血红蛋白测定
血红蛋白测定
【实验目的】
掌握血红蛋白测定的临床意义
熟悉毛细管采血过程，分光光度计的操作
了解血红蛋白测定的注意事项
【实验原理】
血液在血红蛋白转化液中表面活性剂的作用下溶血后，血红蛋白（除SHb外）被高铁氰化钾（K3Fe（CN）6）氧化为高铁血红蛋白（Hi），Hi再与氰化钾（KCN）中的氰离子（CN-）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN最大吸收波峰在540nm,最小吸收谷为504nm。可用分光光度计直接测定或用HiCN 标准液比色法测定。即可求出待测血红蛋白浓度。此法称HiCN法。
【试剂】
血红蛋白转化液（文齐氏液，Van kampen-Zijlstra’液）：
氰化钾50 mg ，提供氰离子（CN-）
高铁氰化钾200 mg ，氧化剂
无水磷酸二氢钾140 mg ，缓冲液成分，维持溶液的pH值，
【实验操作】
（1）取一支试管加入5.0ml HiCN试剂，取全血20μl，加入到5.0ml HiCN试剂中，混匀后静置5 min，使血红蛋白转化完全。
（2）分光光度计，波长540nm ，比色杯光径1.0cm ，杯温20-300C，以蒸馏水或空白转化液调零，测定样品吸光度值（A）。
【计算】
根据比尔定律，浓度与吸光度成正比，所以实际操作中我们还可以直接用待测液的吸光度A测/标准液的吸光度A标＝待测液的浓度C测/标准液的浓度C标来直接计算待测液的浓度。【参考值】
男性：120 ~160g／L ，女性：110 ~150g／L ，新生儿：170 ~200g／L 。
【临床意义】
照书上写
图1 红细胞和血红蛋白的生理变化曲线
红细胞计数医学决定水平：高于6.8×1012/L，应采取相应治疗措施；低于3.5×1012/L可诊断贫血；低于1.5×1012/L应考虑输血。
血红蛋白的测定方法
血红蛋白的测定方法 血红蛋白是一种色素蛋白，可以用比色法测定。血液中血红蛋白以各种形式存在，包括氧合血红蛋白、碳氧血红蛋白、高铁血红蛋白或其他衍生物。 1）氰化高铁血红蛋白（HiCN）测定法：血液中除了SHb以外，其他各种血红蛋白均可被试剂转化、生成HiCN，其最大的吸收峰为540nm波长，可经比色测定。此法为国际血液学标准化委员会（ICSH）推荐的国际标准参考方法，操作简单，显色快且结果稳定医`学教育网搜集整理；但本法试剂中KCN有剧毒，测定过程中高白细胞和高球蛋白血症易致混浊，HbCO转化较慢。 2）十二烷基月桂酰硫酸钠血红蛋白（SLS-Hb）法：除SHb外，血液中各种Hb均可与低浓度十二烷基月桂酰硫酸钠（SLS）作用，生成SLS-Hb棕红色化合物。SLS-Hb最大吸收波峰538nm，波谷500nm，肩峰560nm.由于摩尔消光系数尚未最后确认，因此不能用吸光度“A”值直接计算血红蛋白浓度。本法操作简单，呈色稳定，准确性和精确性符合要求，且无公害。但SDS质量差异较大，并且SDS可破坏白细胞，不适合进行白细胞计数的血液分析仪使用。 3）叠氮高铁血红蛋白（HiN3）测定法：与HiCN法相似，但仍然有公害问题。 4）碱羟血红蛋白（AHD 575nm）测定法：试剂简单、不含有毒试剂、呈色稳定，但由于其吸收峰在575nm，限制了此法在血液分析仪的使用。 5）溴代十六烷基三甲胺（CTAB）血红蛋白测定法：该法试剂溶血性强又不破坏白细胞，可同时进行白细胞计数，可用于血细胞分析仪自动检测Hb和白细胞。缺点是对Hb测定结果的准确度和精密度较低。 近年来，多参数血细胞分析仪的应用，使Hb测定逐步以仪器法取代手工法，其优点是操作简单、快速，同时可以获得多项红细胞的参数，血液分析仪法测定血红蛋白的原理与手工法原理相似，多采用HiCN法，但由于各型号仪器使用的溶血剂不同，形成Hb的衍生物不同医`学教育网搜集整理。某些溶血剂形成的衍生物稳定性较差，因此要严格控制溶血剂加入量及溶血时间，特别是半自动血细胞分析仪应严格控制实验条件。有些溶血剂内虽加入了KCN，但其衍生物并非是HiCN，仪器要经过HiCN标准液校正后，才能进行Hb测定。仪器法测定血红蛋白精确度CV约为1%.
血红蛋白含量测定
血红蛋白含量测定 血红蛋白是红细胞的主要成分，在正常情况下，每个红细胞均含有一 定量的血红蛋白。血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。 血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外，尚能与某些物质作用形成多 种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸光谱，在临床上，可用以诊 断某些变性血红蛋白血症和血红蛋白的定量测定。 ●仪器型号：Sysmex KX-21型多项目自动血球计数仪器 Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置 ●检测原理： 一、Sysmex KX-21 在自动检测法中的血红蛋白测量以氰化正铁血红蛋白法或氧合血红 蛋白法为主流。但这种方法血红蛋白转化速度慢，其处理液应进行妥善处 理，以及环境方面的考虑，并不是一种令人满意的测量法。无氰HGB测量 法与氧合血红蛋白法相同，其血液中的血红蛋白转化成氧合血红蛋白，且 不含剧毒物。另外，由于可以测量正铁血红蛋白，如质控血那样的含有正 铁血红蛋白的血液也可正确进行测量。 二、Sysmex XE-2100 集中于氰化高铁血红蛋白测定法和氧化血红蛋白测定法的优点，不使 用毒性物质，使该方法成为自动检测的一个合适的方法。同时，由于该方
法可以用测量氰化高铁血红蛋白，所以该方法也可以准确的测量含有高铁 血红蛋白的血液。
●试剂： 一、Sysmex KX-21 ⑴稀释液 ⑵WBC/HGB用溶血剂 ⑶2％EDTA二钾溶液 二、Sysmex XE-2100 ⑴CELLPACK（EPK） ⑵SULFOLYSER（SLS） ●标本吸入量： 一、Sysmex KX-21: 全血模式50lμ 二、Sysmex XE-2100：⑴手工模式130lμ ⑵自动进样器模式200lμ ●静脉血采血方法： 抽取病人静脉血2ml，于EDTA三钾抗凝的真空采血管中（1.5mgEDTA-K3 ／ML）24小时室温保存。 ●操作步骤： 一、Sysmex KX-21 ⑴仪器在全血模式（WB）下 ⑵要在允许空白值内： WBC RBC HGB PLT 0.3?109/L 0.02?1012/L 1g/L 10?109/L
糖化血红蛋白(HbA1c)测定原理方法及临床意义
糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义 糖化血红蛋白（HbA1c）测定的原理方法与仪器解析及临床意义 糖尿病目前在世界上发病率很高，占免疫病的比率，在发达国家高达2-5%，而我国糖尿病的发病率亦达 2-3%，并且每年还以1‰的速度增长。糖尿病是一种终生性疾病，其并发症是至残至死的主要原因，所以人们希望能尽早发现和治疗糖尿病。临床上广泛采用血糖参数来判定糖尿病，而血糖参数只代表抽血时的血糖水平，对确诊有局限性。近年来的医学研究证明：血液中的糖化血红蛋白（HbA1c）浓度相对稳定，其浓度值能准确反映最近1-3个月期间的血糖水平，便于医生对糖尿病进行早期诊断；也可用于糖尿病人的血糖监控及慢性并发症的判断等，受到临床的广泛重视，目前我国各大、中型医院正逐渐开展糖化血红蛋白（HbA1c）占总血红蛋白（Hb）的百分含量的测定项目。有些发达国家已将HbA1c的测定列入中老年人的常规体检项目。测定HbA1c比较常用的方法，目前有乳胶凝集反应法和离子交换高压液相色谱法两种，分别用生化分析仪和糖化血红蛋白自动分析仪进行测定。 1HbA1c的临床意义 糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，不受偶尔一次血糖升高或降低的影响。能反应糖尿病患者2-3个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上有重要的临床参考价值。 1．1增高：测定HbA1c可以了解糖尿病人在2～3个月的血糖控制情况。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。 1．2降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。 1．3作为糖尿病的病情监测指标 1．3．1作为轻症、Ⅱ型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。 1．3．2不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验。 1．3．3可以列为糖尿病的普查和健康检查的项目。 1．4当HbA1c＞9％时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。 1．5对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生发展的监督具有重要意义。1．6对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖（测血糖当然增高）抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值。 1．7对于糖化血红蛋白特别增高的糖尿病患者，应警惕如酮症酸中毒等急性合并症的发生。 2临床常用的测定糖化血红蛋白HbA1c的方法 2．1乳胶凝集反应法 乳胶凝集反应法是利用抗原抗体直接测定总血红蛋白Hb中的糖化血红蛋白HbA1c的百分含量。目前有国内外几家厂商可以提供HbA1c测定的试剂盒。这种免疫反应是由被测血样品中的总Hb和HbA1c与试剂中的抗体结合而形成凝集，凝集量随HbA1c浓度的大小而变化。使用生化分析仪器来进行比浊测定HbA1c的浓度，采用终点法，生化仪通过测定反应液的吸光度值，可直接反映出凝集量的多少；推算出
Xt2000i红细胞平均血红蛋白含量MCH测定-检验科临检室作业书
Xt2000i红细胞平均血红蛋白含量MCH测定 实验原理 由微处理器计算而得：MCH由RBC和Hb计算得出： MCH(pg)＝〔Hb(g/dL)/RBC(106/μl)〕×10 2.标本采集： 2.1标本种类：新抽取的凝血或手指末梢血 2.2标本要求： 2.2.1抗凝剂采用EDTAK2抗凝 2.2.2用手指末梢血作白细胞检验时，最少样品量为200ul，如手指有冻疮，则主张采用耳垂血。 3.标本储存：2小时内完成检验，室温放置下不超过8小时，4-8℃保存不超过48小时。 4.标本运输：室温运输 5.标本拒收标准：污染，凝固标本不能作测定 6.试剂 6.1试剂名称:sysmex血细胞分析试剂 6.2生产厂家：希森美康株式会社 6.3试剂组成 试剂1：嗜碱细胞溶血素 试剂2：嗜碱细胞溶血素 试剂3：白细胞分类染液 试剂4：稀释液
6.4试剂储存条件及有效期：储存温度为5-30℃，有效期为一年，开封后的使用期限为60天。 7.仪器设备 7.1仪器名称：sysmex血细胞分析仪 7.2仪器厂家：日本sysmex株式会社 7.3仪器型号：XT-2000i 8.操作步骤 8.1手工模式： 8.1.1上下颠倒试管将内容物充分混匀。 8.1.2轻轻取下盖子，防止血液溅出。 8.1.3将试管正确放入手工吸引管，吸引管浸入样品。 8.1.4按start键，样品开始吸取。 8.1.5当readyled暗（并发出两声短音）移开试管。 8.1.6当readyled再次亮起时，准备下一个样品，重复上述步骤。 8.2进样器模式： 8.2.1将试管入试管架，将试管架放在进样器的右侧槽中，最多能入5个试管架。 8.2.2单击samplerstart键 9.结果的分析与判断：在仪器显示屏上将显示结果 10.质量控制 10.1三种质量控制品（高、中、低），分别对应三种靶值，做出来的质控品不 能超出质控靶值的上下限范围，否则实验无效。
血红蛋白检测试剂盒(比色法)
血红蛋白检测试剂盒(比色法) 简介： 血红蛋白(Hemoglobin ，Hb 或HGB)是高等生物体内负责运载氧的一种蛋白质，是能使血液呈红色的蛋白。血红蛋白由四条链组成，两条α链和两条β链，每一条链有一个包含一个铁原子的环状血红素。Hb 在氧含量高的区域，容易与氧结合；在氧含量低的区域，又容易与氧分离。血红蛋白的这一特性，使红细胞具有运输氧的功能。 Leagene 血红蛋白检测试剂盒(比色法)( Hemoglobin Colorimetric Assay Kit)在酸性条件下产物呈红色，吸收峰在530nm ，产物红色越深，说明Hb 含量越高，反之则越低，通过分光光度比色法测定530nm 处吸光度，据此通过比色分析就可以计算出血清血红蛋白含量水平。该试剂盒主要用于检测溶血血清样本，亦可用于检测细胞或组织的裂解液或匀浆液等中血红蛋白含量。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 1、 配制检测工作液： ① 配制显色工作液：取Hb Assay buffer 至室温，取显色底物溶解于Hb Assay buffer ， 即为显色工作液。 ② 配制标准品工作液。 2、 准备样品： ① 溶血标本血清：溶血血清按照常规方法制备后，-80℃冻存。使用时用生理盐水稀 释100倍。 ② 细胞或组织样品：取恰当的细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速 离心取上清，-80℃冻存。 3、 加样：按照下表设置96孔板空白对照、标准品、待测样品，溶液应按照顺序依次加入， 并注意避免产生气泡。如果样品中的血红蛋白含量过高，可以减少样品用量或适当稀释 编号 名称 TC0205 50T TC0205 100T Storage 试剂(A): Hb Assay buffer 2.5ml 5ml -20℃ 避光 试剂(B): 显色底物 100μl ×2 100μl ×3 RT 试剂(C): Acid Assay buffer 10ml 20ml RT 试剂(D): Hb(1mg/ml) 10μl ×2 10μl ×3 -20℃ 试剂(E): ddH 2O 1ml 1ml RT 使用说明书 1份
血红蛋白含量测定
血红蛋白含量测定 血红蛋白就是红细胞的主要成分,在正常情况下,每个红细胞均含有一定量的血红蛋白。血红蛋白就是由珠蛋白与亚铁血红素组成的结合蛋白质。 血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白外,尚能与某些物质作用形成多 种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽与吸光谱,在临床上,可用以诊断某些变性血红蛋白血症与血红蛋白的定量测定。 仪器型号:Sysmex KX-21型多项目自动血球计数仪器 Sysmex XE-2100型多项目自动血球分析装置 检测原理: 一、Sysmex KX-21 在自动检测法中的血红蛋白测量以氰化正铁血红蛋白法或氧合血红 蛋白法为主流。但这种方法血红蛋白转化速度慢,其处理液应进行妥善处理,以及环境方面的考虑,并不就是一种令人满意的测量法。无氰HGB测量法与氧合血红蛋白法相同,其血液中的血红蛋白转化成氧合血红蛋白,且不含剧毒物。另外,由于可以测量正铁血红蛋白,如质控血那样的含有正铁血红蛋 白的血液也可正确进行测量。 二、Sysmex XE-2100 集中于氰化高铁血红蛋白测定法与氧化血红蛋白测定法的优点,不使用毒性物质,使该方法成为自动检测的一个合适的方法。同时,由于该方法可以用测量氰化高铁血红蛋白,所以该方法也可以准确的测量含有高铁血 红蛋白的血液。
试剂: 一、Sysmex KX-21 ⑴稀释液 ⑵WBC/HGB用溶血剂 ⑶2％EDTA二钾溶液 二、Sysmex XE-2100 ⑴CELLPACK(EPK) ⑵SULFOLYSER(SLS) 标本吸入量: 一、Sysmex KX-21:全血模式50l 二、Sysmex XE-2100:⑴手工模式130l ⑵自动进样器模式200l 静脉血采血方法: 抽取病人静脉血2ml,于EDTA三钾抗凝的真空采血管中(1、5mgEDTA-K3／ML)24小时室温保存。 操作步骤: 一、Sysmex KX-21 ⑴仪器在全血模式(WB)下 ⑵要在允许空白值内: WBC RBC HGB PLT 0、3109/L 0、021012/L 1g/L 10109/L ⑶检测质控数值合格。 ⑷标本的测量:将待测标本充分混均,然后将吸液管放进待测标本试
血红蛋白测定实验
血红蛋白测定实验 一、实验目的与任务 了解XF—1B型（或Hb—2000型）血红蛋白仪的使用方法，掌握血红蛋白的测定技术。有训练运动员在较好训练效果的影响下血红蛋白正常值高于正常成年人，因此，血红蛋白的测定是评定训练效果的重要指标。 二、原理 测定血红蛋白的方法很多，常见的有直接比色，光电比色法，沙利氏比色法（间接比色法）。 我们现在实验室用的是XF—1B型和Hb—2000型血红蛋白仪。此仪器是采用氰化高铁法，应用光电比色的原理测定血红蛋白值的，其原理是：将全血样品20ul注入5ml氰化高铁血红蛋白稀释液内（亦称文—齐氏液），作251倍稀释，溶化红细胞释出血红蛋白。稀释剂将血红蛋白先转变成高铁血红蛋白，再转化为氰化高铁血红蛋白。然后，再用XF—1B 型（或Hb—2000型）Hb仪比色法直接测定显示浓度数，不需任何换算（每次测定只需5秒钟）。 三、实验器材 XF—1B型和Hb—2000型血红蛋白仪、一次性血细胞吸管（刻度10～20ul）、采血针、75%酒精、消毒棉球、培养皿、烧杯、可调加液器、试管架、血红蛋白测定试剂（文—齐氏液）、氰化高铁血红蛋白标准液。 四、实验步骤 1、插上电源，打开血红蛋白仪电源开关，按动进样开关，重复三次吸入蒸馏水，并通电预热20～30分钟。观察显示是否为“零”。（按出Hb仪器左下角“测试—定标”按键，使之处于“测试”状态。）
2、取试管一支，加入Hb测定试剂（文—齐氏液）5ml，放在试管架上备用。 3、采血、比色：先消毒，再用采血针在耳垂或无名指尖处采血，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血自然流出一大滴时，用血细胞吸管取血液20ul（注意：吸管内不可有气泡，否则需重新采血）。擦去吸管外血液后，轻轻吹入测定管底部，并回吸数次洗净吸管，然后充分混合均匀。待5分钟后，置Hb仪上比色。 4、记录：直接读数，记录下来。 Hb值通常以每100 ml血液中含Hb若干克来表示。（g/ml）。 本仪器采用国际单位制（g/L），可直接显示Hb值（g/L）。 我国正常成人，男子约：120～150 g/L 女子约：110～140 g/L 男运动员不超过：170 g/L， 女运动员不超过：160 g/L。 五、注意事项 1、每人每次测试前应先将Hb仪进样处吸入蒸馏水，冲洗流通池。使显示数值为“000”。 2、比色前将仪器前部左下角“测试—定标”键置于测试状态。 3、Hb仪采样吸管一定要全部侵入液体中，避免气泡吸入，否则影响测定结果，若有气泡请重新操作测试一次。 4、若“零点”漂移绝对值>2g/L，需调整“调零”旋钮，使仪器显示回到“000”。
血红蛋白含量测定
血红蛋白含量测定 发表时间：2011-04-27T15:02:00.683Z 来源：《中外健康文摘》2011年第2期供稿作者：马骅1 刘海虹2 [导读] 血红蛋白测定方法很多，如比色法、比重法、血氧法、血铁法等，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白为首选测定法。马骅1 刘海虹2 (1黑龙江省临床检验中心 150008)(2中国造血干细胞捐献者资料库黑龙江省管理中心 150008) 【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2011)2-0049-02 【关键词】血红蛋白生理检测 血红蛋白是由珠蛋白和亚铁血红素组成的结合蛋白质。每个血红蛋白分子有4条多肽链，每条折叠的多肽链中，包裹1个亚铁血红素。亚铁血红素由原卟啉和1个铁原子组成。血红蛋白分子量为64 458D。 (一)血红蛋白生理 每分子血红蛋白中的4个亚铁血红素含有4个Fe2+原子，可结合4个氧分子。因此，64 458 g血红蛋白，含铁4×55.84，可结合4×22.14 L氧，即每克血红蛋白含铁3.47 mg(即铁占0.347％)，可结合氧1.38 ml。 血红蛋白除能与氧结合形成氧合血红蛋白(HbO2)外，尚能与某些物质作用形成多种血红蛋白衍生物。它们具有特定的色泽和吸收光谱，在临床上，可用以诊断某些变性血红蛋白血症或做血红蛋白的定量测定。 (二)氰化高铁血红蛋白测定法 血红蛋白测定方法很多，如比色法、比重法、血氧法、血铁法等，国际血液学标准化委员会推荐氰化高铁血红蛋白为首选测定法。现就氰化高铁血红蛋白(HiCN)法介绍如下： 1.原理血红蛋白被高铁氰化钾氧化为高铁血红蛋白，新生或的高铁血红蛋白再与氰结合成稳定的棕红色的氰化高铁血红蛋白(HiCN)，在规定的波长和液层厚度条件下，具有一定的吸光系数，根据吸光度，可求得血红蛋白浓度。 2.方法取HiCN转化液5ml，加末梢血20μl，混匀后静置5分钟，用光径1.0 cm，波长540 nm的分光光度计测定吸光度OD(以水或稀释液调“0”)，求得每升血液中血红蛋白含量。 (三)血红蛋白测定的质量控制 血红蛋白测定的质量控制除了所用量器必须事先校准外(允许误差，5 ml吸管为2.5％，血红蛋白吸管为1％)，还要进行下面几项质量控制。 1.多仪器的线性校正取50 g／L、100 g／L、150 g／L、200 g／L的HiCN标准参考液，在λ540 nm测出其A值(以HiCN转化液为空白)，标准状态下其值应分别为0.135、0.271、0.407、0.543，如测定值与理论值不符合。 日常工作中测得的A值×367.7×K=Hbg／L或者将一血红蛋白含量较高的样品，分别稀释成1／4、1／2、3／4和原液四个梯度进行线性校正，仪器在200 g／L范围内应有良好线性，重复性试验 CV应≤2％。 2.比色皿的光径和透光度标准比色皿的光径和透光度应符合下述标准：光径1 cm的比色皿误差应<0.005 cm。 3.质控物的应用用来校准仪器和控制实验准确度的制品称为参考品；用于控制实验精密度的制品称为质控品(物)。 4.质控要求手工操作OCV≤3％，RCV≤6％，EQA DI≤2。 (四)红细胞计数和血红蛋白测定的临床意义 通常情况下，单位容积血液中红细胞数量与血红蛋白量大致呈平行的相对应关系。健康成人的红细胞数与血红蛋白量的比例约为100：3，故两者测定的意义大致相同。但在某些情况下，特别是在红细胞内血红蛋白浓度发生改变的贫血时，两者的减少程度往往不一致。如小细胞低色素性贫血时，血红蛋白的降低程度较红细胞明显，大细胞性贫血时，红细胞数量减少程度比血红蛋白下降程度明显，因此同时对患者的红细胞和血红蛋白量进行比较，对诊断就更有意义。 1.红细胞及血红蛋白增多是指单位容积血液中红细胞数及血红蛋白量高于正常参考值高限。一般来讲，经多次检查，成年男性红细胞>6.0×1012／L，血红蛋白>170 g／L；成年女性红细胞>5.5×1012／L，血红蛋白>160 g／L时即认为红细胞血红蛋白增多。一般分为相对增多和绝对增多两类： (1)相对增多：指因血浆容量减少，造成红细胞数量相对增加。见于严重呕吐、腹泻、大量出汗、大面积烧伤、慢性肾上腺皮质功能减退、尿崩症、甲状腺功能亢进症危象、糖尿病酮症酸中毒等疾病。 (2)绝对增多：临床上称为红细胞增多症，是一种由多种原因引起红细胞增多的症候群。按发病原因可分为继发性和原发性两类。 ①继发性红细胞增多症：是一种非造血系统疾病，发病的主要原因是因为血液中促红细胞生成素增多。 ②原发性红细胞增多症：即真性红细胞增多症，是一种原因未明的以红细胞增多为主的骨髓增殖性疾病，目前认为是多功能造血干细胞受累所致。其特点是红细胞持续性显著增多，甚至可达(7～10)×1012／L，血红蛋白180～240g/L，全身总血容量也增加，白细胞和血小板也有不同程度增多。本病属慢性病和良性增生，但具有潜在恶性趋向，部分可转变为白血病。 2.红细胞及血红蛋白减少指单位容积循环血液中红细胞数、血红蛋白量都低于正常参考值低限，通常称为贫血。临床上根据血红蛋白减低的程度将贫血分为4级：①轻度：血红蛋白<参考值低限至90g/L；②中度，90～60g/L；③重度：60～30g/L；④极重度：<30g/L。参考文献 [1]刘兰廷,黄如衡.高铁血红蛋白简易测定法[J];军事医学科学院院刊;1986年03期. [2]陈耀强,王婧,万家义,谢均.血红蛋白的分子结构及与其载氧功能相关的药物研究进展[J];绵阳师范学院学报;2004年05期. [3]沈高山,谷怀民,闫天秀,魏华江.亚硝酸钠和氧合血红蛋白反应的拉曼光谱[J];中国激光;2008年09期. [4]李清文,高宏,黄昊,王义明,冯军,罗国安.血红蛋白与NO分子间相互作用的电化学表征[J].高等学校化学学报;2001年08期.
血红蛋白测定及注意事项
（2）以上述同样的方法取血，并使血红蛋白转化为氰化高铁血红蛋白。然后以转化液作空白，测定标本吸光度A。 （3）通过标准曲线查出待测样本的血红蛋白浓度或用K值来计算血红蛋白浓度，即Hb（g·L-1）=K×A (6.2-2) 3.使用沙里氏血红蛋白计测定 沙里氏比色法是用HCl使血红蛋白酸化形成棕色的高铁血红蛋白，然后和标准比色板进行比色。 （1）沙里血红蛋白计主要具有标准褐色玻璃比色箱和1只方形刻度测定管组成。比色管两侧通常有两行刻度；一侧为血红蛋白量的绝对值，以g·dl-1(每100 ml血液中所含血红蛋白的克数)表示，从2～22 g；另一侧为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，从10%～160%。为避免所使用的平均值不一致，因此一般采用绝对值来表示。 （2）具体测定方法如下： ①用滴管加5～6滴，0.1mol·L-1 HCl到刻度管内,(约加到管下方刻度”2”或多或10%处)。 ②用微量采血管吸血至20 μl(方法同上述)，仔细揩去吸管外的血液。 ③将吸血管中的血液轻轻吹到比色管的底部，再吸上清液洗吸管3次。操作时勿产生气泡,以免影响比色。用细玻棒轻轻搅动，使血液与盐酸充分混合，静置10 min，使管内的盐酸和血红蛋白完全作用，形成棕色的高铁血红蛋白。 ④把比色管插入标准比色箱两色柱中央的空格中。 ⑤使无刻度的两面位于空格的前后方向，便于透光和比色。用滴管向比色管内逐滴加入蒸馏水，并不断搅匀，边滴，边观察、边对着自然光进行比色，直到溶液的颜色与标准比色板的颜色一致为止。 ⑥读出管内液体面所在的克数，即是每100 ml血中所含的血红蛋白的克数。比色前，应将玻棒抽出来，其上面的液体应沥干净，读数应以溶液凹面最低处相一致的刻度为准。换算成每升血液中含血红蛋白克数（g·L-1）。 [注意事项] 1.取血前要做好充分的消毒。 2.血液要准确吸取20 μl，若有气泡或血液被吸入采血管的乳胶头中都应将吸管洗涤干净，重新吸血。洗涤方法是：先用清水将血迹洗去，然后再依次吸取蒸馏水、95%酒精、乙醚洗涤采血管1～2次，使采血管内干净、干燥。作为学生练习，微量采血管可反复使用。 3.使用血红蛋白仪测定时，吸样管应插入试管底部，避免吸入气泡，否则会影响测试结果。仪器连续使用时，每隔4小时要观察一次零点，即吸入文齐试剂，用“调零旋钮”使仪器恢复到零点。仪器用完后，关机前要用清洗液清洗。否则会影响零点的调整。 [实验结果] 报告该实验动物的血红蛋白浓度。并将全班的结果加以统计,用平均值±标准差表示。[思考题] 血红蛋白的含量与年龄的关系？ 影响血红蛋白含量的主要因素？※1.HiCN转化液：即文齐氏液，有标准商品出售。也可配制：高铁氰化钾(K3Fe（CN）6)200 mg，氰化钾（KCN）50 mg，无水磷酸二氢钾（KH2PO4）140 mg，Triton X-100 1.0 ml，蒸馏水加至1000 ml。过滤后为淡黄色透明液体，pH 7.0～7.4，置有色瓶中加盖、冷暗处保存。如发现试剂变绿、变浑浊则不能使用。 2.用分光光度计直接测定血红蛋白 （1）取血、血红蛋白转化和比色同前述1、2的方法，得到标本的吸光度A。 （2）根据标本吸光度A直接计算出血红蛋白浓度：
血红蛋白浓度测定及医学意义
血红蛋白浓度测定及医学意义 血红蛋白（hemiglobin）测定是一项非常普及的血液学检测项目，其最广泛的应用就是判断你是否贫血，虽然它不是血液细胞学检测项目，但常包含在血常规细胞学检测项目里与血液细胞学分析同时测定。该项目以前也称为血色素测定，该项目的英文缩写是HGB或Hb，正常参考值范围如下： 成年男性：120～160 g/L(12.0～16.0 g/dL) 成年女性：110～150 g/L(11.0～15.0 g/dL) 新生儿：170～200 g/L(17．0～20．0 g/dL) 血红蛋白浓度测定的临床意义 分为生理性或病理性增高和减低。 1．生理性增高：住在高原地区的居民其红细胞和血红蛋白往往高于平原地区的居民。饮水过少或出汗过多，排除水分过多可导致暂时性的血液浓缩，造成红细胞和血红蛋白轻度升高。新生儿则为生理性增高。 2．生理性减低：婴儿从出生3个月起到15岁以前的儿童，因身体发育较快，造成红细胞和血红蛋白相对生成不足，因而出现相对的减低，可能比正常成人低约10％～20％。孕妇在妊娠的中后期因血浆容量增加，导致血液被稀释；老年人因为骨髓造血机能减低，可能导致红细胞和血红蛋白的减少，也称为生理性贫血，此时需要进行适当的营养与治疗，并不意味着患有贫血性疾病或疾病导致的贫血。 3．病理性升高： (1)严重呕吐，腹泻，大量出汗，大面积烧伤病人，尿崩症，甲状腺功能亢进危象，糖尿病酸中毒等，由于血浆中水分丢失过多，导致血液浓缩，会出现红细胞和血红蛋白量的明显增加。 (2)慢性心脏病、肺源性心脏病、子绀型先天性心脏病等因为组织缺氧，血液中促红细胞生成素增多而使血液中红细胞和血红蛋白量呈代偿性增加。 (3)某些肿瘤，如肾癌，肝细胞癌，子宫肌瘤，卵巢癌，肾胚胎癌等也可使促红细胞生成素呈非代偿性增加，导致上述的结果。 (4)真性红细胞增多症是一种原因不明的以红细胞增多为主的血液疾病。 4．病理性减低：
血红蛋白的测定
血红蛋白的测定 ——沙利氏比色法 测定血红蛋白的方法很多，常见的有直接比色法，光电比色法，沙利氏(Sahli) 目视比色法（间接比色法）。Sahli氏目视比色法虽然精确度较差，但方法简便快速。 【目的】了解Hb测定方法，练习测定Hb含量的沙利氏比色法，理解Hb测定原理。【原理】血液与盐酸作用后，释放出血红蛋白，Hb被酸化后变为褐色的盐酸高铁血红蛋白，与标准色柱相比，便可测出其含量。【器材与试剂】 （1）沙利氏血红蛋白计一套 吸管为一厚壁毛细玻璃管，其上有10微升和20微升两个刻度，上端接一橡皮吸管。比色架内有标准色柱。测定管上有两种刻度，从下往上，一侧有2—24的刻度，表示100m1血液中所含血红蛋白克数，以g/dl 表示；另一侧有20—160的刻度，表示100ml 血液中血红蛋白的百分数。国产的血红蛋白计是以每100ml血液含14.5g血红蛋白为100％而设制。 （2）0.1M盐酸 （3）75%酒精棉球、干棉球、采血针、蒸馏水 【步骤】 （1）将测定管和吸管依次用自来水、９５％酒精洗净，干燥备用。 （2）向测定管内加入0.1M盐酸5-6滴，约加到管下端刻度“2”为止。 （3）采血、比色：先消毒无名指尖，再用采血针在无名指尖处采血，用干棉球擦去第一滴血，待第二滴血自然流出一大滴时，用吸管取血液20ul。擦去吸管外血液后，轻轻加入测定管底部，并回吸数次以洗出吸管中的血液。轻轻振动比色管，使血液与盐酸充分混合。 （4）静置10min，待血液变成褐色后，缓缓滴加蒸馏水，每加1滴，用细玻璃棒搅动一次，直到颜色与标准色柱完全相同为止。液柱凹面所指的刻度数，即为每百毫升血液中血红蛋白的克数，用g/dl或g％表示。
血浆游离血红蛋白测定试剂盒(比色法)产品技术要求ruierda
血浆游离血红蛋白测定试剂盒（比色法） 适用范围：该试剂用于定量测定人血浆中游离血红蛋白的含量。 1. 产品型号/规格及其划分说明 1.1试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml ×1 2. 性能指标 1、试剂空白 试剂空白吸光度值≤0.18。 2、线性区间 测量范围[0.025，0.400] g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。 3、准确度 回收率90%～110% 4、分析灵敏度 血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。 5、精密度 a）重复性 变异系数≤10%。 b）批间差 连续三批血浆游离血红蛋白试剂盒测定同份血浆样本，其测定值的批间差≤10%。 【包装规格】 试剂1（R1）：100ml×1，试剂2（R2）：100ml×1，试剂3（R3）：10ml×1
【主要组成成 分】 R1：TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/L R2：4-氨基安替比林 5mmol/L R3：过氧化氢3.0% 【产品性能指标】 1. 试剂空白吸光度值≤0.18。 2. 线性区间 测量范围[0.025，0.400 ]g/L,相关系数r≥0.99；相对线性偏差≤12%。 3. 重复性：变异系数≤10%。 4. 准确度： 4.1 型式检验：回收率90%～110% 4.2 出厂检验：检测控质控品，结果在靶值±2SD范围内。 5. 灵敏度：血浆血红蛋白0.025g/L测定吸光度差值（△A）≥0.05。 ”变更为“ 产品技术要求 1. 产品型号/ 规格及其划分说明
1.1 试剂 1（R1）：100ml×1，试剂 2（R2）：100ml×1，试剂 3（R3）：10ml ×1 校准品：2ml×1（选配）；质控品：2ml×1（选配） 1.2 组成成份： 试剂 1（R1） TBHBA 10mmol/L，稳定剂 100mmol/L 试剂 2（R2） 4-氨基安替比林 5mmol/L 试剂 3（R3）过氧化氢 3.0% 校准品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白 0.100g/L（目标浓度） 质控品：水基质，氰化高铁游离血红蛋白0.146 g -0.236g/L 。 注：校准品、质控品浓度具有批差异性，详见标签。 2. 性能指标 2.1 外观 试剂为无色透明无沉淀及絮状浮物溶液，校准品、质控品外观为无色透明液体。 2.2 装量 试剂净含量不少于标示值。 2.3 试剂空白 试剂空白吸光度值≤0.18。 2.4 线性区间 测量范围[0.025，0.400] g/L,相关系数 r≥0.99；相对线性偏差≤12%。 2.5 准确度 回收率 90%～110% 2.6 分析灵敏度
血红蛋白测定
血红蛋白测定 【实验目的】 掌握血红蛋白测定的临床意义 熟悉毛细管采血过程，分光光度计的操作 了解血红蛋白测定的注意事项 【实验原理】 血液在血红蛋白转化液中表面活性剂的作用下溶血后，血红蛋白（除SHb外）被高铁氰化钾（K3Fe（CN）6）氧化为高铁血红蛋白（Hi），Hi再与氰化钾（KCN）中的氰离子（CN-）结合生成稳定的棕红色氰化高铁血红蛋白（HiCN）。HiCN最大吸收波峰在540nm,最小吸收谷为504nm。可用分光光度计直接测定或用HiCN 标准液比色法测定。即可求出待测血红蛋白浓度。此法称HiCN法。 【试剂】 血红蛋白转化液（文齐氏液，Van kampen-Zijlstra’液）： 氰化钾50 mg ，提供氰离子（CN-） 高铁氰化钾200 mg ，氧化剂 无水磷酸二氢钾140 mg ，缓冲液成分，维持溶液的pH值， 【实验操作】 ????（1）取一支试管加入5.0ml HiCN试剂，取全血20μl，加入到5.0ml HiCN试剂中，混匀后静置5 min，使血红蛋白转化完全。 ????（2）分光光度计，波长540nm ，比色杯光径1.0cm ，杯温20-300C，以蒸馏水或空白转化液调零，测定样品吸光度值（A）。 【计算】 根据比尔定律，浓度与吸光度成正比，所以实际操作中我们还可以直接用待测液的吸光度A测/标准液的吸光度A标＝待测液的浓度C测/标准液的浓度C标来直接计算待测液的浓度。【参考值】 男性：120 ~160g／L ，女性：110 ~150g／L ，新生儿：170 ~200g／L 。 【临床意义】 照书上写
图1 红细胞和血红蛋白的生理变化曲线 红细胞计数医学决定水平：高于6.8×1012/L，应采取相应治疗措施；低于3.5×1012/L可诊断贫血；低于1.5×1012/L应考虑输血。
实验6血红蛋白含量测定
实验6 血红蛋白含量的测定（必修） 酸化血红蛋白稀释测定法（改良沙利氏法） [目的与原理] 掌握测定鱼类血红蛋白含量的原理和方法，应用改良沙利氏法测定不同鱼类血红蛋白含量。 本实验是应用比色法测定鱼的血红蛋白量。血红蛋白本身的色泽，常随所结合的氧量多少而改变，不便比色。但是加入稀盐酸于血液中可使血红蛋白变成不易变色的高铁血红蛋白，这就可以与标准色相比，从而测出其含量。通常以每100ml血液中含血红蛋白克数来表示，正常鱼血红蛋白含量为7—8g。 [实验对象] 鲤、鲫或草鱼。 [试剂与器材] 血红蛋白比色计，搪瓷盘，注射器，凹瓷盘，小试管，试管架，蒸馏水，75%酒精，棉球，0.1mol/L盐酸（配置盐酸用具），蒸馏水，滴管，纱布，烧杯，抗凝剂（1%肝素钠溶液或10%草酸钾溶液）。 [实验步骤] 1、了解血红蛋白比色计的构成血红蛋白计主要包括吸血管、比色计和比色管等部件。吸血管为一厚壁毛细玻璃管，其上有10μl、20μl的刻度，尾端连有橡皮头，供吸血用。比色计的两侧，装有标准浓度的高铁血红蛋白溶液，也有用比色玻璃柱（或片）来代替的。比色管可插在比色计中，与两侧的标准比色柱进行比色。比色管的两侧通常刻有两行刻度。一行为血红蛋白的绝对值，以g计数（每100毫升血液中所含血红蛋白的克数）来表示，刻度范围为2～22。另一行为血红蛋白相对值，以%（即相当于正常平均值的百分数）来表示，刻度范围为10%～160%。目前测定常用绝对值来表示。 2、用蒸馏水将比色管洗净，吸血管则依次用蒸馏水，95%酒精和乙醚洗净干燥备用。 3、用滴管加0.1mol/L盐酸4—6滴到刻度比色管内，约加到管下端刻度“2”或“10%”处为止。 4、采血：采血方法见实验49，用吸血管吸血至20μl刻度（要准确）。用绵球仔细将管尖端外面的血拭去。 5、将吸血管中血液轻轻地滴到比色管中盐酸底部，并用上层较清的盐酸溶液反复清洗吸血管3次。使吸血管内的血液完全洗净。切勿带入空气，以至形成气泡影响比色。吸血管尖端残留的液体，应在比色管内壁上沥净。取出吸血管后，轻轻摇动比色管使血液与盐酸充分混合，静置15分钟使管内的盐酸和血红蛋白作用完全，形成棕色的高铁血红蛋白。 6、把比色管插入标准比色架两色柱中央的空格中，使无刻度的两侧面位于空格的前后方，便于透光和比色。 7、用吸管将蒸馏水逐滴地加入比色管内，每加一滴都应充分混匀并观察比色管内的颜色，直到比色管内溶液的色度和血红蛋白计上标准色度相同时为准，读出管内液面所在的刻度数，（读数应以溶液凹面最低点相一致的刻度为佳）。即为每100ml血液中所含血红蛋白的克数（用g/100ml表示）。 8、实验完毕应将吸血管和比色管洗净，放回盒内。 [方法评估] 采用目视比色法测定血红蛋白含量是比较常用及简便的方法，但此法误差较大，而且同仪器的准确度有关。 [应用意义]