生物化学实验

生物化学实验

（二）

绪论

?随着生物化学的发展和生物化学教学内容的不断丰富，生物化学实验也在不断更新和提高。

?本门课程在以往教学工作的基础上，结合生物化学实验教学，力求使学生能够更加深刻地学习生物化学课程。

本实验课实验项目覆盖了当今生物化学研究中常用的技术和方法。

绪论

一、实验目的

?掌握蛋白质、酶、核酸、糖等重要物质的分离、纯化和测定技术的原理及方法；

?掌握生物化学的基本知识、基本理论及基本实验技能；

?培养分析和解决问题能力以及严谨细致的科学作风、创新能力等综合素质。

?二、通过生物化学实验应该做到

?学习设计一个实验的基本思路，掌握各个实验的基本原理，学会严密地组织自己的实验，合理地安排实验步骤和时间。

?训练实验的动手能力，学会熟练地使用各种生物化学实验仪器。

?学会准确翔实地记录实验现象和数据的技能，提高实验报告的写作能力，能够整齐清洁地进行所有的实验。

?掌握生物化学的各种基本实验方法和实验技术，尤其是各种电泳技术和层析枝术，为今后参加科研工作打下坚实的基础。

?三、实验室规则

?１、自觉遵守学习纪律，保持实验室肃静，不得喧哗吵闹、迟到早退。

?２、爱护仪器，厉行节约。试剂、药品、蒸馏水等应节约使用，不得浪费。如不慎损坏仪器，应及时报告老师，说明原因；贵重、精密仪器，应先熟悉使用方法，在老师的指导下，严格按操作规程操作；发现故障，应立即报告老师，不得擅自处理。仪器使用完毕后，一定要填写使用记录。

绪论

?３、取用试剂时，应仔细辨明标签，以免取错。取完试剂后，应及时将瓶盖盖好，放回原处，切忌乱拿乱放。

?４、注意安全。对于有毒、腐蚀的试剂应避免其直接接触人体及衣物；乙醚、丙酮等易燃试剂应远离火源，以免发生意外。

?５、注意实验室卫生、整洁。废弃液体应倒入水槽，实验用过的和棉花、废纸、沉淀废渣及其他废弃物品等均应放入指定容器，不得随意乱扔。实验结束后应将实验台整理好，并清扫、整理实验室。关好水、电、门、窗，方可离开实验室。

绪论

?四、实验须知

?１、实验前应作好预习，认真阅读实验指导。明确学习目标，能简述实验内容及主要的操作步骤。?２、实验过程中，应根据实验指导及老师的要求，认真操作，细心观察，如实记录。严禁捏造实验数据，提倡实事求是的科学态度，杜绝弄虚作假。?３、实验结束后，将实验原始数据填写到实验报告册中的原始数据栏，并当场交给老师批阅。回去后要认真书写实验报告，及时交老师批阅。

绪论—五实验记录与实验报告1、实验记录

实验前写好实验预习报告(钢笔和园珠笔)。

实验中应及时准确地记录所观察到的现象和测量的数据。(直接填写到实验报告册的原始数据栏） 实验记录要注意有效数字，如吸光度值应为

“0.050”，而不能记成“0.05”。所有数据都应如实记录，不得随意涂改。

实验中要详细记录实验条件，如使用的仪器型号、编号、生产厂等；生物材料的来源、试剂的规格、试剂的浓度等。

杜绝一切抄袭和弄虚作假现象，一旦发现

后果自负。

绪论—五实验记录与实验报告?2、实验报告

?实验预习报告包括如下内容：①实验项目名称；

②详细实验目的、原理；③实验操作步骤；④注意事项。

?实验报告包括如下内容：①实验项目名称；②简写实验目的、原理；③实验结果；④分析与讨论；⑤注意事项等。

实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响?一、目的

?了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响，掌握淀粉酶活性鉴定的方法。

实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响

?二、原理

?酶的活性受某些物质的影响，有些物质能增加酶的活性，称为激活剂；而另一些物质则降低酶的活性，称为抑制剂。

?Cl-是唾液淀粉酶的激活剂。而Cu+为抑制剂。将淀粉与酶相混，作用一段时间后，淀粉被水解，遇碘不显蓝色，酶活力强，需时短，酶活力弱，需时长，故可用反应时间表示酶活力的强弱。

实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响

?四、实验器材

?1、0.1%淀粉液:称取可溶性淀粉0.1克,先用少量水加热调成糊状,再加热水稀释至100ml.

?2、1%的氯化钠溶液:1gNaCl溶于100ml 蒸馏水?3、1%硫酸铜溶液:1gCuSo4溶于100ml 蒸馏水?4、稀碘液：于2%碘化钾溶液中加入碘至淡黄色。

实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响

?五、操作

?取试管3支，按表1编号并加入试剂。加毕，摇匀，同时置40℃水浴保温，每隔2min 取液体1滴置白瓷板上用碘液试之，哪支管液最先不呈现蓝色，哪支管次之，说明原因。

0.1%淀粉液/ml 1%的氯化钠溶液/ml 1%硫酸铜溶液/ml H2O/ml 1：30唾液/ml 1 2.0 1.0

------ 1.02 2.0

---- 1.0-- 1.03 2.0-------- 1.0

1.0管号

试剂

实验一激活剂和抑制剂对酶活力的影响

?六、实验注意事项

?1、实验过程中试剂取量一定要保证一致性，同时一定要认真观察实验现象，不能漏过实验颜色的变化点。

?2、要正确找到反应终点，并记下相应反应时间。

?3、要在预热2min后加入唾液，并在加入唾液后马上记时。

实验二、可溶性糖的薄层层析分离

与定量鉴定

?一、目的和要求

?1.了解并初步掌握吸附层析的原理。

?2.学习薄层层析的一般操作及定性与定量鉴定的方法。

?3.学习提取植物材料中可溶性糖的一般方法，并学会简易薄板的制作

实验二、可溶性糖的薄层层析分离

与定量鉴定

?二、原理

?1、植物组织中的可溶性糖可用一定浓度的乙醇提取出来，经除去杂质，即可获得较纯的可溶性糖混合物。

?

?二、原理

?2、薄层层析是层析法的一种，层析法是利用被分离样品混合物中各组分的物理，化学差别，使各组分以不同程度分布在两个“相”中，这两个相通常使一个被固定在一定的支持物上的，称为固定相；另一个是移动的，称为流动相；

?当流动相流过固定相时，在移动过程中由于各组分在两相中的分配情况不同，或吸附性质不同，或电荷分布不同，或离子亲和力不同等，而以不同速度前进，从而达到分离的目的。

?二、原理

?3、薄层层析是一种快速而微量的层析方法，它是将一种固定支持物均匀地涂在薄板上，对物质进行层析的方法。

?本实验只讨论吸附薄层层析，即所有支持物是吸附剂（如硅胶粉），层析时，主要是根据吸附剂对样品中各组分的吸附能力不同，因此个组分的移动速度不同，从而达到分离混合物的目的。

?二、原理

?4、糖为多羟基化合物，具有较强的极性，在硅胶G薄板上展层时，糖与硅胶分子有一定的吸附力。?硅胶分子与糖的吸附能力大小取决于糖的分子量和羟基数目，造成各种糖分子在展层过程中移动的距离不同，从而将各种糖分离出来。

?一般吸附力的大小为：三糖>双糖>己糖>戊糖。其中各种糖移动的速率可用Rf值表示。通过与标准糖的Rf值比较。即可鉴定出植物组织提取液中糖的种类。

实验二、、可溶性糖的薄层层析分离

与定量鉴定

?二、原理

?5、R f计算公式：

?溶质斑点中心到样点的距离?R f(值)=溶剂前沿到点样点的距离?