烟草叶片愈伤组织诱导与植株再生
植物器官培养实验报告(3篇)
第1篇一、实验目的1. 理解植物组织培养的基本原理和操作步骤。
2. 掌握无菌操作技术，包括消毒、接种等。
3. 学习植物器官培养的过程，包括愈伤组织的诱导、分化以及再生植株的形成。
4. 观察并分析植物器官培养过程中的各种现象，加深对植物生长发育机制的理解。
二、实验原理植物组织培养是利用植物细胞的全能性，通过无菌操作将植物器官、组织或细胞在人工控制的培养条件下进行培养，使其生长发育成完整的植株。
实验过程中，植物激素的添加和培养条件的调控对愈伤组织的形成和器官分化起着关键作用。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：小麦种子、香蕉叶片、胡萝卜块根。
2. 试剂：70%乙醇、氯化汞、MS培养基、2,4-D、6-BA、蔗糖、琼脂等。
四、实验方法与步骤1. 无菌操作：将实验材料用70%乙醇和氯化汞消毒后，用无菌水冲洗干净，放置在超净工作台上进行接种。
2. 愈伤组织诱导：a. 将小麦种子接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
b. 将香蕉叶片切成小块，接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
c. 将胡萝卜块根切成小块，接种于MS培养基中，添加2,4-D和6-BA，置于培养箱中培养。
3. 愈伤组织分化：a. 当愈伤组织形成后，调整培养基中激素比例，诱导愈伤组织分化成根和芽。
b. 将分化出的芽和根接种于新的培养基中，继续培养。
4. 再生植株形成：a. 当芽和根生长到一定程度后，将其移植到土壤中，培养成完整的植株。
五、实验结果与分析1. 愈伤组织诱导：实验结果表明，在不同植物材料中，愈伤组织的诱导效果不同。
小麦种子和香蕉叶片的愈伤组织诱导效果较好，而胡萝卜块根的愈伤组织诱导效果较差。
2. 愈伤组织分化：在调整培养基中激素比例后，愈伤组织分化成根和芽。
小麦种子愈伤组织分化出较多的根和芽，香蕉叶片愈伤组织分化出较多的芽，而胡萝卜块根愈伤组织分化出的根和芽较少。
3. 再生植株形成：将分化出的芽和根移植到土壤中，大部分植株成功生长。
常见微生物培养基
常见微生物培养基培养基Medium是供微生物、植物和动物组织生长和维持用的人工配制的养料一般都含有碳水化合物、含氮物质、无机盐包括微量元素以及维生素和水等。
有的培养基还含有抗菌素和色素。
按所用原料不同可分为两类应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的称为天然培养基应用化学药品配成并标明成分的称为合成培养基或综合培养基。
化学试剂中的培养基大多为合成培养基。
由于液体培养基不易长期保管现在均改制成粉末。
培养基由于配制的原料不同使用要求不同而贮存保管方面也稍有不同。
一般培养基在受热、吸潮后易被细菌污染或分解变质因此一般培养基必须防潮、避光、阴凉处保存。
对一些需严格灭菌的培养基如组织培养基较长时间的贮存必须放在2~6。
C的冰箱内。
常见培养基有1、细菌培养基配方一牛肉膏琼脂培养基牛肉膏0.3克蛋白胨1.0克氯化钠0.5克琼脂 1.5克水100毫升在烧杯内加水100毫升放入牛肉膏、蛋白胨和氯化钠用蜡笔在烧杯外作上记号后放在火上加热。
待烧杯内各组分溶解后加入琼脂不断搅拌以免粘底。
等琼脂完全溶解后补足失水用10%盐酸或10%的氢氧化钠调整pH值到7.27.6,分装在各个试管里加棉花塞用高压蒸汽灭菌30分钟。
配方二马铃薯培养基取新鲜牛心除去脂肪和血管250克用刀细细剁成肉末后加入500毫升蒸馏水和5克蛋白胨。
在烧杯上做好记号煮沸转用文火炖2小时。
过滤滤出的肉末干燥处理滤液pH值调到7.5左右。
每支试管内加入10毫升肉汤和少量碎末状的干牛心灭菌备用。
配方三根瘤菌培养基葡萄糖10克磷酸氢二钾0.5克碳酸钙3克硫酸镁0.2克酵母粉0.4克琼脂20克水1000毫升1%结晶紫溶液1毫升先把琼脂加水煮沸溶解然后分别加入其他组分搅拌使溶解后分装灭菌备用。
2、放线菌培养基配方一淀粉琼脂培养基高氏培养基可溶性淀粉2克硝酸钾0.1克磷酸氢二钾0.05克氯化钠0.05克硫酸镁0.05克硫酸亚铁0.001克琼脂2克水100毫升先把淀粉放在烧杯里用5毫升水调成糊状后倒入95毫升水搅匀后加入其他药品使它溶解。
烟草叶片愈伤组织诱导及分化培养的验证
烟草叶片愈伤组织诱导及分化培养的验证陈辉;姚志恒【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2009(037)014【摘要】[目的]研究烟草愈伤组织的发育情况及其丛生芽或分化点的形态建成.[方法]在无菌条件下,把烟草叶片切块培养在含有2mg/L NAA和1 mg/L6-BA的MS 培养基上诱导愈伤组织的形成;而后,转移愈伤组织到含有NAA 0.1 mg/L+BA 2.0 mg/L的分化培养基上使其产生丛生芽或分化点.[结果]诱导培养20 d后,愈伤组织基本形成且没有发生污染,烟草叶片愈伤组织的诱导培养是成功的.愈伤组织的整体分化率比较高,愈伤组织上形成的丛生芽或分化点比较多,且分布比较均匀;编号为4的分化培养基上愈伤组织的分化不理想,且其丛生芽或分化点分布极不均匀.在烟草叶片愈伤组织的分化培养中NAA和6-BA的添加量分别为0.1和2.0 mg/L.[结论]该研究为植株繁育提供了良好的技术支持.【总页数】2页(P6333-6334)【作者】陈辉;姚志恒【作者单位】荆州职业技术学院,湖北荆州,434020;荆州职业技术学院,湖北荆州,434020【正文语种】中文【中图分类】S572【相关文献】1.培养基和继代时间对番茄叶片愈伤组织诱导和芽分化的影响 [J], 毕建水;李翠翠;徐丽丽2.灵发素(LFS)诱导烟草叶片愈伤组织的研究 [J], 李廷洋;周凤珏;许鸿源;周文亮;龚银花;赖洪敏;陈念平;解云英;许鸿章3.红花烟草叶片愈伤组织诱导与植株再生 [J], 董行健;余宗波4.迷迭香叶片愈伤组织诱导及再分化培养 [J], 董玉梅;李正楠;钱成;刘宝刚;段如兰;刘雅婷5.汾阳核桃叶片愈伤组织的诱导、增殖及分化培养 [J], 张燕;范宏伟;张国强;张鹏飞;吴国良因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
2 烟草愈伤组织诱导实验
烟草叶片愈伤组织诱导分化实验1. 实验目的（1）通过诱导植物（烟草叶片、水稻种子）愈伤组织和器官发生，分析生长素和细胞分裂素对烟草叶片离体培养的作用。
（2）了解植物组织在离体培养条件下脱分化和再分化的特点。
2. 实验原理外植体形成愈伤组织大致要经历三个时期：启动期、分裂期和形成期。
启动期主要通过激素以及环境因素的诱导使外植体细胞代谢增强，大量蛋白质与核酸形成为细胞分裂做准备；分裂期时外植体细胞在激素诱导下脱分化并不断增殖，形成结构疏松的组织块；形成期时，由于不同植物生长激素的诱导使愈伤组织形成根、芽等形态分化。
烟草为常见模式植物之一，常用于植物组织培养，是研究细胞脱分化和再分化的理想材料。
在愈伤组织诱导及分化过程中，光照条件起到的作用是促使愈伤组织进行光合作用生成糖类，促使代谢活动进行。
6-BA、NAA均为植物生长调节剂，6-BA属于细胞分裂素，可诱导愈伤组织发生并促进牙的形成；NAA属于细胞分裂素，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根。
根据Skoog和Miller提出的生长素和细胞分裂素相对浓度调节器管分化的概念，相对高的生长素有利于细胞增殖和不定根的分化，而相对高的细胞分裂素浓度有利于不定芽的分化。
通过改变激素的种类和浓度，有效地调节培养组织的器官分化，已经在许多植物的组织培养中得到证实，甚至在一些低等植物中也得到了证实。
3. 实验材料与操作方法3.1 实验材料3.1.1 材料选择：烟草By-2，滤纸片，枪头3.1.2 实验试剂：（1）植物生长调节剂（超净台过滤灭菌，1.5 mLEP管分装后-20℃贮存）6-BA 0.5mg/mL（1mol/L NaOH溶解再用蒸馏水定容）NAA 0.5mg/mL（1 mol/L NaOH溶解再用蒸馏水定容）（2）抗生素（超净台过滤灭菌，1.5 mLEP管分装后-20℃贮存）卡那霉素50 mg/mL（蒸馏水定容）利福平15 mg/mL（无水乙醇溶解再用蒸馏水定容）链霉素30 mg/mL（蒸馏水定容）羧苄青霉素100 mg/mL（蒸馏水定容）（3）实验用培养基MS大量元素储存母液（50×，蒸馏水定容）：1650mg/L NH4NO3+1900mg/L KNO3+370mg/L MgSO4·7H2O+170mg/L KH2PO4+440mg/LCaCl2·2H2O（CaCl2·2H2O在配制过程中不易溶解，可单独配成储液存放）MS微量元素储存母液（100×，蒸馏水定容）：0.83mg/L KI+6.2mg/L H3BO3+22.3mg/L MnSO4·4H2O+8.6mg/L ZnSO4·7H2O+ 0.25mg/L Na2MoO4·2H2O+0.025mg/L CuSO4·5H2O+0.025mg/L CoCl2·6H2O +27.8mg/LFeSO4·7H2O +37.3 mg/L Na2-EDTA·2H2O（FeSO4·7H2O 和Na2-EDTA·2H2O两个试剂配制成100×溶液4℃冰箱避光储存）MS有机成分储存母液（100×，蒸馏水定容）：3mg/L甘氨酸+0.5mg/L烟酸（维生素B5）+0.5mg/L盐酸吡哆醇（维生素B6）+0.1mg/L盐酸硫胺素（维生素B1）+100mg/L肌醇（肌醇难溶解，一般独自配成浓缩液储存）MS培养基（NaOH调节至pH 5.8，蒸馏水定容）：1×大量元素+1×微量元素+1×有机成分+30g/L蔗糖+0.8%琼脂+不同比例生长素（6-BA+IAA）3.1.3 实验仪器：超净工作台，烧杯，锥形瓶，培养皿，枪形镊子，眼科剪，移液枪，酒精灯，光照培养室，3.2 操作方法取幼嫩烟草叶片约5片（选择幼年的外植体较好，如分生组织、维管束、形成层组织、静止的薄壁组织），用自来水清洗晾干。
叶盘法转化烟草的原理
叶盘法转化烟草的原理叶盘法是一种生物工程技术，用于转化或改造植物基因组以生产特定物质。
在烟草中应用叶盘法可以用于合成表达外源蛋白、开发抗病毒烟草品种以及烟草遗传改良等领域。
叶盘法的基本原理是利用植物的组织再生能力，通过培养植物的叶片组织培养而成的小体，在适当的培养基组合下，通过添加适当的物质和条件，将目标基因组转化至植物细胞中。
叶盘法的实验流程一般可以分为以下几个步骤：1.植物材料的准备：从健康的烟草植株中采集叶片，并将其洗净，并进行无菌处理以确保实验的纯度。
2.建立愈伤组织：将洗净的叶片剪成小碎片，并将其转移到含有激素和培养基中，利用试管内的适宜条件培养愈伤组织。
这一步是为了为后续基因转化做好基础，并培养植物细胞的再生能力。
3.转化基因：将目标基因或转入质粒经过适当的处理和筛选，将其引入培养的烟草细胞中。
目标基因可以是外源蛋白的编码序列，用于生产特定蛋白质。
转入基因的方法包括生物颗粒轰击、体外基因传递和通过细菌介导的转化等多种方法。
4.培养变性细胞：转入基因的组织在适宜的培养条件下进行培养和筛选，以确保它们能够在细胞内稳定表达目标基因。
同时，还可以使用适当的抗生素来抑制未转化细胞的生长。
5.稳定转化的筛选：利用特定的筛选方法，筛选出稳定表达目标基因的转化细胞。
常用的筛选方法是利用抗生素抗性基因或镰刀形细菌素酶基因，通过添加抗生素或镰刀形细菌素酶底物来诱导或检测转过的细胞。
6.进一步培育和鉴定：将经过筛选的转化细胞进行进一步培养，培育出大量具有目标基因的烟草植株。
同时，对植株进行鉴定和检测，确认目标基因的稳定性和表达水平。
通过以上步骤，叶盘法能够有效地将外源基因导入到烟草植株的基因组中，并使其稳定表达。
通过优化培养条件和基因的筛选方法，可以进一步提高转化效率和稳定性。
叶盘法的优点在于操作简单、转化效率高、转基因植株易于培养和大规模扩繁等。
然而，叶盘法也存在一些局限性，如转化效率和稳定性的波动性、可能引发的遗传不稳定性等问题，需要进一步的优化和改进。
烟草体细胞胚胎发生再生植株
烟草体细胞胚胎发生再生植株郭文义;白永富;赖钟雄;陈学军;李天飞【期刊名称】《福建农林大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2004(033)003【摘要】以烤烟K326、红大、云85叶片诱导的愈伤组织为材料,在含不同激素配比的培养基上进行试验,研究其体细胞胚胎的发生能力.结果表明:不同品种之间体胚的发生能力存在较大差异,不同激素配比诱导体胚发生的频率也不同,K326、红大、云85体胚最高的发生频率分别为8. 3%、47. 4%和61. 1%;最佳激素配比分别为2. 0 mg·L-1 NAA+0. 5 mg·L-1 BA、2. 0 mg·L-1 NAA+0. 2 mg·L-1 BA和2. 0 mg·L-1 NAA+0. 5 mg·L-1 BA.试验中观察到烟草体胚发育的各阶段,并最终再生成完整植株.【总页数】4页(P369-372)【作者】郭文义;白永富;赖钟雄;陈学军;李天飞【作者单位】福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福建,福州,350002;云南烟草科学研究所,云南,玉溪,653100;云南烟草科学研究所,云南,玉溪,653100;福建农林大学园艺植物生物工程研究所,福建,福州,350002;云南烟草科学研究所,云南,玉溪,653100;云南烟草科学研究所,云南,玉溪,653100【正文语种】中文【中图分类】S572;Q813.1【相关文献】1.抗松针褐斑病湿地松体细胞胚胎发生与植株再生 [J], 张彩云;朱丽华;谈家金;陈婷婷;潘珺;梁芬;叶建仁2.湿地松及其杂种的体细胞胚胎发生与植株再生 [J], HU Jiwen;LIAO Fangyan;GUO Wenbing;DENG Leping;ZHONG Suiying;WANGWeimin;ZHAO Fencheng;HUANG Ting;WU Huishan;LI Yiliang3.不同红蓝配比的光质对棉花体细胞胚胎发生和植株再生的影响 [J], 魏喜;王倩华;葛晓阳;陈艳丽;丁颜朋;赵明哲;李付广4.麻城油茶体细胞胚胎发生及植株再生 [J], 庞芳芹;张靖怡;柳倩;汤欣欣;胡孝明;朱华国5.华南植物园“一种高效诱导杂种檀香体细胞胚胎发生与植株再生的方法”获发明专利 [J], 中国科学院网因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
烟草叶片组织培养及植株再生
1、选取的叶片应尽可能健康， 无病虫害。
2、消毒过程中要避免过度浸泡， 以免对叶片造成损伤。
3、培养基的成分和浓度是诱导愈伤组织的关键因素，需要根据实验目的进 行调整。
4、培养过程中的温度和光照也是影响愈伤组织生长的重要环境因素，需要 保持恒定。
步骤2：红花烟草叶片愈伤组织诱导后的处理措施以及后续的筛选和优化 在红花烟草叶片愈伤组织诱导成功后，需要进行以下处理措施：
谢谢观看
通过对红花烟草叶片愈伤组织的诱导与植株再生研究，可以为提高烟草的产 量和品质以及植物生物技术的进一步发展提供有力的支持。
步骤1：红花烟草叶片愈伤组织 诱导的基本步骤和注意事项
红花烟草叶片愈伤组织的诱导主要分为以下几个步骤：
1、选取健康的红花烟草叶片， 将其用自来水冲洗干净。
2、将洗净的叶片置于消毒液中浸泡一定时间，以杀死叶片表面的微生物。 常用的消毒液有70%酒精和0.1%升汞等。
烟草叶片组织培养及植株再生
01 一、引言
目录Leabharlann 02二、烟草叶片组织培 养
03 三、烟草植株再生
04 四、分析比较叶片组 织培养和植株再生
05 五、总结
06 参考内容
一、引言
随着生物技术的迅速发展，植物组织培养技术已成为一种重要的研究手段， 广泛应用于农业、林业、医药等领域。在烟草行业，叶片组织培养和植株再生技 术的运用对于提高烟草产量、品质以及抗病抗逆性等方面具有重要意义。本次演 示将详细介绍烟草叶片组织培养和植株再生的基本原理、方法及应用，并对其优 缺点进行分析和比较。
（1）方法：烟草叶片组织培养的主要流程包括选取叶片、消毒、接种、培 养、增殖和移栽等步骤。
（2）设备：实验室进行烟草叶片组织培养需要的基本设备包括超净工作台、 酒精灯、解剖刀、镊子、培养皿、三角瓶、摇床等。
烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立
烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立一、概述烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立，是植物组织培养领域中的一项重要研究。
烟草作为一种重要的经济作物，其组织培养技术的研究对于提高其生产效率、优化品质具有重要意义。
愈伤组织的诱导是植物组织培养的第一步，也是后续细胞悬浮培养、基因工程操作等的基础。
烟草愈伤组织的诱导，通常通过无菌操作，利用激素等生长因子刺激烟草叶片等外植体细胞脱分化形成。
这一过程不仅受到激素种类和浓度的影响，还受到光照、温度、湿度等培养条件的影响。
优化诱导条件，降低褐化等不利因素的影响，是烟草愈伤组织诱导研究的关键。
细胞悬浮培养体系的建立，则是进一步将愈伤组织转化为可用于大规模生产和基因操作的细胞悬浮液。
通过选择适当的培养基、调节生长条件、优化细胞悬浮密度等手段，可以实现烟草细胞的稳定增殖和高效表达。
本文旨在探索烟草愈伤组织的诱导条件以及细胞悬浮培养体系的建立方法，通过系统的实验设计和优化，为烟草组织培养技术的发展和应用提供理论基础和实践指导。
这一研究也将为其他植物的组织培养提供有益的参考和借鉴。
1. 烟草愈伤组织诱导与细胞悬浮培养体系的重要性烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立，在植物组织培养、基因工程以及植物快繁等多个领域都具有重要的科学意义和实践价值。
愈伤组织的诱导是植物组织培养中的关键环节。
通过特定的培养基和培养条件，可以诱导烟草叶片等外植体脱分化形成愈伤组织。
这一过程不仅验证了植物细胞的全能性，而且为后续的细胞悬浮培养提供了适宜的起始材料。
细胞悬浮培养体系的建立为植物细胞的大规模培养和遗传转化提供了平台。
通过优化悬浮培养条件，可以获得大量生长状态良好的细胞，进而用于后续的基因转化、次生代谢产物生产等研究。
悬浮培养体系还可以用于筛选具有优良性状或抗性的细胞株系，为烟草育种提供新的途径。
烟草愈伤组织诱导及细胞悬浮培养体系在植物快繁方面也具有潜在的应用价值。
通过诱导愈伤组织再分化形成不定芽或胚状体，可以在短时间内获得大量的植株，从而实现烟草的快速繁殖。
烟草的组织培养技术研究
烟草的组织培养技术研究一、概述烟草作为重要的经济作物，在全球范围内广泛种植。
随着生物技术的不断发展，组织培养技术在烟草育种、种质资源保存和生物反应器等领域的应用日益广泛。
烟草组织培养技术是指通过无菌操作，将烟草的离体组织或细胞，在人工控制的环境条件下进行培养，使其再生成为完整植株的技术。
该技术具有繁殖速度快、遗传稳定性好、不受季节限制等优点，对于提高烟草的产量和品质具有重要意义。
烟草组织培养技术的研究始于上世纪中叶，随着培养条件的优化和技术的不断创新，现已发展成为一项成熟且高效的生物技术手段。
烟草组织培养技术的研究重点主要集中在培养基的优化、外源基因的导入与表达、以及培养过程中的生理生化变化等方面。
通过深入研究这些关键技术，有望为烟草产业的可持续发展提供新的技术支撑和动力。
烟草组织培养技术也面临着一些挑战和问题，如培养过程中的污染问题、遗传变异的风险以及培养成本较高等。
未来烟草组织培养技术的研究还需要进一步探索新的培养方法、提高培养效率、降低培养成本，并加强与其他生物技术的结合，以推动烟草产业的持续健康发展。
1. 烟草产业的重要性及面临的挑战烟草产业在全球经济中占有重要地位，它不仅是许多国家的税收主要来源，同时也为农民提供了稳定的收入来源。
随着社会对健康问题的日益关注，烟草产业面临着前所未有的挑战。
从经济角度看，烟草产业对全球经济的贡献不容忽视。
烟草制品的销售为各国政府带来了可观的税收收入，这些资金被用于支持国家的各项公共事业。
烟草种植也是许多发展中国家农民的主要经济来源，对于提高农民生活水平、促进农村经济发展具有重要意义。
烟草产业也面临着诸多挑战。
最为突出的是健康问题的挑战。
越来越多的研究表明，吸烟对人体健康具有极大的危害，可导致多种疾病，如肺癌、心血管疾病等。
这使得社会对烟草产业的质疑声越来越大，许多国家和地区开始实施严格的控烟政策，限制烟草制品的生产和销售。
烟草产业还面临着环境保护和可持续发展的挑战。
烟草植物组织培养实验报告
烟草叶片的组织培养一、实验目的本实验通过配制3种不同的培养基来实现烟草种子苗叶片诱导、分化及植株再生从而深刻理解植物细胞的全能性、学习和掌握植物组织培养技术，二、实验原理植物组织培养是从20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。
由于其拥有占地少、繁殖系数大等特点，现以在全世界的园林植物尤其是花卉的种苗繁育上得到广泛应用。
本文着重介绍组织培养技术的理论原理、操作过程、生产技术以及经济核算等方面的内容，使大家对组织培养在园林植物尤其是花卉的种苗繁育的应用有所了解，为以后的实际操作提供依据。
在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
从一块外植体形成典型的愈伤组织，大致要经历三个时期：起动期、分裂期和形成期。
培养基配方设计是组培法育苗中的关键步骤。
根据理论与实际经验，对不同种类的花卉及不同的取材部位，需设计出相适应的配方，并从中筛选出最佳者。
继代芽增殖培养：很多花卉植物经过2-6周的培养即可分化出大量的不定芽。
根据情况可以将这些增殖了大量新芽的外植体重新分割进行几代培养，以扩大繁殖规模直至满足繁殖需要为止。
三、实验材料植物材料：烟草植株药品：激素（2,4-D、NAA、6-BA浓度均可）、1N NaOH、1N HCl蒸馏水、 70%酒精、 0.01%升汞仪器：1玻璃杯、1玻璃棒、1pH试纸(5.5-9.0)1瓶无菌水、1个无菌烧杯、1包无菌滤纸、 1个无菌白瓷板、培养瓶若干移液器、微波炉、灭菌器、超净工作台、酒精灯、解剖刀、镊子四、实验方法与步骤4.1 MS培养基母液的配制注意：1．大量元素按照使用时高10倍的数值称取，分别将各种化合物称量后，除CaCl2·2H2O 单独配制外，其余化合物混合在500ml烧杯中加适量蒸馏水溶解，用玻璃棒搅拌促溶，倒入1000ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，置小口瓶中保存，贴上标签注明化合物名称（或编号），浓缩倍数，配制日期和配制者姓名，CaCl2·2H2O配制同上置于另一小口瓶中。
烟草的组织培养与植株再生
烟草的组织培养与植株再生作者：梁程李一鹏来源：《读天下》2017年第10期摘要：在MS培养基上，接种烟草无菌苗的叶片，分别放在光照和黑暗条件下诱导愈伤组织，接种于MS分化培养基上，在光照下分化再生植株。
结果表明：光照和植物生长调节剂对植物愈伤组织的诱导和植株再生产生影响。
关键词：烟草；愈伤组织；植株再生一、实验目的1. 掌握植物组织培养的方法和要点。
2. 学习培养基配制方法、步骤及叶片培养环节中，外植体灭菌、接种、培养观察等技术环节。
3. 了解外植体脱分化及再生过程。
二、材料与器材1. 植物材料：烟草叶片。
2. 实验药品：MS培养基、蔗糖、琼脂、升汞、NAA、6-BA、NaOH。
3. 仪器设备：高压灭菌锅、光照培养箱、天平、pH计、超经工作台、酒精灯。
4. 器械及用具：镊子、手术刀、记号笔等。
5. 玻璃器皿：培养瓶、量筒、容量瓶等。
三、实验步骤（一） MS培养基母液配制大量元素配成50倍母液，使用时每1L培养基需要从母液中取20mL。
配制母液时应做到分别称量，充分溶解，在混合次序上应最后加入Ca2+，混合时要边加边混合。
微量元素配成100倍母液，使用时每配制1L培养基从母液中取10mL，配制时应注意充分溶解后再依次混合。
铁盐单独配制，与其他元素混合易造成沉淀。
一般采用螯合铁，即FeSO4与EDTA钠盐的混合物，一般扩大100倍。
EDTA钠盐须用温水溶解，然后与FeSO4液混合，在75℃～80℃之间让其螯合1h。
使用螯合铁的目的是避免沉淀，并使培养基能缓慢不断地供应Fe2+。
有机物质可配成100倍浓缩液，使用时每1L培养基加10mL。
（本次实验采用培养基粉末代替较为方便）（二）培养基的配制取1000mL烧杯，先加入500mL的蒸馏水，然后根据培养基成分及用量，吸取各种母液加入烧杯，称取蔗糖（一般用量3%）、琼脂（一般6～8g/L），按需要的浓度加入植物激素，加水至800mL，加热使琼脂融化，定容到1000mL，用1NNaOH或HCl调pH至5.8。
本生烟草愈伤组织的诱导和再生体系的建立
本生烟草愈伤组织的诱导和再生体系的建立作者：陆玉建刘俊华王书平高春明刘晓君任宇灵来源：《江苏农业科学》2014年第01期摘要：以本生烟草为材料，研究了不同激素组合对本生烟草愈伤组织诱导和植株再生的影响。
结果表明：当本生烟草叶片在MS+1.0 mg/L 2，4-D+0.2 mg/L KT培养基中培养时，其出愈率最高，愈伤组织生长状况最好；在MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中不定芽生长最快，但存在一定程度的玻璃化现象；MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中不定芽长势较慢，但玻璃化程度较轻；对于生根诱导，MS、1/2MS培养基都可诱导不定根的产生，但NAA对根的生长更有效。
关键词：本生烟草；愈伤组织；不定芽；诱导；再生体系中图分类号： S572.043；Q943.1文献标志码： A文章编号：1002-1302（2014）01-0052-03收稿日期：2013-05-17基金项目：山东省自然科学基金（编号：ZR2012CL14）；滨州学院博士基金（编号：2010Y08）。
作者简介：陆玉建（1979—），男，河南南阳人，博士，讲师，研究方向为植物生物技术。
Tel：（0543）3190096；E-mail：luyujian79@。
烟草是重要的经济作物，常被作为基因工程和分子生物学研究中重要的模式植物[1-5]。
目前烟草遗传转化研究多用普通烟草（Nicotiana tabacum）作为受体，而对本生烟草（Nicotiana benthamiana）的研究相对较少。
本生烟草和普通烟草有密切的亲缘关系[6-7]，由于其植株矮小，生长速度快，生命周期短，对植物病毒非常敏感，所以是基因功能分析和植物病害研究的重要工具[4-8]。
有关本生烟草转基因的研究也见诸报道，通过在本生烟草中瞬时表达促红细胞生成素基因，能够生产重组蛋白-促红细胞生成素[9]。
利用本生烟草建立的质体转化系统，可以用来研究质体和细胞核基因间的相互作用，以及检测质体中相关基因的表达情况[7]。
烟草叶片愈伤组织诱导与植株再生
烟草叶片愈伤组织诱导与植株再生2001级生物技术2班 刘莹 200113831摘要:在植物组织培养中，主要目标是诱导愈伤组织形成和形态发生，使一个离体的细胞、一块组织或一个器官的细胞，通过脱分化形成愈伤组织，并由愈伤组织再分化形成植物体。
本实验通过烟草叶片外植体体外培养，诱导愈伤组织，并分化培养产生再生植株。
Abstract：In the plant tissue culture, the main target is to induce the callus forming and morphogenesis, thus makes a cell, a tissue or an organ in vitro forming the microspores by dedifferentiation, then a plant by redifferentiation. In this experiment we use the explant cultured in vitro to generate the callus and to be regenerated the plant by differentiation.关键词:全能性；组织培养；愈伤组织；分化培养；无菌操作1前言：细胞是生物体的基本结构单位和功能单位。
细胞工程就是利用细胞的全能性，通过类似于工程学的步骤，在细胞整体水平或细胞器水平上，按照人们的意愿来改变细胞内的遗传物质以获得新型生物或特种细胞产品的一门综合性科学技术[1]。
细胞工程所涉及的基本内容,包括细胞培养、细胞融合、细胞核移植、染色体添加、细胞器转移、胚胎分割、动植物克隆等一系列技术[2]。
在植物学界，早在1902年德国的植物学家哈泊兰德就预言植物细胞的全能性。
1934年荷兰的植物学家温特发现生长素，并证实了对植物细胞培养的作用。
1937年，在法国巴黎的Gautheret实验室、格勒诺布尔的Nobecourt实验室和普林斯顿的White实验室等几个实验室几乎同时获得植物培养物的愈伤组织并长期培养成功[3]。
烟草组织培养实验方案
烟草组织培养实验方案摘要本实验通过配制四种培养基来实现烟草种子萌发，种子苗叶片诱导、分化及植株再生，从而获得课题所需要的基因受体植株。
关键词烟草组织培养前言组织培养不仅是一种植物快速繁殖的手段,同时也是植物改良、种质保存和次生物质生产的理想途径。
烟草是典型的基因工程模式植物,易于进行组织培养,容易得到再生的转化植株。
一实验植物：华烟6号二实验材料：华烟6号种子三实验方法与步骤1．培养基的配制本次实验使用（1）种子萌发培养基：MS培养基+GA30.7mg/L；（2）愈伤组织诱导及其幼芽分化培养基:MS+2,4-D 0.5 mg/L +6-BA 1.0 mg/L；（3）幼芽增殖培养基：MS+6-BA 1.0 mg/L +NAA 0.2 mg/L；（4）生根培养基：MS+NAA 0.2 mg/L。
上述培养基均附加3%蔗糖，0.8%琼脂，pH5.8，培养温度25±2℃，光照强度2 000 lx。
2. 培养基的灭菌——高压蒸汽灭菌（湿热灭菌法）3. 无菌苗的获得把烟草种子用市售丝袜（或纱布）包好，先分别用75%乙醇或无菌水浸泡30 s，用无菌水洗净表面抑制种子萌发的药物，待洗涤的水清澈透明，然后将烟草种子用70%酒精浸泡1 min, 10%NaClO消毒10 min,经无菌水漂洗后，在超净工作台处（紫外灭菌20～30min）接种于以配置好的（1）培养基,放入(27±1)℃的光照培养架中培养。
光照周期为10 h(8:00~18:00)光照,12 h暗培养。
种子苗具4~5叶时继代扩繁备用。
4. 烟草叶片愈伤诱导及不定芽分化在超净工作台上取上述烟草无菌苗幼嫩叶片1~2片于无菌培养皿中，将叶片切成1.0～1.5平方厘米的小方块，接入（2）中培养。
约2～3d后，叶片外植体卷曲、增厚、膨胀，15d后外植体脱分化形成疏松絮状浅黄绿色的愈伤组织，愈伤组织诱导率为100%。
30d后，从叶片外植体产生的疏松愈伤组织上分化出许多浅黄绿色芽点。
烟草愈伤组织诱导与植株再生
烟草愈伤组织诱导与植株再生摘要：烟草( Nicotiana tabacum L. )又名草烟，为茄科烟草属的一年生草本植物，是重要的经济作物，常被作为基因工程和分子生物学研究中重要的模式植物[1-5]，具有药用、工业用、保健和美容等多种价值。
近年来有人从花烟草中提取出NaD1,具有抗肿瘤的功效[6]。
利用愈伤组织诱导与植株再生的细胞工程技术来培育烟草可以大大节约烟草的培育成本。
本实验以烟草叶片为实验材料，分别在黑暗、16h/d光周期条件下，用MS+BA 2mg/L + NAA 2mg/L 培养基诱导烟草叶片形成愈伤组织。
用MS+BA 2mg/L + NAA 0.5mg/L培养基全光照诱导分化。
实验结果关键词：烟草；愈伤组织；诱导分化；植株再生；光周期Callus induction and plant regeneration of Nicotiana tabacum LShi Meng-wei(Biotechnology Class 1403)Abstract: Nicotiana tabacum L, also named herbal tobacco, which is classified in Solanaceae Nicotiana L plants, is an annual,as the important Model plant of Genetic engineering and Molecular biology. Tobacco possesses great value in medical, industrial, as well as in cosmetic area. In recent years,NaD1 which has the effect of anti-tumor has been extracted from Nicotiana alata. It is able to save the cost savings of cultivating tobacco by means of callus induction and plant regeneration. In this experiment, the leaves of tobacco are induced the formation of callus in culture medium MS+BA 2mg/L + NAA 2mg/L under the light conditions of completely dark and 16h/d photoperiod, then induced redifferentiation in culture medium MS+BA 2mg/L + NAA 2mg/L.1前言植物组织培养是植物细胞工程中研究得比较早、也比较成熟的技术。
烟草叶片愈伤组织诱导与植株再生
Uc= (p 光-p 暗)/ p 平均=-0.6686 | Uc |=0.6686＜uα/2=2.58，故接纳 H0，拒绝 H1，即光照培养和黑暗条件下
培养的愈伤组织的诱导率无明显差异
3.3.2 平均每个愈伤组织分化芽数的差异显著性分析 假设：H0 是没有显著差异的
不同光照条件对愈伤组织诱导情况的方差分析表
注意在夹取外植体时动作要快，也要注意在对镊子高温消毒后要适 当冷却，否则会造成外植体失水或者烫伤而影响生长。并且要严格进行 无菌操作。
2.4 烟草植株的再生
将上述愈伤组织按类型顺次转到分化培养基上，接种 18 瓶，20~22 条 件下连续光照培养 3~4 周，直到长出芽。
3 结果与分析
3.1 愈伤组织诱导
态发生，使一个细胞、一个组织或一个器官的细胞通过脱分化形成愈伤组 织，并再分化成植株[2]。为了获得用于细胞大量培养的培养物，要从植物 不同的部位诱导生长旺盛的愈伤组织[3]。所谓愈伤组织原是指植物在受伤 后于伤口表面形成的一团薄壁细胞，在组织培养中则指在人工培养基上 由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞[4]。目前组织培养中能重复地 形成愈伤组织和再生植株的一般限于从活跃分生组织部分而来的外植体， 如不成熟的幼胚、幼叶和幼花序，叶肉组织是一般常用的起始材料[5]。得
到愈伤组织以后，在愈伤组织继代培养时需要通过改进培养基和调整培 养温度与光照对培养条件进行优化，以获取最大的生物量和有用成分的 产率。
烟草是植物组织培养的四大典型实验植物之一，也是一种重要的经 济作物，在国民经济发展中起着重要的作用。目前，通过烟草的花药培养， 原生质体培养，以及烟草叶组织培养已经成功获得烟草的体外再生植株。 烟草组织培养技术的成熟，为烟草的快速繁殖和新品种的筛选打下了坚 实的基础。
细胞工程实验-烟草叶片的组织培养.
细胞工程学实验报告专业：_ 09级生物技术一班__ 姓名：___ __ 学号：____ _ _实验一实验室的设计及基本设备一、实验室的设计1、实验室设计的原因：植物细胞工程实验室的流程是：清洗玻璃器皿、配制培养基、高压气灭菌、无菌操作、培养室培养植物、植物材料的检测。
因此实验室需要有清洁器皿和配制培养基的准备室，无菌操作室或超净工作台，供培养材料用的培养室，检查培养情况并做记录的实验室。
一般在设计上，每个组分最好按工作的自然程序连续排列，如：准备室、灭菌室、无菌操作室、植物材料培养室、检测室。
实验室的安排应合理简洁，并要求无尘、灭菌、光洁、清净。
2、实验室的布局要求：（1）准备室准备室可以是一大间或几小间，主要用于进行一切与实验有关的准备工作：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、器脿醮涤、培养基配制与分装、培养基和培养器皿的灭菌、培养材料的预处理等。
必要的设备有:准备室应具备实验台、药品柜、水池、仪器、药品、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器等。
洗涤灭菌区功能：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。
要求：洗涤灭菌室根据工作量的大小决定其大小，一般面积控制在30-50m2。
在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。
中央实验台还应配置2个水槽，用于清洗小型玻璃器皿。
如果工作量大，可以购置一台洗瓶机。
准备1-2个洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿，地面应耐湿并排水良好。
设备：水池、落水架、中央实验台、高压灭菌锅、超声波清洗器、干燥灭菌器（如烘箱）等。
（2）无菌室（接种室）进行植物细胞、组织培养操作的关键是无菌条件。
室内的墙壁要求光滑平整；地面为光洁的水磨石，平坦无缝，避免灰尘积累，便于清扫。
紫外灯一般在3到4平方米内安装1到2只；在工作台下安置紫外灯紫外灯可使灭菌彻底。
同时，工作台上方安装平板玻璃，以防操作时落灰。
条件不好时，用无菌箱代替无菌室，箱内用紫外灯灭菌。
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。