生化实验操作考核要点(新)

【实验操作考核要点】

一、目的要求

1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。

2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。

3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。

4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。

5．正确掌握溶液转移的操作。

6．正确操作使用分光光度计。

二、操作考核内容

按百分制计。

1．吸量管操作（20分）；

2．可调式微量移液器操作（20分）；

3．溶液混匀操作（视具体情况，采用合适的混匀方法）（15分）；

4．溶液转移操作（10分）；

5．分光光度计比色操作（25分）。

6．整体表现（10分）。

三、操作考核标准

（一）吸量管操作（20分，每项操作5分）

1．执管

要求右手拿吸量管，左手拿橡皮球，只能用食指而不能用拇指按压吸量管上口来调节吸取液量的刻度；吸液、排液整个操作过程吸量管应始终保持垂直。

2．坐姿

要求腰、背保持竖直，看刻度时眼睛保持平视。

3．吸取溶液

吸量管插入液面深度约0.5cm，不能一插到底，也不能插入过浅而吸进空气致使溶液进入橡皮球内；调控吸量管吸取液量的刻度时，吸量管尖应离开液面靠在容器内壁上。

4．排出液体

吸量管尖应靠上受纳容器内壁，让管内溶液自然流出。不能用橡皮球吹压，而且在流净后吸量管尖停靠受纳容器内壁至少3秒。

（二）可调式微量移液器操作（20分，每项操作5分）

1．设定容量值

转动加样器的调节旋钮，反时针方向转动旋钮，可提高设定取液量。顺时针方向转动旋钮，可降低设定取液量。在调整设定移液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意使取液器显示的数值不超过其可调范围。

2．吸液

（1）选择合适的吸头安放在取液套筒上，稍加扭转压紧吸嘴使之与套筒之间无空气间隙；

（2）把按钮压至第一停点，垂直握持加样器,使吸头浸入液面下2~3毫米处,然后缓慢平稳地松开按钮，吸入液体，等一秒钟，然后将吸头提离液面，贴壁停留2-3秒，使管尖外侧的液滴滑落。

3．放液

（1）将吸头口贴到容器内壁底部并保持100°~40°倾斜；

（2）平稳地把按钮压到第一停点，等一秒钟后再把按钮压到第二停点以排出剩余液体；

（3）压住按钮，同时提起加样器，使吸头贴容器壁擦过，再松开按钮。按吸头弹射器除去吸头。

4．压放按钮时保持平稳；加样器不得倒转；吸头中有液体时不可将加样器平放。取液器吸嘴为一次性使用。实验完毕，将取液器读数调至最大量程值，竖立放于支架上。

（三）溶液的混匀（操作流程中下划实线的三处，每项操作5分，共15分）1．肝糖原的提取与鉴定操作中，肝匀浆上清液中加5ml 95%乙醇后的混匀最好用倾倒混匀，也可用滴管或吸量管吸、吹混匀，或用玻璃棒搅拌混匀。

2．肝糖原定量测定中，肝组织消化液沸水浴后全部转入100 ml容量瓶，加水至刻线后的混匀应采用倒转混匀。

3．肝糖原定量测定中，加蒽酮溶液后的混匀，可将试管倾斜约45o再作旋转混匀。因蒽酮溶液（浓硫酸配制）比重大于样品水溶液很多，一加入便沉于管

底（加试剂的顺序一定不能颠倒），不倾斜试管旋转混匀不了。

（四）溶液的转移（操作流程中下划波纹线的两处，每项操作5分，共10分）

1．在研钵中研磨后的肝匀浆转入试管离心可用滴管或取液器吸取转移，如果采用倒入，不能洒落管外，应尽量转移干净。

2．肝组织沸水浴后的消化液转入100 ml容量瓶前应冷却；转入时用玻璃棒引入，玻璃棒头插入容量瓶靠瓶颈磨口下约1cm处，玻璃棒上端不要靠上瓶口边沿，引入时试管口靠玻璃棒的位臵靠近容量瓶口，不要离开瓶口太高，以免消化液沾染玻璃棒较长；转入过程中，溶液不要沾染到容量瓶磨砂口上，更不能滴洒到容量瓶外面；应用蒸馏水洗消化管3遍以上，洗液一并全部转入容量瓶。

（五）分光光度计的操作（25分）

1．波长选择，仪器调零，灵敏度挡选择等操作正确（5分）。

2．溶液转移到比色杯操作（10分）

手接触比色杯毛面；倒液量不超过比色杯体积的2/3；比色溶液不能洒落在色杯外或试管外；溅出比色杯外液体的擦拭；空白液、标准液、待测液的放臵顺序；不能在仪器上方倒液。

3．比色操作（5分）：盖盖；调透光度；空白调零；测定（拉杆、记录）。

4．比色后操作（5分）：比色杯溶液的倒出；比色杯清洗。

（六）整体表现（10分）

1．小组分工协作有序，不忙乱。

2．实验结束后实验台面的整理：器材按要求清洗干净、器材与试剂瓶归回原位和台面卫生整洁。

四、实验报告结果要求

1．肝糖原的提取、鉴定

鉴定方法①和鉴定方法②中最后的“呈色对比”和“观察颜色变化”，结果一定要明确表达是“有变化”或“没有变化”，有变化的话还要具体写出变成什么颜色了。而且要作出明确结论：“有糖原”或“没有糖原”，如果颜色转变成红色不很明显，可以写“有少量糖原”、“有极少量糖原”或“有微量糖原”等，但不能写“可能有少量糖原”、“可能有极少量糖原”或“可能有微量糖原”等带“可能”的结论。在这

里结论“没有糖原”不是说绝对没有糖原，而只是说用这种鉴定方法鉴定不出有糖原的存在。

2．肝糖原的定量测定

测定数据应记入结果栏内，计算过程应先写出计算公式，再代入测定数据进行计算，结果保留小数点后3位。如果是直接列式计算，至少前面要出现过有记载计算糖原的公式，否则必须适当扣分；如果只列出计算公式和有测定数据的记录，没有将测定数据代入公式的计算过程而直接写出结果的可结合其它情况酌情扣分。

五、实验报告评分

按平时实验报告要求评分（按百分制计）。