微生物思考题1

※1简述细菌L型的特性

2试述细菌的基本结构和特殊结构

3简述细菌荚膜的定义与临床意义

4简述厌氧菌厌氧的机制

5举例说明检测细菌的毒素与酶有何临床意义

6何谓溶原性细菌？它有何特征?

7举例说明细菌的耐药变异

8病毒的致病作用包括哪几个方面？

9临床工作中如何预防和延迟细菌耐药性的产生？

10简述革兰染色的基本原理

11简述细菌检验的室内质控主要包括那些内容？

12血液细菌学检查如何采集标本?需注意什么事项？

13简述SPA的主要性质、作用和应用

14MRSA有何培养特性？检测时需注意什么？

15如何区别支原体和细菌的L型

16论述梅毒的微生物学检查

17论述流感病毒的微生物学检验的基本程序。

18药敏试验的目的和指征是什么？抗菌药物浓度测定的意义如何？

?微生物与人类的关系是怎样的？

?细菌感染的实验诊断要求是什么？

?细菌感染临床标本的采集与处理有哪些要求？

?病毒感染有哪些检测方法？如何评价临床意义？

1、化脓性球菌包括哪些属、种？

葡萄球菌属(Staphylococcus)

链球菌属(Streptococcus)

肠球菌属(Enterococcus)

奈瑟菌属(Neisseria)

2、如何进行葡萄球菌属内鉴定？

（1）触酶试验

（2）血浆凝固酶试验

（3）耐热核酸酶实验

（4）肠毒素测定

（5）SPA检测

（6）新生霉素敏感试验

（7）其他鉴定试验

3、请画出链球菌细菌鉴定双歧索引图。

（1）触酶试验

（2）杆菌肽敏感试验

（3）胆汁七叶苷试验

（4）6.5％NaCl肉汤生长试验

（5）胆汁溶菌/菊糖分解/ Optochin敏感试验

（6）CAMP试验

（7）马尿酸钠试验

4、如何鉴别肺炎链球菌和草绿色链球菌？

形态菌落

血清肉汤胆汁溶菌

SDS 菊糖分解

Optochin 荚膜肿胀

小鼠毒力试验

5奈瑟菌属Neisseria

共同特点: 1.革兰阴性双球菌

2.无鞭毛，无芽胞，有菌毛

3.需氧，氧化酶和触酶阳性

种类: 1.致病脑膜炎奈瑟菌N.meningitidis

淋病奈瑟菌N.gonorrhoeae

6、肠杆菌科细菌有哪些共同特性？

1、形态染色

2、抗原成分

（1）O抗原：成分是脂多糖

（2）H抗原：不耐热的蛋白质抗原

（3）表面抗原：不耐热的多糖抗原

大肠埃希菌的K抗原

伤寒沙门菌的Vi抗原

志贺菌的B抗原

3、培养和生化特性

(1)营养要求不高，在普通培养基和麦康凯上生长良好。

(2)兼性厌氧，在有氧和无氧条件下均可生长。

(3)生化特性包括：发酵葡萄糖（产酸或产酸产气），触酶阳性，氧化酶阴性，可将硝

酸盐还原至亚硝酸盐。

4、变异性

（1）S-R变异

（2）H-O变异

5、抵抗力：不强。

7、如何鉴别肠杆菌科细菌？

1）科的鉴定

O-F

氧化酶

菌体形态

鞭毛

2）常规生化鉴定

初步生化（属的鉴定）反应包括：肠杆菌科细菌的鉴定实验，KIA，MIU，IMViC，硝酸盐实验等。

系统生化反（种的鉴定）应包括各种糖类、蛋白质和氨基酸等实验。

各主要菌属（种）之间的一些主要鉴定特性有助于鉴定细菌（表8－2）。

4）血清学鉴定：

依据菌落和生化特征作出初步鉴定，再用已知的特异性抗血清做凝集反应以分群及定型，作出最终鉴定。

8、SS、MAC培养基的主要抑菌成分？

SS成分：

牛肉膏5g 琼脂18g

蛋白胨5g 0.5%中性红 4.5ml

胆盐10g 0.1%煌绿0.33ml

枸橼酸钠10g 乳糖10g

硫代硫酸钠10g 蒸馏水1000ml

枸橼酸铁0.5g

MAC成分：

蛋白胨20克胆盐10g

氯化钠 5克琼脂20g

乳糖10克

0.5%中性红溶液 5ml

蒸馏水 1000毫升

9、KIA的主要成分和反应原理？

成分：

蛋白胨20g 枸橼酸铁铵0.5g

牛肉膏3g 硫代硫酸钠0.5g

酵母膏3g 琼脂12g

乳糖10g 酚红0.025g

葡萄糖1g 氯化钠5g

蒸馏水1000ml

10、致腹泻的大肠埃希菌有哪些？

（1）肠毒素型大肠埃希菌（enterotoxigenic E.Coli，ETEC）：儿童腹泻和旅行者腹泻。（2）肠致病性大肠埃希菌（enteropathogenic E.Coli，EPEC）：婴幼儿肠道感染，是世界各地婴儿腹泻的重要病原菌。

（3）肠侵袭型大肠埃希菌（enteroinvasive E.Coli，EIEC）：引起类似志贺菌的肠炎。出现脓血粘液便。

（4）肠出血型大肠埃希菌（enterohemorrhagic E.Coli，EHEC）：EHEC最具代表性的血清型是O157:H7。2~7％的O157：H7引起的腹泻发展成溶血性尿毒综合征(HUS) 。

（5）肠凝聚型大肠埃希菌（enteroaggregative E.Coli，EaggEC）：与世界各地慢性腹泻有关。

11、沙门菌的鉴定过程？

1）生化鉴定

2）血清学分型

先用多价O抗血清（A-F）对沙门菌分离株进行分群，再用代表每个O血清群的单价因子血清定群，之后再用H因子血清检查第一相和第二相H抗原。

煮沸处理能破坏菌体表面的Vi抗原

3）Vi噬菌体分型

12、沙门菌的抗原变异有哪些？在实际工作中应如何应对？

1、S-R变异

2、H-O变异

3、位相变异

4、V－W变异

13、如何鉴别沙门菌与志贺菌？

志贺菌属与伤寒沙门菌伤寒沙门菌硫化氢和动力阳性，能与沙门菌因子血清（OA-F、O9、Vi）凝集而不与志贺菌属因子血清凝集。

14、如何鉴别志贺菌与大肠埃希菌？

志贺菌属与大肠埃希菌的鉴别志贺菌无动力，赖氨酸阴性。

15.如何鉴别肠杆菌属与克雷伯菌属？

肺炎克雷伯菌的基本生化反应特征：

KIA：A/AG ，A/A

MIU：- - +

IMViC：- - + +

ORN（鸟氨酸）：-

Malonate（丙二酸盐）：+

肠杆菌属基本生化反应特征

KIA：A/AG，A/A

MIU：+ - +

IMViC：- - + +

ORN（鸟氨酸脱羧酶）：+

16、在MAC乳糖发酵的细菌有哪些？如何鉴别？

大肠埃希菌宋内志贺菌（乳糖迟缓发酵）枸橼酸杆菌属克雷伯菌属肠杆菌属

小肠耶尔森菌

17、产硫化氢的细菌有哪些？如何鉴别？

沙门均属弗劳地枸橼酸菌普通变形杆菌奇异变形杆菌

18、肠杆菌科细菌的快速鉴定方法有哪些？

1.铜绿假单胞菌的最低鉴定特性

氧化酶＋

动力＋

麦康凯上生长＋

枸橼酸盐＋

42℃生长＋

赖氨酸脱羧酶－

鸟氨酸脱羧酶－

精氨酸双水解酶＋

H2S－

氧化分解葡萄糖、木糖，产酸不产气

19. 嗜麦芽窄食单胞菌的氧化酶阴性，液化明胶、水解七叶苷、赖氨酸脱羧酶阳性、氧化分解麦芽糖。

20.不动杆菌属（Acinetobacter）为一群不发酵糖类、氧化酶阴性、不能运动的革兰阴性杆菌

21. 不动杆菌在血琼脂培养基上经35℃-37℃培养18h，可形成圆形、灰白色、光滑、边缘整齐的菌落。溶血不动杆菌可呈β溶血。氧化酶阴性，动力阴性，硝酸盐还原试验阴性。

22.常见不发酵革兰阴性杆菌的初步分群鉴定

试验假单胞无色杆黄杆不动杆产碱杆丛毛莫拉

菌属菌属菌属菌属菌属菌属菌属

氧化酶＋＋＋/－－＋＋＋/－

葡萄糖代谢O/－O O O/－－－－

（O/F）

动力＋/－＋/－＋/－－＋＋－

麦康凯生长生长不易或不长生长生长生长抑制或

上生长不长

硝酸盐＋/－－－＋/－＋/－

还原产气

鞭毛端鞭毛周鞭毛不定无周鞭毛周鞭毛无

23.铜绿假单胞菌的毒力因子

粘附素

多糖荚膜

内毒素

外毒素

绿脓素（pyocyanin）：

弹性蛋白酶（elastase）：

磷脂酶C

24. 铜绿假单胞菌的绿脓素为蓝绿色，可溶于水和氯仿；荧光素只溶于水。

25.嗜血杆菌为革兰阴性短小球杆菌，无芽孢、无鞭毛、有荚膜菌株，毒力较强。需氧或兼性厌氧，最适生长温度为35℃，pH以7.6-7.8为最佳。培养时必须供给含有X、V因子的新鲜血液。最佳培养基是巧克力琼脂：因为加热可使V因子释放。

26.嗜血杆菌分离培养：

营养要求高，需X、V因子，某些菌种在5%～10%CO2环境下生长更好，最适温度35℃。巧克力琼脂中加入抗生素(万古霉素、杆菌肽、氯林可霉素)，可提高本菌的阳性率。经18～24h培养出现小、无色透明的菌落。

27．（名解）卫星现象：当流感嗜血杆菌与金黄色葡萄球菌一起培养时，可见到靠近葡萄球菌的流感嗜血杆菌的菌落较大，而远离葡萄球菌的流感嗜血杆菌的菌落较小，称为“卫星现象”。

28.布鲁菌为胞内寄生菌，故以细胞免疫为主，它有较强的内毒素

29.弧菌科（Vibrionaceae）包括一群氧化酶阳性、具有端极鞭毛、动力阳性的细菌。分为四个属：

?弧菌属（Vibrio）

?气单胞菌属（Aeromonas）

?邻单胞菌属（Plesiomonas）

?发光杆菌属（Photobacterium）

30．弧菌科是一类菌体短小、弯曲成弧形或直杆状的革兰阴性细菌，兼性厌氧，利用葡萄糖，许多菌株生长需要2%－3%氯化钠。大多数菌株氧化酶阳性，具有一端单一鞭毛，运动迅速，可与肠杆菌科细菌区别；发酵糖类可与非发酵菌鉴别。

31.本菌属除麦氏弧菌外氧化酶均阳性，发酵葡萄糖，对弧菌抑制剂O/129敏感。钠离子能刺激其生长，某些种在无盐条件下不能生长，称为嗜盐菌（halophilic）。

32.霍乱弧菌形态结构

革兰染色阴性，呈弧形或逗点状。在霍乱病人的“米泔水”样便中，可见头尾相接的“鱼群”样排列。作悬滴观察时，呈“穿梭”样运动。

33.O1群霍乱弧菌的O抗原由A、B、C三种抗原因子组成，通过不同组合可分成三个型别：

?小川型（Ogawa）――AB

?稻叶型（Inaba）――AC

?彦岛型（Hikojima）――ABC

–小川型和稻叶型为常见流行型别。

34.霍乱弧菌培养特性

营养要求不高，在普通琼脂上生长良好。兼性厌氧。16℃－44℃均能生长，最适37℃。具耐碱性，PH6.8－10.2均可生长。初次分离常选用PH8.5的碱性蛋白胨水进行增菌，抑制其它杂菌生长。经35℃4-6小时可在液体表面大量繁殖形成菌膜。

35.霍乱弧菌常用的选择性培养基有：

硫代硫酸盐-枸橼酸盐-胆盐-蔗糖琼脂平板（TCBS），霍乱弧菌发酵蔗糖产酸，菌落呈黄色；

含亚碲酸钾的琼脂平板（如4号琼脂平板），霍乱弧菌因还原亚碲酸钾成金属碲，形成灰褐色菌落。

36霍乱弧菌生化反应

霍乱弧菌的氧化酶阳性，发酵蔗糖，动力阳性，赖氨酸、鸟氨酸脱羧酶阳性，精氨酸双水解酶阴性。

37.古典生物型和El-Tor生物型的区别

?特征古典生物型El-Tor生物型

?羊红细胞溶血－ D

?鸡红细胞凝集－＋

?V-P试验－＋

?多粘菌素B敏感试验＋－

?Ⅳ组噬菌体裂解＋－

?Ⅴ组噬菌体裂解－＋

39.霍乱弧菌抵抗力

对热、干燥和光敏感；100℃1-2min即死亡。怕酸耐碱

40.霍乱红试验：（名解）霍乱弧菌有色氨酸酶和硝酸盐还原能力。将霍乱弧菌培养于含硝酸盐的蛋白胨水中时，分解培养基中的色氨酸产生吲哚，同时还原硝酸盐为亚硝酸盐，两种产物结合成亚硝酸吲哚。滴加浓硫酸后呈现蔷薇色，为霍乱红试验阳性。

41.副溶血性弧菌在TCBS琼脂平板上形成0.5-2.0mm大小的蓝绿色菌落（蔗糖不发酵）。

42. 奈川现象（KP）（名解）在普通血平板上不溶血或只产生α溶血。从腹泻病人中分离到的菌株95%以上在含高盐（7%）的人O型血或兔血及以甘露醇为碳源的我妻琼脂培养基上产生β溶血现象，称为神奈川现象（KP）。

43.副溶血性弧菌抵抗力弱，不耐热，90℃1min即被杀死。在淡水中生存不超过2天，但在海水中能存活47天以上。耐碱怕酸，在1%醋酸或50%食醋中1min死亡。

44.气单胞菌属（Aeromonas）和邻单胞菌属（Plesiomonas）是氧化酶阳性，具有端鞭毛的革兰阴性杆菌，兼性厌氧。

45.气单胞菌对O/129耐药、TCBS不生长、在无盐培养基上生长

46.气单胞菌与肠杆菌科的宋内志贺菌和痢疾志贺菌有交叉血清学反应。志贺菌属氧化酶阴

性，动力阴性可与本菌鉴别。

47.弯曲菌：微需氧菌

48.HP氧化酶和过氧化氢酶均阳性、脲酶强阳性

49.炭疽为致病性细菌中最大的革兰阳性杆菌为需氧或兼性厌氧菌，生长条件不严格,最适温度为30℃～35℃，形成灰色、扁平干燥、不溶血粗糙型菌落，边缘呈卷发状，在明胶培养基上生长使明胶表面液化成漏斗状。

50.炭疽毒素由保护性抗原、致死因子和水肿因子三种蛋白质形成的外毒素复合物

51.蜡样芽胞杆菌菌落表面粗糙似白蜡状，故名，简称蜡样杆菌

52.产单核细胞李斯特菌因在4℃能生长故可进行冷增菌，25℃有动力，37℃无动力或缓慢

53.当遇到25℃培养有动力的杆菌，而不符合革兰阴性杆菌鉴定时，应考虑到李斯特菌。

本菌因培养条件而呈链状，37℃培养动力阴性，CAMP试验阳性，常误判为B群链球菌，产单核细胞李斯特菌触酶试验为阳性。

54.阴道加特纳菌

pH测定：若pH﹥4．5为可疑。

胺试验：将lOOg／L KOH l～2滴，滴在待检物上，若发出鱼腥样胺臭味即胺试验阳性。55．各属细菌的主要特征和致病特点

（分支、放线菌、奴卡）

56．结核分枝杆菌的菌体成分、致病物质、生长特点

菌体成分：

致病物质：

生长特点：

57．特殊颗粒：

Much 颗粒：革兰阳性非抗酸颗粒，接种动物时可产生结核样病变

硫磺样颗粒：诺卡菌特有，渗出液、痰或脓汁中有时可见淡黄、红色或黑色小颗粒。58.抗酸杆菌染色镜检报告方式

59.结核分枝杆菌：常用的罗琴(L-J)培养基：含孔雀绿或青霉素：可抑制杂菌生长

培养条件：37℃5-10％CO2培养4～6周后检查结果。

60.什么叫厌氧菌概念和种类。

厌氧菌是指一大群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长的细菌。

分类

有芽孢厌氧性细菌

一个梭菌属包括130个种

无芽孢厌氧性细菌

40多个菌属，300多个菌种和亚种

61.厌氧菌感染的临床及细菌学指征有哪些?

感染局部产生大量气体，皮下有捻发音----产气荚膜梭菌。

发生在粘膜附近的感染：口腔、肠道、鼻咽腔、阴道等。

深部外伤如枪伤后，人或动物咬伤后的继发感染。

分泌物有恶臭，或暗血红色，在紫外光下发出红色荧光----产黑色素类杆菌和不解糖类杆菌感染。

分泌物经涂片革兰染色镜检发现有细菌，而常规细菌培养阴性。

在液体及半固体培养基深部生长的细菌。

长期应用氨基糖苷类抗生素治疗无效的病例。

分泌物或脓汁中有硫磺颗粒----放线菌感染。

62.厌氧菌培养的标本的运送方。

标本送达实验室后，应在20-30min内处

理完毕，最迟不超过2h。厌氧标本禁止冷藏。

---针筒送检法

---无氧小瓶送检法

---棉拭送检法

---标本充盈法

---组织块送检法

---厌氧袋送检法

63.厌氧菌的培养有哪些方法?

厌氧罐法

冷触酶法、抽气换气法、

钢末法、黄磷燃烧法

_ 气袋法

_ 气体喷射法

_ 厌氧手套箱法

_厌氧血培养

64.常用的厌氧菌培养培养基

培养基的选择

_ 强化血琼脂平板(BAP)---非选择性培养基

_ 卡那-万古霉素冻溶血琼脂平板(KVLB)----产黑色素类

杆菌的选择性培养基,常用来分离口腔、头颈部、上呼吸道的产黑色素普雷沃菌

_ 七叶苷胆汁平板(BBE)---耐胆汁的脆弱类杆菌族、多变梭杆菌和死亡梭杆菌的分离，能水解七叶苷，菌落周围产棕色黑色晕

_ 卵黄平板(EYA)和兔血平板---产气荚膜梭菌，兔血平板上菌落可出现双溶血环

65.破伤风梭菌、产气荚膜梭菌、肉毒梭菌、艰难梭菌的特点、临床意义和致病性。

产气荚膜梭菌的培养特性：是不严格的厌氧菌_ 生长迅速，代谢活跃，45℃生长最好_ 血琼脂平板：

双层溶血环内环完全溶血-θ毒素

外环不完全溶血- α毒素

_ 蛋黄琼脂平板：Nagler反应

_ 牛奶培养基：“汹涌发酵”（stormy fermentation）

66. Nagler反应（名解）

产气荚膜梭菌在卵黄琼脂平板上，菌落周围出现在乳白色混浊圈，是由于该菌产生的卵磷脂酶分解蛋黄中的卵磷脂所致，这一现象可被特异性抗血清中和，称Nagler反应。

67. 汹涌发酵（名解）

产气荚膜梭菌在牛乳培养基中能分解乳糖产酸，酸使酪蛋白凝固，同时产生大量气体（H2、CO2），将凝固的酪蛋白冲成蜂窝状，并将液面上的凡士林层向上推挤，甚至冲开管口的棉塞，气势凶猛，称为汹涌发酵。

68.无芽胞厌氧杆菌的种类及意义。

1如何正确采集标本？正确采集标本对病原体的检出有何意义？

血液标本;

1.皮肤消毒程序

?70%乙醇擦拭穿刺部位30s以上

?1-2%碘酊作用30s以上

?70%乙醇脱碘

?对碘过敏者可用70%乙醇作用60s

?特殊患者可用新洁尔灭

原则：由内至外

2.采血部位

?通常采肘静脉

?心内膜炎患者可取肘动脉或股动脉

?新生儿可取股静脉，抽血后需平卧1h以上

?少儿可取颈静脉，抽血后需平卧1h以上

?骨髓炎或伤寒患者，可取骨髓液1ml

4. 采血量:一般采血部分为肘静脉,血量成人以8-10ml为宜,儿童为1-5ml,或按培养基的

量,抽取培养基的1/5-1/10量,常用培养基的量为50ml/20ml.

5.采血时间和次数:发热初期,在使用抗菌药物之前或在停用抗菌药物24h后,下一次抗菌

药物使用之前采集.为提高阳性率,常在24h内采血2-3次进行血培养.

脑脊液标本：

无菌采集脑脊液3-5ml,置无菌试管内送检.

由临床医师在无菌条件下采取

无菌容器盛放，立即送检，一般不超过1h

需要保温35℃（脑膜炎奈瑟菌、嗜血杆菌）

痰液标本：

自然咳痰

以晨痰为佳，留取标本前用清水漱口或用牙刷清洁口腔之后用力咳出。(但不可以用牙膏刷牙!!)

咳痰较困难者可用雾化蒸气吸入以利痰液咳出。

粪便标本：

? 1.采集方法：

?自然排便，采集粘液、脓血便2-3g，液体便取絮状物1-3ml送检.

?排便困难可用直肠拭子

?急性期、用药前

? 2.送检：立即送检或床边接种；如不能立即送检，需要卡-布运送培养基

尿液标本：

?原则：

?正常的尿液是无菌的

?任何怀疑尿路感染或全身感染的患者均可进行尿液细菌培养

?尿液是细菌的良好培养基，容易受污染

? 1.采集方法:用药前采取中段尿

?晨尿，清洗外阴部，留取中段尿10~20ml ，立即送检.

? 2.穿刺取尿:小儿,或疑为厌氧菌感染时，可进行导尿或膀胱穿刺.

? 3.肾盂尿:严格标记左右

? 3.容器要求:洁净,无菌,有盖,封闭,广口,不含任何防腐剂或消毒剂

? 4.运送:室温下不超过2h，淋病奈瑟菌检测标本不得冷藏

标本的正确选择、采集和运送是保证实验室检测质量的重要环节，是实验室工作准确有效的前提

69.从血液和痰液中分离出草绿色链球菌各有什么临床意义？

70.为了判定是否来自下呼吸道的痰，需检查是否为合格的痰标本。白细胞＞25个/低倍镜视野、鳞状上皮细胞＜10个/低倍镜视野为合格标本。

71.粪便标本的临床意义:

1、细菌性痢疾（bacillary dysentery）简称菌痢，主要指由志贺菌属（福氏、宋内等）引起的肠道传染病，小儿多见。

2、细菌、真菌、病毒引起的胃肠炎最常见。

3、细菌性食物中毒,可危及生命。

4、致病性大肠埃希菌引起的肠道感染,可分为5类：ETEC可致霍乱样肠毒素水泻，常见于儿童和旅行者腹泻；HPEC可引起婴幼儿腹泻；EIEC可引起志贺菌样粘液脓血便；EHEC 的O157：H7血清型可引起肠出血性肠炎和溶血性尿毒综合征；EAggEC可引起慢性腹泻

5、幽门螺杆菌引起的消化性溃疡

72.临床感染判断指标：革兰阳性菌> 104 cfu /ml,革兰阴性菌> 105 cfu /ml,真菌> 103 cfu /ml

73.菌落技术方法：

?平板涂布

?倾注培养

?定量接种法

74.淋病奈瑟菌感染，发病率居STD首位。

梅毒螺旋体感染引起梅毒

杜克嗜血杆菌引起的软下疳（Chancroid）

衣原体引起的性病淋巴肉芽肿(LGV)

阴道加特纳菌（G.vaginallis, GV）引起的细菌性阴道病（bacterial vaginosis, BV）

75.微生物实验室怎样获得合格的检验标本？

一：分析前的质量保证, 包括检验项目申请、患者准备、标本采集、保存、标识和运送. 二：检验中质量保证：人员、试剂、培养基、设备、检验过程

三：检验后质量保证：检验结果的评审与报告、.标本处置

76.如何实施分析中的质量保证？标题

人员、试剂、培养基、设备、检验过程

77..影响微生物检验结果准确性的因素有哪些？应该如何进行控制？综合

78.质量保证(quality assurance, QA)（名解）是指有计划、系统地评估和监测患者诊疗质量的整个过程，以便及时发现问题，采取有效措施，提高检验质量和服务水平。

1.衣原体的概念和特点

衣原体（Chlamydia）是一类严格在真核细胞内寄生，有独特发育周期，能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。

衣原体的共同特征

_ 革兰阴性，圆形或椭圆形体

_ 具有细胞壁，其组成与革兰阴性菌相似

_ 含有DNA和RNA两类核酸

_ 有核糖体和较复杂的酶类，能进行多种代谢

_ 专性细胞内寄生，二分裂方式繁殖

_ 有独特的发育周期

_ 对多种抗生素敏感

2.衣原体的发育周期（原体、始体）

原体（elementary body, EB）始体（initial body）

[网状体（reticulatebody, RB）]

小大

有致密的类核结构，有胞壁，发育成熟体大电子致密度较低，无胞壁Giemsa 紫色，Macchiavello红色, Giemsa ，Macchiavello 蓝色

高度感染性（有毒性）无感染性（无毒性）

无繁殖能力代谢活泼，以二分裂方式繁殖

胞外稳定性强胞外稳定性弱

包涵体；易感细胞内含繁殖的始体和子代原体的空泡

3.不同衣原体的特点

4.立克次体的概念和特点

立克次体：是一类微小的杆状或球杆状、革兰染色阴性，除少数外大多细胞内寄生的原核细胞型微生物。

立克次体共同特点

_ 大小介于细菌与病毒之间

_ 革兰染色阴性，有多种形态，主要为球杆状

_ 绝大多数为专性细胞内寄生

_ 有DNA和RNA两类核酸

_ 以二分裂方式繁殖

_ 大多是人畜共患病的病原体

_ 与节肢动物关系密切

_ 对多种抗生素敏感

5.不同立克次体的传播致病性

6.不同立克次体的特点

7.外斐反应

外斐试验（Weil-Felix test）：大部分立克次体与变形杆菌某些菌株（如OX19、OX2、OXk 等）的菌体有共同的抗原成分,用这类变形杆菌代替相应的立克次体抗原进行非特异性凝集反应，检测人类或动物血清中有无相应的抗体。辅助诊断立克次体病。

掌握密螺旋体属的临床意义和微生物检验

掌握钩端螺旋体属的临床意义和微生物检验

掌握支原体临床意义和微生物检验

熟悉疏螺旋体属的临床意义和微生物检验

1.梅毒临床表现及各期特点

Ⅰ期（初期）梅毒

感染后3周左右局部出现无痛性硬下疳。

_ 感染性极强_ 渗出物含有大量梅毒螺旋体_ 可有淋巴结肿大，但不痛

_ 梅毒血清反应常呈阴性。

II期（中期）梅毒

-发生于硬下疳出现后2-8周。-全身皮肤、粘膜常有梅毒疹，全身淋巴结肿大。

-除引起皮肤损害外，尚可侵犯内脏及神经系统。-本期梅毒血清反应呈强阳性。

III期（晚期）梅毒

-发生时间晚（感染后2-15年），病程长，甚至终生。-基本损害为慢性肉芽肿，可累及任何组织器官，较易侵犯神经系统。-病损内螺旋体少、传染力弱、但破坏性大-抗梅治疗对已破坏的组织器官无法修复-梅毒血清反应不稳定，阴性率可达30%以上，脑脊液常有改变。

先天性梅毒（胎传梅毒）

先天性梅毒又称胎传梅毒。系母体苍白亚种螺旋体通过胎盘进入胎儿所致，多发生于妊娠4个月之后。可导致早产、流产或死胎。如果出生，多呈现马鞍鼻、锯齿形牙、间质性角膜炎、先天性耳聋等特殊体征

2.梅毒螺旋体血清学试验方法及应用

非密螺旋体抗原试验：由于牛心肌的心脂质与梅毒螺旋体有共同抗原，故多用牛的心脂质为抗原检测患者血清中抗脂质抗体。本试验敏感性很高，但特异性稍差，常用作筛选试验。 密螺旋体抗原试验：用Nichols株的螺旋体抗原检测患者体内抗密螺旋体抗体，本试验特异性和敏感性都极好，但无法区别不同株的感染和所致疾病的类型，常用作梅毒的确诊试验。

试验类型试验名称

1荧光密螺旋抗体吸收试验(FTA-ABS)

密螺旋体抗原 2梅毒螺旋体制动试验(TPI)

(确诊) 3梅毒螺旋体血凝试验(TPHA）

4免疫印迹试验(IBT)

非密螺旋 1性病研究实验室玻片试验(VDRL)

2不加热血清反应素环状卡片试验(USR)

体抗原 3快速血浆反应素试验（RPR）

(筛选) 4甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)

3.各属螺旋体的临床意义

钩端螺旋体属：钩端螺旋体

密螺旋体属：梅毒螺旋体

疏螺旋体属：伯氏螺旋体、回归热螺旋体、奋森螺旋体

4.特殊培养基及应用

钩端螺旋体的培养特性；在含有10%兔血清的柯氏（Korthof）培养基上生长，28℃培养1周左右可见培养基由透明变成半透明云雾状。

5.特殊试验：显微凝集试验、冷凝集试验等

目前钩体病诊断最常用的方法

显微镜凝集试验：用标准株或当地常见菌株作抗原，分别与病人不同稀释度的血清混合，在37℃作用2小时，然后滴片作暗视野显微检查。若待检血清中有某型抗体存在，则在同型抗原孔中可见钩体凝集成团，形如小蜘蛛，一般病人凝集效价在1:400以上或晚期血清比早期血清效价高4倍以上有诊断意义。

6.支原体的概念和特点

支原体(mycoplasma)：是一类没有细胞壁，形态上呈多样性，可通过细菌滤器，能在无生命培养基中生长的最小的原核细胞型微生物。因其生长后能形成分枝长丝，故命名为支原体。

7.各型支原体的特点

没有细胞壁的原核细胞型微生物

_ 细胞膜含胆固醇

_ 能通过滤菌器(0.5μm)、呈高度多形性

_ 二分裂繁殖，含DNA与RNA

_ 能在无生命培养基中繁殖的最小微生物

_ 培养需加入10%-20%的血清

_ 菌落呈荷包蛋样

支种类葡萄糖精氨酸尿素致病性

肺炎支原体 + ——肺炎、支气管炎

人型支原体— + —泌尿生殖道感染

生殖器支原体 + ——泌尿生殖道感染

穿透支原体 + + —多见于艾滋病

解脲脲原体—— + 泌尿生殖道感染

8.支原体和细菌Ｌ型的异同点

性状支原体 L型细菌

来源自然界、人与动物由细菌诱生而成

遗传与细菌无关与原菌相关,并可回复

培养一般培养基稳定生长高渗培养基

荷包蛋状菌落 0.1~0.3mm，生长慢 0.5~1.0mm

胆固醇占细胞膜36% 细胞膜不含胆固醇

液体培养混浊度极低有一定混浊度,粘附生长

1.真菌的概念、基本特性和分类

真菌的基本特性

真核细胞型微生物，属于真菌界，有典型的细胞核，不含叶绿素

（以腐生或寄生方式摄取营养），单细胞或多细胞，有性生殖或无性繁殖

真菌的分类（I）

按菌落形态分：霉菌:多细胞，产生菌丝和孢子，“丝状菌落”

酵母：单细胞，“乳酪样菌落”

双相真菌：菌落形态受环境因素影响

在自然环境或25℃-30℃培养为霉菌型组织内或应、营养丰富培养基上37 ℃培养为酵母型真菌的分类（II）

按致病性分

致病性真菌（如申克孢子丝菌、荚膜组织孢浆菌、粗球孢子菌等）

条件致病性真菌（如念珠菌、曲霉菌、毛霉菌等）

真菌的分类（III）

按感染部位分

浅部真菌，主要侵犯皮肤、指（趾）甲、毛发

深部真菌，主要侵犯深部组织、内脏及全身

2.主要条件致病性深部致病真菌有哪些？

假丝酵母菌（念珠菌）：81个种，其中11个种对人有致病性：

隐球菌：17个种7个变种，仅新型隐球菌及其变种对人有致病性

曲菌：900余种，其中10个种对人有致病性

毛霉目真菌：根霉属，梨头霉属，毛霉属，根毛霉属等

组织孢浆菌：组织孢浆菌，组织孢浆菌杜波变种

卡氏肺孢菌（卡氏肺曩虫）

3.白色假丝酵母的特点及鉴别要点

白假丝酵母菌的微生物学特性

形态；圆形或卵圆形单细胞真菌，革兰阳性

培养；普通琼脂、血琼脂与沙保培养基需氧。室温或37℃甚至42℃生长良好，菌落灰白色或奶油色，表面光滑，带有浓厚的酵母气味

有大量向下生长的营养假菌丝，呈类酵母型。在玉米粉培养基上可长出厚膜孢子

4.假丝酵母菌主要鉴定试验

1.芽管形成试验：

假丝酵母菌接种到0.5ml人或动物血清中，37℃培养1-4小时，镜检芽管形成情况

2.厚膜孢子形成试验：

假丝酵母菌接种到玉米粉琼脂中，27℃培养1-2天，镜检厚膜孢子形成试验

白色假丝酵母菌芽管试验阳性。注：热带假丝酵母菌芽管试验6小时以上阳性

3.糖同化发酵试验

酵母菌能发酵某种糖，一定能同化该糖

4.TZC还原试验

含0.05%g/L氯化三苯四氮唑的培养基上菌落颜色

白色假丝酵母菌无色；热带假丝酵母菌红色

5.酵母菌显色培养法：利用培养基上特殊的显色物质鉴定念珠菌

商品：CHROMagar Candida 培养基（柯玛嘉）培养24-48小时观察菌落

白色假丝酵母菌------绿色、翠绿色（直径约2mm）

热带假丝酵母菌------蓝灰色，铁蓝色（直径约1.5mm）

克柔假丝酵母菌------粉红色（模糊，有微毛，直径约4-5mm）

光滑假丝酵母菌------紫色（直径约2mm）

其它假丝酵母菌------白色等

能准确鉴定95%以上的白色假丝酵母菌，热带假丝酵母菌，克柔假丝酵母菌；85%以上的光滑假丝酵母菌。

5.新型隐球菌的特点及鉴别要点

隐球菌的形态特性：

较大球形，直径可达5～20um，其外周有宽阔的荚膜

? 用墨汁负染镜检，可见到透明荚膜包裹着菌细胞，

? 菌细胞常有出芽，但不生成假菌丝。

隐球菌的培养特性

在沙保氏琼脂及血琼脂培养基上，于25及37℃皆可生长，非病原性隐球菌在37℃不能繁殖。酵母型菌落，呈白色。有荚膜者菌落粘稠

新型隐球菌鉴定依据

新型隐球菌：四个血清型

37℃和25℃均生长

墨汁负染色镜检：阳性（可见菌体外宽厚荚膜）

靛氧化酶试验：阳性

将菌接种L-多巴枸橼酸铁和咖啡酸培养基中，培养2~5d，新生隐球菌呈棕黑色菌落。

尿素酶试验：阳性

糖同化发酵试验：同化纤维二糖、肌醇；不发酵糖

6.各类真菌的特性

7.双相型真菌的概念、特点及主要菌种

由于生活环境（如营养、温度、氧气等）的改变，有些真菌的孢子与菌丝两种形态可以互变，这类真菌称为二相性真菌（dimorphic fungus）。

孢子丝菌组织孢浆菌马内菲青霉

8.AIDS相关性真菌

隐球菌曲霉组织孢浆菌卡氏肺胞菌

1.抗菌药物主要分为哪几类？

一.青霉素类

二.头孢菌素类

三.其他β内酰胺类

四.氨基糖苷类

五. 喹诺酮类

六.大环内酯类

七.糖肽类

八.磺胺类

九.其他类

十.人工合成抗菌药

2.细菌的主要耐药机制有哪些？

一.产生药物灭活酶；(一) 水解酶(二)钝化酶(三)修饰酶

二.药物作用靶位的改变

三.抗菌药的渗透障碍

四.药物主动转运系统

3.超广谱β内酰胺酶的检测方法和临床意义是什么？

?ESBL：超广谱β内酰胺酶是一种由质粒介导的能广泛水解青霉素、头孢菌素及单酰胺类的酶，主要由肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌等产生。常用的筛选方法是CLSI推荐的双纸片协同法，也可使用E-test试条法检测。

?方法：头孢噻肟，头孢噻肟+克拉维酸，头孢他啶，头孢他啶+克拉维酸，间隔一定距离贴于已涂布待测菌的培养基中，如果不含克拉维酸纸片的抑菌环与含克拉维酸纸片的抑菌环直径相差5mm以上者，即为ESBLs阳性.

?例：

?头孢噻肟抑菌环6mm

?头孢噻肟+克拉维酸抑菌环直径24mm

?两者直径差24mm-6mm=18mm>5mm

?结论：本菌产ESBL

4.耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测方法和临床意义是什么？

?耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)检测

?头孢西丁纸片替代苯唑西林检测(CLSI)

?金黄色葡萄球菌，路邓葡萄球菌：S≥22，R≤21

?其它葡萄球菌：S≥25，R≤24

?报告对苯唑西林的耐药性

?琼脂初筛法

?含4%NaCl和6ug/ml苯唑西林的MH琼脂

?>1个菌落报耐药

5.氨基糖苷类高水平耐药的肠球菌的检测方法和临床意义是什么？

HLAR&VRE检测

?氨基糖苷类高水平耐药HLAR

?纸片法：

?庆大120: S≥10，R=6

?链霉素300: S≥10，R=6

?万古霉素耐药的肠球菌VRE

?VRE：30ug万古霉素纸片抑菌环直径<=14mm或MIC>=32ug/ml的肠球菌，目前尚无有效的治疗方法，可采用替考拉宁替代治疗，但疗效不定。

6.K-B法药物敏感性试验的注意事项有哪些？

K-B纸片扩散法原理

?将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上，纸片中所含的药物吸收琼脂中水分溶解后不断向纸片周围扩散形成递减的梯度浓度，在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成无菌生长的透明圈即为抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的MIC呈负相关关系。

K-B纸片扩散法原理

适用范围

?在MH琼脂上快速生长的需氧或兼性厌氧细菌

经改良后也适用于

?链球菌- 添加5% 羊血

?嗜血杆菌属- 使用HTM 培养基

?淋病奈瑟菌- 使用GC 培养基

K-B扩散法材料

?含药纸片，MH培养基(Mueller-Hinton)，菌株，标准比浊管

K-B法操作程序

?准备MH培养基:pH为7.2~7.4,琼脂厚度为4mm

?准备菌悬液:0.5麦氏浊度的菌液(15min内接种完毕)

?涂布平板:均匀接种

?贴含药纸片：各纸片中心相距＞24mm，纸片距平板内缘＞15mm

?孵育:35℃孵育箱16 ~ 18h

?测量抑菌环直径:游标卡尺(精确度为1.0mm)

?结果解释：根据NCCLS标准，质控同时进行

最低抑菌浓度（Minimal Inhibitory Concentration, MIC）

稀释法所测的某种抗菌药物能够抑制待测细菌肉眼可见生长的最低药物浓度。

以ug/mL或U/mL表示