教你如何看懂花了好几千的免疫组化报告单

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免疫组化是用标记的特异性抗原(抗体)对组织内抗体(抗原)的分布进行检测。免疫组化虽然价钱昂贵,却有不能替代的作用:

①恶性肿瘤的诊断和鉴别②确定转移性恶性肿瘤的原发部位③对某类肿瘤进行病理分型④明确软组织肿瘤的正确组织学分类,明确软组织的诊断⑤发现微小转移灶⑥为临床治疗方案提供支持虽然免疫组化有那么多作用,但是很多患友拿到手了根本就看不懂,都是些英文缩写,代表着什么意思呀,别着急,下面小编就按照字母顺序列张表,告诉大家各个代表什么意思:

项目临床意义Actin肌动蛋白,间叶组织来源标记,平滑肌、血管内皮、肌上皮组织表达。AE1/AE3细胞角蛋白

AE1/AE3,标记上皮及上皮来源的肿瘤,鉴别和判断转移性肿瘤是否为上皮源性,如胆管细胞阳性,肝细胞阴性,鉴别肝癌和胆管癌。AFP甲胎蛋白,肝癌细胞表达,胃和肝脏同时肿瘤时,胃肝样腺癌HepPar-1、AFP、CK19 和CDX-2等4 种不同程度阳性表达,而肝细胞癌CK19 和CDX-2不表达。ALK间变型淋巴瘤激酶,用于淋巴造血来源标记,间变性大细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和炎症性肌纤维母细胞瘤的诊断。AMACR甲基酰基辅酶A消旋酶,癌特异

性指标,只存在于癌症组织。结肠直肠癌、卵巢癌、乳腺癌、膀胱癌、肺癌、淋巴瘤和黑素瘤等过度表达,以结直肠癌和前列腺癌表达最高。Bax促进凋亡蛋白,同Fas/FasL。Bcl-2抑制细胞凋亡相关基因-2,肿瘤预后指标,高表达者对多数抗癌药物、放射治疗耐受,高表达者预后差。Bcl-6B淋巴细胞凋亡相关基因-6,抑制细胞凋亡作用,淋巴造血细胞来源标记,用于B淋巴瘤诊断。Bel-XL抑制细胞凋亡相关基因-XL,Bcl-2 抑制细胞凋亡基因家族成员之一,作用同Bcl-2 。Cam5.2人角蛋白抗原决定簇,正常分泌上皮表达,复层鳞状上皮不表达,用于鉴别腺癌和鳞癌。CD10分化簇10,间叶组织来源标记,未成熟淋巴细胞阳性表达,用于B细胞淋巴瘤、慢性髓性白血病等诊断,某些非造血肿瘤子宫内膜间质肉瘤、恶性黑色素瘤、肾细胞癌也可阳性。CD117分化簇117,间叶组织来源标记,胃肠间质瘤细胞阳性表达,阳性者可用格列卫靶向治疗。某些肿瘤如黑色瘤、白血病、皮肤纤维瘤、血管肉瘤、尤文氏瘤、胶质瘤也可阳性。CD14脂多糖LPS受体,单核细胞、巨噬细胞等细胞表面分化抗原,用于单核细胞和组织细胞相关病的鉴别诊断。CD15半乳糖、岩藻糖和N-乙酰葡萄糖组成的碳水化合物抗原,又称半抗原χ,是粒/单核细胞相关抗原标记,成熟粒细胞、激活的淋巴细胞(主要是T淋巴细胞)、R-S细胞、大多数腺癌等阳性表达。用于霍奇金淋巴瘤、胃癌、结直肠癌、甲状腺癌、乳腺

癌等诊断。表达随癌细胞分化程度下降、淋巴结转移和临床分期增高而明显增高,判断肿瘤的发展、预测淋巴结转移和预后良好指标。CD1a树突状细胞DC表面抗原递呈分子,DC发挥抗肿瘤免疫作用的特征标记,肿瘤组织表达减少,肿瘤细胞逃脱免疫监视,恶性程度高预后差。CD20L26分化簇20,淋巴组织源性标记,B细胞标记抗体。用于B淋巴瘤诊断,阳性者可用Rituxan或Zavalin靶向治疗。CD3T细胞的共受体是一种蛋白质复合物,标记胸腺细胞、T淋巴细胞,用于T细胞淋巴瘤诊断。CD31分化簇31,血管内皮表达。CD31是血管内皮分化的标志,现在强阳性提示肿瘤细胞具有血管内皮分化,而CD34是间质起源,用在血管肿瘤诊断时提示血管肿瘤起源。CD34分化簇34,间叶组织来源标记,血管内皮细胞表达用于血管源性肿瘤的诊断,胃肠间质瘤、乳腺叶状肿瘤、孤立性纤维肿瘤、黏液性脂肪瘤可阳性。而CD31强阳提示肿瘤细胞具有血管内皮分化。CD44分化簇44,跨膜糖蛋白分子,肿瘤预后指标,CD44s透明质酸受体,结合透明质酸后影响肿瘤的生长和转移。CD44v 淋巴转移的肿瘤细胞表达,提示肿瘤细胞的侵袭性与易转移性强。CD45CD45RACD45RO分化簇45,淋巴组织源性标记,T细胞标记抗体,白细胞共同抗原Ⅰ型跨膜蛋白, 在机体免疫应答中,CD45RA 阳性T 细胞遇抗原刺激后以增殖反应为主,CD45RO 阳性T 细胞以分泌细胞因子产生免疫效应为主。

用于自身免疫疾病诊断和随访。CD56分化簇56,神经内分泌标记,神经细胞黏附分子阳性表达,用于神经外胚层细胞来源星型细胞瘤、神经母胞瘤、神经内分泌肿瘤诊断。NK 细胞瘤、小细胞肺癌也可阳性。CD68分化簇68,淋巴组织源性标,骨髓和神经组织巨噬细胞源表达,用于粒细胞白血病、单核细胞白血病、恶性纤维组织细胞瘤诊断。CD79-aB 淋巴细胞抗原受体复合物,B淋巴组织源性标记,用于B细胞淋巴瘤的诊断。CD99分化簇99,小圆细胞标记,用于神经外胚层肿瘤骨尤文肉瘤诊断,其它肿瘤特异性差。CEA癌胚抗原,上皮来原标记,用于内胚层来源发肿瘤如胃癌、肠道癌、胰腺癌和肺腺癌等诊断,少量成人上皮细胞和良性肿瘤亦可表达。C-erbB-2NeuHER-2原癌基因蛋白表达产物

P185,增殖活性标记,乳腺癌、卵巢癌、胃癌、食管癌、涎腺肿瘤、肺癌、胆管癌、膀胱癌、前列腺癌、结直肠癌等均有阳性表达。表达越高多药耐药可能越大、恶性程度越高。乳腺癌ER、PE、C-erbB-2同时阳性三苯氧胺治疗效果不好,但提示可以Herceptin赫赛汀治疗。CgA嗜铬蛋白颗粒A,神经内分泌细胞标记,几乎所有的神经内分泌肿瘤中均可检测到嗜铬素。用于于所有含有颗粒的内分泌细胞和神经内分泌细胞来源的肿瘤的诊断。Chr嗜铬素,神经内分泌肿瘤标记,用于神经内分泌肿瘤诊断,鉴别肾上腺髓质和皮质源肿瘤。CK细胞角蛋白,上皮来源标记,鉴别和判断转移性肿

瘤是否为上皮源性。CK14细胞角蛋白14,肌上皮来源标记,用于鉴别肿瘤基底细胞上皮和肌上皮来源,鳞状上皮也可阳性表达。CK18细胞角蛋白18,上皮性肿瘤标记,各种单层上皮包括腺上皮标记,诊断小细胞癌、胸腺瘤、梭形细胞癌、肝细胞癌诊断;复层鳞状上皮阴性,用于鉴别鳞癌。CK19细胞角蛋白19,上皮性肿瘤标记,单层上皮和间皮标记,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,胆管上皮阳性反应,鉴别肝癌和胆管癌。CK20细胞角蛋白20,胃肠上皮移行上皮Merkel 细胞来源标记,用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断,鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜/卵巢非黏液性肿瘤、神经内分泌肿瘤常阴性用于鉴别。CK5/6细胞角蛋白5/6,上皮来源标记,鳞状上皮和导管上皮的基底细胞以及部分的鳞状上皮生发层细胞、肌上皮细胞和间皮细胞阳性,腺上皮细胞阴性,用于鳞癌和腺癌、间皮瘤和腺癌的鉴别诊断,支气管上皮基底细胞、间皮;鳞癌、大细胞癌、移行细胞癌、间皮瘤阳性。大多数腺癌为阴性。CK7细胞角蛋白7,上皮来源标记,通常在腺癌中表达,腺上皮和移行上皮细胞表达,非上皮来源细胞无表达。在卵巢、乳腺和肺的腺癌呈阳性反应,而胃肠道的腺癌阴性。用于卵巢、肺和乳腺癌诊断,结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性用于鉴别诊断。CKH高分子角蛋白,鳞状细胞肿瘤标记,用于鳞状细胞肿瘤诊断。CKL低分之角蛋白,单层上皮、腺上皮标记,用于腺

上皮来源肿瘤诊断。CK-Pan上皮来源标记,同AE1/AE3CT 降钙素, 内分泌细胞标标记,用于甲状腺髓样癌诊断。DesDesmin结蛋白,间叶组织来源标记,平滑肌和横纹肌可检测到结蛋白,用于平滑肌、骨骼肌细胞和肌上皮细胞肿瘤诊断,高分化高表达、低分化低表达。DOG-1间叶组织来源标记,用于源于Cajal 细胞胃肠间质瘤诊断。E-CaE钙粘附蛋白,肿瘤增殖活性与凋亡标记,阳性表达细胞之间连接的破坏,肿瘤侵袭和转移性强。EGRF抗表皮生长因子,结直肠癌表达阳性可用Erbitux(Cetuximab)爱必妥(西妥昔单)抗靶向治疗。EK表皮角蛋白,上皮性肿瘤诊断标记,用于鳞状上皮或高分化鳞癌诊断。EMA上皮膜抗原,上皮来源标记,广泛分布于各种上皮细胞,低/未分化上皮高表达;用于多数的癌、间皮瘤、滑膜肉瘤和上皮样肉瘤等,间变大细胞、恶性横纹肌样瘤也可阳性。淋巴瘤、黑色素瘤和软组织肿瘤阴性表达。过表达与肿瘤侵袭程度有关。ER雌激素受体,内分泌细胞标记,肿瘤组织阳性率越高,肿瘤对内分泌治疗越有效,预后越好。FasFasLT细胞表面促进凋亡蛋白,维持T细胞总量平衡,T细胞标记,过少表达与免疫功能紊乱、淋巴结脾肿大、多种自身免疫疾病相关,过度表达T细胞易被CTL识别杀伤免疫功能低下。GA733肿瘤相关抗原,编码上皮糖蛋白40,上皮细胞黏附分子(EP-CAM),对上皮细胞的生长与分化起着重要作用。多种肿瘤可有GA733

表达,尤其是乳腺癌、结肠癌及肺癌等。非小细胞肺癌手术切除淋巴结中隐匿性微转移灶表达阳性预后差。结肠癌细胞膜及细胞浆表达预后较基膜侧的表达为差。GFAP胶质纤维酸性蛋白,神经来源标记,脑胶质细胞阳性表达,多用于星形胶质瘤诊断。GST-π谷光甘肽S转移酶(GST π)多药耐药相关基因表达产物,:阳性率越高对下列药物耐药性越强:阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。谷光甘肽S转移酶--解毒作用--胞浆--阳性率越高,对下列药物耐药性越强:阿霉素、顺铂、氮芥、环磷酰胺、瘤可宁。HAS上皮来源标记,用于判断上皮来源肿瘤。HBME1间皮细胞标记,鉴别间皮瘤与腺癌参考,间皮瘤为厚膜型,腺癌为薄膜型或胞浆着色。HCG性腺来源标记,用于判断性腺上皮来源肿瘤。Hep par1肝细胞抗原,正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。HepPar肝细胞抗原,在正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。HER-2原癌基因,同C-erbB-2,胃癌生物学行为及预后的指标,HER-2 (3 )及HER-2 (2 )时应进一步FISH 检测分析HER-2基因状态,野生型可用赫赛汀靶向治疗。HMB45上皮性肿瘤标记,恶性黑色素瘤阳性表达。Inhibin-a 性腺来源标记,判断性腺上皮来源肿瘤。Ki-67Ki-67,细胞增殖标志,细胞周期G1、S、G2、M 期表达,G0 期缺如,阳性率越高,肿瘤增殖越快,分化差、浸润转移快、预后差,

共认的肿瘤预后指标。LCA详见CD45,淋巴组织源性标记,淋巴网状细胞一线标记抗体LH性腺来源标记,判断性腺上皮来源肿瘤。MDRP-gp多药耐药(MDR)基因编码P-糖蛋白(P-170),蛋白位于细胞膜上,有药物泵作用,将进入细胞的药物泵出细胞外而使细胞产生耐药,阳性率越高对下列药物耐药性越强:阿霉素、柔红霉素、表阿霉素、米托蒽醌、长春花碱、长春新碱、紫彬醇、泰素帝。Melan A间叶组织来源标记,用于黑色素细胞瘤诊断和转移性肿瘤的鉴别诊断,比HMB-45敏感。MNF-116细胞角蛋白共同的抗原决定簇,上皮来源一线标记,用于鳞癌、小细胞癌、肉瘤样癌/梭形细胞癌、腺癌、间皮瘤(纤维状细胞)、滑膜肉瘤、血管肿瘤、平滑肌肿瘤和浆细胞瘤等诊断。MOC-31上皮细胞来源标记,大多数腺癌为阳性,而间皮瘤通常为阴性。MRP1ABCC1基因表达的多药耐药相关蛋白,药泵作用,肺癌、乳腺癌、前列腺癌等肿瘤阳性表达,化疗敏感性差、预后不良。MSA肌特异性肌动蛋白,广泛分布于几乎所有肌型细胞中用于肌源性来源肿瘤鉴别。MSI微卫星不稳定性,遗传性结直肠癌如阳性表达,90%诊断Lynch综合征(遗传性非息肉性结直肠癌,错配修复基因胚系突变)和10-15%诊断散发性MSI阳性结直肠癌(错配修复基因MLH1基因启动子甲基化)。mtp53

同Bcl-2Myosin肌红蛋白,间叶组织来源标记,用于横纹肌来源肿瘤鉴别。Myotlobin肌球蛋白,间叶组织来源标记,

用于横纹肌来源肿瘤鉴别。NESTIN神经组织源性标记,用于神经干细胞来源肿瘤鉴别。NEU同Her-2, C-erbB-2NF神经纤维细丝蛋白,神经组织源性标记,用于神经组织源性肿瘤鉴别。Nm23转移抑制基因,其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。用于乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、大肠癌、肝癌、喉癌等检测,高表达患者淋巴结转移率相对较低,存活期相对较长。N-myc是MYCN表达的一种螺旋蛋白,能导致肿瘤发生,多种肿瘤阳性表达,过度阳性表达如肺小细胞癌和神经母细胞瘤等化疗反应差,病情进展快。NSE神经内分泌肿瘤标记,神经原特异性烯醇化酶,神经内分泌肿瘤阳性表达Ost成骨素,骨化细胞阳性表达,用于骨肿瘤诊断。P16P16蛋白,上皮性肿瘤标记,用于宫颈癌预后判断,阳性表达者预后差。P504S上皮性肿瘤标记,甲酰基辅酶A,前列腺癌阳性表达,敏感性97%,特异性为100%。P53Mtp53一种抑癌基因,人类研究最多的基因,分野生型(Wtp53)和突变型(Mtp53)。野生型Wtp53因微量免疫组化难以检测,正常参与细胞从G0期进入G1期的负调节,而控制细胞的增生,同时诱导细胞的程序性死亡。突变型Mtp53能够被免疫组化测定,突变后则丧失了启动细胞凋亡的能力。突变型p53高表达,细胞的高度增生、分化程度差分化、恶性程度越高、预后不良,公认预后差指标之一。P63新发现抑癌基因表达蛋白,细胞周期中的刹车装置,一旦失灵则会导致细胞恶性

增殖,导致恶性肿瘤发生,阳性表达提示预后好。PCNA增殖细胞核抗原,增殖活性与凋亡标记,阳性表达肿瘤增殖快、预后差,目前公认的肿瘤预后差指标之一。P-gp同MDR。PH甲状旁腺素标记,甲状旁腺肿瘤阳性表达PLAP性腺来源标记,判断性腺来源肿瘤。PR孕激素受体,内分泌细胞标记,肿瘤组织阳性率越高,肿瘤对内分泌治疗越有效,预后越好。PS2雌激素调节蛋白,增殖活性标记,表达和ER 表达有关,可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。PSA 内分泌细胞标记,用于前列腺癌来源肿瘤的判断。RbRb基因表达蛋白,肿瘤抑制蛋白,抑制肿瘤细胞周期,但对多数肿瘤无作用,阳性表达意义尚不清。S-100神经组织来源标记,神经组织周围神经雪旺氏细胞阳性表达,神经内分泌肿瘤、垂体瘤、颈动脉体、肾上腺髓质、唾液腺、少数间叶组织阳性表达,用于神经鞘瘤、恶黑、脂肪肉瘤、软骨肿瘤诊断。SMA平滑肌肌动蛋白,间时组织来源标记,用于平滑肌来源肿瘤诊断。SP表面活性蛋白,肺表面活性物质含,用于细支气管肺泡癌诊断。Survivin抑制凋亡蛋白家族的新成员,具有肿瘤特异性,只表达于肿瘤和胚胎组织,且与肿瘤细胞的分化增殖及浸润转移密切相关,肿瘤组织阳性表达者肿瘤浸润转移率高,预后差。Syn突触素,存在于神经元突触前囊泡膜,神经性和上皮性神经内分泌肿瘤的特异性标志,用于神经内分泌肿瘤诊断。Tg甲状腺球蛋白,甲状腺癌Tg 阳

性表达。TGA72肿瘤相关抗原72,多种恶性上皮性肿瘤表达,尤其是乳腺癌、卵巢癌和结肠癌。正常上皮细胞、肉瘤、淋巴造血系统肿瘤通常阴性。乳腺癌高表达与肿瘤体积大、淋巴结转移瘤细胞分化差及高增殖活性有关。TOPOⅡ拓扑异构酶Ⅱ,多药耐药相关基因表达产物,阳性率越高对VP16、替尼泊苷、玫瑰树碱、新霉素、柔红霉素、表阿霉素、阿霉素、VM26等药物越有效。TS胸苷合成酶(TS),5-FU重要作用靶点,阳性以上,提示肿瘤细胞对5FU耐药。TTF-1甲状腺转录因子-1,甲状腺腺上皮和肺的上皮细胞表达,用于大多数肺小细胞癌、腺癌、少部分大细胞癌、大多数非典型神经内分泌肿瘤诊断,而肺鳞癌及绝大多数典型类癌阴性。非小细胞肺癌阳性表达强度与预后成呈负相关。甲状腺和良性腺瘤表达多,甲状腺乳头状癌与滤泡癌中表达少,未分化癌中不表达,恶性甲状腺病表达强度随年龄增加而增强,而且病变存瘤期长,复发机率高。VGEF抗血管内皮生因子,转移性结直肠癌表达阳性可用Avastin(Bevacizumab)安维汀(贝伐单抗)靶向治疗。Villin绒毛蛋白,刷状缘的上皮细胞表达,胃肠道癌、胰腺癌、肝癌、胆囊癌和胆管癌阳性表达率高,子宫内膜样腺癌、卵巢粘液性癌、肾细胞癌和小部分肺癌、肺类癌、甲状腺髓样癌和美克尔细胞瘤也可阳性表达。阴性表达胃肠道、胰腺、胆囊或胆管、乳腺癌、卵巢浆液性癌、尿道移行细胞癌和前列腺癌、间皮瘤来源可

能性极低。胃肠类癌阳性,胰腺胰岛细胞瘤阴性用于鉴别。VimVimentin波形蛋白,所有间(充)质细胞均有表达,是正常间叶细胞及其来源的肿瘤的特异性标志,在许多上皮细胞及其肿瘤中可与细胞角蛋白共表达。用于间皮瘤与腺癌鉴别,波形蛋白在间皮瘤中更常见与细胞角蛋白共表达。同时也是诊断有用的“对照标记”工具。

免疫组化技术全程原理

免疫组化技术全程原理 一、概念和常用方法介绍 1、定义 用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。 2、原理 根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素等)结合,最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。 2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。 3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较常用的方法;聚合物链接,如即用型二步法,此方法尤其适合于内源性生物素含量高的组织抗原检测。 4、目前几种常用免疫组化方法简单介绍 1)免疫荧光方法 是最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用较广。 2)免疫酶标方法

免疫组化操作步骤

免疫组化操作步骤集团标准化工作小组 #Q8QGGQT-GX8G08Q8-GNQGJ8-MHHGN#

免疫组化操作流程 试剂准备 1. PBS缓冲液(~): NaCl 137mmol/L,KCl L,Na2HPO4 L, KH2PO4 L。 2. L柠檬酸盐缓冲液(CB,,1000ml):柠檬酸三钠 3g,柠檬酸。即抗原修复液 : PBS+吐温-20(1000:1)洗液可全部运用PBST 4. 3% 甲醇-H2O2溶液:用30%H2O2和80%甲醇溶液配制。 5. 封片剂:中性树脂+二甲苯。 操作流程 免疫组织化学染色 SP法: 1. 脱蜡、水化: 脱蜡前,应将切片在60℃恒温箱中烘烤60~120分钟,观察石蜡应溶解。 从烤箱拿出切片后尽快置于二甲苯中浸泡30分钟,更换二甲苯后再浸泡30分钟; 无水乙醇中浸泡3分钟; 95%乙醇中浸泡3分钟; 70%乙醇中浸泡3分钟(我用80%); 50%乙醇中浸泡3分钟; 自来水中浸泡3分钟;

梯度脱蜡 2. 抗原修复:(用于福尔马林固定的石蜡包埋组织切片) 高压热修复高压锅里放少许水,用一量杯或容器(大小能容纳玻片架为宜)装抗原修复液放入高压锅里一起煮沸,再放入玻片架,盖上不锈钢高压锅的盖子,将排气阀门套上,待听到阀门冒气时,即可倒计时2min,之后将玻片杯一起放入凉水中,静置15min,平衡至室温。电磁炉1000W 2min。 3.丢弃抗原修复液,将玻片浸泡在去离子水中(时间不限)可省略 4.用组织笔沿组织边缘画线(可与组织边缘留适当间隙),画完立即放入PBST溶液中浸泡3遍X3min(三个容器,每个容器3min,时间不限制)。 5. 3%H2O2滴加在切片上,室温静置15分钟(3%的H2O2用30%的 H2O2加双蒸水稀释10倍,现配现用。目的为阻断内源性过氧化物酶); 6. PBST洗3次各3分钟(过三缸) 7. 滴加正常山羊血清封闭液,室温30分钟。用与一抗不同源的血清即可,本人用Western-blotting的含胎牛血清封闭液。 8. 甩去封闭液(注:不要冲洗),滴加一抗50ul(至少50ul否则易干片),4℃孵育过夜。4℃过夜后需在37℃复温45分钟(未验证:室温静置1小时或者4℃过夜或者37℃1小时。)。 9. PBST洗3次各3分钟;

医学检验《基础知识》考试题及答案

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一、A1 1、检测血糖时,实验室多采用血浆或血清而不使用全血的原因是 A、方便于同时检测其他生化指标 B、血细胞的糖酵解作用会使血中葡萄糖浓度降低 C、血细胞中的葡萄糖渗出使血中葡糖糖浓度升高 D、细菌污染使血中葡萄糖浓度升高 E、细菌污染使血中葡萄糖浓度降低 【正确答案】 B 【答案解析】由于红细胞内的G-6-PD可促使葡萄糖的酵解从而使血糖浓度降低。 2、与试带法检测白细胞的原理有关的酶是 A、粒细胞酯酶 B、酸性磷酸酶 C、碱性磷酸酶 D、过氧化物酶 E、单核细胞酯酶 【正确答案】 A 3、关于免疫耐受的描述,错误的是 A、免疫耐受是机体对抗原刺激表现出的特异性"免疫不应答"现象 B、T细胞和B细胞都可发生免疫耐受 C、免疫耐受机体对任何抗原均不应答 D、免疫耐受具有特异性 E、中枢免疫耐受状态可持续终身 【正确答案】 C 4、肾移植进行组织配型.优先考虑的是

A、AB0血型 B、HLA-DR C、HLA-DP D、HLA-A E、HLA-B 【正确答案】 B 5、下列何种疾病使中性粒细胞和单核细胞的调理、吞噬和杀伤能力受损 A、慢性肉芽肿 B、髓过氧化物酶 C、G-6-PD缺乏症 D、Shwachman综合征 E、类白血病 【正确答案】 A 【答案解析】慢性肉芽肿属原发性吞噬细胞功能缺陷,其中性粒细胞和单核细胞的调理、吞噬和杀伤能力受损。6、属于Ⅲ型超敏反应的疾病是 A、过敏性支气管哮喘 B、新生儿溶血症 C、接触性皮炎 D、过敏性休克 E、系统性红斑狼疮 【正确答案】 E 7、用密度梯度离心法分离的外周血单个核细胞,不含有 A、单核细胞 B、T细胞 C、B细胞 D、NK细胞 E、多形核粒细胞 【正确答案】 E 8、补体系统活化替代途径激活物主要是 A、结合抗原后的IgG类抗体 B、结合抗原后的IgM类抗体

免疫组化原理和步骤

免疫组化原理及步骤 免疫组化操作规程 一、实验原理与意义免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜(包括荧光显微镜、电子显微镜)的显像和放大作用,在细胞、亚细胞水平检测各种抗原物质(如蛋白质、多肽、酶、激素、病原体以及受体等)。 二、实验器材微波炉、吹风机、组化笔、湿盒、烤箱、振荡器、染缸、光学显微镜、纯木浆卫生纸、计时器和通风橱等。 三、试剂配制 1. 0.01 M PBS(pH 7.34 ):9.0 g NaCl + 50 ml 0.2 M PB 加双蒸水至1000 ml ; 1000 ml 0.2M PB (pH 7.4)=5.93 g NaH 2 PO 4 2·H 2 O +58.02 g Na 2 HPO 4 ·12H 2 O in 1000 ml 双蒸水或=190 ml A + 810 ml B (A. 0.2 M NaH 2 PO 4 2·H 2 O :15.6 g in 500 ml ddH 2 O ; B. 0.2 M Na 2 HPO 4 ·12H 2 O :71.632 g in 1000 ml dH 2 O )。 2. Citrate Buffered Saline (0.01 M 柠檬酸缓冲液, PH6.0 ):28 ml A + 72 ml B + 200 ml ddH 2 O (A.Citrate acid

(柠檬酸):10.5 g

加双蒸水至 1000 ml ; B.Citrate sodium (柠檬酸钠): 29.41 g 加 双蒸水至 1000 ml )。 3. 细胞通透液:由终浓度分别为 0.3% 双氧水和 0.5%Triton X-100 混合而成。配制方法是先用微波加热的 36 ml PBS ,再接着 加 120 ul TritonX-100, 并加热一儿,冷却至临用前加 0.4 ml 30 % H 2 O 2 。 4. 5%羊血清或封闭血清,用 PBS 稀释。 5. 含 0.03 % H 2 O 2 的 0.05 %DAB (避光) :用 20×DAB (1%, 10 mg/ml )5 ul +0.1 ul 30% H 2 O 2 +95 ul PBS 。 6. 一抗、二抗均用 PBS 稀释。 7. Xylene 、梯度 Ethanol (100 %×2、95%、80%、70%、50%)、 双蒸水、中性树胶(封裱剂)。 8. 苏木精染液: 四、操作步骤 1 、脱蜡、水化 60 ℃× 20 min →Xylene 2 × 10 minut ;es 80% ethanol 2 minutes ; 70% ethanol 2 minutes ; distilled water:5 min ; PBS 洗 3 次×3 min 。 1) 2) 3) 4) 5) 6) 7) 100% absolute ethanol :2 ×5 minutes ; 95% ethanol 2 minutes ;

免疫组化基本步骤

细胞免疫组化染色步骤 1.细胞爬片,取出后,PBS洗三遍,每次3分钟。4℃冷丙酮固定10分钟,(或用4%多聚甲醛固定30分钟),干燥30分钟。 2. 用PBS洗三次,每次5分钟,加3%过氧化氢30μl,室温孵育10分钟,(以消除内源性过氧化物酶的活性)蒸馏水冲洗,PBS洗三次,每次5分钟。 3.加1%的Triton X-100 30μl,室温孵育10分钟,增加细胞膜的通透性。蒸馏水冲洗,PBS洗三次,每次5分钟。 4.滴加正常山羊血清30μl,封闭非特异性结合位点,以消除非特异性染色,室温孵育30分钟,倾去勿洗。 5.滴加适当稀释度的一抗,空白对照组以PBS代替一抗,4℃湿盒孵育过夜。PBS洗三次,每次5分钟。 6.滴加生物素标记的二抗工作液30μl,室温孵育30分钟。PBS洗三次,每次5分钟。 7.滴加辣根酶标记链酶卵白素30μl,室温孵育30分钟。PBS洗三次,每次5分钟。 8.滴加DAB显色剂30μl,显微镜下观察显色,自来水冲洗。 9. 将处理好的玻片细胞核衬染:浸入苏木精染液染色2min,自来水洗,迅速过盐酸酒精溶液,自来水洗,过氨水溶液,自来水洗。 10.梯度酒精脱水,过70%酒精1次,95%酒精2次,无水乙醇3次,每次1min 11.二甲苯透明,过二甲苯溶液3次,每次1min。 12.中性树胶封片将有细胞的一面向下,用中性树脂封片。 稀盐酸酒精溶液:用75%酒精配制1%盐酸。 淡氨水溶液:在400ml自来水中滴2滴浓氨水(使细胞核蓝化) 另外:需1%TritonX-100增加细胞膜通透性。苏木素复染时间和盐酸酒精脱色时间需自己摸索,我是染5-6秒脱色1-2秒。盐酸酒精还可用70%乙醇配制1%盐酸。我没用淡氨水溶液。若为悬浮细胞则需涂片,20μl即可。

2016病理试题及答案

2016年北京市医师定期考核业务水平测评 (病理专业试卷) 单位:____________________________________________________ 姓名:_________________ 性别:_________ 身份证号:___________________________________________________________ 分数 共120分,75分合格。 A1型题(每题1分) 1.主动脉粥样硬化病变最严重受累的部位是() A.升主动脉 B.主动脉弓 C.降主动脉 D.腹主动脉 E.胸主动脉 2.心肌梗死最常发生的部位为() A.左心室侧壁 B.左心室前壁 C.左心室后壁 D.右心室前壁 E.室间隔后1/3A. 3.原发性良性高血压特征性病变是() A.细小动脉痉挛 B.细小动脉粥样硬化斑 C.细小动脉的硬化 D.细小动脉的纤维蛋白样坏死 E.细小动脉闭塞 4.风湿性心肌炎时,Aschoff小体最多见于() A.心内膜下结缔组织 B.心肌细胞间 C.心肌间质血管旁 D.心包脏层血管旁 E.心包壁层血管旁 5.动脉瘤最常见的部位是() A.肾动脉 B.冠状动脉 C.主动脉和脑血管 D.下肢动脉 E.肺动脉 6.以下不属于肥厚性心肌病特征的是() A.心脏肥大 B.心腔扩张 C.室间隔不均匀肥厚 D.舒张期充盈异常 E.左心室流出道受阻 7.肺腺癌呈阳性的标志物的是() A.CK5/6、TTF1 B.CK5/6、Napsin A C.Napsin A、TTF1 D.TTF1、P40 E.P40、CK5/6 8.肺鳞状细胞癌呈阳性的标志物的是() A.P40、CK5/6 B.CK5/6、Napsin A C.Napsin A、TTF1 D.TTF1、P40 E.CK5/6、TTF1 9.小细胞癌细胞核的大小() A.小于2个静止的淋巴细胞 B.小于3个静止的淋巴细胞 C.小于1个静止的淋巴细胞 D.小于4个静止的淋巴细胞 E.小于5个静止的淋巴细胞 10.肺神经内分泌肿瘤不包括() A.类癌 B.非典型性类癌 C.梭形细胞癌 D.大细胞神经内分泌癌 E.小细胞癌 11.肺硬化性肺泡细胞瘤的立方细胞和多角形细胞均呈阳性的标志物为() A.TTF1 B.CK7 C.AE1/AE3 D.Napsin A E.CgA 12.下列哪项不是胚胎性横纹肌肉瘤的好发部位()

免疫组化与免疫荧光的区别

免疫组化与免疫荧光 一、两者都是蛋白定位的检测(也就是确定蛋白是表达在细胞核/浆/膜)。 二、区别是: 1、概念和基本原理 免疫组织化学又称免疫细胞化学,是指带显色剂标记的特异性抗体在组织细胞原位通过抗原抗体反应和组织化学的呈色反应,对相应抗原进行定性、定位、定量测定的一项新技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙地结合起来,借助显微镜的现像和放大作用,在细胞,亚细胞水平检测各种抗原物质,并可在原位显示相应的基因和基因表达产物。免疫组织化学技术现已有:免疫荧光组织(细胞)化学技术、免疫酶组织(细胞)化学技术、亲和组织化学技术、免疫金银及铁标记免疫组织化学技术等。 免疫荧光组织(细胞)化学技术是采用荧光素标记的已知抗体(或抗原)作为探针,检测待测组织、细胞标本中的靶抗原(或抗体),形成的抗原抗体复合物上带有荧光素,在荧光显微镜下,由于受高压汞灯光源的紫外光照射,荧光素发出明亮的荧光,这样就可以分辨出抗原(或抗体)的所在位置及其性质,并可利用荧光定量技术计算抗原的含量。以达到对抗原物质定位、定性、定量测定的目的。 2、标本制作: 免疫荧光一般用冰冻切片,减少杂质干扰;而酶免疫组化一般用石蜡切片或冰冻切片均可以。 3、实验步骤:免疫荧光染色步骤简单,而酶免疫组化方法较为复杂,多了DAB显色过程。 4、染色后的标本保存:免疫荧光染色后的标本一般短时间拍照,时间长了荧光衰退;而酶免疫组化染色标本可以长期保存。 5、免疫组化结果除了知道蛋白是在细胞浆还是细胞膜表达高些,还可以用软件做相对定量分析。 6、免疫荧光得到的图片是彩色的,漂亮些,可以发高档次文章。 免疫学三大工具:免疫组化、Western、ELISA,分别用于定位,定性和定量。

免疫组化HE染色步骤

免疫组化H E染色步骤 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020

骨组织石蜡切片制作 步骤: 1.固定:切取骨缺损出的骨组织,用PBS冲洗,放入4%多聚甲醛缓冲 液内固定12—24h。 2.脱钙:将固定好的骨组织放入脱钙液中侵泡脱钙24h. 3.脱水:将固定好的骨组织用蒸馏水冲洗3次,再用50%的酒精冲洗2次,常规脱水,70%酒精(60min),80%酒精(40min),95%酒精(30min),100%酒精1(25min),100%酒精II(25min)。 4.透明:二甲苯I(35min),二甲苯II(35min)。 5.包埋:将透明处理后的骨组织依次侵入石蜡I1小时,石蜡II1小时。 6.切片:包埋后的组织块经修理后,用切片机切成4um的石蜡带,将组织石蜡块在50℃温水中展片,然后用干净的载玻片捞片。 7.烤片:将切好的组织片放入63℃恒温箱中烤片2小时。 免疫组化检测 步骤: 1.脱蜡:将组织切片放入62℃恒温箱中烘烤20min二甲苯1 (10min)二甲苯2(10min)。 2.水化:100%酒精1(2min)100%酒精(2min)95%酒精(2min) 80%酒精(2min)70%酒精(2min)。 冲洗3次,每次5min.。

4.抗原修复:将组织片置的柠檬酸缓冲液()中煮沸15min,自然冷 却至室温。 冲洗3次,每次5min。 6.阻断:3%去离子水37℃孵育10min,以灭活内源性过氧化物酶活 性。 冲洗3次,每次5min。 8.滴加1抗(GFP1:100稀释,4℃过夜) 冲洗3次,每次5min。 10.滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂1,37℃孵育,20min,PBS冲洗 3次,每次5min。 11.滴加二步法免疫组化检测试剂的试剂2,37℃孵育,20min,PBS冲洗 3次,每次5min。 显色5min。 13.自来水冲洗10min。 14.苏木精复染2min,盐酸酒精分化。 15.自来水冲洗10min。 16.常规脱水,透明,封片,镜检。 组织切片HE染色 步骤 1、将烘烤后的组织切片依次侵入二甲苯1,二甲苯II进行脱蜡各 10min。 2、脱蜡后的组织切片依次浸入无水乙醇I、无水乙醇II、95%酒精、80%酒精、70%酒精中各2min,PBS冲洗2次,每次5min。

1月全国自考病理学试题及答案解析

全国2018年1月高等教育自学考试 病理学试题 课程代码:02901 一、单项选择题(本大题共25小题,每小题1分,共25分) 在每小题列出的四个备选项中只有一个是符合题目要求的,请将其代码填写在题后的括号内。错选、多选或未选均无分。 1.病理学对人体研究的常见三大内容是() A.尸体解剖、细胞学检查、免疫组化检查 B.活体组织检查、免疫组化检查、细胞学检查 C.细胞学检查、尸体解剖、电子显微镜检查 D.尸体解剖、活体组织检查、细胞学检查 2.严重的细胞水变性进一步发展可发生() A.凝固性坏死 B.细胞固缩坏死 C.液化性坏死 D.细胞嗜酸性坏死 3.手术伤口一期愈合7天拆线的病理学依据是() A.表皮再生已完全覆盖创面 B.伤口已收缩变小 C.伤口胶原的含量已达到足够的抗拉力强度 D.创口干燥无渗出 4.低蛋白血症引起水肿的机制是() A.毛细血管压升高 B.血浆胶体渗透压下降 C.组织间液胶体渗透压升高 D.组织间液流体静压下降 5.下肢静脉内血栓脱落易引起() A.脑动脉栓塞 B.门静脉栓塞 C.肺动脉栓塞 D.肾动脉栓塞 6.引起炎症的因素中最常见的是() A.化学性因子 B.物理性因子 C.异常免疫反应 D.生物性因子 7.调理素的作用主要是() A.增强吞噬细胞吞噬作用 B.增强吞噬细胞消化作用 C.调理炎症介质间相互作用 D.调和细胞免疫作用 8.发生于实质器官的良性肿瘤外观多呈() A.结节状 B.蕈伞状 1

C.菜花状 D.蟹足状 9.肝活检显示有分泌粘液的腺癌组成的小结节,肝外最可能的原发部位是() A.肛管 B.结肠 C.膀胱 D.前列腺 10.风湿性心脏病中最常见的联合瓣膜病变是() A.二尖瓣和三尖瓣 B.三尖瓣和肺动脉瓣 C.二尖瓣和主动脉瓣 D.三尖瓣和主动脉瓣 11.二尖瓣狭窄在临床上可表现为() A.左心室肥大 B.水冲脉 C.球形心 D.慢性肺淤血 12.后果最为严重的动脉粥样硬化发生于() A.大动脉 B.小动脉 C.中动脉 D.细动脉 13.小叶性肺炎的病变性质是() A.化脓性炎 B.肉芽肿性炎 C.纤维蛋白性炎 D.浆液性炎 14.硅肺最常见的合并症为() A.肺癌 B.肺脓肿 C.胸膜间皮瘤 D.肺结核 15.慢性支气管炎通常合并() A.小叶中心型肺气肿 B.全小叶型肺气肿 C.小叶周围型肺气肿 D.老年性肺气肿 16.肝硬化晚期出现肝功能不全的临床表现,下列哪项是错误 ..的?() A.蜘蛛痣、肝掌 B.性腺发育 C.出血倾向 D.血浆白蛋白减少 17.消化性溃疡发生在哪个部位易引起大出血?() A.胃小弯 B.幽门 C.胃底 D.十二指肠球部后壁 18.下列哪一种阑尾炎最易引起阑尾穿孔?() A.急性蜂窝织性阑尾炎 B.急性单纯性阑尾炎 C.急性坏疽性阑尾炎 D.慢性阑尾炎 19.肾盂肾炎的基本病变属于() A.纤维素性炎 B.化脓性炎 C.变质性炎 D.急性增生性炎 2

免疫组化技术(原理、分类、步骤及主要试剂、设备准备)

免疫组化技术 免疫组化技术
业精于勤而荒于嬉 行成于思而毁于随
免疫组化技术
原理
抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色 来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。 众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取 出来,以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物,制备特异性抗体,再用这种抗体(第一抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体,并 用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合,形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物,将抗原放大,由于抗 体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的,因此,还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂 DAB 显示 为棕黄色颗粒) 。通过抗原抗体反应及呈色反应,显示细胞或组织中的化学成分,在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产 物,从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质,如蛋白质、多肽、氨 基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
分类(常用)
1、免疫荧光方法
最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内 的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某 种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用比较 广。
2、免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后, 60 年代发展起来的技术。 于 基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用, 然后加入酶的底物, 生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标 技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种 标记方法,目前在病理诊断中广为使用的当属 PAP 法(过氧化物酶-抗过氧化物酶) 、ABC 法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物) SP 、SP 、即用型二步法(聚合物链接)等。 法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶) 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶)
3、免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白 的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌 A 蛋白)等作为 探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免 疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银 加强的免疫金银法则更便于光镜观察。
4、免疫铁蛋白法 5、放射免疫自显影法
标本
1、组织标本:石蜡切片 石蜡切片(病理切片和组织芯片) 、冰冻切片 石蜡切片 2、细胞标本:组织印片、细胞爬片、细胞涂片
---------------------------------------------------------------------------------华中科技大学同济医学院
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一文读懂免疫组化步骤、结果分析及注意事项

文读懂  免疫组化步骤、结果分析及注意事项 导语实验室花花师姐正在教导新来的师弟:想拿高分 文章,不学免疫组化怎么行?” 免疫组化王子毛博旁边插话: 是这个理,今天我就豁出去,将我十多年的心得和经验奉献给小师弟你了。”小师弟感激涕零,唯诺细听两位前辈的教诲免疫组化,免疫组织化学技术(immunohistochemistry ),是 项利用抗原抗体反应,通过使标记抗体的显色剂显色来确定组织细胞内抗原,对蛋白定位,定性的实验技术。免疫组化主要用的是组织标本和细胞标本两大类,组织标本包括石蜡切片(病理切片和组织芯片)和冰冻切片。石蜡切片,对组织形态保存好,保存时间也长,虽然对组织抗原暴露有影响,但可以抗原修复,所以石蜡切片仍然是首选的标本制作方法。免疫组化步骤详解免疫组化结果分析很多时候,我们千辛万苦地染出了一张张漂亮的免疫组化片子。但是却不知道如何正确地分析,得出理想的结果。这实在是一件憾事。 如下图,正常的结果应该是这样的:镜下细胞核呈蓝色,阳性结果呈深浅不一的棕色。结果分析主要有两种方法,阳性着色细胞计数法和评分法。前者是在40*光镜下,随机10 个视野下计数阳性着色细胞;后者则是在光学显微镜下按染色程度(0 分阴性着色,1 分淡黄色,2 分浅褐色,3 分深褐色)

和阳性范围(1分0-25%,2分26-50%,3分51-75%,4分76-100%)评分,最终分数相加。 免疫组化结果分析是毛博的特长,以下是他传授的独门绝技。 1.对照染色 和做实验的时候必须设立对照组一样,免疫组化也必须设立对照染色。没有对照染色的免疫组化结果是不可信的。对照 般有阳性组织对照,阴性组织对照,阴性试剂对照,自身 对照。般来说,有一个阳性组织对照和一个阴性组织对照 就足够了。 2.定位 抗原表达必须在特定部位。如LCA 应定位在细胞膜上;CK 应定位在细胞浆内;PCNA 及p53 蛋白应定位在细胞核内等等。不在抗原所在部位的阳性着色,不能视为确切的阳性结果。有可能是非特异性染色或者假阳性。不能确定怎么办?这就要用到上一段提到的对照染色了。 3.半定位 现在一般用图像分析系统进行定量。如果你的实验室不幸没有那么高大上的话,就只好赶鸭子上架,用肉眼定一下量了。 因为人为主观性比较强,所以只能称作半定量。免疫组化的 半定量一般就分为三级:弱(+ ),中++ ),强(+++ )。以绿色免疫荧光为例,则表现为浅绿色荧光、明显绿色荧光和

免疫组化超详细步骤

免疫组化超详细步骤 Prepared on 22 November 2020

免疫组化 一实验目的:分别用KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体检测肺癌组织中KRAS、NRAS、HRAS蛋白的表达情况 二实验原理:应用基本原理——抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使的(、酶、、)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和),对其进行定位、定性及定量的研究,称为或. 三实验试剂及耗材:经病理医生确认的肺癌组织切片、KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体、DAB显色试剂盒、抗原修复液、PBS、苏木素染料、1%盐酸酒精溶液、%氨水、二甲苯、等 四实验设备:切片机、4℃冰箱、显微镜、烤片机 五主要试剂配置: 缓冲液 应用液配成1000毫升溶液 应用液BNa2HPO4·配成1000毫升溶液 配制1000毫升PBS需要14毫升应用A液,36毫升应用B液,加。 枸橼酸钠抗原修复液 应用液A枸橼酸配成1000毫升溶液 应用液B柠檬酸三钠(三水合柠檬酸三钠)配成1000毫升溶液 配制500毫升抗原修复液需要9毫升应用A液,41毫升应用B液。 苏木素染液配方:苏木素2g,无水乙醇250毫升,硫酸铝蒸馏水750毫升,碘酸钠,冰醋酸20毫升。先将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝溶于蒸馏水水中。两液溶解后将其混合,加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。 抗体说明书建议的抗体稀释度 N-Ras1:50-1:500 H-Ras1:50-1:500 K-Ras1:20-1:200 六实验步骤: 1组织常规石蜡切片厚度3-5um,防脱片捞片后晾干,放入72℃烤箱烤片2小时。 2切片脱蜡水化程序 ⑴二甲苯Ⅰ、Ⅱ脱蜡各12分钟; ⑵无水乙醇Ⅰ、Ⅱ各3分钟;(洗二甲苯) ⑶95%乙醇3分钟; ⑷85%乙醇3分钟; 3自来水漂洗3分钟,洗涤一定要充分。 4组织修复采用高温高压法:压力锅中加入,抗原修复液约1000ml,切片插入塑料架上,放入压力锅,盖上锅盖(此时不扣上压力阀)1600W预热至沸腾,扣上压力阀1300W,待高压锅阀门喷气开始计时,修复时间为2分钟。 5停止加热并用流水冲洗高压锅以降温,室温冷却。 6将抗原修复后切片置自来水中,浸泡2分钟。将样本置于内源性过氧化物酶阻断剂 3%H2O2,室温放置4分钟。(需要盖盖子)自来水洗2分钟,PBS缓冲液洗涤2分钟。

2016病理试题及答案

2016病理试题及答案

2016年北京市医师定期考核业务水平测评 (病理专业试卷) 单位:____________________________________________________ 姓名:_________________ 性别:_________ 身份证号:______________________________________________________ _____ 分数 共120分,75分合格。 A1型题(每题1分) 1.主动脉粥样硬化病变最严重受累的部位是() A.升主动脉 B.主动脉弓 C.降主动脉 D.腹主动脉 E.胸主动脉 2.心肌梗死最常发生的部位为() A.左心室侧壁 B.左心室前壁 C.左心室后壁 D.右心室前壁 E.室间隔后1/3A. 3.原发性良性高血压特征性病变是() A.细小动脉痉挛 B.细小动脉粥样硬化斑 C.细小动脉的硬化 D.细小动脉的纤维蛋白样坏死 E.细小动脉闭塞 4.风湿性心肌炎时,Aschoff小体最多见于() A.心内膜下结缔组织 B.心肌细胞间 C.心肌间质血管旁 D.心包脏层血管旁 E.心包壁层血管旁 5.动脉瘤最常见的部位是() A.肾动脉 B.冠状动脉 C.主动脉和脑血管 D.下肢动脉 E.肺动脉 6.以下不属于肥厚性心肌病特征的是() A.心脏肥大 B.心腔扩张 C.室间隔不均匀肥厚 D.舒张期充盈异常 E.左心室流出道受阻 7.肺腺癌呈阳性的标志物的是()

A.CK5/6、TTF1 B.CK5/6、Napsin A C.Napsin A、TTF1 D.TTF1、P40 E.P40、CK5/6 8.肺鳞状细胞癌呈阳性的标志物的是() A.P40、CK5/6 B.CK5/6、Napsin A C.Napsin A、TTF1 D.TTF1、P40 E.CK5/6、TTF1 9.小细胞癌细胞核的大小() A.小于2个静止的淋巴细胞 B.小于3个静止的淋巴细胞 C.小于1个静止的淋巴细胞 D.小于4个静止的淋巴细胞 E.小于5个静止的淋巴细胞 10.肺神经内分泌肿瘤不包括() A.类癌 B.非典型性类癌 C.梭形细胞癌 D.大细胞神经内分泌癌 E.小细胞癌 11.肺硬化性肺泡细胞瘤的立方细胞和多角形细胞均呈阳性的标志物为() A.TTF1 B.CK7 C.AE1/AE3 D.Napsin A E.CgA 12.下列哪项不是胚胎性横纹肌肉瘤的好发部位() A.头颈部 B.鼻咽部 C.泌尿生殖道 D.腹膜后 E.大关节周围 13.HMB45表达阴性的肿瘤的() A.淋巴管平滑肌瘤病 B.黑色素瘤 C.透明细胞肿瘤(糖瘤) D.肾上腺皮质腺瘤 E.大细胞未分化癌 14.继发性肺结核的主要蔓延方式为() A.血行蔓延 B.淋巴路蔓延 C.气道蔓延 D.沿胸膜蔓延 E.蔓延至心包 15.结节病改变不包括() A.上皮样肉芽肿 B.结节境界清楚 C.明显纤维化 D.纵隔增宽 E.干酪型坏死 16.过敏性鼻息肉的诊断主要依据() A.大量嗜酸性粒细胞 B.黏膜水肿 C.出现少数怪异细胞 D.腺体增生 E.纤维化 17.鼻硬结症为() A.化脓性炎症 B.浆液性炎症 C.纤维素性炎症 D.

免疫组化操作方法原理步骤以及常见问题处理大总结

免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难,最大的难处是出现异常结果时如何解决?这就需要掌握免疫组化实验原理,每一步知道为什么这样做,这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间,这三者一般是相互成反比的(相对),其中浓度是最重要的先决条件,温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说,可以有4度、室温、37度,我推荐4度最佳,反应最温和,背景较浅;而37度反应速度较快,时间较短;室温我不太提倡,除非你每次都把环境温度控制在一定的范围,否则,尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法,免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确,是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析,但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下,分析最为准确,这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做;阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应,其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题;后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛,是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时,明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难,加一些形态学数据或图片,老外十分欢迎,可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤,重复运用于同一性质的切片和同一种抗体,做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法,更换一种抗体后,居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程,成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那,这是因为我经过了反复的动手+动脑,把理论原理运用于实践,在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决,最终把理论与实践融会贯通。 一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素等)结合,最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较

免疫组化步骤

免疫组化:链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法 1)将石蜡切片置于烤片机烘烤2-3h,{因为做石蜡切片时要高温烤片,可能会破坏组织的抗原性,所以应烤片2-3h,除非组织的抗原性较稳定,则时间可长一点}后可把烤好的组织切片,放在60℃烤箱中过夜,最佳时间控制在14-18h{乳腺病理处省略此步骤}。取组织切片于切片架,用吹风机吹至产生蜡液,不可靠太近,以免使组织切片局部温度过高,破坏组织切片。 2)常规脱蜡 ({二甲苯脱蜡,在夏天,室温较高,脱蜡试剂也新鲜,则脱蜡时间不需很多,3-5分钟就已足够。如果在冬天,室温较低,脱蜡试剂也较陈旧,则脱蜡时间需要延长,10-20分钟或更长}二甲苯I 20min →二甲苯II 20min→二甲苯Ⅲ20min →无水乙醇10min(清洗二甲苯)→无水乙醇10min→95%乙醇5min→80%乙醇5min) {梯度酒精用无水酒精与蒸馏水配置} 目的:把水渗入组织切片中,给细胞创造一个水溶性环境 <以下步骤是为细胞染色做准备> 3)捞出,放入铁缸内,用凉清水冲洗3次{如果组织容易脱片,就尽量泡一下,这样脱片可以减少很多}; 4)将配好的柠檬酸盐抗原修复液(抗原修复液的量为稍高于横向放倒的切片架的高度){EDTA配制方法:EDTA修复液使用比例:EDTA:蒸馏水=1:49,每次最好配制1000ml。EDTA修复液重复使用最好不要超过5次,并且3次之后要测PH值,测PH是否为9.0,如偏离太大则弃用。枸橼酸修复液只能用一次。修复的原因:因为常规的石蜡切片标本均用甲醛固定,结果使得抗原性物质形成醛键,羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇。另外,蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。在染色时,要先进行抗原修复或暴露,即将固定时分子之间所形成的交联破坏,而恢复抗原的原有空间形态}{用EDTA修复比柠檬酸容易脱片,但是你要用到EDTA的时候也可,因其抗原修复效果比柠檬酸盐的好,可从另外的问题上着手}灌入高压锅中,不旋紧,盖上即可,210℃烧至沸腾后,把切片架放入横向放倒,旋紧锅盖,待喷气时,开始计时2min-2min30s,如果组织不易染色,可延长修复时间,但一般不超过3min,否则容易掉片。 5)到时间后,把高压锅放入水池中用凉水冲至气体放出完,旋下锅盖,自然冷却至室温,大于30min。 6)冷却后取出切片架用凉清水冲洗3次,放入3% H2O2 罐中10min,目的:封闭过氧化物酶。【每天用前新放入10ml H2O2 】【配制方法:1000ml 3%的过氧化氢=100ml 30%过氧化氢+900ml蒸馏水,(H2O2保存需避光)】 7)捞出后用凉清水冲洗多次,应注意H2O2 有腐蚀性,最后一次用PBS(磷酸盐缓冲液),PBS

2020年自考《病理学》模拟试题及答案(卷一)

2020年自考《病理学》模拟试题及答案(卷一) 1.多发性骨髓瘤是 A 造血系统的一种良性肿瘤 B 慢性白血病的一种 C 恶性组织细胞增生症侵犯骨髓后形成的肿块 D 浆细胞样淋巴细胞型淋巴瘤转移到骨髓所致 E 是骨髓内肿瘤性浆细胞增生所形成的浆细胞性恶性肿瘤答案:E 2.绿色瘤属于 A 急性粒细胞性白血病 B 急性淋巴细胞性白血病 C 慢性粒细胞性白血病 D 慢性淋巴细胞性白血病 E 毛细胞白血病 答案:A 3.毛细胞白血病属于 A 急性粒细胞性白血病 B 急性淋巴细胞性白血病 C 慢性白血病 D 慢性粒细胞性白血病 E 慢性淋巴细胞性白血病 答案:C 4.与EB 病毒感染有关的造血系统肿瘤是 A 蕈样霉菌病 B Burkitt 淋巴瘤 C 绿色瘤 D 毛细胞白血病 E 恶性组织细胞增生症 答案:B

5.下列哪种疾病病人血液内有M 蛋白以及在尿液中有Bence-Jones 蛋白 A 恶性组织细胞增生症 B 多发性骨髓瘤 C 真性红细胞增多症 D 毛细胞白血病 E 绿色瘤 答案:B 6.瘤细胞间散在多数吞噬各种细胞碎屑的巨噬细胞,形成所谓“满天星”图像的恶性肿瘤是 A 脂肪肉瘤 B 恶性组织细胞增生症 C 恶性纤维组织细胞瘤 D 恶性巨细胞瘤 E Burkitt 淋巴瘤 答案:E 7.绿色瘤是 A 胆管上皮癌因淤胆所致 B 原发性肝细胞癌转移到皮下,分泌胆汁所致 C 急性粒细胞性白血病在骨组织、骨膜下或软组织中浸润,聚集成肿块呈绿色 D 绒癌阴道转移性结节,呈紫蓝色 E 血管肉瘤出血,产生胆绿色蛋白所致 答案: 8.何杰金病中预后最差的组织学类型是 A 淋巴细胞为主型 B 淋巴细胞消减型 C 结节硬化型 D 混合细胞型 E 以上都不是 答案:B

免疫组化超详细步骤

免疫组化 一实验目的:分别用KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体检测肺癌组织中KRAS、NRAS、HRAS蛋白的表达情况 二实验原理: 应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学技术或免疫细胞化学技术. 三实验试剂及耗材:经病理医生确认的肺癌组织切片、KRAS、NRAS、HRAS蛋白抗体、DAB 显色试剂盒、抗原修复液、PBS、苏木素染料、1%盐酸酒精溶液、0.05%氨水、二甲苯、等 四实验设备:切片机、4℃冰箱、显微镜、烤片机 五主要试剂配置: 缓冲液 应用液A NaH2PO4 38.4g配成1000毫升溶液 应用液B Na2HPO4·12H2O 114.8g配成1000毫升溶液 配制1000毫升PBS需要14毫升应用A液,36毫升应用B液,加8.5gNaCl。 枸橼酸钠抗原修复液 应用液A 枸橼酸 10.55g配成1000毫升溶液 应用液B 柠檬酸三钠(三水合柠檬酸三钠) 29.01g 配成1000毫升溶液 配制500毫升抗原修复液需要9毫升应用A液,41毫升应用B液。 苏木素染液配方:苏木素2g,无水乙醇250毫升,硫酸铝17.6g蒸馏水750毫升,碘酸钠0.2g,冰醋酸20毫升。先将苏木素溶于无水乙醇,再将硫酸铝溶于蒸馏水水中。两液溶解后将其混合,加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。 抗体说明书建议的抗体稀释度 N-Ras 1:50-1:500 H-Ras 1:50-1:500 K-Ras 1:20-1:200 六实验步骤: 1组织常规石蜡切片厚度3-5um,防脱片捞片后晾干,放入72℃烤箱烤片2小时。 2 切片脱蜡水化程序

临床免疫学检验技术考试题(含答案)-2

临床免疫学检验技术复习练习试题及答案 301.检测SmIg,下列说法正确的是( ) A.常采用间接荧光免疫法或酶免疫组化法 B.间接荧光免疫法时,应选用高效价、高特异性和高亲和力的荧光 C.采用酶免疫组化法时,可选用酶标记的多价抗人Ig抗体 D.间接荧光免疫法检测时,B细胞膜表面呈现的荧光有多种荧光着色形式 E.间接荧光免疫法检测时,B细胞膜表面荧光着色的观察时间应不超过1小时答案:ABCD 302.关于溶血空斑试验,下列说法正确的是( ) A.经典溶血空斑形成试验是用来检测动物抗体形成细胞的功能 B.经典溶血空斑形成试验中,每一个空斑中央含一个抗体形成细胞,其大小表示抗体形成细胞产生抗体的多少 C.经典溶血空斑形成试验直接法所测到的细胞为IgM类抗体形成细胞,而其它类抗体形成细胞需用间接法检测 D.被动溶血空斑试验是非红细胞抗体性溶血空斑试验,可检测SRBC上抗原相应的抗体形成细胞 E.反向间接溶血空斑实验可用于检测人类IgG形成细胞,与抗体的特异性无关答案:ABCDE 303.选择素分子膜外区组成部分包括( ) A.补体调控蛋白(CCP)结构域 B.C型凝集素(CL)结构域 C.IgV样结构域 D.表皮生长因子(EGF)样结构域 E.IgC样结构域 答案:ABD 304.在淋巴细胞转化实验中,属于非特异性刺激物的是( ) A.PHA B.ConA C.PWM

D.PPD E.LPS 答案:ABCE 305.与RZ值有关的是( ) A.酶含量 B.酶活性 C.酶的组成 D.酶的理化性质 E.酶的底物 答案:ACDE 306.理想的分离技术应具备的条件( ) A.简便易行,适于大批量样品分析 B.分离完全,快速,非特异结合低 C.试剂来源容易,价格低廉,稳定性好,可长期保存 D.不受外界因素和样品中其他组分的干扰,对标准品和待测抗原分离效果相同 E.适合自动化分析的要求 答案:ABCDE 307.以下关于整合素分子的叙述,哪些是正确的( ) A.由α、β两条肽链组成 B.多数分布广泛 C.表达水平可随细胞分化和生长状态发生改变 D.其配体主要是细胞外基质 E.主要介导同型粘附作用 答案:ABCD 308.下列关于双参数直方图的描述,正确的是( ) A.双参数直方图是一种细胞数与双测量参数的图型A B.通常采用对数信号 C.通常采用设置十字门来区分细胞信号 D.纵、横坐标分别代表被测细胞的两个测量参数

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