(生物科技行业)分子生物学常用技术的原理及其应用及人类基因组学
第八章分子生物学常用技术的原理及其应用及人类基因组学
测试题
一、名词解释
1．分子杂交
2．Southern blotting
3．Northern blotting
4．Western blotting
5．dot blotting
6．DNA芯片技术
7．PCR
8．功能性克隆
9．转基因技术
二、填空题
1．Southern blotting用于研究、Northern blotting用于研究，Western blotting用于研究。
2．PCR的基本反应步骤包括、和三步。
3. 在PCR反应体系中，除了DNA模板外，还需加入、、和。
4．Sange法测序的基本步骤包括、、和。
5．目前克隆致病相关基因的主要策略有、、。
6．血友病第Ⅷ因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是，而DMD致病基因的克隆所采用的克隆策略是。
三、选择题
A型题
1. 经电泳分离后将RNA转移到硝酸纤维素(NC)膜上的技术是：
A．Southern blotting B．Northern blotting
C．Western blotting D．dot blotting
E．in situ hybridization
2. 不经电泳分离直接将样品点在NC膜上的技术是
A．Southern blotting B．Northern blotting
C．Western blotting D．Dot blotting
E．in situ hybridization
3. 经电泳分离后将蛋白质转移到NC膜上的技术是
A．Southern blotting B.Northern blotting
C．Western blotting D．dot blotting
E．in situ hybridization
4. 经电泳后将DNA转移至NC膜上的技术是
A．Southern blotting B．Northern blotting
C．Western blotting D．Eastern blotting
E．in situ hybridization
5. PCR的特点不包括
A．时间短，只需数小时 B．扩增产物量大
C. 只需微量模板 D．用途非常广泛
E. 底物必须标记
6．用于PCR的DNA聚合酶必须
A．耐热 B．耐高压 C. 耐酸 D．耐碱 E. 耐低温
7．PCR反应过程中，模板DNA变性所需温度一般是
A．95 ?C B．85 ?C C．75 ?C D．65 ?C E．55 ?C
8．PCR反应过程中，退火温度一般是
A．72 ?C B．85 ?C C．75 ?C D．65 ?C E．55 ?C 9. PCR反应过程中，引物延伸所需温度一般是
A．95 ?C B. 82 ?C C．72 ?C D．62 ?C E．55 ?C 10．PCR反应体系不包括
A. 模板DNA B．TaqDNA聚合酶
C. 上、下游特异性引物A、B D．ddNTP
E．含Mg2+的缓冲液
11．PCR的循环次数一般为
A．5～10次 B．10～15次 C．15～20次
D．20～25次 E．25～30次
12．PCR反应体系与双脱氧末端终止法测序体系不同的是缺少A．模板 B．引物 C. DNA聚合酶
D．ddNTP E．缓冲液
13．Sanger法测序不需要
A．Klenow小片段 B．引物 C. dNTP
D．标记dNTP E．ddNTP
14．Sanger法测序的基本步骤不包括
A．标记模板 B．模板一引物杂交 C．电泳
D．引物的延长与合成阻断 E．放射自显影直读图15．Sanger法测序的四个反应体系中应分别加入不同的A．模板 B．引物 C标记dNTP D．DNA聚合酶 E. ddNTP
16．人类基因组计划的主要研究内容不包括
A．遗传图分析 B．物理图分析 C．转录图分析
D. 序列图分析 E．蛋白质功能分析
17．1996年，英国科学家克隆的Dolly羊所采用的技术是A．转基因技术 B．核转移技术 C．基因剔除技术
D．肽核酸技术 E. 反义核酸技术
18．Maxam—Gilbert法与Sanger法测序的共同点是均需
A. 引物 B．Klenow大片段 C. ddNTP
D. 化学裂解试剂 E．电泳后放射自显影读图
19．Sanger法测序所得直读图像中，由终点至始点所读序列为A．待测DNA5'到3'的碱基序列
B．待测DNA3'到5'的碱基序列
C．待测DNA互补链3'到5'的碱基序列
D．待测DNA互补链5'到3'的碱基序列
E．引物5'到3'的碱基序列
20．PCR实验的特异性主要取决于：
A．DNA聚合酶的种类 B. 反应体系中模板DNA的量
C．引物序列的结沟和长度 D．四种dNTP的浓度
E. 循环周期的次数
21．基因剔除(knock out)的方法主要被用来研究
A．基因的结构 B．基因的功能 C. 基因的表达
D．基因的调控 E．基因的突变
22. 反义核酸作用主要是
A．封闭DNA B．封闭RNA C．降解DNA
D．降解DNA E．封闭核糖体的功能
23．有关Sanger法测序的叙述，不正确的是
A．只需标记一种dNTP
B. 一般应去除DNA聚合酶I的5'到3'外切酶活性
C．与dNTP相比阻断剂应尽可能的多
D．反应时间不必太长
E. 应采用超薄高压电泳
B型题
(1—5)
A．Northern blotting B．dot blotting C．Western blotting
D. Southern blotting
E. in situ hybridizanon
1.．用限制性内切酶酶切后进行电泳分离，再将DNA转移到NC膜上杂交的技术是
2．电泳分离后将RNA转移至NC膜上杂交的技术是
3．电泳分离后将蛋白质转移至NC膜上，与标记蛋白杂交的技术是
4．不经电泳直接将样品点在NC膜上杂交的技术是
5. 在组织切片上直接与探针杂交的技术是
(6—8)
A．95?C B．85 ?C C．72?C D．65?C E．55?C
6．PCR变性温度一般是
7．PCR退火温度一般是
8．PCR引物延伸温度一般是
(9—12)
A．Taq DNA聚合酶 B. 反转录酶 C．K1cnow大片段 D．末端核苷酸转移酶 E．Klenow小片段
9．同聚物加尾连接需要
10．PCR需要
11．Sanger法测序需要
12．由mRNA合成cDNA需要
X型题
1.PCR反应体系中含有
A．特异性引物 B．Klenow大片段 C.dNTP
D．ddNTP E．35S-α-dATP
2. PCR技术的反应步骤包括：
A．退火 B. 复性 C. 变性 D．引物延伸E．引物终止
3．DNA链末端合成终止法反应体系中含有
A．引物 B．dNTP C．ddNTP
D．35S-α-dATP E．TaqDNA聚合酶
4．DNA链末端合成终止法反应体系中不含有
A．模板 B．TaqDNA聚合酶 C．ddNTP
D．化学裂解试剂 E．35S-α-dATP
5．PCR技术可以用于
A．病原微生物的微量检测 B．突变基因的筛选
C. 法医学鉴定 D．DNA序列分析
E．克隆目的基因
6．克隆致病相关基因的策略包括
A．定位克隆 B．非定位候选克隆 C．功能克隆
D．定位候选克隆 E．随机克隆
四、问答题
1．何谓PCR?简述其基本原理、反应体系和主要步骤。
2．简述Sanger法测序的基本原理及大体过程。
3. 如果你有翻译活性很高的人酪氨酸酶的mRNA，请设计两个实验以鉴定某个克隆的基因片段是否为酪氨酸酶的基因?
参考答案
一、名词解释
1．在DNA复性时，如把不同DNA分子或DNA与RNA分子放在同一溶液中，只要这些核酸单链分子之间存在一定程度的碱基配对关系，就可在不同分子间形成杂化双链，这种现象称核酸分子杂交。
2．将限制性内切酶酶切电泳后的DNA转移至NC膜上，再与核酸探针杂交的技术。
3．将电泳后的RNA转移至NC膜上，再与核酸探针杂交的技术。
4．将聚丙烯酰胺凝胶电泳后的蛋白质转移至NC膜上，再与另一标记蛋白质分子(如抗体)杂交的技术。
5．不经电泳分离直接将样品点在NC膜上用于杂交的技术。
6．指采用原位合成或显微打印手段，将数以万计的DNA探针固化于支持物表面上，产生二维DNA探针阵列，然后与标记的样品进行杂交，通过检测杂交信号来实现对生物样品快速、并行、高效地检测或医学诊断。由于常用硅芯片作为支持物，且在制备过程运用了计算机芯片的制备技术，故称基因芯片技术。
7．是一种快速简便的体外DNA扩增技术，能在很短时间内，将几个拷贝的DNA放大上百万倍。
8．指从对一种致病基因的功能的了解出发克隆该致病基因的策略。血友病的第Ⅷ因子基因是以此策略克隆成功的。
9．指将目的基因整合人受精卵细胞或胚胎干细胞，然后将细胞导人动物子宫，使之发育成个体，该个体能把目的基因继续传给子代，该技术称转基因技术。目的基因的受体动物就是转基因动物。
二、填空题
16．DNA RNA 蛋白质 17．引物 TaqDNA聚合酶 dNTP 含Mg2—’的缓冲液1S．变性退火延伸 1Q．模板一引物杂交引物延长与合成阻断电泳放射自显影直读图 20．遗传图分析物理图分析转录图分析序列图分析资料的储存和利用 21．功能基因组学蛋白质组学 22．功能性克隆定位克隆候选基因克隆23．功能性克隆定位克隆
三、选择题
A型题
1—10
11—20
21—30
31—40
41—50
5—60
B型题
1—10
11—20
21—30
31—40
X型题
1—10
11—20
21—30
31—40
四、问答题
1．是一种快速简便的体外DNA扩增技术，能在很短时间内，将几个拷贝的DNA放大百万倍。其基本工作原理是：以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板5，末端和3’末端相互补的寡核苷酸片段为引物，在DNA聚合酶的作用下，按半保留复制的机制沿模板链
延伸直至完成新的DNA合成，重复这一过程，使目的DNA片段得到大量扩增。其反应体系包括：模板DNA、特异性引物、耐热DNA聚合酶、dNTP以及含Mg2+的缓冲液。PCR反应步骤为(1)变性：95℃，15s ；(2)退火：Tm-5C，一般为55℃，30s ；(3)延伸：72C L 5rain。此三步为一个循环，一般进行25～30次循环。最后一次循环的延伸反应时间应适当延长(5 min)，以获得较大量的DNA产物。
2．双脱氧末端终止法测序由Sanger创立，是常用方法之一。其基本原理是利用DNA 聚合酶的聚合反应，在试管内复制待测DNA的随机长度的互补链。反应设A、T、C、G体系，其中分别加入适当比例的相应ddNTP，由于ddNTP缺少3，一OH，不能形成磷酸二酯键，而使合成反应终止，致使4管中所合成的产物为随机长度的终止于相应ddNTP的DNA片段。从总体看，4管中所有产物是一系列长度只差1个核苷酸的聚合链，经超薄高压电泳可将其一一分辨。大体过程为： (1)单链模板的制备；可据M13噬菌体的特性，将目的基因用基因工程的方法插入M13复制型双链DNA中，培养扩增后，提取单链M13噬菌体作模板 (2)模板一引物杂交：引物与待测DNA的3‘端上游杂交。并沿5，一3，方向延长，所合成新链即待测DNA的互补链。(3)引物的延长与合成阻断：杂交液分4管，各管分别加入Klenow 大片段、4种dNTP(其中一种被标记)、一种ddNTP和缓冲液，保温使引物延长并随机阻断。
(4)电泳：四泳道超薄聚丙烯酰胺一尿素凝胶高压电泳。(5)放射自显影和读图：将凝胶板干燥后，与X线片夹在一起，使X线片在电泳带相应位置曝光、显影、定影后直读图像。自终端至始点读出新合成链的5’一3’序列，其互补链即为待测DNA的碱基序列。
3．(1)以酪氨酸酶RNA为模板合成的’’P标记的cDNA为探针，对克隆片段进行Southern 杂交。
(2)克隆片段与酪氨酸酶mRNA杂交，mRNA翻译活性丧失，该克隆片段为酪氨酸酶的基因。
基因组学与医学
测试题
一、名词解释
1．人类基因组计划
2. 结构基因组学
3．功能基因组学
4．比较基因组学
5．基因病
二、填空题
1．Southern blotting用于研究一一——，、Northern blotting用于研究一一——，Western blotting用于研究一一——。
2．PCR的基本反应步骤包括一——、——和——三步。
3. 在PCR反应体系中，除了DNA模板外，还需加入——、————、——和——。
4．Sange法测序的基本步骤包括——、——、——和——。
5．人类基因组计划的主要研究内容包括、、、、。
6．目前克隆致病相关基因的主要策略有——、——、——。
7．血友病第Ⅷ因子基因的首次克隆成功所采用的克隆策略是————，而DMD致病基因的克隆所采用的克隆策略是————。
三、选择题
A型题
1．人类基因组计划的主要研究内容不包括
A．遗传图分析 B．物理图分析 C．转录图分析
D. 序列图分析 E．蛋白质功能分析
2．1996年，英国科学家克隆的Dolly羊所采用的技术是
A．转基因技术 B．核转移技术 C．基因剔除技术
D．肽核酸技术 E. 反义核酸技术
3．PCR实验的特异性主要取决于：
A．DNA聚合酶的种类 B. 反应体系中模板DNA的量
C．引物序列的结沟和长度 D．四种dNTP的浓度
E. 循环周期的次数
X型题
1．有关人类基因组计划(HGP)的描述，错误的是
A．最初由美国人提出
B．主要任务是完成人的23对染色体碱基测序
C. 因真正编码蛋白质的序列只占1％-5％，所以HGP计划的实际意义不大
D．我国未参与该计划
E．该计划至今未有进展
2．HGP的主要研究内容有
A．绘制遗传图 B．绘制物理图 C．完成转录图
D. 完成序列图
E.资料的储存和利用
四、问答题
1．HGP和PHGP有和重大意义?
2．HGP的主要研究内容是什么？
3. 如何进行疾病相关基因的克隆与鉴定?
参考答案
一、名词解释
1．
二、填空题
1．遗传图分析物理图分析转录图分析序列图分析资料的储存和利用 2．功能基因组学蛋白质组学3.功能性克隆定位克隆候选基因克隆
三、选择题
四、问答题
1．
2．
3．
分子生物学与基因工程原理
分子生物学与基因工程原理复习资料 一、名词解释 1. 分子生物学:是研究核酸、蛋白质等生物大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学；是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘，由被动地适应自然界转向主动地改造和重组自然界的基础学科。 2. 染色体：是细胞在有丝分裂时遗传物质存在的特定形式，是间期细胞染色质结构紧密包装的结果。 3. DNA 多态性：是指DNA 序列中发生变异而导致的个体间核苷酸序列的差异，主要包 括单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism , SNP)和串联重复序列多态性 ( tandem repeats polymorphism )两类。 4. DNA 的半保留复制：DNA 复制过程中，由亲代DNA 生成子代DNA 时，每个新形成的子代DNA 中，一条链来自亲代DNA ，另一条链则是新合成的，这种复制方式称半保留复制。 5. 冈崎片段：在DNA 复制过程中，前导链能连续合成，而滞后链只能是断续的合成5 3 的多个短片段，这些不连续的小片段称为冈崎片段。 6.SNP：single nucleotide polymorphism ，单核苷酸多样性，是基因组DNA 序列中单个核苷酸的突变引起的多态性。 7. “基因”的分子生物学定义：产生一条多肽链或功能RNA 所必需的全部核甘酸序列。 8. 获得性遗传：是有机体在生长发育过程中由于环境的影响而不是基因突变所形成的新的遗传性状。 9. DNA 甲基化：是基因的表观修饰方式之一，指生物体在(DNA methyltransferase ，DNMT)的催化下，以S-腺苷甲硫氨酸(SAM)为甲基供体，将甲基转移到特定的碱基上的过程。 10. CDNA文库：以mRNA为模板，经反转录酶催化，体外合成cDNA，与适当的载体 (常用噬菌体或质粒载体)连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖 扩增。这样包含着细胞全部mRNA 信息的cDNA 克隆集合称为该组织细胞cDNA 文库。11. 基因组：是指一个细胞或者生物体所携带的全部遗传信息。生物个体的所有细胞的基因组是固定的。 12. 蛋白质组学：指在大规模水平上研究蛋白质的特征，包括蛋白质的表达水平，翻译后的修饰，蛋白与蛋白相互作用等，获得蛋白质水平上的关于疾病发生，细胞代谢等过程的整体而全面的认识。 13. 转录组：广义上指某一生理条件或环境下，一个细胞、组织或生物体内所有转录产 物的总和，包括信使RNA、核糖体RNA、转运RNA及非编码RNA ;狭义上指细胞中转录出来的所有mRNA 的总和。 14. 基因定点突变技术：通过改变基因特定位点核苷酸序列来改变所编码的氨基酸序列的一
分子生物学原理教案
分子生物学原理教案 课程代码356.237.1 前言 根据教学大纲要求，按基础医学专业的教学进度安排(总学时46学时)，由本系主讲教师共同制订本教案，以供教师备课、讲课、复习指导参考。 核酸的结构与功能 教学要求： 1．掌握核苷酸的分子结构，了解连接键及分子表达式 2．重点掌握DNA、RNA的结构特征及主要功能 3．了解DNA的理化性质与结构的关系 4．了解DNA的高级结构 课时安排：总学时4.0 第一节核酸的化学组成及一级结构1.0 第二节DNA的空间结构与功能1.0 第三节RNA的结构和功能1.0 第四节核酸的理化性质0.8 第五节核酸酶0.2 重点： 1．核酸的化学组成 2．DNA的双螺旋结构 3．RNA的结构和功能
4．核酸的理化性质 难点： 1．DNA的双螺旋结构 2．核酸的理化性质 教学内容： 一、核酸的化学组成及一级结构 1．核苷酸嘌呤与嘧啶，DNA和RNA分子中核苷酸组成上的特点，核苷酸各组分之间的连接方式 2．脱氧核苷酸的连接 3．核苷酸的连接 4．核酸的一级结构 二、DNA的空间结构与功能 1．DNA的双螺旋结构Chargaff规则、B-双螺旋结构模型和Z-DNA。 2．DNA的超螺旋结构染色质、核小体、组蛋白、基因 3．DNA是遗传信息的物质基础 三、RNA的结构和功能 1．mRNA模板、hnRNA 2．tRNA稀有碱基、茎环结构、反密码环 3．rRNA核糖体、多核糖体 四、核酸的理化性质 紫外吸收、变性、复性、增色效应、减色效应、解链温度、杂交、探针。
五、核酸酶 中、英文专业词汇： nucleic acid核酸 purine嘌呤 deoxyribonucleic acid(DNA)脱氧核糖核酸pyrimidine嘧啶 ribonucleic acid(RNA)核糖核酸 adenine(A)腺嘌呤 base碱基 guanine(G)鸟嘌呤 nudeotide核苷酸 cytosine(C)胞嘧啶 nucleoside核苷 uracil(U)尿嘧啶 thymine(T)胸腺嘧啶 base pair碱基对 phosphodiester linkage磷酸二酯键nucleosome核小体 ribosome核糖体 hybridization杂交 genetic code遗传密码
分子生物学技术原理
生物分子类实验室常用实验技术原理汇总 一、GST pull-down实验 基本原理:将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。注：GST即谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase) 二、足印法（Footprinting） 足印法（Footprinting）是一种用来测定DNA-蛋白质专一性结合的方法，用于检测目的DNA 序列与特定蛋白质的结合，也可展示蛋白质因子同特定DNA片段之间的结合。其原理为：DNA 和蛋白质结合后，DNA与蛋白的结合区域不能被DNase（脱氧核糖核酸酶）分解，在对目的DNA序列进行检测时便出现了一段无DNA序列的空白区(即蛋白质结合区)，从而了解与蛋白质结合部位的核苷酸数目及其核苷酸序列。 三、染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP） 染色质免疫共沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，ChIP）是研究体内蛋白质与DNA 相互作用的有力工具，利用该技术不仅可以检测体内反式因子与DNA的动态作用，还可以用来研究组蛋白的各种共价修饰以及转录因子与基因表达的关系。 染色质免疫沉淀技术的原理是：在生理状态下把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为小片段后，利用抗原抗体的特异性识别 反应，将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来。染色质免疫沉淀技术一般包括细胞固定，染色质断裂，染色质免疫沉淀，交联反应的逆转，DNA的纯化及鉴定。 四、基因芯片（又称 DNA 芯片、生物芯片）技术 基因芯片指将大量探针分子固定于支持物上后与标记的样品分子进行杂交，通过检测每个探针分子的杂交信号强度进而获取样品分子的数量和序列信息。通俗地说，就是通过微加工技术 ，将数以万计、乃至百万计的特定序列的DNA片段（基因探针），有规律地排列固定于2cm2 的硅片、玻片等支持物上，构成的一个二维DNA探针阵列，被称为基因芯片。基因芯片主要用于基因检测工作 。 基因芯片的测序原理是杂交测序方法，即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法，在一块基片表面固定了序列已知的八核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG，与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时，通过确定荧光强度最强的探针位置，获得一组序列完全互补的探针序列。据此可重组出靶核酸的序列。
常用的分子生物学内容和相关技术
常用的分子生物学内容和相关技术 一、分子克隆（分子操作） 大肠杆菌中1．原核表达系统（PET28a，PET30a 等） 融合蛋白抗原免疫动物 原核表达系统蛋白转导系统（TAT） 大肠杆菌中
2．真核表达系统（pcDNA3）：用于transfection（基因转染） 在培养的动物细胞中 分子克隆的方法： ●选择合适的表达载体 ●选择酶切位点，设计PCR引物并合成 ●制备待克隆的靶基因
?PCR（来源培养细胞或组织、植物的mRNA cDNA） ?RT-PCR ?质粒中已克隆的目的片段 ?人工合成cDNA片段 退火后形成双链 二、细胞培养 ?动物细胞 ?植物细胞 ?原代细胞培养 ?传代细胞培养 三、探讨功能： 与细胞生长、增殖、凋亡的关系，检测mRNA、蛋白质的表达变化及意义 ?内源基因：或使内源基因表达抑制（RNAi, down-regulation）或缺失、突变 ?外源基因：通过transfection（基因转染）、电转移、显微微注射等方法将外源基因导入培养的细胞中过 表达（overexpression），在mRNA、蛋白质水平上 表达上调（up-regulation） ?信号传导：protein-protein interaction
◆Two hybrid system ◆Western blot ◆免疫荧光双标记图像分析 ?细胞:BrdU,Flow Cytometry（cell cycle，apoptosis） ?动物：成瘤 四、检测表达 ?DNA:Reporter gene(promoter activity),Hybridization （DNA-Southern blot，RNA-Northern blot，tissues or cells-in situ） ?RNA:RT-PCR，Real-time PCR,microRNA Gene chips:cDNA,microRNAs ?Proteins （tissues or cells-Western blot or immunohistochemistry，serum or conditional medium–ELISA）
分子生物学常用技术 习题
第五章常用分子生物学技术的原理及其应用习题（引自网络精品课程） 一、选择题 （一）A型题 1 ．分子杂交实验不能用于 A ．单链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 B ．双链 DNA 与 RNA 分子之间的杂交 C ．单链 RNA 分子之间的杂交 D ．单链 DNA 分子之间的杂交 E ．抗原与抗体分子之间的杂交 2 ．关于探针叙述错误的是 A ．带有特殊标记 B ．具有特定序列 C ．必须是双链的核酸片段 D ．可以是基因组 DNA 片段 E ．可以是抗体 3 ．下列哪种物质不能用作探针 A ． DNA 片段 B ． cDNA C ．蛋白质 D ．氨基酸 E ． RNA 片段 4 ．印迹技术可以分为 A ． DNA 印迹 B ． RNA 印迹 C ．蛋白质印迹 D ．斑点印迹 E ．以上都对 5 ． PCR 实验延伸温度一般是 A ．90 ℃ B ．72 ℃ C ．80 ℃ D ．95 ℃ E ．60 ℃ 6 ． Western blot 中的探针是 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．抗体 E ．双链 DNA 7 ． Northern blotting 与 Southern blotting 不同的是 A ．基本原理不同 B ．无需进行限制性内切酶消化 C ．探针必须是 RNA D ．探针必须是 DNA E ．靠毛细作用进行转移 8 ．可以不经电泳分离而直接点样在 NC 膜上进行杂交分析的是 A ．斑点印迹 B ．原位杂交 C ． RNA 印迹 D ． DNA 芯片技术 E ． DNA 印迹 9 ．下列哪种物质在 PCR 反应中不能作为模板 A ． RNA B ．单链 DNA C ． cDNA D ．蛋白质 E ．双链 DNA 10 ． RT-PCR 中不涉及的是 A ．探针 B ． cDNA C ．逆转录酶 D ． RNA E ． dNTP 11 ．关于 PCR 的基本成分叙述错误的是 A ．特异性引物 B ．耐热性 DNA 聚合酶 C ． dNTP D ．含有 Zn 2+ 的缓冲液 E ．模板 12 ． DNA 链末端合成终止法不需要 A ． ddNTP B ． dNTP C ．引物标记 D ． DNA 聚合酶 E ．模板 13 ． cDNA 文库构建不需要 A ．提取 mRNA B ．限制性内切酶裂解 mRNA C ．逆转录合成 cDNA D ．将 cDNA 克隆入质粒或噬菌体 E ．重组载体转化宿主细胞 14 ．标签蛋白沉淀是 A ．研究蛋白质相互作用的技术 B ．基于亲和色谱原理 C ．常用标签是 GST D ．也可以是 6 组氨酸标签 E ．以上都对 15 ．研究蛋白质与 DNA 在染色质环境下相互作用的技术是 A ．标签蛋白沉淀 B ．酵母双杂交 C ．凝胶迁移变动实验 D ．染色质免疫沉淀法 E ．噬菌体显示筛选系统 16 ．动物整体克隆技术又称为
分子生物学常用技术考试题目及答案
1．P C R反应过程中，引物粘合所需温度一般是A．72℃ B．85℃ C．75℃ D．65℃ E．55℃ 2．PCR反应过程中，引物延伸所需温度一般是 A．95℃ B．82℃ C．72℃ D．62℃ E．55℃ 3．PCR反应体系不包括 A．模板DNA B．Taq DNA聚合酶C．特异性引物A、B D．ddNTP E．含Mg2+的缓冲液 4．PCR的循环次数一般为 A．5～10次B．10～15次C．15～20次D．20～25次E．25～30次 5．PCR反应体系与双脱氧末端终止法测序体系不同的是缺少 A．模板B．引物C．DNA聚合酶D．ddNTP E．缓冲液 6．Sanger法测序不需要 A．Klenow小片段B．引物C．dNTP D．标记dNTP E．ddNTP 7．Sanger法测序的基本步骤不包括 A．标记模板B．模板-引物杂交C．引物的延长与合成阻断 D．电泳E．放射自显影直读图 8．Sanger法测序的四个反应体系中应分别加入不同的 A．模板B．引物C．标记dNTP D．DNA聚合酶E．ddNTP 9．人类基因组计划的主要研究内容不包括 A．遗传图分析B．物理图分析C．转录图分析 D．序列图分析E．蛋白质功能分析 10．1996年，英国科学家克隆的Dolly羊所采用的技术是 A．转基因技术B．核转移技术C．基因剔除技术
D．肽核酸技术E．反义核酸技术 11．Maxam-Gilbert法与Sanger法测序的共同点是均需 A．引物B．Klenow大片段C．ddNTP D．化学裂解试剂E．电泳后放射自显影读图 12．Sanger法测序所得直读图像中，由终点至始点所读序列为 A．待测DNA5ˊ→3ˊ的碱基序列B．待测DNA3ˊ→5ˊ的碱基序列 C．待测DNA互补链3ˊ→5ˊ的碱基序列D．待测DNA互补链5ˊ→3ˊ的碱基序列E．引物5ˊ→3ˊ的碱基序列 13．PCR实验的特异性主要取决于 A．DNA聚合酶的种类B．反应体系中模板DNA的量 C．引物序列的结构和长度D．四种dNTP的浓度E．循环周期的次数14．基因剔除（knock out）的方法主要被用来研究 A．基因的结构B．基因的功能C．基因的表达 D．基因的调控E．基因的突变 15．反义核酸作用主要是 A．封闭DNA B．封闭RNA C．降解DNA D．降解DNA E．封闭核糖体的功能 16．有关Sanger法测序的叙述，不正确的是 A．只需标记一种dNTP B．一般应去除DNA聚合酶I 的5ˊ→3ˊ外切酶活性C．与dNTP相比阻断剂应尽可能的多D．反应时间不必太长 E．应采用超薄高压电泳 17．经电泳后将DNA转移至NC膜上的技术是 A．Southern blotting B．Northern blotting C．Western blotting D．Eastern blotting E．in situ hybridization
最新分子生物学原理(考点总结)
分子生物学原理（最终回） 1 2 Chapter 1 Protein Structure and Function 3 复习题（1） 4 1. 名词解释 5 （1）Peptides肽，由氨基酸脱水缩合形成的两性有机化合物。 6 （2）Simple proteins简单蛋白，不含蛋白辅助因子的蛋白为简单蛋白。 7 （3）Conjugated proteins缀合蛋白，它含有蛋白辅助因子，如辅酶、辅基8 等。 9 （4）Coenzyme辅酶，是一种蛋白辅助因子，通过非共价键与链相连，可以10 用透析、超滤的方法将其除去。 11 （5）Prosthetic group辅基，是一种蛋白辅助因子，通过共价键与多肽链12 相连，不易与多肽链分离。 13 （6）Configuration 构型，有机分子的空间排列，不同的排列彼此作为参照，14 它们之间的转化需要破坏共价键。 15 （7）Conformation构象，取代基团的空间排列，它们的转化可以通过单键16 的旋转来完成，故不需要破坏共价键。 17 （8）Chiral carbin 手性碳原子，连接四个不同原子或基团的碳原子叫做手18 性碳原子。 19 （9）Enantiomers对映异构体，如两个分子互为镜像关系，则称这两个分子20 为对映异构体，对映异构体具有旋光性。 21 （10）Optical isomers 旋光异构体，是一对对映异构体，它们除了光学特
性不一样以外，其它物化特征均相同。 22 （11）Cis and trans isomers正反异构体，取代基团在双键两侧的不同排23 列形成正反异构体。 24 （12）Ampholytes两性电解质，既包括碱性基团又包括酸性基团的分子，故25 既能和酸反应又能和酸反应，如氨基酸。 26 （13）Isoelectric point等电点，氨基酸净电荷为零时所对应的pH。 27 （14）Peptide plane 肽平面，肽键具有一定程度的双键性，参与肽键的六28 个原子C、H、O、N、C α1及C α2 不能自由转动，位于同一平面内，该平面就是肽 29 平面。 30 （15）Dihedral angle二面角，绕C α-N及C α -N旋转的角分别为肽平面的两 31 个二面角，它决定了肽链的主链构象。 32 （16）Ramachandran diagram 拉氏构象图，Ramachandran 根据蛋白质中非33 键合原子间的最小接触距离，确定了哪些成对二面角（φ、ψ）所规定的两个34 相邻肽单位的构象是允许的，那些是不允许的，并以φ为横坐标，以ψ为纵35 坐标，在坐标图上标出，该图几位拉氏构象图。 36 （17）Primary structure of proteins蛋白的初级结构，氨基酸的排列顺37 序即为蛋白的初级结构。 38 （18）Secondary structure of proteins蛋白的二级结构，它是指多肽链39 的局部构象，即局部骨架的折叠方式。 40 （19）Tertiary structure of proteins 蛋白的三级结构，是指整条多肽链41 的构象，包括所有原子的空间排列。 42 （20）Quaternary structure of proteins蛋白的四级结构，它是指亚基间43
常用的分子生物学基本技术
常用的分子生物学基本技术 核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 固相杂交 固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。 斑步杂交（dot hybridization） 是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交（blotting hybridization） Southern印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的DNA片段，将凝胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上，经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显色，检测特定大小分子的含量。可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析（RELP）等。 Northern印迹杂交:由Southerm印杂交法演变而来，其被测样品是RNA。经甲醛或聚乙二醛变性及电泳分离后，转移到固相支持物上，进行杂交反应，以鉴定基中特定mRNA分子的量与大小。该法是研究基因表达常用的方法，可推臬出癌基因的表达程度。 差异杂交（differential hybridization） 是将基因组文库的重组噬菌体DNA转移至硝酸纤维素膜上，用两种混合的不同cDNA探针（如：转移性和非转移性癌组织的mRNA逆转录后的cDNA）分别与滤膜上的DNA杂交，分析两张滤膜上对应位置杂交信息以分离差异表达的基因。适用于基因组不太复杂的真核生物（如酵母）表达基因的比较，假阳性率较低。但对基因组非常复杂的盐酸核生物（如人），则因工作量太大，表达的序列所占百分比较低（仅5％左右），价值不大。
《分子生物学原理》
分子生物学原理（最终回） Chapter 1 Protein Structure and Function 复习题（1） 1. 名词解释 （1）Peptides肽，由氨基酸脱水缩合形成的两性有机化合物，相对分子量小于6000 （2）Simple proteins简单蛋白，仅由氨基酸组成，不含蛋白辅助因子等非氨基酸成份的蛋白为简单蛋白。 （3）Conjugated proteins缀合蛋白，除了蛋白组分外还含有蛋白辅助因子等非氨基酸成份（如辅酶、辅基和金属离子等）的蛋白为缀合蛋白。 （4）Coenzyme辅酶，是一种蛋白辅助因子，为非氨基酸成份，通过非共价键与链相连，可以用透析、超滤的方法将其除去。 （5）Prosthetic group辅基，是一种蛋白辅助因子，为非氨基酸成份，通过共价键与多肽链相连，不易与多肽链分离。 （6）Configuration 构型，有机分子的空间排列，不同的排列彼此作为参照，具有双键和手性中心两个特征，它们之间的转化需要破坏共价键。 （7）Conformation构象，取代基团的空间排列，由于键的自由旋转，在空间能形成不同位置，它们的转化可以通过单键的旋转来完成，故不需要破坏共价键。 （8）Chiral carbin 手性碳原子，连接四个不同原子或基团的碳原子叫做手性碳原子。 （9）Enantiomers对映异构体，如两个分子互为镜像关系，则称这两个分子为对映异构体，对映异构体具有旋光性。 （10）Optical isomers光学异构体，L-和D-构型的异构体具有相同的熔点、溶解度等物理性质和相同的化学性质，但旋光方向相反，故称之为光学异构体 （11）Cis and trans isomers正反异构体，取代基团在双键两侧的不同排列形成正反异构体。（12）Ampholytes两性电解质，既可以作为质子供体又可以作为质子受体的电解质。在偏中性的水溶液中，α-氨基酸的氨基（-NH3+）可以起质子供体的作用，而羧基（-COO-）起质子受体的作用，所以氨基酸是两性电解质 （13）Isoelectric point等电点，氨基酸的等电点。当溶液的PH达到某一特定值的时候，氨基酸所带正电荷刚好与负电荷相等，氨基酸分子对外不显电性，此时溶液的PH值。（14）Peptide plane在肽键中，由于共振现象，以致C-N之间具有部分双键的性质，不能自由旋转；而C=O之间具有部分单键的性质。于是，形成肽键的4个原子与其左右相邻的2个Cα原子处于同一个平面，这两个Cα反式排列，该平面叫做肽平面。 （15）Dihedral angle二面角，φ绕Cα-N及ψ绕Cα-C旋转的角分别为肽平面的两个二面角，它决定了肽链的主链构象。 （16）Ramachandran diagram 拉氏构象图，Ramachandran 根据蛋白质中非键合原子间的最小接触距离，确定了哪些成对二面角（φ、ψ）所规定的两个相邻肽单位的构象是允许的，那些是不允许的，并以φ为横坐标，以ψ为纵坐标，在坐标图上标出，该图即为拉氏构象图。 （17）Primary structure of proteins蛋白的初级结构，氨基酸的排列顺序即为蛋白的初级结构。（18）Secondary structure of proteins蛋白的二级结构，它是指多肽链的局部构象，即局部骨架的折叠方式, 蛋白质分子中某一段肽链的局部空间结构，即该段肽链的主链骨架原子的相对空间位置，不涉及氨基酸侧链的构象。
常用的分子生物学基本技术
常用的分子生物学基本技术?核酸分子杂交技术 ?由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性,它已成为分子生物学中最常用的基本技术,被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（ｐrｏbe),待测核酸序列可以是克隆的基因征段,也可以是未克隆化的基因组DＮA和细胞总RNＡ。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的,能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或ＲNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。? 固相杂交 ?固相杂交（soｌｉd－phase ｈｙbｒｉdizatｉon)是将变性的DNＡ固定于固体基质(硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上,再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。? 斑步杂交(dot hyｂrｉｄizａtｉoｎ）??是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或ＲNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单,事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品,可在同一张膜上同时进行多个样品的检测;根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量,而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交(blｏttｉng hybridizatioｎ） ?Southｅrn印迹杂交：凝胶电离经限制性内切酶消化的ＤNA片段，将凝胶上的DＮA变性并在原位将单链ＤNA片段转移至硝基纤维素膜或其他固相支持物上,经干烤固定，再与相对应结构的已标记的探针进行那时交反应，用放射性自显影或酶反应显色,检测特定大小分子的含量。可进行克隆基因的酶切图谱分析、基因组基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性长度多态性分析(ＲELP)等。 ?Ｎortｈeｒn印迹杂交:由Southeｒm印杂交法演变而来，其被测样品是RNA。经甲醛或聚乙二醛变性及电泳分离后,转移到固相支持物上，进行杂交反应,以鉴定基中特定mRＮＡ分子的量与大小。该法是研究基因表达常用的方法,可推臬出癌基因的表达程度。? 差异杂交(differential hybridｉzatｉon) ?是将基因组文库的重组噬菌体DNA转移至硝酸纤维素膜上,用两种混合的不同ｃDNA探针(如:转移性和非转移性癌组织的mRNＡ逆转录后的ｃDNA)分别与滤膜上的DNA杂交，分析两张滤膜上对应位置杂交信息以分离差异表达的基因。适用于基因组不太复杂的真核生物（如酵母）表达基因的比较，假阳性率较低。但对基因组非常复杂的盐酸核生物(如人),则因工作量太大,表达的序列所占百分比较低（仅5％左右),价值不大。 ?cDＮA微点隈杂交（cDＮＡmiｃroａｒray hybriｄizａtion）? 是指将cDNA克隆或cDNA的ＰCR产物以高度的列阵形式排布并结合于固相支持物上(如:尼龙膜或活化的载玻片)以微点阵,然后用混合的不同DNＡ探针与微点阵上的DNA进行杂交。再利用荧光、化学发光、共聚焦显微镜等技术扫描微点阵上的杂交信息。它比差异杂交技术的效率高、速度快、成本低，适用于大规模的分析。已成商品问世。其缺点是无法克服保守的同源序列及重序对杂交信息的干扰。??寡核苷酸微点隈杂交(oligonucleotｉｄｅmicｒoarraｙhybridizatiｏn)? 是在特殊的固相支持物上原位合成寡核苷酸,使它共价结合于支持物表面，与平均长度为20-50nt的混合RNA或cDNA探针进行杂交，以提高杂交的特异性和灵敏度。应用共聚焦显微镜可检测跨越三个数量级的杂交信息。适用于低丰度mRNA的检测,以区分基因家族不同成员的差异表达特征，或鉴定同一转录在不同组织和细胞中的选择性剪接。但有工作量较大、
分子生物学常用实验技术
分子生物学常用实验技术 第一章质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第二章 DNA酶切及凝胶电泳 第三章大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 第四章 RNA的提取和cDNA合成 第五章重组质粒的连接、转化及筛选 第六章基因组DNA的提取 第七章 RFLP和RAPD技术 第八章聚合酶链式反应(PCR)扩增和扩增产物克隆 第九章分子杂交技术 第十章测序技术 第一章质粒DNA的分离、纯化和鉴定 第一节概述 把一个有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖和表达的工具叫载体(Vector)。细菌质粒是重组DNA技术中常用的载体。 质粒(Plasmid)是一种染色体外的稳定遗传因子,大小从1-200kb不等,为双链、闭环的DNA分子,并以超螺旋状态存在于宿主细胞中。质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，它具有自主复制和转录能力,能在子代细胞中保持恒定的拷贝数,并表达所携带的遗传信息。质粒的复制和转录要依赖于宿主细胞编码的某些酶和蛋白质，如离开宿主细胞则不能存活,而宿主即使没有它们也可以正常存活。质粒的存在使宿主具有一些额外的特性,如对抗生素的抗性等。F质粒(又称F因子或性质粒)、R质粒(抗药性因子)和Col质粒(产大肠杆菌素因子)等都是常见的天然质粒。 质粒在细胞内的复制一般有两种类型:紧密控制型(Stringent control)和松驰控制型(Relaxed control)。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制,当染色体不复制时,它也不能复制,通常每个细胞内只含有1个或几个质粒分子,如F因子。后者的质粒在整个细胞周期中随时可以复制,在每个细胞中有许多拷贝,一般在20个以上,如Col E1质粒。在使用蛋白质合成抑制剂-氯霉素时,细胞内蛋白质合成、染色体DNA复制和细胞分裂均受到抑制,紧密型质粒复制停止,而松驰型质粒继续复制,质粒拷贝数可由原来20多个扩增至1000-3000个,此时质粒DNA占总DNA的含量可由原来的2%增加至40-50%。 利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在,当两种质粒同时导入同一细胞时,它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争,在一些细胞中,一种质粒占优势,而在另一些细胞中另一种质粒却占上风。当细胞生长几代后,占少数的质粒将会丢失,因而在细胞后代中只有两种质粒的一种，这种现象称质粒的不相容性(Incompatibility)。但利用不同复制系统的质粒则可以稳定地共存于同一宿主细胞中。 质粒通常含有编码某些酶的基因,其表型包括对抗生素的抗性,产生某些抗生素,降解复杂有机物,产生大肠杆菌素和肠毒素及某些限制性内切酶与修饰酶等。 质粒载体是在天然质粒的基础上为适应实验室操作而进行人工构建的。与天然质粒相比,质粒载体通常带有一个或一个以上的选择性标记基因(如抗生素抗性基因)和一个人工合成的含有多个限制性内切酶识别位点的多克隆位点序列,并去掉了大部分非必需序列,使分子量尽可能减少,以便于基因工程操作。大多质粒载体带有一些多用途的辅助序列,这些用途包括通过组织化学方法肉眼鉴定重组克隆、产生用于序列测定的单链DNA、体外转录外源DNA序列、鉴定片段的插入方向、外源基因的大量表达等。一个理想的克隆载体大致应有下列一些特性：（1）分子量小、多拷贝、松驰控制型；（2）具有多种常用的限制性内切酶的单切点；（3）能插入较大的外源DNA片段；（4）具有容易操作的检