右，饵料系数下降20%左右，个体增重15%，且无任何副作用。
育苗用量：每平方米用100克。间隔10天用一次。
鱼育肥：首次用7公斤一亩，以后用4—5公斤/亩，间隔15天用一次。
鱼苗或病鱼药浴：用光合细菌稀释10倍，把鱼苗或病鱼放入游15分钟即可。
药浴后，可使药浴鱼虾成活率提高90%，如患粘细菌病、烂鳃病、打印病后成活60-100%，患水霉病、赤鳍病、擦伤病后成活近100% 且无任何药浴副作用。
饲料中用量：鱼苗5%，成鱼3%，禽畜3%-5%，现拌现喂，喂水添加3%。现拌现喂。
施用方法：适当用水稀释后全池洒匀，若先用生石灰后2小时，再用PSB则效果更好。
注意事项：不可与消毒杀菌剂同时使用，水体消毒须1周后方可使用。晴天水温在20度以上时使用效果较好。液体PSB拌入料中后应于当天用完。酸性水体易使鱼生病，且不利于PSB生长，应常用生石灰调节水体pH值。
（二）在种植业上的应用：
水稻、小麦：每次亩用5千克叶面喷施。水稻秧苗期、孕穗期各用一次；小麦冬肥、拔节期各
用一次。
油菜：基肥亩用15千克浇根。窜苔前亩用15千克叶面喷施。
瓜果类蔬菜：每次亩用10千克，幼苗期稀释浇根一次，现蕾期喷一次。
叶菜类蔬菜：每次亩用20千克，生长期浇根或叶面喷施，7天用一次。
花卉：移载后每亩40千克浇根，生长期每亩20千克喷施，15天一次。
茶树：播种基肥亩用80千克。冬肥亩用40千克浇根。萌发期前亩用20千克浇根，叶片生长期亩用15千克喷施，每15天一次。
果树：冬肥亩用40千克浇根。新叶长成后亩用20千克叶面喷施。
（三）使用方法
（1）将光合细菌菌液稀释20-30倍全池均匀泼洒。
（2）将菌液用沸石粉吸附或拌和细土后撒入池中。
（3）将菌液拌和饲料后投喂。
（4）将菌液稀释10倍后，浸泡鱼种。
（5）拌种、浇根、叶面喷施。
（四）.注意事项
（1）不可与消毒杀菌剂混合使用，水体消毒须1周后方可使用。
（2）使用前，将菌液光照10小时以上，使用效果更好。
（3）晴天水温20℃以上时使用效果较好。
（4）拌入的饲料应于当天投喂完毕。
（5）应灵活掌握用量和使用的连续性，因为光合细菌在水体中只有形成优势群落后，才能发挥最大的作用。宜春专利中心提供光合细菌发生剂。
（6）水体呈碱性时施用效果最好。酸性水体易使鱼类生病，应常用生石灰或烧碱调节pH值至中性或偏碱程度。
（7）光合细菌菌液不能用金属器皿贮存。
（8）培育鱼苗时，在苗种入池前7天全池泼洒，以利于浮游生物生长。
（9）植物萌发期，施用效果最好。
九、光合细菌液体成品的保存方法
成品应放在低温环境下，15度以下最好，夏季应放在凉爽的地方，并要保持一定的光照度，每天不低于2小时，这是因为PSB在刚刚结束培养时，正处于生长旺盛期，形成了很强的“生长惯性”，如果此时突然没有了光照或光照很弱，经5~10天后会出现光合作用失衡而导致大量死亡，使菌液发
黑，并有恶臭，刚开始发黑时若施以适当光照，即可缓和。所以刚培养好的成品应尽量降温，逐步降光照，以减少生长惯性，到了生长惯性很弱或没有惯性时，PSB就进入了稳定期，此时在阴凉避光处可保存6个月。
总之，保存期的长短主要取决于温度、光度。通常您在正常的连续的生产及使用过程中，对PSB 的的保存及留种无须做特别的处理，如：夏天在太阳下培养的产品就放于阳光下，可保2个月，可不断地再培养，扩大，反复等。秋天，培养的最后一批产品可保1年之久。
十、光合细菌的活菌计数和纯种分离技术
采用琼脂固体培养基涂抹培养计数分离法。
条件：无菌室、过滤空气鼓风工作台、平皿、接种针、固体培养基、液体培养基、密封玻璃试管、高压灭菌锅、加热器、培养箱等。
步骤：（在无菌室内操作）
1.将适量琼脂固体培养基高压蒸煮(120℃)20分钟后，倒入若干个平皿冷却到45℃以下，制成固体培养基待用。
2.取待测光合细菌菌液，分别用蒸馏水以10万倍、50万倍、100万倍、500万倍、5000万倍、10000万倍稀释。
3.分别从每个稀释倍液中取1毫升的样本各10个，均匀涂布于贴好相应标签的平皿内固体琼脂培养基平面上。
4.将平皿放入培养箱培养12-50个小时，如菌落未长成，再继续培养，直到有明显的菌落长成为止。
5.各种菌的菌落颜色、形状各不相同，根据光合细菌菌落特征，找出光合细菌菌落，并计数。取同稀释倍液10个样本菌落的平均数，乘以它的稀释倍数，即可大约得出待测菌液每毫升含光合细菌的活菌数。取各稀释倍液算出的每毫升含光合细菌活菌的平均数，即可较为准确地检测出该待测菌液的浓度。实际操作并不如此简单，因为菌落有杂菌和光合菌交错在一起的，也有两个以上光合细菌菌落合在一起的，很难分辨计数。
6.用接种针将光合细菌菌落挑出，用适量蒸馏水稀释后，再涂布于固体培养基平面上，进行培养，待光合细菌在培养基上再次长成菌落后，在鼓风工作台内用接种针挑出，接入盛有经高压蒸煮灭活过液体培养基的试管内，进行密封厌氧培养，培养好的光合细菌就是纯菌种。
纯菌种的分离是专业性很强的一门技术，只有专业人员，且经验丰富的，才能识别各种菌落，从中分离出有用的菌株。
十一、光合细菌品质的鉴别
目前，市面上光合细菌产品良莠不齐，有些不法厂家为达到赢利目的，采用色素加水调配成所谓的光合细菌，或用培养得不好的劣质光合细菌加色素调配。这些假、劣产品从外貌看几乎可以乱真，但是由于质量低劣，完全达不到有关指标的标准，使用后甚至会残害养殖对象，严重地侵犯了用户的利益。如何分辨光合细菌产品的真与假、劣，成为许多用户头疼的事情。
科学培养出来的光合细菌产品的红色是光合细菌菌体的颜色，为非水溶性的，而用色素调配出来的假劣产品的红色为水溶性色素的颜色。根据这两者的不同，我们设计了一套鉴别真与假、劣产品的方法，经反复试验证明该方法科学、准确、易操作、易观察。现将此方法介绍给广大用户，希望能对用户辨别真与假、劣光合菌产品有所帮助。具体方法如下：
1、鉴别绿色色素溶液的配制：称取食用果绿色素0.1克，溶于100毫升自来水中，配成深绿色的鉴别色素溶液。或取少量食用果绿色素，溶于适量自来水中，配成深绿色的溶液。
2、取样品：取待测的样品10-20毫升装于干净、透明的玻璃管中。
3、滴2滴鉴别绿色素溶液于装有待测样品的玻璃管中。
4、观察颜色的反应。
若样品为真正培养的光合细菌产品，绿色素溶液则会与红色光合细菌分层，上层绿色为绿色素溶液，下层红色为光合细菌液，摇动之后稍微放置，分层仍是存在，滴加的鉴别绿色素溶液越多，绿色层所占的比例越多，最后，整玻璃管都为绿色。
若是用色素调配出来的假光合细菌产品，可见滴加的鉴别绿色素溶液会溶于红色产品中，绿色溶液与红色溶液不会分层，轻轻摇动后，两者颜色会混匀，样品的红色加深，红中带有点紫，滴加的绿色色素溶液越多，颜色就会逐渐加深为紫黑色。
有些厂家在培养得不好的劣质光合细菌产品中加色素调色。如果鉴别这一类加有色素的劣质光合细菌产品，同样也可用上述的方法。产品中因色素加量不同，加入鉴别绿色色素溶液后，会有不同的颜色反应。若其产品中红色素添加量较少，滴加鉴别绿色色素溶液后，会有分层，上层为浅绿，绿中带有些紫。随着产品内红色素加量的增加，滴加绿色素溶液后还会有分层，但上层较下层深紫红，产品内调配的红色素量进一步加大，上层颜色为深紫，轻摇后，整管颜色为紫黑色。
十二、沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂产品质量暂行标准
1998-8-4 农牧函[1998]30号
沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂产品质量暂行标准
1．主题内容与适用范围
本标准规定了沼泽红假单胞菌（光合细菌）水剂产品的质量指标、试验方法、检验规则、
标志包装、运输、储存的要求。
本标准适用于沼泽红假单胞菌类（光合细菌）水剂的生产。
2．引用标准
下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。在标准出版时，所示版本均为有效，所有标准都会被修订，使用标准的各方应探讨、使用下列标准最新版本的可能性。
GB 13079－91饲料卫生标准
GB 13091－91饲料中沙门氏菌的检验方法
GB 8381－87 饲料中黄曲霉素B1的测定方法
GB 13079－91饲料中总砷的测定方法
GB 13080－91 饲料中铅的测定方法
GB 10648－93饲料标签
3．技术要求
3．1微生物指标
3．1．1菌落形态
本品稀释后在琼脂培养皿上培养，菌落形态为草帽形或园形，表面光滑，少隆起，边缘整齐，棕红色。
3．1．2菌体形态
显微镜下观察，本产品菌体形态为短杆状或卵园形，宽0.5-0.9微米，长1.2-2.0微米，无芽孢，无荚膜，单极鞭毛，可运动。
3．1．3革兰氏染色阴性
3．2感观指标
本品为红色悬浮液体，带培养基发酵味，长时间静置红色悬浮菌体会逐渐下沉，振荡后可恢复悬浮液状，无臭味。
3．3光合细菌含量
总菌数不低于30亿个／ml 活菌数不低于20亿个／ml
3．4理化指标
酸度pH6.5-7.0 电导率6－8ms/cm
3．5光谱指标
光吸收植A660＞1.5 A490＞2.5 A805＞1.7 A860＞1.9
3．6卫生指标
沙门氏菌无黄曲霉素B1 Mg/Kg ＜0.02 总砷（AS） Mg/Kg ＜0.5 铅 Mg/Kg ＜2.0 4．试验方法
4．1试剂和溶液
除特别注明外，试验中所用试剂为分析纯试剂，水为蒸馏水或相应程度的水，溶液为水溶液。4．1光合细菌培养液
5.5g磷酸二氢钠，1.5gDL苹果酸，2g乙酸钠，2g氢氧化钠，1g氯化铵，0.25g氯化镁，0.05g氯化钙溶于1升蒸馏水，再加入本产品生产中用的生长因子溶液和微量元素溶液各1ml，搅拌均匀，pH应于
6.5至
7.0之间。
4．2常规实验和仪器和设备
4．2．1分光光度计：有10mm比色池，可在340－900nm处测量吸光度。
4．2．2 1600倍光学显微镜
4．2．3电动离心机（4000转／分）
4．2．4酸度计：精度0.01pH
4．2．5电导仪：DDS－11型（或同等精度其它型号）
4．3取样
需备20ml具塞磨口无色透明的三角瓶为样品瓶，洗净后置烘箱120℃干燥灭菌，用清洁并灭菌后的25ml移液管（或吸管）随机在5桶产品中各取25ml左右置于样品瓶中混和，将靡口塞盖严，用胶布封住，贴上标签注明厂名、产品名，批号。取样日期、生产日期。
按和以上相同方法取样200ml置于一干燥灭菌洁净的200ml白塑料瓶中，注明标签（内容同上）密封后留存。
4．4检验方法
4．4．1微生物检验
4．4．1．1菌落形态检验：用含1.2％琼脂的光合菌用培养液，除菌处理后，在无菌环境中，充平皿板，厚约3－5mm。凝固后取光合菌液做平板划线，将平皿厌氧培养光照3－5天，室温30℃，3－5天后长出红色菌落，观察菌落形态。
4．4．1．2原菌液用培养液稀释100倍，取一滴置载片上（盖盖片）在高倍镜下（16×40）观察菌形态大小及运动状态。
4．4．1．3培养中的菌液一滴做涂片，自然干燥，酒精灯火焰固定，经初染（结晶紫），媒染（路氏碘液），脱色（95％乙醇），复染（番红染液）后，油镜（16×100）观察，菌体呈红色。4．4．2感观检验
量取样品500ml，置三角瓶中，用肉眼观察颜色，用嗅觉检察嗅味。长期静置已有沉淀的产品应先振荡或搅拌10－20秒后再取样。
4．4．3含量测定
4．4．3．1总菌数测定：样品充分振荡后取0.5ml用水稀释到200ml灭菌水中，搅匀后从中取数微升充板入血球计数板的计数池中（每大格0.1mm3，置600倍显微镜下观察，同时用红血球计数法记菌数，将25个小格的每格菌数平均值乘1亿为每毫升总菌数。
4．4．3．2活菌数测定：将4．4．3．1节中稀释的菌液再稀释100000倍，取1ml加到10ml培养液中，混合均匀后加入20g/1000ml浓度琼脂溶液10ml，置平皿中凝固，加玻璃盖在25－30℃温度，无菌环境下，60瓦白炽灯照射，距灯泡12cm，1－2天后观察计数菌落数，以下式计算：
每毫升样品中的活菌数＝菌落计数／25×1亿
4．4．4理化指标测定
4．4．4．1酸度测定
以不低于0.01pH值精度的酸度计，直接于20ml样品中测量。
4．4．4．2电导率测定
以DOS－IIA型（或同等精度其它型号）电导仪直接于20ml样品中测量。
4．4．5光谱指标测定
取0.5ml样品置3ml容积，1cm光径比色杯中，加入2ml蒸馏水，以蒸馏水为对照，在可见分光光度计中读取660nm、490nm、805nm、860nm波长处光吸收值，再乘5得到以上几个波长处的光吸收值。
4．4．6卫生指标检验
4．4．6．1沙门氏杆菌检验：按GB13091－91测定方法检测
4．4．6．2黄曲霉素B1检验：按GB8381－87测定方法检测
4．4．6．3总砷含量测定：按GB13079－91测定方法检测
4．4．6．4铅含量测定：按GB13080－91方法检测
5．检验规则
5．1本品应由生产厂的质量检验部门进行检验，生产厂保证所有出厂的产品均符合本标准的要求，每批出厂的产品，都应附有质量检验合格证明书。
5．2感观指标、理化光谱及微生物指标为生产厂日常检验项目，由生产厂质检部门进行检验。6．判定规则
检验中有一项指标不符合本标准时，应重新抽样，进行复检，复检结果仍有一项指标不符合本标准时，则该批产品不能验收。
7．标签、包装、运输、储存
7．1标签
7．1．1采用鲜明的标签贴于外包装；
7．1．2标签内容应符合饲料标签标准规定要求；
7．1．3标签上需采用现已注册的商标，条件成熟时考虑增加防伪标志。
7．2包装：采用白色聚乙烯有密封盖的塑料桶或塑料瓶。
7．3运输：运输中应避免日晒，避免35℃以上高温，搬运装卸时小心轻放，不得到置，不得与有毒物质混装混运。
7．4储存
应保存于阴凉的仓库中，避免直接日晒，（不需要黑暗）避免30℃以上高温，不得和有毒、有害物质一起堆放。原包装（未开封）保质期4个月。
十四、培养基配方
光合细菌的培养基
对光合细菌培养条件进行了优化研究，结果表明：菌株的生长温度为30℃时，最适培养光照为3000ｌｘ，最低接种浓度为6%。培养基正交试验研究表明其最优培养基配方为：氯化铵2．00ｇ、磷酸氢二钾0．20ｇ、乙酸钠4．00ｇ、碳酸氢钠2．00ｇ、氯化钠1．00ｇ、酵母膏0．15ｇ、硫酸镁0．20ｇ、Ｔ.Ｍ储液少量、蒸馏水1000ｍＬ;其中乙酸钠为最大影响因子。酵母膏对产品品质影响较大，要求酵母膏质量稳定，无杂菌。
目前应用的光合细菌有多种配方，现介绍一种常用的配方：
磷酸氢二钾（K2HPO4）0.5g
磷酸二氢钾（KH2PO4）0.5g
硫酸铵（(NH4)2SO4 ）1g
硫酸镁（MgSO4.7H2O 0.5g
乙酸钠(或95%酒精3ml ) 2g
酵母浸出汁(或酵母膏) 2g
消毒海水1000ml
自制EM菌制作方法
自制EM菌制作方法 一：【操作方法】 将1公斤白糖（红糖更好,最高用量2.5公斤，用量越大，浓度越高）倒入洗干净的塑料容器中（容量大于12公斤，因为需要预留产储气空间），倒入8公斤30-40℃的冷开水，倒入本品一包（500克），简单搅拌使本品溶解，然后密封放在室温25-40℃的环境下进行培养，每天开盖放气与搅拌1-2次，3-10 天完成培养即可使用（低于25℃时间会延长，产气大的阶段正是培养作用的高峰期，产气连续2-3天感觉没有增加或下降时表示已经完成培养）。在2个月内使用效果最好，每次取出后一定要密封保存，发现塑料桶胀气特别严重时要放气，放气时切忌注意安全，防止桶盖冲开击伤人等情况发生。 【使用方法】 生产完成的EM活菌使用方法与市场上销售的基本无差异，与等量的红糖（白糖、葡萄糖也可）加适量的40℃温水激活1小时以上后使用效果最佳；自产1个月内的也可以不添加糖，直接加温水稀释后使用。 二：种制作菌液的方法：（以一瓶为例） 1、先烧开10公斤的水，加一公斤的红糖，把红糖融化开，把红糖里面的有害菌消除。 2、然后把上述融化后的红糖水冷却到30~40度情况下加1瓶菌种 3、然后把10公斤的菌水整体装进一个大塑料壶或者其他的容器中，要密封发酵，不能漏气。不要装的太满，要预留10-15%的缓冲空间，在发酵过程中会产生气体，装满容易涨破塑料壶。 4、发酵7-12天天左右，温度低要多发酵几天，打开瓶口，有气体产生。闻到酸甜闻到就证明发酵成功。（低于15度不能发酵；15-20度发酵20-15天；20-30度，发酵15-10天；30-40度发酵6-10天） 5、发酵成功后的菌液如果一次不能大量的使用完，就用小瓶子分装密封保存。使用一瓶打开一瓶。技术很简单， 三：EM菌液制作方法，em菌种发酵方法，EM使用方法 EM菌种制作EM菌液的方法以制作50公斤菌液为例子 原料准备：能够密封的塑料桶（容量50公斤）红糖（5公斤）菌种（5瓶）无菌干净的水（深井水，凉开水，或者放置2天的自来水）
em菌发酵剂怎么发酵鸡粪
em菌发酵剂是微生物制剂，可以用来发酵多种的粗饲料来饲养动物，例如：粪便、潲水、豆渣、秸秆、豆粕等。em菌发酵剂来发酵鸡粪喂猪可以提高猪的免疫力减少生病，还可以改变鸡粪的适口性，像鸡粪我们都知道，鸡的肠胃较短吃进去的饲料有些根本来不及消化吸收就随着粪便排解出去，不过这些粪便在经过em菌发酵剂发酵过之后却是用来喂猪很好的饲料，因为从本身改变了鸡粪的适口性，所以猪非常爱吃。 那怎么来使用em菌发酵剂来发酵鸡粪喂猪的呢？ 由于鸡的肠子较短，食物在肠道中逗留的时间不长，吃下饲料中的养分一般只能吸收30%左右，大部分通过直肠而被排出体外。鸡粪中含有的营养物质随鸡所摄取饲料的不同而有所差异，一般地说，每公斤鸡粪的干物质中有13.4～18.8千焦的总能量，其含氮量达30～70克。现在使用农盛乐粪便发酵剂即（农盛乐饲料发酵剂）将鸡粪发酵过后就可以直接来喂猪了，因为鸡粪发酵过后是很好的喂猪饲料。 既然鸡粪里面含有这么多的营养成分，那该怎么用粪便发酵剂来发酵鸡粪喂猪的呢？ 1、鸡粪的收集 (1)使用的鸡粪必须是健康鸡的粪便，越新鲜质量越好。如果是饲喂大剂量抗生素添加剂的鸡粪，使用 (2)为避免营养的损失，夏季不要超过一日清粪，冬季不要超过三日，以当日清理当日发酵效果最好 2、发酵料配制
将无霉变无病菌的新鲜鸡粪60%(或鸽子粪、鸭粪也可发酵使用)，玉米粉15%，谷糠10%、麦麸5%、农盛乐粪便发酵剂0.5-1%(加入与菌液等比例红糖效果更好)，充分搅拌均匀，调节水分到60%左右(可以提前将农盛乐粪便发酵剂加入适量水中稀释，更利于其搅拌均匀)。其简单判断办法为：即用手紧抓物料一把能成团，松手落地能散开为宜，水分过高过低均不利。然后装入塑料袋或能密封的池子(缸或者做个小发酵池)，密封发酵5-7天(冬天时间略长)，当鸡粪呈黄绿色，无臭味而略带酒酸味时(发酵时间过长酒味过浓)，发酵基本完成，即可饲喂。饲喂时应注意遵从“由少到多，慢慢适应”的原则，猪很爱吃，不易生病，皮毛红润发亮，喜睡，一般能替代最多30%的精饲料。 3、鸡粪发酵后喂猪的技术 发酵后鸡粪的缺点是：能值仍然较低，非蛋白氮仍然较多，所以，需要结合能量高的饲料如玉米、大小麦、薯粉，高粱、麦麸等一起喂养，同时供给大量的清洁饮水，而对于生长较快的动物如肉用仔鸡，肉用仔猪等，不宜多喂。 ①空怀母猪和怀孕前90天的母猪：发酵鸡粪50%、玉米37%、麦麸7%、豆粕6%。(注意先从5%开始用起，慢慢增加用量，有一个适应的过程)，将上述混合饲料混合拌匀后喂猪更好。怀孕90天后的、哺乳母猪要少量饲喂或不饲喂发酵鸡粪。 ②中大猪：发酵鸡粪30%、玉米45%、麦麸5%、豆粕18%、鱼粉2%、。(注意先从5%开始用起，慢慢增加用量，有一个适应的过程)，将上述混合饲料混合拌匀后喂猪。
菌种活化保存法
附件： 新菌株（乳酸菌）斜面培养法 1.购买新菌株（安瓿瓶装冻干粉） 2.菌种管开启方法一：按购买菌种上的说明进行操作即可。 3.菌种管开启方法二（本次实验方法均在水平层流台进行）： 3.1水平层流台开启风机跟紫外灯，半个小时 3.2 用浸过75 ％酒精的脱脂棉擦净菌种管。 3.3将菌种管顶端在火焰上加热，注意避免直接加热菌体或加热过度。 3.4 将无菌水滴至加热过的菌种管顶端，使玻璃开裂。 3.5 用锉刀或镊子敲下已开裂的菌种管的顶端。 4.用玻璃三角瓶121.0℃灭菌约10-30ml的生理盐水20分钟 5.将开封后的冻干粉倒入生理盐水中，摇匀 6.用接种环沾取生理盐水，转接与MRS培养基平板上，在36.5℃中恒温培养48-72小时 后，得到二代菌。 7.此时可以使用二代菌进行菌株扩大培养，或对其进行保存菌种。 注意事项： 1 菌种活化前，请将冻干菌种管冷藏保存在5 ℃-10 ℃环境下。 3 菌种经过冷冻干燥后，生长延迟期较长，需连续两次继代培养才能正常生长。 4 菌种活化及使用过程应做好安全防护工作。 第二代第2 代)观察是否具有典型的菌落形态,然后挑取单一的纯菌落,进行革兰染色、镜检,观察其染色特征及菌体形态,并进一步做生化鉴定实验以确定菌种。第三代为工作用菌。 乳酸菌菌种保存法 方法一：斜面保存法（略） 方法二：20%甘油保存法 器材：冻存盒、冻存管(2ml装)、甘油（丙三醇）、MRS肉汤培养基、1ml移液器及枪头、酒精灯、水平层流台、高压灭菌锅 操作步骤： 1.在水平层流台中用接种环挑取所需保存的的菌株放于灭菌过的MRS肉汤培养液，进行 36.5℃恒温培养48小时 2.配制40%的甘油，用移液器移取0.5ml于冻存管中，放于冻存盒 3.用报纸将冻存盒包扎好，放于灭菌锅中灭菌（121.0℃、20Min） 4.在水平层流台中，用移液器移取0.5ml培养后的MRS肉汤培养液加入到冻存管中，拧 紧盖子，摇匀，标识。 5.在冻存盒外也做好操作人，日期，所保存的菌种等信息标记 6.将冻存盒放于保鲜袋中，放入冰箱的冷冻室层进行保存，一般可以保存至两三年。 7.若是需用，那一冻存管样进行培养即可。 实验室菌种激活方法
EM菌液制作方法与配方
E M菌液制作方法与配方 Prepared on 24 November 2020
EM菌液制作方法与配方 信息来源：广宇生物加入日期：2009-2-13点出：384 一、【ＥＭ原液发酵方法】：制作ＥＭ菌种发酵液——EM原液 EM菌液（100公斤）=12支EM菌种+70公斤水+15公斤红糖+食盐2汤勺+100公斤能够密封的水桶+前6天不要打开 注意：不要用自来水。红糖食盐用温水化开，最后加菌种，搅拌均匀，夏天3-6天，冬天10-15天左右，密封即可。 二、【水产养殖水肥配方】 1、有机肥：（发酵动物粪便40%，桔杆或草粉10%，泥碳土20%、活性小肽%） 2、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）10% 3、活菌制剂：（EM原液）1% 4、复合氨基酸1%，复合维生素1%，多糖%，核酸%，腐植酸1%，蛋白酶%，淀
粉酶（共5%） 5、微量元素10%（N=%、P=4%、K=4%、Ca、Na、Mg、Cu、Fe、Zn、Mn、B、Si） 三、【高效种植微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）4% 2、活菌制剂：EM菌原液1% 3、动物粪便：80% 4、微量元素%、N=%、P=5%、K=5%（合计15%） 四、【种植叶面微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）12% 2、活菌制剂：（EM原液）80% 3、复合氨基酸1%，复合多维生素1%，多糖%，核酸%，腐植酸1%，蛋白酶%，淀粉酶%（合计4%） 4、微量元素%、N=%、P=1%、K=1%（合计4%）
五、【微生物饲料—全价料配方】玉米 小麦麸 大豆粕 棉籽粕 菜籽粕 微生物发酵秸秆粉 复合酶 复合微量元素 复合维生素 皮毛营养调控剂 无氟磷酸氢钙
使用em菌发酵剂发酵鸡粪的方法
鸡粪、鸽粪、鸭粪、猪粪、牛粪、羊粪等动物粪便有很多的营养价值，直接排放不仅污染环境，而且造成很大的浪费，其实这些粪便经过专业的发酵剂处理之后不仅可以制作成肥料，还可以发酵做成动物饲料。 （一）、利用农盛乐em菌发酵剂发酵鸡粪做肥料的方法： 1）发酵原料：如谷糠、杂草、人、畜、禽粪便、作物秸秆（切碎）、茎叶、锯末木屑、食用菌基质残渣和饼粕等。 2）工具：搅拌机；塑料容器或水泥池（或者土坑垫塑料薄膜）；塑料薄膜；粉碎机（普通农用型）；铁锹。 3）发酵菌：种植em菌发酵剂 4）配比：谷糠、杂草、人、畜、禽粪便、作物秸秆（切碎）、茎叶、锯末木屑、食用菌基质残渣和饼粕等。准备400公斤材料和种植em 菌发酵剂1公斤 5）操作规程： ①将发酵原料按配比准备400公斤，此为发酵原料待用； ②将1公斤种植em菌发酵剂倒入50公斤水中稀释搅拌均匀，稀释用水最好为井水或河水，若为自来水请放置24小时后再用；能够适当的溶解一些红糖在里面效果更佳。 ③如有搅拌机：可以先将发酵原料混合2分钟后，再倒入发酵剂稀释液搅拌6分钟；没有搅拌机：用铁锹搅拌按由少到多的原则，即先将菌液稀释液倒入少量发酵原料中搅拌均匀，直到没有团块，然后再将搅拌好的少量发酵原料倒入剩余发酵原料中搅拌均匀，直到没有团
块；（注意：视发酵原料干湿程度增减稀释用水水量，稀释的em菌发酵剂用水应是发酵原料的40%左右，拌成以手握成团，指缝见水但不滴水珠，松手即散为好。注意：水多了易酸，少了发酵不透。如发酵原料较湿，应减少稀释的用水量。） ④将混合后的发酵原料放入塑料容器或水泥池（或者土坑垫塑料薄膜）中，最后装满压实，排去空气后用塑料薄膜密封，一定要完全密闭，适宜温度为25-35℃，发酵5-10天（一般夏4天，春秋7天，冬10天），注意温度和时间的掌握，直到没有臭味含有酒味即为发酵成功。 （二）利用农盛乐em菌发酵剂发酵鸡粪做饲料的方法：将无霉变无病菌的新鲜鸡粪60%(或鸽子粪、鸭粪也可发酵使用），玉米粉15%，谷糠10%、麦麸5%、em菌发酵剂0.5-1%（加入与菌液等比例红糖效果更好），充分搅拌均匀，调节水分到60%左右（可以提前将em菌发酵剂加入适量水中稀释，更利于其搅拌均匀）。其简单判断办法为：即用手紧抓物料一把能成团，松手落地能散开为宜，水分过高过低均不利。然后装入塑料袋或能密封的池子（缸或者做个小发酵池），密封发酵5-7天（冬天时间略长），当鸡粪呈黄绿色，无臭味而略带酒酸味时（发酵时间过长酒味过浓），发酵基本完成，即可饲喂。饲喂时应注意遵从“由少到多，慢慢适应”的原则，猪很爱吃，不易生病，皮毛红润发亮，喜睡，一般能替代最多30%的精饲料。 发酵后鸡粪的缺点是：能值仍然较低，非蛋白氮仍然较多，所以，需
菌种活化-操作方法
菌种活化-操作方法-CAL-FENGHAI-(2020YEAR-YICAI)_JINGBIAN
低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化 A. 低温保存管之临时存放及解冻 1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。 3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。 4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。 B. 菌株活化: 在无菌操作下 1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。 2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。 C. 划线法 1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。 2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。 3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。 4. 灼烧接种环，将接种环归位。 D. 图示 （1）金属接种环 （2）平板划线法
EM菌液制作方法
一、EM菌液制作方法( 细菌生长繁殖的条件) 1、液体EM菌种的制作方法：按EM固体原菌种10克：红糖0.1公斤：水1公斤（100度白开水放凉到40度时的无菌水）的比例混合均匀，密闭保温（人体温度35-37度）发酵，每1-2天摇动一次，5-7天即成，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭、放置阴凉干燥处，通常可保存18个月。可以作为液体菌种使用。请参考( 细菌生长繁殖的条件) 2、液体菌种扩陪成EM原液：按液体菌种1公斤：红糖1公斤：水10公斤（100度白开水放凉到40度时的无菌水）的比例混合均匀，密闭保温（人体温度35-37度）发酵，每1-2天摇动一次，5-7天即成，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭、放置阴凉干燥处，通常可保存18个月。用时按照说明书稀释比例稀释。请参考( 细菌生长繁殖的条件) 3、用EM菌液制做植物防虫、杀菌液请参考( 细菌生长繁殖的条件) EM菌种、红糖、30℃以上白酒、清水按1：8：1：100的比例备料。 将等量的EM发酵液、红糖与酒及100倍的清水混合，搅匀盖紧，发酵5-10天左右，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭置阴凉干燥处通常可保存6－18个月。
EM防虫液能增强植物新陈代谢，强化叶片保护膜的角质层，防止病原菌进入，它的酯成分在草食害虫体内不分解，产生生理障碍致死，对线虫等多种害虫有显着效果，但应及早使用，虫害大面积发生时使用效果甚微。 使用时的标准稀释倍数为1000-500，雾状喷施，叶片的正反两面都喷到。 二、【生产水产养殖水肥配方】请参考( 细菌生长繁殖的条件) 1、有机肥：（发酵动物粪便40%，桔杆或草粉10%，泥碳土20%、活性小肽%） 2、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）10% 3、活菌制剂：（EM原液）1% 4、复合氨基酸1%，复合维生素1%，多糖%，核酸%，腐植酸1%，蛋白酶%，淀粉酶（共5%） 5、微量元素10%（N=%、P=4%、K=4%、Ca、Na、Mg、Cu、Fe、Zn、Mn、B、Si） 三、【生产高效种植微生物肥料配方】请参考( 细菌生长繁殖的条件) 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）4% 2、活菌制剂：EM菌原液1% 3、动物粪便：80% 4、微量元素%、N=%、P=5%、K=5%（合计15%）
EM菌的简易生产方法
EM菌的简易生产方法 1．EM菌的生产方法 (1)场地设备：生产场地可选择光线较暗的室内或能遮光的楼上阳台。主要生产设备是容量50千克或25千克的有盖塑料桶、提水桶、塑料瓶、锅和台秤。 (2)生产原料：EM菌种(原露)、红糖、干净的井水或自来水。 (3)发酵方法：以生产50千克为例，先将容量50千克的塑料桶洗干净，加入干净生水45千克静置24小时备用，再将2千克红糖溶于4千克热水中，冷却至35～37℃后加入EM菌种2千克，密封2小时使菌种活化，然后倒人大塑料水桶中盖上桶盖，不必完全密封，让其在半密封状态下发酵。在发酵期间要注意开盖观察，发酵到第四天，水面会出现泡沫，到第十天泡沫消失，水面浮起一片白色悬浮物，15天后悬浮物沉人桶底，发酵结束。一般气温在30℃以上，发酵15～20天完成，气温在30℃以下，发酵时间要延长到25～35天才完成(比原来资料介绍的时间要长得多)。 2．EM活菌剂质量检测方法 (1)看颜色：正常为棕黄色。若为乳白色，说明发酵失败。 (2)闻气味：有较浓的甜酸味。没有酸味或变味说明变质。 (3)pH值：用试纸检测pH值在3．2～3．8之间达标。若pH值未达标，说明发酵时间不够或红糖放得少，必须加糖继续发酵。 (4)把EM装入一个矿泉水瓶中，装到大半瓶就拧紧瓶盖，用力摇几下，如果瓶中有大量气体，说明发酵成功，没有气体说明发酵失败。瓶里出现一些悬浮物属于正常现象。 (5)有条件的要定期对EM菌液内5科、10属、80种微生物的含量进行检测，以保证EM菌种的质量。 3．EM贮存及使用的注意事项
(1)EM活菌制剂要保存在不透明的容器内，保存期为6个月。如用透明塑料瓶装，很快就会变质。自产EM用做2级菌种，使用期为3个月；用于养殖业，使用期为6个月。 (2)长时间不使用，要放在阴暗干燥处半密封保存。若完全密封保存时间过长，气味会发生变化，影响质量。 (3)一次引种，可连续不断生产使用。在生产过程中，应注意不断提纯复壮菌种。没有提纯复壮能力的，一般连续接种生产4～6代以后就要更换新菌种。 (4)在EM生产和使用过程中，不能接触任何抗生素药品。养殖使用抗生素药品，用EM时要注意间隔期(一般要求间隔12～24小时)。
菌种活化_操作方法
低温保存管（cryotube）中之一般菌种临时存放及活化 A. 低温保存管之临时存放及解冻 1. 低温保存管（cryotube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。 3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。 4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。 B. 菌株活化: 在无菌操作下 1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。 2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。 C. 划线法 1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。 2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。 3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。 4. 灼烧接种环，将接种环归位。 D. 图示 （1）金属接种环
（2）平板划线法 冷冻干燥管之开管说明 下列步骤请在无菌环境下操作： 1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。 2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。 3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。 4、( a ) 适用于细菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。 ( b ) 适用于霉菌、酵母菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml 无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。 5、取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌L 型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之。 6、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期( lag period ) 较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养(Subculture) 后才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。 7、若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。 8．未开封之冷冻干燥管，请冷藏于4℃冰箱，切勿冷冻保存。
em菌液制作发酵床的步骤
em菌液制作发酵床的方法： 材料准备：锯末、稻壳、盐、土、农盛乐em菌液（也可使用发酵床菌种，比较经济划算）。（没有锯末或者稻壳也可以用玉米芯和秸秆代替，最好用锯末（锯末耐腐烂性比较好，用的时间会比较长）） 材料比例：锯末60%左右，稻壳30%左右，土10%，盐0.3%，农盛乐EM菌液2L/m3。材料打碎：物料粗细大小标准是2mm以上5mm以下。垫料太粗没有截口，微生物难以侵入，发酵效果不理想或者根本不发酵。物料太细其碳化速度太快，没等到发酵，就已经白白浪费掉了。 水分调节：水分的控制要根据垫料的干湿程度来决定加水的多少，要求垫料混合后水分应在50%左右。（即手抓成团，不滴水，手上留有水印，放下一触能散即可） 发酵方法： ①将所有准备好的物料（物料可以因地制宜，自由搭配）按比例混合均匀。 ②将农盛乐EM菌液加水稀释（稀释倍数根据物料水分来定），均匀喷洒在物料上，边喷洒，边翻堆，直至拌均匀，水分调节在50%左右，水分不足时可另外加水单独喷洒（注，不要一次性把计算好的水全部加入，最好分次加，这样才能更好的控制水分，不至于水分过大而影响发酵质量）。农盛乐提供发酵床专用菌种，可以制作养猪养鸡养羊养牛养鸭养鹅发酵床，另外提供发酵床技术支持，保证成功。农盛乐发酵床菌种一瓶30元，可以制作10平米的发酵床。 农盛乐em菌液主要是由放线菌、乳酸菌、芽孢杆菌、枯草杆菌、光合细菌、酵母菌等七大类微生物中的10属80种有益微生物复合而成，有效活菌数≥200亿cfu/ml（%）。我们提供发酵床制作技术支持，量大的可以上门指导。 发酵床垫料发酵成功的标准： 刚发酵好的垫料手感松软，略带酸香或清香味，有时会见到白色的菌丝，温度在20～40℃左右（这个和发酵所处外界温度有关系）。（15-20度发酵15-10天；20-30度，发酵10-7天；30-40度发酵7-4天，发酵时间越长效果越好） 发酵床垫料的更换： 牲畜每批次转栏或出栏后，应对圈舍进行全面立体的消毒处理，然后补充部分新鲜木屑或秸秆粉及适量农盛乐EM原液，调节水分至50%左右，将垫料在圈栏中堆积起来进行发酵处理，温度上升到50℃以上高温24小时后，即可作为发酵床垫料重新使用。
EM菌液制作方法与配方
EM菌液制作方法与配方 信息来源：广宇生物加入日期：2009-2-13 点出：384 一、【ＥＭ原液发酵方法】：制作ＥＭ菌种发酵液——EM原液 EM菌液（100公斤）=12支EM菌种+70公斤水+15公斤红糖+食盐2汤勺+100公斤能够密封的水桶+前6天不要打开 注意：不要用自来水。红糖食盐用温水化开，最后加菌种，搅拌均匀，夏天3-6天，冬天10-15天左右，密封即可。 二、【水产养殖水肥配方】 1、有机肥：（发酵动物粪便 40%，桔杆或草粉 10%，泥碳土 20%、活性小肽 0.3%） 2、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）10% 3、活菌制剂：（EM原液）1% 4、复合氨基酸1%，复合维生素1%，多糖0.5%，核酸0.5%，腐植酸1%，蛋白酶0.5%，淀粉酶0.5 （共5%） 5、微量元素 10%（N=0.5%、P=4%、K=4%、Ca、Na、Mg、Cu、Fe、Zn、Mn、B、Si） 三、【高效种植微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）4% 2、活菌制剂：EM菌原液1% 3、动物粪便：80%
4、微量元素1.5%、N=3.5%、P=5%、K=5%（合计15%） 四、【种植叶面微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）12% 2、活菌制剂：（EM原液）80% 3、复合氨基酸1%，复合多维生素1%，多糖0.4%，核酸0.1%，腐植酸1%，蛋白酶0.2%，淀粉酶0.3%（合计4%） 4、微量元素1.5%、N=0.5%、P=1%、K=1%（合计4%） 五、【微生物饲料—全价料配方】 玉米 50.0 小麦麸 8.00 大豆粕 8.00 棉籽粕 3.00 菜籽粕 2.00 微生物发酵秸秆粉 28.0 复合酶 0.15 复合微量元素 0.15 复合维生素 0.02 皮毛营养调控剂 0.02 无氟磷酸氢钙 0.16 食盐 0.20 复合赖氨酸 0.10 石粉 0.20 六、【微生物饲料—添加剂配方】
2018-大肠杆菌菌种活化步骤-推荐word版 (6页)
本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！ == 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ == 大肠杆菌菌种活化步骤 篇一：抑菌实验步骤 抑菌实验：待测菌金色葡萄球菌；枯草芽孢杆菌；大肠杆菌；绿脓杆菌 菌种活化：菌种，进行活化，可以划线，也可以涂布， 划线：直接用接种环在酒精灯上烧过之后，等之冷却，蘸 取进行划线！ 涂布：用枪头吸取100ul的菌液涂布既可！本实验采用涂 布法 1.金色葡萄球菌最佳生长条件(过夜培养一般为12h) 2. 枯草芽孢杆菌培养条件（过夜培养） 3.绿脓杆菌最佳培养条件（14-17h） 培养基 MH（A）培养基( Mueller-Hinton Agar)成分：牛肉浸粉（牛肉膏） 5g；酪蛋 白水解物 17.5g；淀粉 1.5g；琼脂 12.5g MH液体培养基配制方法：称取本品36.5克，加入1000ml蒸馏水中，加热煮沸 溶解，分装，121℃高压灭菌15分钟备用。 牛肉膏蛋白胨固体培养基（LB培养基）：牛肉膏10 g，蛋白胨10 g，琼脂15g，NaCl 5 g，双蒸水1000mL，pH 7.2-7.5，121℃灭菌20min。 牛肉膏蛋白胨液体培养基：不加琼脂，其他同牛肉膏蛋白胨固体培养基。 菌悬液的配制
将冰箱保存的大肠杆菌移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，置于37℃恒温培养 箱中培养24 h，用接种环挑取少许菌体与装有无菌生理盐水的试管中，震荡均匀，制成菌悬液。具体为用接种环挑取一环（本实验是吸取100uL菌悬液）于 5 mL的无菌生理盐水中，每10倍稀释一次地逐级稀释，取（10-8、10-9、10- 10 、10-11）的浓度100μL做涂布实验，每个梯度平行三组，加100μL药品 溶剂（二甲基亚砜）的空白对照3个平板，完全不加任何样品即只是LB培养基的完全空白对照1个平板，调整菌悬液浓度，用平板菌落法测定其菌液浓度， 使其含菌体数为103 cfu/mL，即为供试菌悬液。 抑菌作用初步筛选 将灭菌固体培养基加热至熔化，待冷却至50℃时，每20ml培养基倒入无菌培 养皿中。待平板自然晾干后，分别移取0.1ml待测药品，0.1 mL供试菌悬液， 均匀涂布于加药平板上，每个处理3次重复。(涂布30min后再倒置)另设置对 照组，涂菌，以等量无菌水（溶解药品物质）代替药液。上述操作在超净工作 台内进行。将做好的细菌平板在37℃恒温培养24 h，统计菌落个数，按照下式计算抑菌率。 抑菌率=对照菌落数-处理菌落数?100% 对照菌落数 实验结果表示为：平均数±标准误差（Mean±SDE）。 菌种活化：37℃培养；约24H 挑取两环于50ml 液体培养基上活化：先恒温150r/min震荡12h,再静置培养 8-12h。达到稳定期后，4度保藏，备用。 生理盐水：8.5gNaCl加入到1000ml 蒸馏水中，121度高压蒸汽灭菌15-20min 即可。 篇二：大肠杆菌电击转化流程 大肠杆菌感受态制备及电转化流程 1. 细菌电转化感受态细胞的制备 准备：50mL离心管3个 10%甘油≥200mL 灭菌蒸馏水≥100mL 冰盒（50mL离心管预冷）2个 1）由-80℃冰箱保存的菌种划单菌落，过夜培养16-20h。晚上将新鲜的菌落接 种于装有20mLLB培养基的250mL三角瓶中，37℃振荡培养过夜（约12h），转 速控制在200rpm； 2）第二天，取过夜培养物以1%接种量（可适当加大）转接入2个含50mLLB培 养基的 250mL三角瓶中，37℃剧烈振荡（200rpm）培养至OD600约为0.5~0.6；
EM菌液制作方法
E M菌液制作方法 This model paper was revised by the Standardization Office on December 10, 2020
制作EM菌液方法：比例：100克EM菌液，200克红糖，15公斤水，按这个比例剩余的就放在饮料瓶中密封保存 有以下两种制作方法： 【第一种方法】：直接制作：1瓶菌种+4斤红糖+36斤水+密封装起来发酵3到7天=40斤原液；优点是简单方便；缺点是发酵没有第二种充分； 【第二种方法】：激活菌种：取菌种10克 + 红糖公斤 + 水1公斤；密封培养1到2天后即可激活；激活后就是液体菌种了；随后转入原液制作阶段） 制作原液：（1公斤液体菌种+红糖2公斤+17公斤+密封发酵3到7天=制作成40斤EM菌原液）打开容器口闻到有酸甜味即制作成功。可以作为原液使用。 原液标准：（气味：酸甜；PH值：3～5；镜检活菌含量：100亿/ml左右） 【制作说明】第一：第一种方法简单容易操作；第二种方法制作原液效果更好；强烈推荐用第二种； 第二；有条件的可以加点食盐和尿素；加入的话会好些。但会影响气味和PH值； 第三；最好恒温35度制作速度会很快；气温低也可，只是需要延长发酵时间； 第四；本品制作过程菌种活性很强；会产生很强气压；务必缓慢打开容器；以免喷洒出来； 有以下两种制作方法： 【第一种方法】：直接制作：1瓶菌种+4斤红糖+36斤水+密封装起来发酵3到7天=40斤原液；优点是简单方便；缺点是发酵没有第二种充分； 【第二种方法】：激活菌种：取菌种10克 + 红糖公斤 + 水1公斤；密封培养1到2天后即可激活；激活后就是液体菌种了；随后转入原液制作阶段）
EM菌液制作方法
制作EM菌液方法：比例：100克EM菌液，200克红糖，15公斤水，按这个比例剩余的就放在饮料瓶中密封保存 有以下两种制作方法： 【第一种方法】：直接制作：1瓶菌种+4斤红糖+36斤水+密封装起来发酵3到7天=40斤原液；优点是简单方便；缺点是发酵没有第二种充分； 【第二种方法】：激活菌种：取菌种10克 + 红糖0.1公斤 + 水1公斤；密封培养1到2天后即可激活；激活后就是液体菌种了；随后转入原液制作阶段） 制作原液：（1公斤液体菌种+红糖2公斤+17公斤+密封发酵3到7天=制作成40斤EM菌原液）打开容器口闻到有酸甜味即制作成功。可以作为原液使用。 原液标准：（气味：酸甜； PH值：3～5；镜检活菌含量：100亿/ml左右） 【制作说明】第一：第一种方法简单容易操作；第二种方法制作原液效果更好；强烈推荐用第二种； 第二；有条件的可以加点食盐和尿素；加入的话会好些。但会影响气味和PH值； 第三；最好恒温35度制作速度会很快；气温低也可，只是需要延长发酵时间； 第四；本品制作过程菌种活性很强；会产生很强气压；务必缓慢打开容器；以免喷洒出来； 有以下两种制作方法： 【第一种方法】：直接制作：1瓶菌种+4斤红糖+36斤水+密封装起来发酵3到7天=40斤原液；优点是简单方便；缺点是发酵没有第二种充分； 【第二种方法】：激活菌种：取菌种10克 + 红糖0.1公斤 + 水1公斤；密封培养1到2天后即可激活；激活后就是液体菌种了；随后转入原液制作阶段） 制作原液：（1公斤液体菌种+红糖2公斤+17公斤+密封发酵3到7天=制作成40斤EM菌原液）打开容器口闻到有酸甜味即制作成功。可以作为原液使用。
自制培育EM菌原液的方法
如何自制EM菌液 EM菌广泛应用在水产、种植、养殖等领域，越来越多的人在使用EM菌，那么我们怎样通过自制EM菌节省成本呢？ EM菌是有益微生物复合菌群，包括光和菌、乳酸菌、酵母菌、芽孢杆菌、醋酸菌、双歧杆菌、放线菌七大类80多种菌，所以自己要配置的话，不容易搜集这么多菌、但是却可以根据自己用途单独搜集某单类菌。 比如说，我们把米饭用盒子装好，然后放入密林中埋起来，过一周时间，取出盒子，就能看看到盒子里的米饭长了一层白色的绒毛，这就是土著菌，当然还会有其他的腐败细菌。 新疆畜科院饲料所王文奇说，EM菌原露都是购买的，因为要制作EM菌原露需要各种微生物，原料很复杂，一般自制是不可能的，所以建议需要时最好到正规厂家购买。 但是，EM菌原液在用量大的时候也是一笔不小的开支，那么我们怎样降低EM菌的应用成本又可以自制培育正规的EM菌原液呢？ 河南农富康生物科技有限公司为大家解决了这一问题，农富康公司推出EM菌原种，既休眠状态下存储的粉末状的EM菌，使用时候加入培养液激活便可大量繁殖培育出EM菌原液，除了包含上述菌群外，农富康EM菌种还加入了硝化细菌、土著菌等两大类20多种有益细菌、扩展了EM菌的应用功能提高了使用效果。 使用农富康EM菌种培育EM菌原液时，一瓶农富康EM菌种可培育10公斤原液，使用时候按1：200的比例稀释，也就是说一瓶农富康EM菌种可配置200公斤稀释液，而一瓶农富康EM菌种的售价仅为35元，这也是农富康公司对7年来新老客户对农富康公司一如既往支持的回馈。 所以呢，在降低成本的同时，为了保证EM菌使用质量我们可选择农富康EM菌种自行配置EM菌原液。 农富康EM菌种配置菌液的方法如下： 以制作50公斤菌液为例子 原料准备：能够密封的塑料桶（容量50公斤）红糖（5公斤）农富康菌种（5瓶）无菌干净的水（深井水，凉开水，或者放置２天的自来水） 步骤1、先把塑料桶装入40公斤无菌干净的水。
EM菌液制作方法与配方精选文档
E M菌液制作方法与配 方精选文档 TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-
EM菌液制作方法与配方 ?信息来源：广宇生物? ??加入日期：2009-2-13?点出：384 一、【ＥＭ原液发酵方法】?：制作ＥＭ菌种发酵液——EM原液 ???? ???? EM菌液（100公斤）=12支EM菌种+70公斤水+15公斤红糖+食盐2汤勺+100公斤能够密封的水桶+前6天不要打开 注意：不要用自来水。红糖食盐用温水化开，最后加菌种，搅拌均匀，夏天3-6天，冬天10-15天左右，密封即可。 二、【水产养殖水肥配方】 1、有机肥：（发酵动物粪便?40%，桔杆或草粉?10%，泥碳土?20%、活性小肽?0.3%） 2、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）10% 3、活菌制剂：（EM原液）1% 4、复合氨基酸1%，复合维生素1%，多糖0.5%，核酸0.5%，腐植酸1%，蛋
白酶0.5%，淀粉酶0.5?（共5%） 5、微量元素?10%（N=0.5%、P=4%、K=4%、Ca、Na、Mg、Cu、Fe、Zn、Mn、 B、Si） 三、【高效种植微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）4% 2、活菌制剂：EM菌原液1% 3、动物粪便：80% 4、微量元素1.5%、N=3.5%、P=5%、K=5%（合计15%） 四、【种植叶面微生物肥料配方】 1、生物肥：（固N菌、解P菌、解K菌）12% 2、活菌制剂：（EM原液）80% 3、复合氨基酸1%，复合多维生素1%，多糖0.4%，核酸0.1%，腐植酸1%，蛋白酶0.2%，淀粉酶0.3%（合计4%） 4、微量元素1.5%、N=0.5%、P=1%、K=1%（合计4%）
菌种活化方法
低温保存管（cryo tube）中之一般菌种临时存放及活化 A. 低温保存管之临时存放及解冻 1. 低温保存管（cryo tube）应存放于－20℃ ~ －80℃之低温条件下。 2. 准备 37℃之 70﹪（V/V）酒精浴槽（只能在电气水浴槽中改放酒精，不可以火加温，以免危险；若以 37℃水浴取代，应避免水中微生物污染），其中事先安放小试管架（可放置 cryotube 之大小），液面不可高达管塞。 3. 将 cryotube 从低温保存条件中取出，置于 37℃浴槽之小试管架上。 4. 不断轻微摇动 cryotube，液面不可高至管塞，直至结冰完全溶解（约需 2 分钟）。 B. 菌株活化: 在无菌操作下 1. 用无菌微量吸管，从已溶解之 cryotube 吸取 50 ?l（或 1 ~ 2 滴）之菌液，滴入固态指定培养基(培养基编号及温度示于菌株订购单)某一边缘附近，以划线法接种于培养基。 2. 将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。 C. 划线法 1. 手持金属接种环，用酒精灯将接种环（共约 5 公分）烧至火红，并不断来回烧烤金属固定杆之前约 10 公分，等待约 10 秒钟，将接种环前端轻触培养基边缘凝胶（无菌体部份），待接种环完全冷却后，以环沾黏菌滴，由培养基边缘向中央轻轻横划紧接的并行线，直到涵盖 1/3 培养基为止（I 区）。 2. 灼烧接种环，待数秒冷却后，旋转培养基自 I 区涂布的边缘再横划数条线到未接种的区域（II 区）。 3. 重复 2. 的动作完成 III 区与 IV 区。 4. 灼烧接种环，将接种环归位。 D. 图示 （1）金属接种环
（2）平板划线法 冷冻干燥管之开管说明 下列步骤请在无菌环境下操作： 1、以沾有70%酒精的棉花，擦拭外管，在火焰上加热外管之尖端。 2、滴数滴无菌水于加热处，使外管破裂，再以硬棒敲破尖端。 3、取出隔热纤维纸和内管，以灭菌过的镊子取出内管之棉塞。 4、( a ) 适用于细菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml指定之液体培养基，滴入内管内，并轻微震荡（可用该吸管协助），直到均匀悬浮。 ( b ) 适用于霉菌、酵母菌 用无菌吸管，吸取0.3-0.5 ml无菌水，滴入内管内，待干燥粉末溶解后，以无菌吸管吸取并滴入约含有5ml无菌水之试管内，轻微震荡使其均匀后，静置30至60分钟。 5、取0.1-0.2 ml之菌体悬浮液于指定的平板培养基上，做划线分离培养或做成一系列之稀释，用无菌L型玻棒均匀涂抹，以检验菌种之纯度及活化情形，而剩余的菌体则全部移入指定的液体培养基内，并依指定的温度培养之。 6、某些菌种经过冷冻干燥保存后，迟滞期 ( lag period ) 较长，必须等培养二倍时间后才能长出，且再经过一、二次继代培养 (Subculture) 后才能正常生长。经过以上的努力后仍培养失败，才视为不能活化。 7、若菌种未能活化，或活化之菌落有疑问时，请于收到菌种之一个月内，以问题菌株反应单传真至本中心，即进行处理。
EM菌技术
em菌液制作技术 来源：河南中广农业信息开发有限公司发布时间：2009-05-19 16:00:43 查看次数：1631 1、EM菌液制作方法：按EM菌种10克：红糖1KG：水10KG（100度白开水放凉到40度的无菌水）的比例混合均匀，密闭保温（人体温度35-37度）发酵，每1-2天摇动一次，5-7天即成，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭置阴凉干燥处通常可保存18个月。用时加水1：500倍稀释后使用。 2、用EM菌种发酵液制做植物防虫、杀菌液 EM菌种、红糖、30℃以上白酒、清水按1：8：1：100的比例备料。 将等量的EM发酵液、红糖与酒及100倍的清水混合，搅匀盖紧，发酵5-10天左右，其间，因产生气体容器鼓起时，要及时松动盖子放气，并立即盖紧，到气体不再产生，能闻到酸甜香味时，表明发酵成功。保持密闭置阴凉干燥处通常可保存6－18个月。
EM防虫液能增强植物新陈代谢，强化叶片保护膜的角质层，防止病原菌进入，它的酯成分在草食害虫体内不分解，产生生理障碍致死，对线虫等多种害虫有显著效果，但应及早使用，虫害大面积发生时使用效果甚微。 使用时的标准稀释倍数为1000-500，雾状喷施，叶片的正反两面都喷到。 EM的主要成分 来源：河南中广农业信息开发有限公司发布时间：2009-05-19 15:53:29 查看次数：153 ＥＭ由整个生态系统都存在的气大类微生物中的多种有益微生物组成。EM的生产方法是采用适当的比例和独特的发酵工艺，把经过仔细筛选出来的好气性和嫌气性有益微生物混合培养，形成多种多样的微生物群落，这些菌群在生长中产生的有益物质及其分泌物质成为各自或相互生长的基质（食物），正是通过这样一种共生增殖关系，组成了复杂而稳定的微生态系统，形成功能多样的强大而又独特的优势，其最初发现人为日本国琉球大学教授比嘉照夫。 １．光合菌群（好气性和嫌气性）
em菌制作方法
em菌制作方法 一、对益生菌原液的认识 em菌制作,益生菌原液是日本琉球大学比嘉昭夫教授等研制出来的一种活 菌剂，经过筛选的多种微生物共生在一起，能够产生多种功能的复合菌液，采用独特的发酵工艺按一定比例加以混合，培养出多种多样的微生物群落，形成一种人工的有效微生物生态系统，在这个系统中各种微生物在生长过程中形成相互间的共生增殖关系，相互作用，相互促进，起到群体的协同作用，抑制有害微生物的生长繁殖，它们的代谢产物能促进动、植物和其他生物的生长，抑制病害发生。这项技术告诉人们可以建立一种比自然的微生物生态系统更有效的人工微生态系统，并在种植业、养殖业、环境保护和人体健康方面具有广泛的应用价值，为我国的生态农业和生态牧业建设和绿色食品生产开辟了一条新途径。 益生菌原液是由厌氧性细菌和好氧性细菌等10个属80多种作用各异的有益微生物（主要有乳酸菌群、酵母菌群、光合菌群、发酵菌系的丝状菌群、革兰氏阳性放线菌群）混合培养的。这些微生物广泛生存于自然界，大部分菌种被用于食品加工等行业，对人畜无害。 em菌制作,益生菌原液被作为微生物土壤改良剂用于水稻、蔬菜、果树等的栽培，对提高产量和品质发挥了作用。用于养殖上除氨、臭味效果显著，减少苍蝇，还具有减少家畜家禽疾病、应激反应，提高肉品质、蛋品质、奶品质。增加牧草产量，提高青贮饲料品质等多种效果。 现将其中几类具有代表性的微生物介绍如下：EM菌的使用方法 1、光合细菌类：具有分解有机物的能力，将有害物质转化成无害物质，并在转化过程中产生抗氧化物质，利用太阳光和热能进行光合作用产生氧气，供其他生物利用，利用CO2和氮等物质合成糖类、氨基酸、维生素和生物活性物质等，促进其他生物的生长繁殖。 2、乳酸菌类：它能分解难以分解的木质素和纤维素，使未腐熟的有机物质进行发酵，转化为对动植物可利用的有效养分。它能将较易降解的有机物质转化为葡萄糖、氨基酸和生物活性物质等，供动、植物直接吸收和利用。乳酸菌具有抑制引起连作障碍的镰刀菌的繁殖和活动，可以减轻有害线虫的发生。乳酸菌产生的乳酸还可抑制菌核菌类病原菌的繁殖和活动。