耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药机制及检测

#综述#耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药机制及检测

朱以军综述李向阳审校

=摘要>耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(M RSA)是医院内感染和社区感染的重要病原菌之一,其

检出率逐年增高,耐药性不断增强,对临床治疗提出严峻挑战。阐明M R SA的耐药机制以及快速准

确地检测M RSA是预防和控制M RSA感染的基础和重要环节,也是当前M RSA研究的热点。现就

M RSA的耐药机制及其检测方法的研究进展作一综述。

=关键词>甲氧西林抗药性;葡萄球菌,金黄色;基因,细菌;抗药性,微生物

自从1961年Jevons首次分离出耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylo coccus au-r eus,MRSA)以来,MRSA在世界各地感染率和分离率不断增加,已成为目前医院内感染的重要病原菌之一。在美国,M RSA占院内感染分离的金黄色葡萄球菌(简称金葡菌)的比率从1987年的14.3%上升到1997年的39.7%[1]。李家泰等[2]监测表明,我国MRSA检出率为27.55%,而医院内感染(ho spital in-fections,H I)患者中M RSA检出率显著高于社区感染(co mmunity-acquired infections,CAI)患者。1996年日本首先发现对万古霉素敏感性降低的金黄色葡萄球菌(vancom ycin intermediate staphylo coccus au-r eus,V ISA)。随后,美国、英国、德国、意大利等国也陆续报道了VISA,给M RSA感染的临床治疗带来严峻挑战。目前,M RSA感染与乙型肝炎、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)同时列为世界上最难解决的三大感染性顽症。因此,从基因水平阐明MRSA的耐药机制,快速准确地检测M RSA对其感染的控制有重要意义。现就M RSA的耐药机制及检测方法作一简要综述。

M RSA的耐药机制

1.MRSA的耐药决定因子)))m ec基因:MR-SA的染色体上携带有一个甲氧西林敏感金葡菌(M SSA)所不具备的甲氧西林耐药决定因子)))m ec 基因,其大小为30~50kb,为一段外源性的插入片段,通常位于pur-nov-his基因群附近。m ec基因包括mecA基因、mecI和mecR1基因以及mec相关基因。mecA基因长约

2.13kb,编码产生78@103的青霉素结合蛋白(penicillin-binding protein,PBP)2a,其基因序列具有细胞壁合成转肽酶基因结构特征。

mecI和mecR1是调控m ecA转录的一对调节基因,位于mecA启动子上游。通常情况下,mecI编码产生的M ecI蛋白结合在m ec基因的启动子部位,使mecA基因不能被转录。当诱导物存在时,m ecR1基因编码产生的MecR1蛋白能够去除MecI蛋白对mecA的阻遏作用,去阻遏的mecA经RNA多聚酶转录、翻译产生PBP2a。mecI和m ecR1的结构、功能和调节机制与B-内酰胺酶调控组件(blaI和blaR1)相似。BlaI是阻遏B-内酰胺酶基因转录的DNA结合蛋白,BlaRI则在B-内酰胺类抗生素存在时诱导B-内酰胺酶基因转录,产生B-内酰胺酶。有学者提出,mecA 基因是PBP基因和B-内酰胺酶基因的同源性重组产物[3]。因此,m ecA可受B-内酰胺酶调控组件blaI和blaR1的共同调节。但m ecR1-mecI对mecA的调节作用比blaR1-blaI强。

mecA、mecR1和mecI整合在20~45kb的mec 相关基因中,这些基因包括IS431、T n554、pUB110和pT181等。它们编码产生对非B-内酰胺类抗生素的耐药因子,导致MRSA的多重性耐药。其中T n554位于m ecA的5c端,包含编码红霉素耐药的ermA基因。IS431则位于m ecA的3c端,由于缺失、重排、重组的发生,它与mecA基因间的距离变化很大,IS431是葡萄球菌染色体和质粒极普遍的插入序列,与四环素耐药有关[4]。

mec基因的起源尚未完全阐明,有证据表明,金葡菌的SCC m ec基因(staphylococcal chro mosome cassette m ec)可能来源于凝固酶阴性的葡萄球菌,如松鼠葡萄球菌携带的m ecA基因[5]。目前,关于MR-SA的起源有两种假说[6]:一种是单克隆假说,该假说是在对早期MRSA的m ecA基因和T n554基因进行的限制性片段长度多态性分析的基础上提出的,认为mecA是很偶然地进入金葡菌并以单一的M RSA克隆形式在世界各地蔓延;但有不少学者对该学说提出质疑,因为有资料表明mecA基因能反复地水平传播给8种以上金葡菌家系,在抗生素的选择压力下有更多的耐药克隆被传播。第二种假说通过多位点酶电泳分型检测mecA,认为M RSA的mecA基因是经过水平传播、长时间的演变而进入不同种系的MSSA 中,使用DNA芯片技术已检测出至少5种以上的分

作者单位:325027浙江,温州医学院附属第二医院检验科

散家系,说明mecA的水平传播扮演重要角色。最近在体内观察到mecA基因从表皮葡萄球菌向金葡菌传播,表明m ecA可以频繁地传给M SSA。

影响mecA基因表达的辅助基因

虽然完整的mecA基因是M RSA对甲氧西林高度耐药的表达所必需,但单纯的mecA基因及其产物PBP2a并不能完全解释M RSA对甲氧西林的耐药性。有研究表明,虽然MRSA可产生相同的PBP2a,但对甲氧西林的敏感性可相差很大,说明PBP2a的量与M RSA耐药水平的高低即M IC并无相关性。实验研究结果显示,在细菌染色体上有表达甲氧西林耐药的必需因子,即fem(factor essential fo r methicillin resistance)或称为aux因子(auxiliary factors)。目前已被识别的fem有6种,分别命名为femA、femB、femC、femD、femE和femF。fem A和femB的基因失活均可导致MRSA对甲氧西林的敏感性水平明显提高,但PBP2a和其他PBP的产生不受影响。fem C的失活也可降低细菌对甲氧西林的耐药水平,但对异质性耐药性的表达没有影响。fem D的失活虽可增高细菌对甲氧西林的敏感性,但高水平的同构型耐药仍可表达。fem E的功能至今尚未阐明,femF的突变可导致细菌表达异质性耐药。

影响mecA表达的其他染色体位点

llm基因可编码38kD的疏水性蛋白,llm灭活后,均质性耐药的菌株可变为异质性耐药的菌株[4]。

ag r(accessory gene reg ulator)位点和sar (staphy loco ccal accessory regulator)位点的失活能使异质性菌株的菌量轻度减少。PBP2a产量没有改变但PBP1和PBP3的数量减少,这可能与细菌耐药性表达有关[4]。

M RSA的耐药机制

MRSA的耐药机制非常复杂,但主要的机制是其染色体上产生了一个额外的PBP,即PBP2a所致。PBPs是一组位于细菌内膜,具有催化活性的D肽酶,催化细菌细胞壁肽聚糖的转肽反应,这种转肽酶活性为维持细菌细胞壁的结构完整所必需。普通的金葡菌可产生4种主要的PBPs:PBP1、PBP2、PBP3和PBP4。PBP1、2、3均为转肽酶,为细菌生存所必需, PBP4则具有转肽酶和羧肽酶的双重活性。这些PB-Ps与多数B-内酰胺抗生素都有高亲和力,是该药物主要的作用靶点。当药物浓度达到M IC时,PBPs失活导致细菌的细胞壁合成障碍,细菌无法生存。而MR-SA染色体上m ecA基因编码产生的PBP2a对B-内酰胺抗生素的亲和力很低,并能替代原来正常PBPs的生物合成功能,从而使细菌得以生存,表现为对抗生素的耐药。

PBP2a的表达除受调控基因的调节外,也受多种外界因素的影响,如温度、pH和渗透压等。有实验研究表明,温度在30~35e、pH7.0~7.2、盐浓度为4%时PBP2a的产量最高。因此,对于表型敏感但染色体上携带mecA基因的细菌应视为耐甲氧西林菌株。

导致M RSA耐药的另一原因是正常PBPs基因修饰或B-内酰胺酶的过量产生。在抗生素选择压力下原有产生PBPs的基因发生突变,导致这些PBPs 与B-内酰胺抗生素的亲和力下降而表现为耐药。另外,大量产生的B-内酰胺酶能微弱水解包括甲氧西林在内的耐青霉素酶及头孢菌素,使抗生素失活而表现为耐药。但这些原因引起的耐药往往表现为低水平或临界性的耐药,所占比例极少,临床意义不大。

M RSA的耐药特点

11M RSA耐药的导质性:MRSA对B-内酰胺抗生素的高度耐药性有同构型(hom ogeneo usly)或异质性(heter ogeneo usly)耐药两种。同构型耐药的菌株表现为所有菌细胞均高度耐药,呈单一群体。异质性耐药菌株则在同一群体中包括两个或两个以上耐药程度不同的亚群体,仅有极少数细菌(10-4~10-7)对抗生素高度耐药,大部分(通常为9919%或更高)则表现为低度耐药。绝大多数临床分离株在常规培养条件下表现为异质性耐药。改变培养条件(如添加NaCl或蔗糖的高渗培养基或30e培养)可使高度耐药菌增加而表现为同构型耐药。此外,异质性耐药菌株在含B-内酰胺抗生素的培养基中多次传种后可通过高耐药突变克隆而改变其耐药表现,表现为同构型耐药。而在无抗生素的培养基中,高耐药菌株可逐渐消失而重新转变为异质性耐药菌株。

21M RSA耐药的多重性:几乎所有M RSA都是多重耐药菌,对B-内酰胺类抗生素,如青霉素类和头孢菌素类均不敏感,对氯霉素、庆大霉素、林可霉素、氨基糖甙类、环丙沙星、四环素类和大环内酯类抗生素的敏感性很低,对氟喹诺酮类药的耐药率也迅速增高。

M RSA的检测方法

11M RSA的表型检测:常用的表型检测法有:KB 纸片扩散法、肉汤稀释法、E试验法和琼脂筛选法。由于细菌耐药表型的表达与各种生长条件(如温度、pH和培养基的渗透压等)密切相关,使得这些药敏试验存在实验条件的标准化问题[4]。美国实验室标准化委员会(NCCLS)对实验的条件、质量控制和结果的判断都作了规定。Cavassini等[7]的研究表明,纸片扩散法的特异性为9617%,而敏感性只有6113%。琼脂筛选法、肉汤稀释法都是可靠的检测法,与其他表型检测法相比有很高的特异性和敏感性,因此被NC-CLS列为参考方法。Sakoulas G等[1]研究表明,琼脂

筛选法、肉汤稀释法的敏感性均为99%,特异性分别为9811%和100%。但也有研究表明,高异质性的菌株能降低琼脂筛选法的敏感性[7]。苯唑西林琼脂筛选法在苯唑西林耐药葡萄球菌检测方面用了很多年,但近来该试验已被证明对凝固酶阴性的葡萄球菌的检测无效[8],NCCLS已不再推荐用该试验检测这些细菌。肉汤稀释法的缺点是操作复杂且费时,因此多用于科研,临床应用较少。E试验法是扩散法和稀释法相结合的产物,通过观察长塑料条与抑菌带的交点读取M IC值即可判断结果,具有简便、可靠的特点[9],其缺点是价格昂贵。

Milner[10]报道了一种从人体未消毒部位分离MRSA的新型选择培养基)))PAN O DNA琼脂,能早期分离并鉴别M RSA,特异性较高,成本低,制备简便。

除上述人工检测M RSA的方法外,还可应用自动细菌分析仪来检测M RSA,其检测原理与稀释法相同。常用的自动检测系统有VITEK和M icroscan 等。VIT EK-2AST-GP55卡的敏感性可达99.5%,是MRSA检测中最敏感的常规药敏试验法[1]。VITEK GPS106卡也有很高的特异性(100%)和敏感性(98.0%)[11]。但由于该法以NCCLS中度敏感值作为耐药标准,且只测定了折点附近的数个MIC值,因此其结果存在一定的偏差。

2.MRSA的免疫学检测:PBP2a胶乳凝集试验是采用抗PBP2a的单克隆抗体包被胶乳颗粒,通过凝集反应检测PBP2a而判断MRSA的一种快速检测方法。该法快速(15~20m in)、简便易行,敏感性100%,特异性99.1%[1]。但凝集时间对结果影响很大。最近报道,当凝集结果在试剂厂家推荐的3m in判读时敏感性只有76%,而在15m in判读时则达到100%,但如果凝集时间超过15min则检测特异性下降[12]。由于随着反应时间的延长,一些苯唑西林敏感的菌株也可产生假阳性反应[11],一些学者建议10min后出现凝集的菌株应当用PCR法检测m ecA基因作最后确诊[11,12]。

3.M RSA的基因检测:由于mecA基因的表型表达与细菌的生长条件密切相关,因此MRSA表型检测法影响因素较多。用分子生物学方法直接检测mecA基因则具有快速、敏感、特异的特点,其在临床的应用日益广泛。常用的基因检测技术有核酸探针杂交技术和PCR技术。核酸探针杂交技术设计32P、地高辛和酶等标记的探针与mecA片段进行杂交,常采用菌落原位杂交、斑点杂交和Southern印迹法等。PCR法通过对目的基因的扩增大大增加了检测敏感性,被公认为MRSA检测的/金标准0。Chamber lain 等应用多重PCR同时检测凝固酶基因、fem A基因和mecA基因等多种基因,能同时鉴别是否为金葡菌和是否对甲氧西林耐药。Per ez-Ro th等[13]运用多重PCR在一个反应管中同时检测fem B、mecA和ileS-2 (编码mupir ocin耐药的基因),从而可检测出mupir o-cin耐药的M RSA。T ow ner等将扩增技术和免疫技术相结合创立了免疫PCR法。Francois等[14]则应用多重实时定量PCR直接从临床标本中检测MRSA,使检测时间大大缩短。此外,荧光增强重复序列PCR、等温信号扩增法等技术都有快速、灵敏、特异的特点。

结语

MRSA在世界各地广泛传播,已成为医院内感染的重要病原菌之一。由于其高度耐药和多重耐药,导致治疗困难,病死率高。快速、准确的检测是控制MRSA感染的关键。MRSA的分型对其来源、分布和传播等流行病学调查具有重要意义,有利于控制其感染。脉冲场凝胶电泳分辨率高,重复性好,被认为是MRSA分型的/金标准0,已广泛用于MRSA的流行病学研究。近来已有研究表明,多位点序列分型在金葡菌长期的、全球性的流行病学研究和基因研究中是最可靠的方法。而对于短期的、地方性的金葡菌流行病学研究来说,脉冲场凝胶电泳也是一种可选择的方法[15]。

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9Walsh T R,Bo lmstro m A,Q w arnst rom A,(下转第31页)

定期空气消毒,对患者进行保护性隔离;控制危险因素,减少侵入性操作;积极治疗原发疾病,提高患者抵抗力[14]。最后,就是加强新药的研究开发,一种有可能成功的较新的氨基糖甙类药阿比卡星(arbekacin),是迪比卡星(dibekacin)的衍生物,目前仅在日本用来治疗对庆大霉素和新青霉素耐药的金黄色葡萄球菌感染,阿比卡星受双功能酶AAC(6c)-Ie-APH(2d)-Ia 介导影响的几率要比庆大霉素小得多,因此在治疗一些含有aac(6c)-Ie-aph(2d)-Ia基因的肠球菌感染中可能有用。氨苄西林与阿比卡星的联合用药在体外对40%的含有aac(6c)-Ie-aph(2d)-Ia基因的肠球菌有协同杀伤作用[10]。利奈唑胺(linezo lid)是一种新的化学结构恶唑烷酮类(ox azolidinones)药物,有望用来治疗严重的肠球菌感染[15]。此外,美国最新的研究表明,耐庆大霉素肠球菌是通过食品由动物传播给人类的[16]。所以在临床药敏监测中提倡合理使用抗生素的同时,畜牧业也应敲响警钟,防止抗生素滥用,从而减少耐药菌株通过食品由动物传播给人类。

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(收稿日期:2004-04-01)

(本文编辑:杨庆华)

(上接第28页)

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(收稿日期:2004-04-16)

(本文编辑:杨庆华)

金黄色葡萄球菌的耐药性分析

金黄色葡萄球菌的耐药性分析目的：了解医院住院患者金黄色葡萄球菌感染分布及耐药情况，为临床合理用药提供参考依据。方法：收集2013年1月至2014年12月临床分离的106株金黄色葡萄球菌，采用纸片扩散法（K-B法）测定15种抗菌药物的敏感情况。结果：106株金黄色葡萄球菌，其中MRSA为66株（62.3%），MSSA40株（37.7%），金黄色葡萄球菌对多种抗菌药物呈普遍耐药。结论：MRSA对大部分抗菌药物具有较高的敏感性，而MSSA表现为多重耐药性，未发现耐万古霉素MRSA菌株，医院金黄色葡萄球菌对多种抗菌药物耐药。标签：金黄色葡萄球菌；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；耐药性金黄色葡萄球菌是重要的医院感染菌，能引起皮肤软组织[1]、内脏器[2]、全身感染[2]。由于耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）同时对多种抗生素耐药，使治疗由它所引起的感染和控制其传播变得十分困难。本文将分析我院近2年中106株金黄色葡萄球菌医院感染病历的临床分布及药敏情况。 1 材料与方法 1.1 菌株来源 106株金黄色葡萄球菌来自2013年1月至2014年12月本院临床各科室送检的住院患者的标本，包括呼吸道分泌物、创面分泌物、尿液、胸水、腹水等。 1.2 分离鉴定按照《全国临床检验操作规程》第3版进行细菌的分离鉴定，药敏纸片及M-H琼脂均为法国生物梅里埃公司配套产品。 1.3 药敏试验采用K-B琼脂纸片扩散法检测对15种抗生药物的耐药性。 1.4 质控菌株金黄色葡萄球菌ACTT25923购于内蒙古临床检验中心。 2 结果 2.1 标本分布 106株金黄色葡萄球菌主要来自呼吸道分泌物（占53.5%），创面分泌物（占21.4%）、尿液（占9.4%）、胸水（占8.6%）、腹水（占4.0%）、其它（占3.1%）。

金黄色葡萄球菌

金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌革兰氏染色显微照片金黄色葡萄球菌 (Staphyloccocus aureus Rosenbach) 是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属（Staphylococcus），有“嗜肉菌"的别称，是革兰氏阳性菌的代表，可引起许多严重感染。而对于金黄色葡萄球菌在速冻食品中的存在量，卫生部于2011年11月24日公布食品安全国家标准《速冻面米制品》，允许金葡菌限量存在。目录简介流行病学引发病症球菌检验球菌控制感染处理限量存在简介金黄色葡萄球菌细胞壁含90%的肽聚糖和10%的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌没有细胞壁结构，所以紫色被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。新出现的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，被称作超级细菌，几乎能抵抗人类现在所有的药物，但是万古霉素可以对付它。典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm 左右，显微镜下排列成葡萄串状。

显微图像金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1~2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10~15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。流行病学金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率83%，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。一般说，金黄色葡萄球菌可通过以下途径污染食品：食品加工人员、炊事员或销售人员带菌，造成食品污染；食品在加工前本身带菌，或在加工过程中受到了污染，产生了肠毒素，引起食物中毒；熟食制品包装不密封，运输过程中受到污染；奶牛患化脓性乳腺炎或禽畜局部化脓时，对肉体其他部位的污染。金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：

金黄色葡萄球菌检测方法

金黄色葡萄球菌检测方法 Revised as of 23 November 2020

金黄色葡萄球菌检测方法 1.纸片法目前广泛应用的一种方法，用纸片、膜、胶片等作为培养基载体，将特定的培养基和显色物质附着在上面，通过观察微生物在测试片上面的生长、显色来测定食品中微生物。采用快速测试片检测具有显着的优点：可测定少量检品，不需要配制试剂，不需要大量的玻璃器皿，操作简便迅速；易于消毒保存，便于运输携带方便，价格低廉；除纸片外无其他任何废液废物，大大减少了工作量；可以在取样时同时接种，结果更能反映当时样本中真实细菌数，防止延长接种时间时细菌繁殖造成的污染。技术优点：操作简单使用方便，避免了繁琐的操作。技术缺点：用时间比较长，无法准确定性及计数。此方法现在应用于快速检测领域，美国3M公司Petrifilm为载体的测试片应用最为广泛。但其也存在一些问题：Petrifilm测试片上覆盖了一层薄膜，当样品粘液过多时会出现菌落的扩散和融合，影响计数；Petrifilm测试片面积较小，当菌量大于250cfu时，准确计数较困难；待测样品中含有的某些有机物可能使显色减缓。使目视效果下降，导致计数偏低。 2.免疫学方法各种免疫学方法的基本原理都是抗原抗体反应。抗原抗体反应是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合反应。金黄色葡萄球菌特异的抗原能激发机体产生相应的特异性抗体。在免疫检测中，可利用单克隆抗体检测金黄色葡萄球菌的特异抗原，也可利用金黄色葡萄球菌抗原检测体内产生的特异抗体，两种方法均能判断机体的感染状况。目前对于金黄色葡萄球菌的测定主要进行了肠毒素的测定，方法以酶联免疫吸附实验为主，有胶体金方法，也有用亲和素一生物素乳胶凝集实验和免疫荧光实验，但都有一定的局限性。免疫学方法包括下面两个部分：（1）抗原抗体技术分析：抗原抗体技术是免疫技术中的核心部分，对于金黄色葡萄球菌检测全菌免疫筛选抗体是很困难的事情，现在目前市场有的大多都是对金黄色葡萄球菌毒素类进行免疫得到的抗体，金黄色葡萄球菌毒素有12种，军事医学科学院生产的金黄色葡萄球菌毒素A、B、C的抗体。毒素抗体优势在于敏感度高，易于检查，缺点毒素种类多，检测其中几种不具有普遍性。毒素分离工艺复杂，要得到纯毒素成本比较高。（2）免疫学方法技术分析：上述免疫学技术应用最多的是酶联免疫技术和胶体金侧向层析技术。酶联免疫技术广泛应用于实验室检测，由于一次可以检测多个样本，此技术多用于体外诊断，目前也广泛用于食品安全。胶体金技术由于操作简单，检测适度快等优势，在食品安全领域广泛用于现场快速检测。基于免疫学方法的技术主要分为：酶联免疫技术、胶体金侧向层析技术、免疫荧光技术、免疫沉淀技术、乳胶凝集技术、免疫磁珠技术。 3.分子生物学方法金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶：肠毒素、血浆凝固酶、溶血素、杀白细胞素、表皮溶解毒素、毒性体克综合重量毒素I 等。而这些致病因子基因的鉴定(包括耐药性相关基因、毒素基因、酶基因及多

金黄色葡萄球菌的测定

金黄色葡萄球菌的测定 1 卫生学意义金黄色葡萄球菌定性检验（增菌培养法）：适用于检查含有受损伤的金黄色葡萄球菌的加工食品。 2 检验方法 2.1 术语与定义金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为一种革兰氏染色阳性球形细菌。显微镜下排列成葡萄串状，金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜。是常见的引起食物中毒的致病菌。常见于皮肤表面及上呼吸道黏膜。 2.2 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：（1）恒温培养箱：36℃±1℃。（2）冰箱：2℃～5℃。（3）恒温水浴箱：37℃～65℃。（4）天平：感量0.1g。（5）无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头。（6）无菌锥形瓶：容量100mL、500mL。（7）无菌培养皿：直径90mm。（8）pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2.3 培养基和试剂（1）7.5%氯化钠肉汤 1）成分：蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0g；氯化钠：75g；蒸馏水：1000mL；pH：7.4； 2）制法：将上述成分加热溶解，调节pH，分装，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。（2）B－P琼脂平板 1）成分：胰蛋白胨：10.0g；牛肉膏：5.0 g；酵母膏：1.0g；丙酮酸钠：10.0g；甘氨酸：12.0g；氯化锂（LiCl·6H2O）：5.0g；琼脂：20.0g；蒸馏水：950mL；pH：7.0±0.2 2）增菌剂的配法：30%卵黄盐水50mL与经过除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL 混合，保存于冰箱内。 3）制法：将各成分加到蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，调节pH。分装每

金黄色葡萄球菌耐药的现状及临床治疗对策

金黄色葡萄球菌耐药的现状及临床治疗对策孙宏莉徐英春单位：中国医学科学院中国协和医科大学北京协和医院摘要：金黄色葡萄球菌，尤其是甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起院内感染的多重耐药菌。目前MRSA已逐渐成为全世界院内感染的主要病原菌。目前在许多国家仍在增长，MRSA几乎对所有?-内酰胺类抗生素耐药，甚至累及到红霉素，环丙沙星和庆大霉素。本文对金黄色葡萄球菌的耐药现状、耐药机制以及金黄色葡萄球菌感染的危险因素和治疗对策进行了简要介绍。关键词：金黄色葡萄球菌耐药现状耐药机制危险因素治疗对策答 1. 甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（ MRSA ）是引起院内感染的多重耐药菌。是吗？ A.是 B.不是 2. 根据 NCCLS 判定标准，对于金黄色葡萄球菌，万古霉素的MIC≤4ug/ml 时为敏感。对吗？ A.不对 B.对金黄色葡萄球菌，尤其是甲氧西林或苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌（ MRSA ）是引起院内感染的多重耐药菌。在第一个耐青霉素酶的β－内酰胺类抗生素甲氧西林用于临床治疗葡萄球菌感染不久， 1961 年在英国发现了世界首例 MRSA 。从此， MRSA 逐渐成为全世界院内感染的主要病原菌。目前在许多国家仍在增长， MRSA 几乎对所有β- 内酰胺类抗生素耐药，甚至累及到红霉素，环丙沙星和庆大霉素。 1996年在日本首次发现了MRSA对万古霉素敏感性下降的菌株，即万古霉素中介的金黄色葡萄球菌（VISA）。VISA 的出现预示着万古霉素治疗葡萄球菌感染的临床疗效下降，随之万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌（VRSA）临床株是否会分离到，成为人们监测和关注的热点。如果葡萄球菌一旦对万古霉素耐药，临床将如何治疗？

金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌

金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。它在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因此，它很容易就能够污染一些食物来源，从而引发疾病。特别是金黄色葡萄球菌肠毒素，它是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，中国金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件也时有发生。误食金葡菌污染的食品,可引起呕吐和腹泻等症状。因此，在本篇文献中，我们选取了关于金黄色葡萄球菌肠毒素的一部分内容进行了较为细致的思考。文中提到，肠毒素能够引起人和哺乳动物肠胃道毒性反应。但是，金葡菌肠毒素同时也是一种典型的超级抗原。在免疫反应中，只需极微量，就能通过一种独特的机制，使之产生大量细胞因子和细胞毒性物质。从而抑制异常分裂的癌症细胞生长而可能起到治疗癌症的效果。那么，肠毒素治疗肿瘤的机制是什么呢？首先，肠毒素是一种超级抗原。超抗原是一类只需极低浓度就能激活大量T细胞克隆或B细胞克隆、产生极强免疫效应的物质。它远超普通抗原的多克隆激活能力，可视其为具非特异性免疫原性但无免疫反应性的抗原。它在体内能够活化CD4 + T细胞，这种细胞能分泌多种细胞因子。它们不仅能够直接或间接地杀伤肿瘤细胞，而且可以增加肿瘤细胞表达MHC 抗原分子，增强肿瘤细胞刺激宿主免疫系统的能力; 另一方面，这些细胞因子又刺激T细胞进一步增殖分化，而增殖分化的T细胞又将产生更多的细胞因子与细胞毒作用，共同导致肿瘤细胞的破坏溶解，从而形成级联效应，达到对肿瘤的治疗作用。除了对肿瘤的治疗作用，肠毒素在一定浓度和不同途径给予时，还具备着非特异性促进人和哺乳动物细胞的有丝分裂效果。特别是对损伤部位的组织有促进分裂和生长作用，能够致使损伤组织快速愈合。故有利于对损伤组织的治疗。但这种反应作用的机制我们小组尚且还无法解释，希望在之后的课程中能够有所启发。

实验七--食品中金黄色葡萄球菌的检验

实验七食品中金黄色葡萄球菌的检验一、实验目的要求 1、了解食品的质量与金黄色葡萄球菌检验的意义。 2、掌握金黄色葡萄球菌的生物学特性。 3、掌握金黄色葡萄球菌检验的生化试验的操作方法和结果的判断。 4、掌握食品中金黄色葡萄球菌检验的方法和技术。二、原理葡萄球菌在自然界分布极广，空气、土壤、水、饲料、食品(剩饭、糕点、牛奶、肉品等)以及人和动物的体表粘膜等处均有存在，大部分是不致病，也有一些致病的球菌。金黄色葡萄球菌是葡萄球菌属一个种。可引起皮肤组织炎症，还能产生肠毒素。如果在食品中大量生长繁殖，产生毒素，人误食了含有毒素的食品，就会发生食物中毒，故食品中存在金黄色葡萄球菌对人的健康是一种潜在危险，检查食品中金黄色葡萄球菌及数量具有实际意义。金黄色葡萄球菌能产生凝固酶，使血浆凝固，多数致病菌株能产生溶血毒素，使血琼脂平板菌落周围出现溶血环，在试管中出现溶血反应。这些是鉴定致病性金黄色葡萄球菌的重要指标。三、试剂和仪器（一）最先准备的器材规格名称数量用途 1、500ml广口瓶1个稀释样品 2、500ml三角瓶1个制生理盐水 3、250ml三角瓶3个制培养基等 4、10×100mm试管6支血浆凝固酶试验 5、1ml移液管2支 6、10ml移液管 2 支 7、直径为90 mm平皿12套制血平板B-P平板 8、250ml量筒1支（二）应灭菌的其它器材剪刀1把不锈钢汤匙1把称量纸适量（三）应制备的培养基培养基总量所用容器 1.无菌水50ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 2.0.85%生理盐水70ml/瓶1瓶250ml三角瓶（全班共用） 3.0.85%生理盐225ml/瓶1瓶500ml三角瓶 4.7.5%NaCl肉汤50ml/瓶1瓶250ml三角瓶

金黄色葡萄球菌危害程度评估报告

金黄色葡萄球菌的危害程度评估报告一、生物学特性金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，隶属于葡萄球菌属，可引起多种严重感染。金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH 7.4。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1-2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，VP反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。二、危害程度分类根据中华人民共和国卫生部制定《人间传染的病原微生物名录》该菌危害程度为第三类。三、致病性和感染剂量金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。金黄色葡萄球菌的致病力强弱主要取决于其产生的毒素和侵袭性酶，有报道目前出现越来越多的耐药菌株，MRSA即耐甲氧西林金黄色葡萄球，菌致病性也随着变强。四、暴露的潜在后果暴露后可能引起感染，菌量大时可使实验人员出现皮肤软组织感染、全身性感染、呼吸道感染、中毒、肠炎等。被感染后，成为传染源，可能对周围及环境造成污染，应及时得到治疗和控制。五、感染途径通过污染食品和水源经口传播，也可通过呼吸道和接触传播。六、微生物在环境中的稳定性葡萄球菌是无芽胞菌中抵抗力最强者，而干燥可达数月，加热80℃30min才被杀死。5％石炭酸，0.1％升汞10～15min死亡。1:100000～1:200000龙胆紫溶液能抑制其生长。对磺胺增效剂、青霉素、红霉素等较敏感，但耐药株逐年增多，MRSA即为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。七、浓度和浓缩标本的容量

金黄色葡萄球菌及其检验

我们以SN标准中的最近似值(MPN)测定法来进行讲解：这种方法适用于检测认为带有大量竞争菌的食品及其原料和未经处理的食品中的少量金黄色葡萄球菌。 1、样品制备：固体或半固体食品: 以无菌操作称取25g样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌均质杯内,于8000r/min均质1～2min,制成1:10样品匀液。液体食品: 用灭菌吸管吸取25mL样品,放入装有225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内 (瓶内预置适当数量的玻璃珠),经充分振摇制成1:10样品匀液。供计数检验时,可按十进位递增稀释法将样品匀液再进行适当稀释。 2、选三个连续稀释度，从每个稀释度分别取1 mL稀释样品液，接种3管含10％氯化钠why?还记得么？金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10-15%NaCl肉汤中生长。因此，这事实上是一种选择性的增菌。胰蛋白胨大豆肉汤。样品的最高稀释度必须达到能获得阴性终点,置36±1℃培养48 h。 3、用3 mm接种环,从有细菌生长的各管中移取1 环,划线接种于表面干燥的Baird- Parker琼脂平板,置36±1℃培养45～48h。 4、从有细菌生长的每一平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌菌落,移种到肉汤培养基中,置36±1℃培养20～24 h。 5、取肉汤培养物0.3mL同0.5mL凝固酶试验兔血浆于8mm×100mm试管内充分混合,置36±1℃培养,定时观察是否有凝块形成,至少观察6 h,以内容物完全凝固,使试管倒置或倾斜时不流动者为阳性。试验中需同时做巳知阳性和阴性对照。对可疑结果,应进行革兰氏染色、镜检和其他辅助试验{如耐热核酸酶试验等} 加以证实。 6、报告结果：根据凝固酶试验结果查最近似值(MPN)表,报告金黄色葡萄球菌的MPN/g (mL)。附：怎样在平板上进行细菌的划线分离。 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法

实验5 金黄色葡萄球菌的检验

实验5 金黄色葡萄球菌的检验 1 目的和要求（1）掌握金黄色葡萄球菌的检验方法（2）了解金黄色葡萄球菌各检验步骤的依据及原理 2 基本原理金黄色葡萄球菌进入人体内，可引起局部的痈疾和蜂窝组织炎，还可以引起肺炎、心肌炎、骨骼炎、肾盂肾炎等系统化脓性感染，甚至可发展成败血症。此外，食品中生长金黄色葡萄球菌是食品卫生中的一种潜在危险，因为金黄色葡萄球菌在是中会产生肠毒素，食用后将引起食物中毒，这在我国细菌性食物中毒事件中，仅次于沙门氏菌和副溶血弧菌。因此，检验食品中金黄色葡萄球菌是实际意义。绝大多数金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上产生金黄色色素，菌落周围有透明的溶血圈，在厌氧条件下能分解甘露醇产酸，产生血浆凝固酶和耐热的DNA酶。 3 实验材料 3.1 检样乳与乳制品（如奶粉、消毒乳）、肉制品、饮料 3.2 菌种金黄色葡萄球菌、藤黄八叠球菌斜面培养物。 3.3 培养基7.5%氯化钠肉汤、肉浸液肉汤、血琼脂平板、Baird-Parker氏培养基 3.4 试剂与染色剂无菌生理盐水、兔血浆、革兰氏染色液等。 3.5 仪器与其他用具无菌吸管（1mL、5、10）、无菌试管、载玻片、接种环、酒精灯、显微镜、均质器、恒温箱等。 4 检样程序 5 操作步骤 5.1 5.1.1样品的处理

称取25 g 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1 min～2 min。若样品为液态，吸取25 mL 样品至盛有225 mL 7.5 %氯化钠肉汤或10 %氯化钠胰酪胨大豆肉汤的无菌锥形瓶(瓶内可预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，振荡混匀。 5.1.2 增菌和分离培养 5.1.2.1 将上述样品匀液于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤内呈混浊生长。 5.1.2.2 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker 平板和血平板，血平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。Baird-Parker 平板36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h 或45 h～48 h。 5.1.2.3 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 5.1.3 鉴定 5.1.3.1 染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 μm～1 μm。 5.1.3.2 血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker平板或血平板上可疑菌落1个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1℃培养18 h～24 h。取新鲜配臵兔血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，臵36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察 6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒臵时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到 5 mL BHI，36 ℃±1℃培养18 h～48 h，重复试验。病原性葡萄球菌多数产生血浆凝固酶，非病原性的一般不产生。因此，该法是判定葡萄球菌有无致病性的重要指标。 5.2 金黄色葡萄球菌Baird-Parker平板计数 5.2.1 样品的稀释 5.2.1.1固体和半固体样品：称取25 g样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～10000 r/min均质1 min～2 min，或臵盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2 min，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取25 mL样品臵盛有225 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预臵适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。 5.2.1.3 用1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓慢注于盛有9 mL 稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1 支1 mL 无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100 的样品匀液。 5.2.1.4 按5.2.1.3 操作程序，制备10 倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1 次1 mL 无菌吸管或吸头。 5.2.2 样品的接种

金黄色葡萄球菌的耐药性研究

金黄色葡萄球菌的耐药性研究一、金黄色葡萄球菌的分离及培养称取10g土样，在无菌条件下，放入无菌的三角瓶中，加入90ml的蒸馏水，再加入0.2mg复方磺胺甲恶唑振荡10min，使土样充分混合，利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性，杀死其他细菌。从三角瓶中取1ml上清液放入一支无菌试管（15*150mm）中按10倍梯度稀释成10-5的土壤稀释液后，分别取200μL涂布于牛肉膏蛋白胨培养基上，置于37℃培养箱中恒温培养24h。利用高盐培养基抑制其它细菌的生长，从而分离得到金黄色葡萄球菌。二、金黄色葡萄球菌的鉴定 1.菌落形态：菌落较小，圆形，直径1-2mm，较湿，较透明，边缘整齐，隆起，略带淡绿色。 2.染色观察：从平板上挑取可疑性菌落进行革兰氏染色，金黄色葡萄球菌为革兰氏阴性菌，显微镜下呈单个或葡萄状排列，无芽孢、荚膜，单个菌体直径为0.5-1μm。革兰氏染色： 1.涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液枪吸取10μL待检样品滴在载玻片的中央，用烧红冷却后的接种环将液滴涂步成一均匀的薄层，涂布面不宜过大。 2.干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯上高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烧枯而变形。 3.固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒钟，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉得烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。 4.初染：在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约为1min。

5.水洗：斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 6.媒染：用100-1000μL移液枪吸取300μL碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 7.水洗：重复步骤5。 8.脱色：斜置载玻片，滴加95％的乙醇脱色，至流出的乙醇不显紫色为止，大约需时20-30s，随即水洗。 9.复染：在涂片薄膜上滴加沙黄染液1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 10.水洗：重复步骤5。 11.干燥、观察：用吸水纸吸掉水分，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后，滴一滴浸油在玻片上，用油镜观察细菌的形态及颜色，紫色为革兰氏阳性菌，红色为革兰氏阴性菌。三、实验中所需培养基配方及制法（1）科玛嘉金葡萄球菌显色培养基：琼脂15.0g/L 蛋白胨及盐分65g/L 色素2.5g/L PH 6.9+0.2 金黄色葡萄球菌在科玛嘉黄色葡萄球菌显色培养基上，菌落颜色为紫红色、粉色或粉红色。（2）广东环凯显色培养基：蛋白胨大豆胨和酵母粉氯化钠琼脂显色剂金黄色葡萄球菌在广东环凯显色培养基上，菌落颜色为粉红——紫红色。（3）13％NaCl牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏5g 蛋白胨10g 氯化钠130g 琼脂15g 水1000ml PH 7.4-7.6 （4）MH肉汤培养基：乳糖5g 胰蛋白胨20g SDS 0.5g 氯化钠5g 磷酸氢二钠（无水）5.74 磷酸二氢钾（无水）1g 微量元素溶液0.5mL 蒸馏水1000mL

金黄色葡萄球菌的概况

金黄色葡萄球菌的概况摘要：本文旨在讲述金黄色葡萄球菌的目前现状，以及其主要检测方法，代谢物肠毒素检测方法，耐药检测和幼儿园发病原因，这些对金葡菌的检测、治疗和预防起到了很好的帮助。关键词：金黄色葡萄球菌；检测；肠毒素；耐药；发病金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）是食品卫生标准中规定不得检出的常见食物中毒致病菌，是食品卫生微生物常规检测项目之一[1]。SA是葡萄球菌属，革兰染色阳性，呈葡萄状排列。当衰老、死亡、被吞噬后常转为阴性。无鞭毛、无芽胞、体外培养一般不形成荚膜。在浓汁及液体培养基中常单个、成对、或短链状排列。在普通培养基上即可生长，当加入血液或其他营养物质生长的更好。需氧或兼性厌氧。最适pH7.4，最适温度28-38℃，致病菌在37℃生长最好。某些菌株耐盐性特强，在100-150g/L氯化钠培养基中都能生长。在某些影响细胞壁形成物质的作用下可形成L型。触酶试验阳性。多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气，致病菌株可分解甘露醇。SA能产生大量核酸酶，该酶可耐受100℃30min不破坏，降解DNA和RNA的能力较强。此酶对检测葡萄球菌的致病性与血浆凝固酶具有同等价值。由于致病金黄葡萄球菌能分泌肠毒素，因此一旦细菌污染食品，并在合适的温度环境下，细菌可以大量繁殖并产生肠毒素，从而引起消费者食物中毒[2]。金黄色葡萄球菌是一种能引起食物中毒的重要细菌。根据美国疾病控制中心的一些报告，由SA引起的食物中毒居第二位，仅次于大肠杆菌，在细菌性食物中毒中的比例为33％。加拿大的发生率更高，占细菌性食物中毒的45％[3]。中国每年发生SA中毒事件也屡见不鲜，因此造成每年的经济损失相当惨重，目前世界各国都把SA定为重要的食品卫生法定检测项目。在1960年，人们将一种半合成的青霉素-甲氧西林第一次应用于临床，而且仅仅一年之后，在英国就发现了首例耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistance Staphylococcus aureus,MRSA），再后来，在世界范围内MRSA便以惊人的速度蔓延开去，继而发展成为医院内最最常见的微生物病原菌，与乙型肝炎、艾滋病同为当今世界三大感染顽疾[4]。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌是医院内重要感染的致病菌，其发病率和病死率在世界各地均很高，美国疾病控制中心在2003年做了大量工作，根据统计了解，每年因为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染，大约有数十万人住院接受治疗，在医院内由SA引起耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染，其分离程度已经高达80%以上，而且呈向社区扩散的趋势[5]。1996年，日本报告了第一例对万古霉素敏感性下降的金葡菌[6] ，人们把万古霉素认为是治疗SA的最后防线，最为经济有效的药物，不过在20世纪90年代后期又出现了耐万古霉素的SA，开始表现为万古霉素中介金黄色葡萄球菌（vancomycin intermediate-susceptible staphylococcus aureus ，VISA），美国、英国、德国、意大利、韩国等相继报道检出了VISA[7]，；1997年美国分离了2例VISA[8]同期，在欧洲与亚洲多个国家均有类似报到[9]。国内外对SA的检测方法，主要有传统分离培养及生化鉴定、显色培养基鉴定、酶联免疫(ELISA)、PCR、美国3M公司的petrifilm培养片等方法。现行国标检测食品中的SA主要是采用传统的分离培养之后进行生化鉴定，整个检测过程获得最终结果需时5天左右。而且免疫学的ELISA法所用的抗体基本上全部依赖国外进口，试剂也相对昂贵；但传统的PCR法却需要提取DNA，加大了人力、物力的消耗，成本提高。对于SA的检测，很多研究者都来检测致使其食物中毒的肠毒素基因[10]，尤其是用于食物中毒事故的调查，所以对于研发一种快速、便捷的检测方法是目前食品安全检测的当务之急。 SA的常规检验检验程序：检样处理→增菌→分离→分纯→溶血试验→革兰染色镜检→血浆凝固酶试验→肠毒素检验[11]。常规检验具有操作简便，所需设备简单，成本相对较低的优点，但其操作繁琐，检测时间较长，且灵敏度较低[12]。

葡萄球菌属检验

精心整理1．概述葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2.标本类型血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3.鉴定 3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌 O/F试 ”为3.5.1涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。 3.5.4鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4.药敏参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSIM100-S20最新版本文件。 5.质量控制参见《质量管理程序》。 6.检验结果解释与分析 6.1由于葡萄球菌分布广泛，从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时，将其定为致病菌时应慎重。

精心整理应根据凝固酶试验进一步确认。对可疑菌株的鉴定，最好利用商品化的鉴定系统根据生化图谱进行确定。表皮葡萄球菌分离自导管相关血流感染时，通常视为致病菌。溶血性葡萄球菌从泌尿感染病人分离得到时，尤其是细菌量较大或作为优势菌时，通常被视为致病菌。 6.2甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和?-内酰胺药/?-内酰胺酶抑制剂类抗生素，对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。若葡萄球菌属对四环素敏感，则对多西环素和米诺环素敏感。某些菌对四环素中介或耐药，而对多西环素和米诺环素敏感。临床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗3-4日后，原来敏感的葡萄球菌易产生耐药。所以对这类葡萄球菌需多次反复进行药敏试验。大环内酯类耐药葡萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。所以临床试验室须进行“D”试验以检测克林霉素诱导性耐药，根据“D”试验结果来报告克林霉素的耐药性。 7.临床意义金黄等，等。 MRSA 物。 8. [1] [2] [3]

金黄色葡萄球菌的耐药性分析

金黄色葡萄球菌的耐药性分析 [摘要]目的了解金黄色葡萄球菌的耐药性，便于临床合理用药。方法采用WHONET软件对临床标本中分离的545株金黄色葡萄球菌的耐药情况进行回顾性分析。结果MRSA的检出率为50.83％。金黄色葡萄球菌对青霉素G、阿奇霉素、红霉素的耐药率分别为91％、80.7％、80.4％；对万古霉素和替考拉宁的耐药率为O％和1.8％。MRSA与MSSA对头孢西丁、左旋氧氟沙星、苯唑西林等的耐药性差异有显著性(P＜0.01)。结论金黄色葡萄球菌对青霉素、阿奇霉素、红霉素耐药严重；未发现耐万古霉素的金黄色葡萄球菌；对于金黄色葡萄球菌感染的治疗，应根据实验室药敏试验结果选用抗菌药物。 [关键词]金黄色葡萄球菌；MRSA；耐药性；药敏试验金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus，sAU)引起的社区感染和医院感染一直是临床上的重要难题。自20世纪60年代出现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant stphylococcus aureus。MRSA)以来，SAU的耐药率和MRSA 的检出率越来越高。为了解本地区SAU的耐药性，便于临床合理用药，对武汉大学中南医院2006年1月至2007年1月临床标本中分离的545株SAu的耐药情况进行分析，现将结果报告如下。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌株来源2006年1月至2007年1月从武汉大学中南医院临床标本中分离出545株sAU。其中痰液标本中分离出254株，伤口分泌物分离出50株，血液中分离出38株，咽拭子中分离出36株，脓液和尿液中各分离出11株，其他标本中分离出145株。545株SAU来自门诊病人62株，占11.4％(62/545)；来自住院部病人483株，占88.6(483/545)。 1.1.2药敏纸片四环素30μg/片、左旋氧氟沙星5μg／片、加替沙星5μg ／片、头孢西丁30μg/片、庆大霉素10μg片、复方新诺明23．75μg片、环丙沙星5μg片、氯霉素30μg／片、青霉素G 10 IU／片、万古霉素30μg片、替考拉宁30μg片、苯唑西林1μg/片、红霉素15μg/片、克林霉素2μg/片、阿奇霉素15/μg 片，均为北京天坛药物生物技术开发公司的产品。 1.1.3培养基Mueller-Hinton琼脂，北京天坛药物生物技术开发公司的产品。 1.1.4KB法抑菌圈测量仪北京先驱威锋技术开发公司产品。 1.2方法 1.2.1SAU鉴定所有菌株按照全国临床检验操作规程鉴定。

金黄色葡萄球菌检测

金黄色葡萄球菌检测 1 设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下： 1.1 恒温培养箱：36℃±1℃。 1.2 冰箱：2℃～5℃。 1.3 恒温水浴箱：37℃～65℃。 1.4 天平：感量0.1g。 1.5 均质器。 1.6 振荡器。 1.7 无菌吸管：1ml（具0.01ml刻度）、10ml（具0.1ml刻度）或微量移液器及吸头。 1.8 无菌锥形瓶：容量100ml、500ml。 1.9 无菌培养皿：直径90mm。 1.10 注射器：0.5ml。 1.11 pH计或pH比色管或精密pH试纸。 2 培养基和试剂 2.1 Baird-Parker 琼脂平板：见附录中1。 2.2 脑心浸出液肉汤(BHI) ：见附录中2。 2.3 兔血浆：见附录中3。 2.4 营养琼脂小斜面：见附录中4。 2.5 无菌生理盐水：见附录中5。 3 操作步骤 3.1 样品的稀释

3.1.1 固体和半固体样品称取25g样品置盛有225ml生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min均质1min～2min，或置盛有225ml稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1：10的样品匀液。 3.1.2 液体样品以无菌吸管吸取25ml样品置盛有225ml生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1：10的样品匀液。 3.1.3 用1ml无菌吸管或微量移液器吸取1：10样品匀液1ml，沿管壁缓慢注于盛有9ml稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1ml无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1：100的样品匀液。 3.1.4 按3.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用一次1ml无菌吸管或吸头。 3.2 样品的接种根据对样品污染状况的估计，选择2个～3个适宜稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1ml样品匀液以0.3ml、0.3ml、0.4ml接种量分别加入三块Baird-Parker平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25℃～50℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。 3.3 培养在通常情况下，涂布后，将平板静置10min，如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36℃±1℃培养1h；等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，36℃±1℃培养，45h～48h。

金黄色葡萄球菌的耐药机制研究现况

金黄色葡萄球菌的耐药机制研究现况近年来，耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA)感染的耐药率和多重耐药菌株不断增长，导致临床抗感染治疗难度增加。金黄色葡萄球菌是引起化脓性感染和医院感染的常见病原菌。数十年来，由于细菌的进化和抗生素的滥用，该菌的耐药性逐渐增强，特别是甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌。为了及时了解该菌的耐药情况，本文从分子水平阐明了其对几种常见抗菌药物耐药机制，对于医务人员从分子生物学角度对临床耐药性加以研究，治疗金黄色葡萄球菌引起的感染，指导临床合理用药，减少耐药性的产生具有重要意义。 1甲氧西林耐药机制甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌是指表达mecA基因或具有其它甲氧西林耐药机制的金黄色葡萄球菌J。目前，实验室利用苯唑西林或头孢西丁代替甲氧西林进行MRSA检测。临床微生物实验室检测MRSA，常利用药敏纸片法(K—B 法)，该法将30片头孢西丁纸片贴在培养基上，35℃培养24 h，当抑菌环大于或等于22 mm判为苯唑西林敏感金黄色葡萄球菌，小于或等于21 HnTI则为苯唑西林耐药金黄色葡萄球菌。青霉素结合蛋白(PBP)是金黄色葡萄球菌细胞壁主要成分肽聚糖合成过程中所必需的转肽酶，其催化细胞外五肽侧链的交联而构成肽聚糖网状立体结构。金葡菌正常的PBP有PBP1、PBP2、PBP3和PBP4 [1]，B-内酰胺类抗生素通过与PBPs结合抑制其酶活性，从而阻碍细胞壁肽聚糖交联，使得细菌细胞壁合成被破坏而死亡。而MRSA能产生一种新的特殊的PBP2a。PBP2a常由B一内酰胺类抗生素诱导，对大多数8-内酰胺类抗生素亲和力低，由于其可替代高亲和力的正常PBPs催化肽聚糖交联，使细菌得以逃逸B-内酰胺类抗生素的作用而表现出耐药性[2]。治疗甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌，首选药物为万古霉素。然而，目前国际上已经出现了万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌。 2万古霉素耐药机制万古霉素为糖肽类抗生素，主要抑制细胞壁的合成。细胞壁前体D一丙氨酰一D一丙氨酸是万古霉素的作用靶位。万古霉素通过与五肽交联前体的C端D一丙氨酰一D一丙氨酸结合形成复合物，阻断肽聚糖合成中的转糖基酶、转肽酶及D，D一羧肽酶的活性，从而阻止细胞壁的合成，导致细胞死亡。自1997年日本报道了世界上第一株临床分离的万古霉素中介金黄色葡萄球菌以来，欧美多个国家都相继有VISA菌株的报道，至2002年6月，在美国证实的VISA感染已达8例。金黄色葡萄球菌对万古霉素的MIC小于或等于2µg／ml为敏感，MIC 4—8µg／ml为中介，MIC大于或等于16µg／ml为耐药。任何万古霉素MIC大于或等于8µg／ml的金黄色葡萄球菌都应送往参考实验室。金黄色葡萄球菌对万古霉素的耐药机制可能有耐药基因转移、细胞壁增厚及改变、抗生素选择性压力和基因突变。

金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些

如对您有帮助，可购买打赏，谢谢生活常识分享金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些导语：金黄色葡萄球菌感染是皮肤化脓性感染的最常见致病菌，也是四种最常见的医院获得性感染的病原之一。其传播方式在医院内部主要是经健康医务人金黄色葡萄球菌感染是皮肤化脓性感染的最常见致病菌，也是四种最常见的医院获得性感染的病原之一。其传播方式在医院内部主要是经健康医务人员暂时寄居细菌的手进行传播，尤其是在新生儿童症监护病房(NICU)金葡菌是最常见的毒力最强的致病原。那么金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些呢？看过下面的文章相信你就会明白。金黄色葡萄球菌脑膜炎是指由金黄色葡萄球菌引起的脑膜炎，起病急，常有全身感染中毒症状，如畏寒、发热，伴持久而剧烈的头痛，颈强直较一般脑膜炎明显，除有脑膜炎症状外，尚有局部感染病灶，败血症患者还有其他迁徙性病灶，出现皮疹，如荨麻疹样、猩红热样皮疹或小脓疱疹，皮肤可见出血点，很少融合成片。金黄色葡萄球菌引起的脑膜炎多继发于金葡菌败血症，尤其多见于合并左心内膜炎的患者，通过细菌栓子经血流侵袭脑膜。面部痈疖并发海绵窦血栓性静脉炎可进一步导致脑膜炎，颅脑损伤、颅脑手术后及腰椎穿刺时消毒不严也可并发脑膜炎。脑膜附近的感染病灶如中耳炎，乳突炎、鼻窦炎等亦可引起本病，新生儿脐带和皮肤的金葡菌感染也可继发脑膜炎，发病时间多在产后2周左右。金黄色葡萄球菌感染的病因有哪些呢？上面的内容已经让我们知道了答案.为了您和家人的健康，如有发现类似感染的症状请及时就医，如果您还有什么需要咨询的请随时向我们提问，我们的专家24小时在线回答您的问题接军您的疑惑给您提供一个最佳的治疗方案，相信一定能给您满意的答复。