草鱼肌肉生长抑制素cDNA克隆及序列分析

获得未知基因的方法

染色体步移技术(Genome walking）：这是一项重要的分子生物学研究技术，使用这种技术可以有效获取与已知序列相邻的未知序列。染色体步移技术主要有以下几方面的应用： ①根据已知的基因或分子标记连续步移，获取人、动物和植物的重要调控基因，可以用于研究结构基因的表达调控。如分离克隆启动子并对其功能进行研究； ②步查获取新物种中基因的非保守区域，从而获得完整的基因序列； ③鉴定T-DNA或转座子的插入位点，鉴定基因枪转基因法等转基因技术所导致的外源基因的插入位点等； ④用于染色体测序工作中的空隙填补，获得完整的基因组序列； ⑤用于人工染色体PAC、YAC和BAC的片段搭接。对于基因组测序已经完成的少数物种（如人、小鼠、线虫、水稻、拟南芥等）来说，可以轻松地从数据库中找到某物种已知序列的侧翼序列。但是，对于大多数生物而言，在不了解它们的基因组序列以前，想要知道一个已知区域两侧的DNA序列，只能采用染色体步移技术。常用的方法有： 1. 反向pCR（reverse PCR）:其基本点是用适当内切酶裂解核心区外分子，使这些酶切片段自身连接形成环状分子，从而将边侧区域转化为内部区域。用与核心区末端同源的引物，但其3’端趄向未知区域，可以进步用pCR扩增环中的未知区域。反向pCR程序目前，反向pCR所扩增的片段的大小实际上限为3-4kb。在许多情况下，首先需要进行Southern杂交来确定内切酶用以产生大小适于环化及反向pCR的片段的末端片段。能裂解核心区的内切酶使反向pCR只能扩增引物所定模板(依赖于引物)的上游或上游区，而不裂解核心区的酶则使两上边侧序列都扩增，并带有由内切酶和环化类型决定的接点。对于扩增左翼或右翼序列，初试时最好靠近识别上个碱基位位的酶，并已知在核心区有其方便的裂解位点。如果用反向pCR 从含有大量不同的克隆片段的同一载体中探测杂交探针，建议事先在载体中引入合适的酶切位点。用T4连接酶在稀DNA浓度下环化更容易形成单环。在一些实验中，为产生对反向pCR大小适当的DNA片段需要两种内切酶，但这样所产生的片段末端则不适于连接，环化前需用Klenow或噬菌体T4DNA聚合酶修理(钝化)。连接前，需用酚或热变性使内切酶失活。聚合酶链反应条件与经典所用的相同，例如，94℃-30秒变性，58℃-30秒引物退火， Taq聚合酶70℃延伸3分钟，进行30个循环。将反向 pCR用于测序时，与核心区末端后部结合的扩增引物更为有用，它使测序引物扩增部分的核心序列与未知边侧序列间的接点更近，减少了扩增引物的干扰。 2. 接头PCR技术：接头PCR技术的原理为,首先设计一个长链接头和一个与之互补的短链接头,并在短链接头的3′端设计一个NH2序列,以阻止聚合酶催化的短链延伸。两条单链退火后形成的双链接头能在3′端形成一个酶切位点的粘性或平末端,然后选用能形成该酶切位点末端的限制性内切酶酶切基因组,形成

草鱼怎样喂养大得快

草鱼怎样喂养大得快草鱼怎样喂养大得快鱼苗在4月份清明节后放养，四月份的大地到处可见嫩芽嫩草，这时早上九点可以割田里细嫩的杂草来喂养鱼苗，饲喂量3个小时吃完为宜，下午4点喂饲料两小时吃完为宜。开春还可以种植象草增加等牧草增加青料，象草耐旱生长力强蛋白质为百分之16。到了5月中旬农民种植的木薯可以截枝饲喂草鱼，也就是说木薯种植后会长出1到4根茎杆，只留一根把多余的截掉，这样有利于生长。木薯叶的蛋白含量为百分之20左右。木薯叶饲喂量3个小时吃完为宜，下午4点喂饲料两小时吃完为宜。用竹子做四方形一个饲喂框，便于饲喂。饲喂后的木薯杆要及时捞起，以免在水里腐烂影响水质。木薯叶和象草要隔天交替着，以增加不同营养的饲喂。这样经过8到9个月的青料和饲料精心喂养，草鱼的体重可达4到5斤之间，这样养殖的草鱼肉质好价钱要比单喂饲料的草鱼多出一倍多。草鱼如何快速养殖过去常规养殖草鱼都是以混养为主，3年才能养成，成本高，资金占用时间长。笔者总结推广了无公害草鱼高产高效快速养殖技术，现介绍如下。

1、池塘要求：池塘面积以10-20亩为宜，水深2-2.5米，淤泥厚度不超过20厘米。每10亩池塘配套功率为3千瓦的增氧机和自动投饵机各1台。 2、池塘清整：冬季排干池水，冻晒20天以上。鱼种放养前15天，进水10-20厘米，每亩用生石灰150公斤清塘消毒。 3、鱼种放养：春节前后，每亩放规格为200-250克/尾的草鱼种300尾，规格为15-20尾/公斤的鲫鱼种300尾，规格为5-6尾/公斤的鲢鱼种50尾、鳙鱼种10尾。鱼种放养前用5%食盐水浸泡消毒5-10分钟。 4、饲料投喂：以投喂颗粒饲料为主，饲料蛋白质含量在28-32%，辅投青绿饲料。饲料投喂遵循“前粗后精”和“四定四看”的原则，一般每天投喂2次，以2小时内吃完、草鱼摄食8成饱为宜。 3-6月以投喂蛋白质含量为28%的颗粒饲料为主，日投饲率为3%，适量投喂青饲料;7-9月，控制颗粒饲料投喂量，日投饲率为1.5%左右，颗粒饲料蛋白质含量为28%，加大青饲料投喂量，控制鱼病发生;10-11月投喂蛋白质含量为32%的颗粒饲料。连续投喂颗粒饲料一段时间后，应停喂颗粒饲料1周，间隔期内投喂原粮饲料。平时注意在饲料中适量添加维生素等药物，避免草鱼患肝胆综合症等疾病而造成大量死亡。 5、水质管理：正确使用增氧机，6-10月晴天无风天气，每天下午1-3时开机增氧2小时，凌晨适时增氧;连续阴天应提早增氧。适时向池塘加注新水，采取“小排小进、多次换水”的办法逐步调控水质。6-9月，每隔3-5天加注新水1次，每次加水10厘米左右，每隔15-20天每亩水面1米水深用生石灰10-20公斤化浆

植物生长素的作用机理

植物生长素的作用机理陶喜斌 2014310218 种子科学与工程

摘要；经过多位科学家的研究，发现了与植物生长有关的重要激素——生长素。生长素在植物芽的生长，根的生长，果实的生长，种子休眠等方面有重要作用。那么，生长素是如何发挥这这些作用? 1;什么是生长素生长素(auxin)是一类含有一个不饱和芳香族环和一个乙酸侧链的内源激素，英文简称IAA，国际通用，是吲哚乙酸(IAA；。4-氯-IAA、5-羟-IAA、萘乙酸(NAA)、吲哚丁酸等为类生长素。1872年波兰园艺学家谢连斯基对根尖控制根伸长区生长作了研究~后来达尔文父子对草的胚芽鞘向光性进行了研究。1928年温特证实了胚芽的尖端确实产生了某种物质，能够控制胚芽生长。1934年，凯格等人从一些植物中分离出了这种物质并命名它为吲哚乙酸，因而习惯上常把吲哚乙酸作为生长素的同义词。 2;植物生长素的生理作用生长素有多方面的生理效应，这与其浓度有关。低浓度时可以促进生长，高浓度时则会抑制生长，甚至使植物死亡，这种抑制作用与其能否诱导乙烯的形成有关。生长素的生理效应表现在两个层次上。在细胞水平上，生长素可刺激形成层细胞分裂~刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长~促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。在器官和整株水平上，生长素从幼苗到果实成熟都起作用。生长素控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制~当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性~当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性~吲哚乙酸造成顶端优势~延缓叶片衰老~施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落~生长素促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。生长素对生长的促进作用主要是促进细胞的生长，特别是细胞的伸长。植物感受光刺激的部位是在茎的尖端，但弯曲的部位是在尖端的下面一段，这是因为尖端的下面一段细胞正在生长伸长，是对生长素最敏感的时期，所以生长素对其生长的影响最大。趋于衰老的组织生长素是不起作用的。生长素能够促进果实的发育和扦插的枝条生根的原因是；生长素能够改变植物体内的营养物质分配，在生长素分布较丰富的部分，得到的营养物质就多，形成分配中心。生长素能够诱导无籽番茄的形成就是因为用生长素处理没有受粉的番茄花蕾后，番茄花蕾的子房就成了营养物质的分配中心，叶片进行光合作用制造的养料就源源不断地运到子房中，子房就发育了。生长素在植物体作用很多，具体有；1.顶端优势 2.细胞核分裂、细胞纵向伸长、细胞横向伸长3.叶片扩大4.插枝发根5.愈伤组织6.抑制块根7.气孔开放8.延长休眠9.抗寒 3;生长素的作用机理 3.1生长素作用机理的解释激素作用的机理有各种解释，可以归纳为二；一、是认为激素作用于核酸代谢，可能是在DNA转录水平上。它使某些基因活化，形成一些新的mRNA、新的蛋白质(主要是酶；，进而影响细胞内的新陈代谢，引起生长发育的变化。二、则认为激素作用于细胞膜，即质膜首先受激素的影响，发生一系列膜结构与功能的变化，使许多依附在一定的细胞器或质膜上的酶或酶原发生相应

实验六基因克隆及序列分析

实验六、基因克隆及序列分析 1.目的片段回收取5 μl PCR产物在1.2%琼脂糖凝胶上检测，如果扩增产物大小与原来一致，在紫外灯管下用刀片切下目标带，然后用UNIQ-10 Column DNA Collection Kit 试剂盒（上海生工）进行回收。具体回收过程如下：从琼脂糖凝胶中精确切下包含有目标片段的胶块，放入到1.5 ml离心管中，加入500 μl Binding Buffer II，50℃~60℃水浴锅中放置10 min，使胶彻底熔化，然后将熔化的胶溶液转移到套放于2 ml收集管的UNIQ-10柱中，室温放置2 min，8000 r/min离心1 min，倒去收集管中的废液，在UNIQ-10柱中加入500 μl Washing Solution，室温8000 r/min离心1 min，加入新鲜的Washing Solution重复一次，倒去收集管中的废液，室温12000 r/min离心15 s。在UNIQ-10柱中加入Elution Buffer 30 μl（直接滴到过滤膜上），37℃放置2 min，放到一个新的1.5 ml离心管后离心收集（12000 r/min，1 min），所得溶液用于连接反应。 2 片段连接反应采用pGEM? -T Easy Vector试剂盒（Promega，A1360）进行目标片段的克隆。取1.5 μl PCR产物，加入0.5 μl T4 DNA ligase，0.5μl T Easy Vector，2.5 μl ligation buffer，短暂离心收集，轻轻混匀，置于室温连接1-2 h后，放于4?C冰箱过夜。 3大肠杆菌感受态细胞的制备及转化取保存于-70℃的大肠杆菌菌株DH5α菌液，首先在LB固体培养基上分离单克隆，然后挑一个单克隆进行液体培养过夜。从中取1.0 ml菌液转接于装有100 ml LB液体培养基的250 ml三角瓶中，于摇床培养1.5~2 h（37℃，240 r/min），后转移至预冷的50 ml离心管中，冰浴10 min，低温离心10 min（4℃，4000 r/min）收集菌体，加入25 ml预冷的0.1 mol/L CaCl2重悬培养物，冰浴20-30 min，4℃4000r/min离心10 min，去上清液，倒立晾干，再加2 ml预冷的0.1 mol/L CaCl2（含15%的甘油）重悬细胞，分装于冰浴的0.5 ml无菌离心管中，放入-70℃冰箱保存。取2 μl连接反应物转到1.5 ml离心管中，冰上保存待用。从-70℃冰箱中取出感受态细胞置于冰上，待其刚好融化时（约5 min）小心吸取30-50 μl转入到离心管中，冰上静置20 min。42℃水浴中热激90 s（不要摇动）。迅速放回冰上2 min，然后加入LB培养基（室温）400 μl，37℃摇床培养1.5 h（150 r/min）。

2017年选修课《创新我国》尔雅考试答案解析

在智商上胜一、单选题（题数：50，共 50.0 分）1 由数据这种自然资源产生的（）称为大数据。 1.0分 ?A、经济 ? ?B、产品 ? ?C、经济体系 ? ?D、技术 ? 我的答案：C 2 中国的发明很多都存在着缺憾，其中勾股弦定理体现的缺憾是（）。 1.0分 ?A、无法学习 ? ?B、看不见摸不着 ?

?C、缺乏理论科学 ? ?D、无法应用于实践 ? 我的答案：C 3 下面事物中可以被发现的是（）。 1.0分 ?A、新工艺 ? ?B、产品 ? ?C、万有引力 ? ?D、方案 ? 我的答案：C 4 知识产权之争本质上是（）。1.0分 ?A、法律之争

? ?B、创新利益之争 ? ?C、智力之争 ? ?D、技术之争 ? 我的答案：B 5 要成为创新事业中的一员，应该做到（）。 1.0分 ?A、创立一个公司 ? ?B、考上公务员 ? ?C、从小事做起，从当下做起 ? ?D、在智商上胜过外国人 ? 我的答案：C 6

根据对近几年全国高校毕业生去向的统计，其中排在首位的是（）。 0.0分 ?A、考研 ? ?B、创业 ? ?C、考公务员 ? ?D、就业 ? 我的答案：B 7 阿西莫夫提出了机器人三守则，其中不属于这三个守则的是（）。 1.0分 ?A、不能危害人类 ? ?B、绝对服从人类 ? ?C、帮助人类处理一切问题 ? ?D、

保护自身不受伤害 ? 我的答案：C 8 DSK键盘没有QWERTY键盘应用广泛的原因是（）。 1.0分 ?A、 DSK键盘打字速度更慢 ? ?B、 DSK键盘布局不合理 ? ?C、人们习惯使用QWERTY键盘 ? ?D、 QWERTY键盘技术水平高 ? 我的答案：C 9 下面能源中能够为汽车提供动力并具有广泛应用前景的是（）。 1.0分 ?A、潮汐能 ? ?B、石墨烯

【高中生物】功能基因的克隆及生物信息学分析

（生物科技行业）功能基因的克隆及生物信息学分析

功能基因的克隆及其生物信息学分析摘要：随着多种生物全基因组序列的获得，基因组研究正从结构基因组学（structuralgenomics）转向功能基因组学(functionalgenomics)的整体研究。功能基因组学利用结构基因组学研究获得的大量数据与信息评价基因功能(包括生化功能、细胞功能、发育功能、适应功能等)，其主要手段结合了高通量的大规模的实验方法、统计和计算机分析技术[1]，它代表了基因分析的新阶段，已成为21世纪国际生命科学研究的前沿。功能基因组学是利用基因组测序获得的信息和产物，发展和应用新的实验手段，通过在基因组或系统水平上全面分析基因的功能，使生物学研究从对单一基因或蛋白的研究转向多个基因或蛋白同时进行系统的研究，是在基因组静态的组成序列基础上转入对基因组动态的生物学功能学研究[2]。如何研究功能基因，也成为我们面临的一个课题，本文就克隆和生物信息学分析在研究功能基因方面的应用做一个简要的阐述。关键词：功能基因、克隆、生物信息学分析。 1.功能基因的克隆 1.1图位克隆方法图位克隆又称定位克隆，它是根据目标基因在染色体上确切位置，寻找与其紧密连锁的分子标记，筛选BCA克隆，通过染色体步移法逐步逼近目的基因区域，根据测序结果或用BAC、YAC克隆筛选cDNA表达文库寻找候选基因，得到候选基因后再确定目标基因。优点是无需掌握基因产物的任何信息，从突变体开始，逐步找到基因，最后证实该基因就是造成突变的原因。通过图位克隆许多

控制质量性状的单基因得以克隆，最近也有报道某些控制数量性状的主效基因（控制蕃茄果实大小的基因克隆[3]、控制水稻成熟后稻谷脱落基因克隆[4]以及小麦VRN2基因克隆[5]等）也通过图位克隆法获得。 1.2同源序列克隆目的基因首先根据已知的基因序列设计PCR引物，在已知材料中扩增到该片段，并经克隆测序验证，利用放射性同位素标记或其他非同位素标记该PCR片段作为探针，与待研究材料的cDNA文库杂交，就可以获得该基因cDNA克隆，利用克隆进一步筛选基因组文库，挑选阳性克隆，亚克隆并测序，从中就可以筛选到该基因的完整序列。 1.3结合连锁和连锁不平衡的分析方法结合连锁和连锁不平衡的分析方法是未知基因克隆研究领域发展的新方向[6]。(Linkagedisequilibrium,LD)。与连锁分析不同,连锁不平衡分析可以利用自然群体中历史发生的重组事件。历史上发生的重组使连锁的标记渐渐分布到不同的同源染色体上,这样就只有相隔很近的标记才能不被重组掉,从而形成大小不同的单倍型片段(Haplotypeblock)。这样经过很多世代的重组,只有相隔很近的基因,才能仍处在相同的原始单倍型片段上,基因间的连锁不平衡才能依然存在。所以基于连锁不平衡分析,可以实现目的基因的精细定位。林木大多为自由授粉的异交物种,所以连锁不平衡程度很低,林木基因组中的LD可能会仅局限于非常小的区域,这就为目的基因的精细定位提供了可能,结合SNP检测技术,科学家甚至可以将效应位点直接与单个的核苷酸突变关联起来,进行数量性状寡核苷酸

微生物克隆文库的综述

JISHOU UNIVERSITY 本科生毕业论文题目：微生物克隆文库的综述作者：学号： 20114071021 所属学院：生物资源与环境科学学院专业年级： 11级生物科学（师范）指导教师：职称：副教授完成时间： 2015年4月5日吉首大学教务处制

独创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。论文题目：作者签名：日期：年月日论文版权使用授权书本人完全了解吉首大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意吉首大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。 (保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 论文题目：学生签名：日期：年月日导师签名：日期：年月日

目录摘要........................................................................................... 错误！未定义书签。Abstract ....................................................................................... 错误！未定义书签。前言............................................................................................. 错误！未定义书签。1具体微生物克隆文库的目的和意义...................................... 错误！未定义书签。2构建微生物克隆文库的方法.................................................. 错误！未定义书签。 2.1技术路线........................................................................ 错误！未定义书签。 2.2获取目的基因 (6) 2.3 质粒的准备过程........................................................... 错误！未定义书签。参考文献..................................................................................... 错误！未定义书签。致谢.. (10)

生长素作用两重性的深度解析

关于植物生长素作用两重性的多角度解析十堰市应用科技学校孙世顺【摘要】生长素作用的两重性是教学中的重点难点，读者一概念容易出现一些错解误解，本文从多角度解析生长素浓度的两重性，以期加深理解，破除难点。【关键词】生长素两重性生长素是植物生长过程中的重要激素，它的作用相对于其他激素而言，显得尤为重要，主要表现在生长素作用的两重性方面。生长素作用的两重性指的是，一般情况下，一定低浓度促进生长，一定高浓度抑制生长。具体表现在，生长素既能促进生长，也能抑制生长；既能促进发芽，也能抑制发芽；既能保花保果也能疏花疏果。而且，对于同一种植物，同样浓度的生长素对不同的器官也有不同的作用。在实际工作中，我们常用生长素类似物处理植物，例如促进扦插枝条生根，形成无籽果实，保花保果或疏花疏果，或用生长素类似物除草，这些均需要了解生长素作用的两重性，否则，不仅达不到预期的效果，而且会适得其反，造成严重损失。因而，有必要对其作用的两重性加以全面理解。一、对生长素的“促进”和“抑制”作用的解析关于生长素的促进和抑制作用，存在着许多误解，有必要再次作出解析。通常抑制不等于不生长了，而是生长速度变慢，只有抑制作用达到一定程度时，才会停止生长；促进是指生长速度变快；既不促进也不抑制，也不等于不生长了，而是既没有加快也没有变慢，以一

定的速度生长。这里可以借用物理的加速度来加以理解：促进是加速度为正值，抑制是加速度为负值，既没有促进也不抑制时加速度为零，而加速度为零时，物体不运动或匀速运动，对于植物而言，就是以一定的速度生长。例如，我们可以用以下图形来具体说明：图一芽对生长素浓度的反应 A~C段对于芽来说就是一定低浓度范围，C点以后的生长素浓度范围就是一定高浓度；A点对应的浓度比较低，对生长的促进作用不明显在A~之间的浓度促进作用明显，B点对应的生长素浓度的促进作用最大，叫着最适生长素浓度；C点对应的浓度既不促进生长也不抑制生长，并不是不生长了，而是以一定的速度生长；D点以后的浓度范围就在一定“高浓度”范围内，具有抑制生长的作用，浓度过高时甚至可以杀死植物。二、对“低浓度”和“高浓度”的相对性的解析生长素作用通常表达为，一定低浓度促进生长，一定高浓度抑制生长。这里所说的“低浓度”和“高浓度”其实没有固定的数值，它是相对于植物的某一器官所需生长素的最适浓度而言的。比如：

肠道微生物调控动物肌肉的生长和发育

11-05 摘要：栖息于动物肠道中的微生物群与宿主形成稳定的共生关系。肠道菌群的定植状态、繁殖能力和营养需求受到宿主生理稳态的影响，同时，肠道菌群的组成和多样性随宿主外部和内部环境的改变而发生波动。此外，肠道菌群通过肠道神经系统和外周循环系统直接或间接参与并调控宿主的信号传递、物质代谢、免疫形成和器官功能。骨骼肌的生长、发育和代谢很大程度上决定了动物的能量稳态和整体生长性能，是决定动物产肉性状和肉品生产的根本因素。当前，大量研究表明动物肠道微生物在促进肌肉生长和维持肌肉机能方面发挥重要作用，一些学者提出了“肠——肌轴”的双向信息交流机制。本文综述了近年来国内外关于消化道微生物参与调控人和动物的肌肉生长和发育、肌肉疾病形成、物质与能量代谢等方面的研究进展，加深和完善关于肠道微生物调控肌肉生长和发育的认识。近年来，肠道微生物已逐渐成为生命科学领域的研究热点。哺乳动物胃肠道中栖息着数量庞大、种类繁多的微生物（细菌、真菌、古菌、病毒等），其中绝大多数是细菌。单胃动物肠道细菌的数量高达1014个，是细胞数量的10倍以上，由500种以上的细菌组成。仔猪出生后肠道微生物区系迅速发展，出生12 h后结肠中细菌的数量达到109～1010 CFU/g内容

物，以厌氧菌和兼性厌氧菌为主，并在断奶以后逐渐形成稳定的肠道菌群。肠道菌主要分为厚壁菌门（Firmicutes）、拟杆菌门（Bacteroidete）、变形菌门（Proteobacteria）、放线菌门（Actinobacteria）、疣微菌门（Verrucomicrobia）和梭杆菌门（Fusobacteria），其中前2类菌门的数量超过全部肠道菌的90％。在动物的进化过程中，肠道微生物与宿主形成了稳定的共生关系。微生物长期稳定的寄居在动物消化道内，它们的增殖和繁衍依赖动物机体提供适宜的环境因子和营养源。肠道菌群的黏附定植、组成变化和代谢活力直接或间接地影响和控制宿主的生长、发育以及各项生命活动。反之，肠道菌的定植和生长随着宿主动物的年龄、性别、生长环境、饮食营养的不同而发生波动和改变。病原菌、药物、应激和外部刺激等引起的宿主的急剧生理变化会影响肠道菌群的多样性和稳定性，导致肠道微生态失衡。 1 肠道微生物的重要生理功能当前的研究证实，肠道菌对于宿主的健康生长具有不可估量的重要作用。除了协助宿主分解和消化进入肠道的各类营养物质（特别是膳食纤维），肠道菌群还能合成和产生多种营养功能物质（如B族维生素和部分功能性氨基酸等）。一些益生菌能够促进肠上皮黏液的分泌，协助宿主形成肠黏膜保护屏障，抑制外源致病菌群的定植。细菌产生的代谢物、菌体蛋白、细菌素等经由迷走神经和循环途径参与宿主各种代谢调控与信号传导。肠道微生态紊乱会引起宿主免疫失衡从而引发机体代谢表型障碍，并诱发多种疾病的发生，如抑郁症、帕金森症和肥胖症等。通过补充益生菌或益生元来促进优势菌群的繁殖，或者采用菌群移植的方式恢复肠道稳态，能够有效地减少有害菌的数量，恢复或者促进宿主的健康发育。 2 肠道菌群定植稳态影响动物肌肉生长和代谢骨骼肌是动物重要的组织器官，负责机体的运动和平衡，保护内脏器官，同时还是重要的能量储存和消耗器官。骨骼肌组织可以通过分泌产生

甘蔗MYB2转录因子的电子克隆和生物信息学分析

第9卷第1期2011年3月生物信息学 China Journal of Bioinformatics Vol．9No．1Mar．，2011 收稿日期：2010－04－29；修回日期：2010－09－06．基金项目：国家948项目（2010－C21）。作者简介：李国印，男，山东菏泽，硕士研究生E －mail ：lyion029@163．com． *通讯作者：许莉萍，女，福建莆田，博士，博导、研究员，E －mail ：xlpmail@yahoo．com．cn． doi ：10.3969/j．issn．1672－5565．2011．01．006 甘蔗MYB2转录因子的电子克隆和生物信息学分析李国印，阙友雄，许莉萍* ，郭晋隆，闫学兵，陈如凯（福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室，福建福州350002）摘要：用电子克隆方法获得甘蔗MYB2基因，采用生物信息学方法，对该基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、跨膜结构域、疏水性/亲水性、亚细胞定位、高级结构及功能域等方面进行了预测和分析。结果表明：甘蔗MYB2基因全长991bp ，包含570bp 的ORF ，编码189个氨基酸。甘蔗MYB2基因包含有MYB 功能域，在序列组成、高级结构及活性位点等方面，与玉米等其它植物的MYB2基因具有高度的相似性。研究结果为该基因的实验克隆奠定基础。关键词：甘蔗；MYB2基因；电子克隆；生物信息学中图分类号：Q785 文献标识码：A 文章编号：1672－5565（2011）－01－024－04 Electronic cloning and characterization of MYB 2gene from Saccharum officinarum using bioinformatics tools LI Guo-yin ，QUE You-xiong ，XU Li-ping *，GUO Jin-long ，YAN Xue-bing ，CHEN Ru-kai （Key Laboratory of Sugarcane Genetic Improvement ，Ministry of Agriculture ，Fujian Agriculture＆Forestry University ，Fuzhou 350002，China ） Abstract ：An novel MYB2gene from Saccharum officinarum was cloned in silico based on the EST seqences from Unigene of NCBI．Some characters of the MYB2encodes amino acid were analyzed and predicted by the tools of bioinformatics in the following aspects ，including the compositon of amino acid sequence ，hydrophobicity or hydro-philicity ，secondary and tertiary structure of protein and funcion．Bioinformatical analysis showed that the full －length of MYB2gene from S．officinarum was 991bp and it contained a complete ORF which encoded 189amino acid．The MYB2gene contained an typical MYB domain and was highly conservative compared with MYB2from several different plant species in sequence compositon ，advanced structure and activity sites．The results will pro-vide the basis for MYB2gene cloning in experiment． Key words ：Saccharum officinarum ，MYB2gene ，In silico cloning ，Bioinformatics 在植物中首先从玉米中克隆了含有MYB 结构域的转录因子C1基因［1］，此后在植物中发现的MYB 相关基因的数量迅速增加。对其功能的研究表明，植物MYB 转录因子具有广泛的生理功能，几乎参与植物发育和代谢的各个方面，重点是调控环境胁迫，如干旱和病害逆境胁迫、次生代谢调节、激素调控应答及控制细胞分化等。植物MYB2转录因子是MYB 大家族中一个小的亚族，虽然不同植物的MYB2基因具有不同的生物学功能［2，3］，但它们都是在转录水平上调控植物各个阶段的生长发育。通过突变体及基因敲除技术，已克隆了很多植物MYB 类基因，但在甘蔗MYB 方面研究甚少。以NCBI 数据库为基础，电子克隆得到甘蔗中编码MYB2的cDNA 序列，利用生物信息学方法，对该基因编码蛋白从氨基酸组成、理化性质、疏水性、亚细胞定位及结构功能等方面进行预测和分析，为后续通过实验手段克隆甘蔗MYB2基因和基因功能研究奠定基础。

如何分辨草鱼苗与草鱼鱼种的质量

如何分辨草鱼苗与草鱼鱼种的质量？草鱼苗与草鱼鱼种的名称 1.鱼苗从鱼卵中刚孵出来的小鱼，体长7?8毫米，称为鱼苗或水花。 2.乌仔鱼苗经10?15天伺养，养成1.5?2.0厘米的稚鱼，称为乌仔。 3.夏花乌仔再经过10?15天饲养，养成3?5厘米的夏花; 也有的地方直接将鱼苗经过20?25天的培育，养至3厘米左右，由于此时正值夏季，故通称为夏花，又称火片、寸片。 4.冬片夏花再经3~5个月的饲养，养成8?20厘米长的鱼种,此时正值冬季或翌年春天。故通称冬片，又称冬花、春片鱼种。在生产上也称为一龄鱼种。 5.秋片北方地区将夏花经1?2个月的饲养，养成5?8厘米长的鱼种，此时正值夏季，故称秋片，又称秋花。 6.二龄鱼种一龄鱼种再培育一年称为二龄鱼种，亦称老口鱼种，又称为过池鱼种。对青鱼、草鱼的仔口鱼种通常是先养成二龄鱼种，然后到第三年再养成成鱼（食用鱼）上市。二、鱼苗质量鉴别不同个体的鱼苗，由于受到受精卵的质量和孵化过程中众多环境条件的影响，导致其孵化后的体质有强有弱，体质强健的鱼苗对环境的适应能力强，在以后的培育过程中生长速度快，成活率也高；劣质鱼苗在以后的培育过程中生长速度明显缓慢，成活率也低得多。因此在进行苗种培育时一定要学会鉴别鱼苗的优劣，生产上可根据鱼苗的体色、游泳情况以及挣扎能力来区别其优劣。见图1。

图1：家鱼鱼苗质量优劣鉴别表在鱼类人工繁殖过程中，容易产生4种劣质鱼苗，分别是杂色苗、“胡子”苗、“困花”苗和畸形苗，杂色苗是指鱼苗的体色斑杂不一致；“胡子”苗是鱼苗看起来像胡子一样，也就是身体不清洁，拖带污泥；“困花”苗是游泳能力弱，贴在池边不肯游动的鱼苗；畸形苗则是身体弯曲、眼大头小等有畸形的鱼苗。这四种鱼苗基本上都是不能成活的，因此在购买鱼苗时，必须了解每批鱼苗的产卵日期、孵化时间，并按表3-1中的质量鉴别标准严格挑选，严禁购买上述4种劣质鱼苗，为提高鱼苗培育成活率创造良好条件。三、夏花质量鉴别常见养殖鱼类夏花的质量可根据出塘规格大小、体色、鱼类活动情况以及体质强弱等来进行鉴别。见图2。

赤霉素和生长素的区别

赤霉素和生长素的区别可能很多人都有印象，生活中接触到的有些不同药物，在药效上有着很大的相似之处，但药效细微的差别决定了必须要慎重用药。赤霉素和生长素就是这样的，两种药物都广泛的在农业生产中使用，植物用药和人类用药一样，必须搞清楚功效类似药物的区别，尽可能正确用药。那么，赤霉素和生长素的区别有哪些？生长素：生长素是一类含有一个不饱和芳香族环和一个乙酸侧链的内源激素。在扩展的幼嫩叶片和顶端分生组织中合成，通过韧皮部的长距离运输，自上而下地向基部积累。根部也能生产生长素，自下而上运输。生长素有多方面的生理效应，这与其浓度有关。低浓度时可以促进生长，高浓度时则会抑制生长，甚至使植物死亡。在细胞水平上，生长素可刺激形成层细胞分裂；刺激枝的细胞伸长、抑制根细胞生长；促进木质部、韧皮部细胞分化，促进插条发根、调节愈伤组织的形态建成。在器官和整株水平上，生长素从幼苗到果实成熟都起作用。生长素控制幼苗中胚轴伸长的可逆性红光抑制；当吲哚乙酸转移至枝条下侧即产生枝条的向地性；当吲哚乙酸转移至枝条的背光侧即产生枝条的向光性；吲哚乙酸造成顶端优势；延缓叶片衰老；

施于叶片的生长素抑制脱落，而施于离层近轴端的生长素促进脱落；生长素促进开花，诱导单性果实的发育，延迟果实成熟。赤霉素：赤霉素其化学结构属于二萜类酸，由四环骨架衍生而得。最突出的生理效应是促进茎的伸长和诱导长日植物在短日条件下抽薹开花。各种植物对赤霉素的敏感程度不同。遗传上矮生的植物如矮生的玉米和豌豆对赤霉素最敏感，经赤霉素处理后株型与非矮生的相似;非矮生植物则只有轻微的反应。有些植物遗传上矮生性的原因就是缺乏内源赤霉素（另一些则不然）。赤霉素在种子发芽中起调节作用。许多禾谷类植物例如大麦的种子中的淀粉，在发芽时迅速水解；如果把胚去掉，淀粉就不水解。用赤霉素处理无胚的种子，淀粉就又能水解，证明了赤霉素可以代替胚引起淀粉水解。赤霉素能代替红光促进光敏感植物莴苣种子的发芽和代替胡萝卜开花所需要的春化作用。赤霉素还能引起某些植物单性果实的形成。对某些植物，特别是无籽葡萄品种，在开花时用赤霉素处理，可促进无籽果实的发育。但对某些生理现象有时有抑制作用。赤霉素应用于农业生产，在某些方面有较好效果。例如提高无籽葡萄产量，打破马铃薯休眠；在酿造啤酒时，用GA3来促进制备麦芽糖用的大麦种子的萌发；当晚稻遇阴雨低温而抽穗迟缓时，用赤霉素处理能促进抽穗；或在杂交水稻制种中调节花期以

DNA基因克隆及序列分析,英语翻译

热和酸应力条件下脂环酸芽孢杆菌Dnak基因克隆和序列分析 DNA基因克隆及序列分析。通过兼并PCR基因组扩增获得了大约1300bp的基因片段，然后子克隆到PMD-18T载体上测序。BLAST基因组数据库搜索表明，此PCR产物的序列共享原核热休克蛋白70 DNAK基因，与来自脂环酸芽孢杆菌LAA1伴侣蛋白的DNAK基因的同源性是最高的（92%）。通过基因组步移技术测定DNAK 基因（基因组数据库登录号HQ893543），包含1854bp完整的开放阅读对话框（ORF），编码617个氨基酸。推知的氨基酸序列与来自A. acidocaldarius LAA1 (86%)的DNAK基因表达的伴侣蛋白的相似性最高，与来自Bacillus tusciae,Paenibacillus sp.Y412MC10,Thermosinus carboxydivorans, Brevibacillus brevis 的 A. acidocaldarius 的相似性分别为83%, 77%, 76%,75%。没有检测到信号肽。预测分子量是(Mw)是66.2KDa，等电点（pI）是4.82. 氨基酸序列比对和主题搜索结果显示，在这个基因中有3个域：N末端核苷酸结合域(NBD, aa 1–360)类似于肌动蛋白ATP酶结构域，它包括三个保存位点(-I-D-L-G-T-T-N-S-, -V-F-D-L-G-G-G-T-F-D-V-S-I-L-,和V-I-L-V-G-G-S-T-R-I-P-A-V-Q-E) ，它可能与ATP绑定和激活有关；aa 360–517组成C-末端底物结合域(SBD);aa- 484–617组成的C-末端子域，它可能和底物的结合和释放有关。脂环酸芽孢杆菌在不同的培养温度下DNAK基因的表达。脂环酸芽孢杆菌生长的温度范围从20°C - 60°C，最适生长温度为45-50°C。在这项研究中，脂环酸芽孢杆菌DSM 3922T在45°C中活跃培养16小时，分别在20°C, 25°C, 30°C, 35°C, 40°C, 45°C, 50°C, 55°C和60°C繁殖生长。根据观察脂环酸芽孢杆菌在温度为30°C, 35°C, 40°C, 45°C, 50°C和55°C正常生长。在55°C和30°C生长时，分别繁殖8小时和10小时时达到对数生长期。然而，在培养温度为20°C，25°C或者60°C时，芽孢生长及其缓慢，与其他处理组像比较很难进入指数生长期。值的注意的是，在繁殖温度为20°C，25°C和60°C 时没法收集到足够的细菌ＲＮＡ用于分离和表达分析。如图２所示，ＤｎａＫ在培养温度为30°C, 35°C, 40°C, 45°C, 50°C 和55°C的基本表达情况。在脂环酸芽孢杆菌最适生长温度(40–55°C),其表达水平相对稳定。在较低的温度下，30°C和35°C,Ｄｎａｋ的表达大幅升高。这表明Ｄｎａｋ可能参与脂环酸芽孢杆菌对不良环境的适应。在热应力条件下脂环酸芽孢杆菌DNAK的表达。在实验中，热应力加在45°C 繁殖生长到指数生长期摇瓶菌悬液内的细菌上，然后置于温度分别为70°C, 80°C, 90°C的恒温浴内。在80°C和 90°C时，开始10分钟内，细菌正常生长，15分钟后细胞开始破裂。随着热应力的继续，有明显的细胞裂解和细胞凋亡的进一步加剧。在80°C,和90°C时仅仅热应力持续5分钟和10分钟，提取的RNA适合做进一步分析，热冲击15分钟或更长时间，提取的RNA严重退化，不能用于ＲＴ－ＰＣＲ分析。当孵育温度70°C热冲击，所有的时间范围内细菌维持正常生长，全部的RNA被分离用于ＲＴ－ＰＣＲ检测。正如图３所示，以70°C的热冲击温度，与对照在不孵育的脂环酸芽孢杆菌相比，ＤＮＡＫ的表达水平在孵育５分钟增加了４０％，长时间的热冲击，表达水平下降，与对照的相比２５分钟孵育的细菌ＤＮＡＫ表达水平提高了３０％，当热休克在80°C和90°C时，与对照相比，在5分钟内细菌的DNAK表

功能基因的克隆及生物信息学分析

功能基因的克隆及其生物信息学分析摘要：随着多种生物全基因组序列的获得，基因组研究正从结构基因组学（structural genomics）转向功能基因组学(functional genomics)的整体研究。功能基因组学利用结构基因组学研究获得的大量数据与信息评价基因功能(包括生化功能、细胞功能、发育功能、适应功能等)，其主要手段结合了高通量的大规模的实验方法、统计和计算机分析技术[1]，它代表了基因分析的新阶段，已成为21世纪国际生命科学研究的前沿。功能基因组学是利用基因组测序获得的信息和产物，发展和应用新的实验手段，通过在基因组或系统水平上全面分析基因的功能，使生物学研究从对单一基因或蛋白的研究转向多个基因或蛋白同时进行系统的研究，是在基因组静态的组成序列基础上转入对基因组动态的生物学功能学研究[2]。如何研究功能基因，也成为我们面临的一个课题，本文就克隆和生物信息学分析在研究功能基因方面的应用做一个简要的阐述。关键词：功能基因、克隆、生物信息学分析。 1.功能基因的克隆 1.1 图位克隆方法图位克隆又称定位克隆，它是根据目标基因在染色体上确切位置，寻找与其紧密连锁的分子标记，筛选BCA克隆，通过染色体步移法逐步逼近目的基因区域，根据测序结果或用BAC、YAC克隆筛选cDNA表达文库寻找候选基因，得到候选基因后再确定目标基因。优点是无需掌握基因产物的任何信息，从突变体开始，逐步找到基因，最后证实该基因就是造成突变的原因。通过图位克隆许多控制质量性状的单基因得以克隆，最近也有报道某些控制数量性状的主效基因（控制蕃茄果实大小的基因克隆[3]、控制水稻成熟后稻谷脱落基因克隆[4]以及小麦VRN2 基因克隆[5]等）也通过图位克隆法获得。

序列比对：未知作用

>gi|433815100|gb|JK744877.1|JK744877 MrPAL M. roreri in planta Moniliophthora roreri cDNA similar to phenylalanine ammonia- lyase, mRNA sequence GTTGAATTCGCTAACAATGTCTACAGCCTCCTTCAAGATAGTAAACTTGCGTTTAGTCA TGAAGAGGAAG TTTCTCTTCAAGATGACAAGTACTCCTTGCGTCAAGACCGTTATCCGCTCCGTACCTC CCCCCAGTTCCT CGGTCCACAGATAGAGGATGTCTTGGCTGCTTTAGCCGCTGTCACCCAGGAATGCAA TTCCACCACCGAC AACCCTCTAGTAGACGGGAACACAGGAATTATTCATCATGGAGGAAACTTCCAAGCAA TGGCTGTTACAA ATGCCATGGAAAAGACCCGTCTTGCTCTCCACCACATTGGCAAGCTTCTCTTTGCTC AGAGCACAGAACT TGTCAACCCAGCAATGAACCGTGGTCTTCCTCCATCACTTGCAGCATCAGACCCCTC CCTCAATTATCAT ACCAAGGGTGCCGATATTGCAACAGCTGCCTACGTTGCTGAATTGGGACATCTTGCA AACCCAGTTTCAA CCCATGTGCAATCAGCAGAAATGCACAACCAAGCAGTAAACTCACTGGCGTTGATCT CTGCCCGCGCTAC CATCGCCTCTATTGACGTCTTGTCAATTCTCACCGCTACATACCTCTACATCCTGTGC CAAGCTGTCGAT CTCCGAGCCCTTCGCCTGGAGTTTGATGACGGCCTGCAACGTATCGTATCGGAAGA GCTTACCACAGTTT TCGGCTCATCTATCGATGCATCCCGTCGATCCATGTTCGCATCCAAGGTGTTCCATAC AATGCTCCAAAC GTTGGAAAAGACCAGCACAATGGATCTTGCCGACCAAATGAGCACTGTTGCTTCCTC CAGTGTTGCAACA CTCTCGGACCTCTTTATCTCAGCTGGTGTCGACGTCGCCGGTACCCTCACTTCCATT AACACCTTCCGTG CCAATGTTGCTTCCCGAACTACTATACTCATGGATCAACTCCGCAAGAGCTATCTGTC CGGTGAACGAGG TGCTGCTCCTGCTTCTCCTTACCTTGGAAAGACCAAGCTGGTGTATGAGTTCATTCGT