小鼠冠状动脉平滑肌细胞使用说明

小鼠冠状动脉平滑肌细胞

小鼠冠状动脉平滑肌细胞产品说明：

为使客户能尽快开展实验，派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期，且每次发货为汇合率达到70%的细胞，收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠冠状动脉平滑肌细胞取自新鲜的组织，按照标准操作流程分离培养。研发的小鼠冠状动脉平滑肌细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件，降低杂细胞污染，保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时，派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测，保证细胞纯度在90%以上；同时也需经过微生物检测，保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

小鼠冠状动脉平滑肌细胞注意事项：

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞传代时可以一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议客户收到细胞后前3天各拍几张细胞照片，记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研，不得用于临床应用。

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小胶质细胞培养及鉴定

2．1小胶质细胞的原代细胞培养 2．1．1混合胶质细胞培养自中山大学北校区动物中心购买刚出生1天内的SD乳鼠，用75％酒精消毒后固定四肢，剪开皮肤、颅骨，取出脑组织放入PBS液中洗涤一次，分离脑干取出，脑膜及血管尽量剥离，将组织放入盛有DMEM／F12无血清培养基的培养皿中，移至离心管中剪碎，加入浓度为0．125％的胰蛋白酶，37。C水浴箱中消化15分钟，血清终止消化，待组织沉淀后收集上液，余下组织可通过反复吹打进行再次消化，经过709m细胞滤网过滤，收集滤液，1500r ／min离心5分钟，去上清，加入完全培养基悬浮细胞后进行细胞计数，以1*106接种至预先用多聚．L．赖氨酸铺被的75cm2培养瓶中。24d'时后稍微轻摇下未贴壁及贴壁不稳的细胞碎片，全量更换培养基，随后4天／次换液，约至10天左右可见明显的细胞分层，上层为半贴壁，呈圆形，透光性较好，主要为小胶质细胞及少量的少突胶质细胞，下层细胞主要为星形胶质细胞、神经元。第一章原代小胶质细胞的培养、纯化及鉴定 2．1．2小胶质细胞分离及纯化：机械振摇法：将铺满胶质细胞／神经元的培养瓶置于摇床振摇，180r／min，15rain，将培养基吸出，并用PBS冲洗1遍，收集脱落的细胞，1500r／s 5min离心，去除上清液，加入完全培养基，吹打混匀，计数，(34+39+30+33)／4×104／ml，以3×105／孔的浓度将细胞种入6#L板(已放置盖玻片)，37。C 5％C02温箱培养15．30分钟，更换培养基，即去除延迟贴壁的少突胶质细胞，贴壁细胞即为纯化的小胶质细胞。分离后的底层混

合细胞继续加入15％FBSDMEM／F12培养基，4．5天后可以再次收获小胶质细胞。 2．1．3免疫荧光鉴定步骤 1)小胶质细胞接种第2—3天后，待细胞在盖玻片上伸出伪足时，自培养箱中取出。 2)用预温的PBS洗3次，每次5分钟 3)4％多聚甲醛室温固定20分钟左右 4)PBS洗3次，每次5分钟 5) 5％BSA室温封闭30分钟 6)加抗Iba抗体(用1％BSA稀释)放在湿盒里，4V过夜 7)PBS洗3次，每次5分钟 8)DIIFITC．山羊抗小鼠IgG(用1％BSA稀释)避光孵育1小时 9)PBS洗3次，每次5分钟 10)DIIDAPI(用1％BSA稀释)避光孵育5分钟 11)1xPBS洗3次，每次5分钟 12)95％甘油封片

血管内皮细胞体外培养(赵)

血管内皮细胞体外培养 1．概述血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是衬于心，血管和淋巴管腔内表面的一种单层扁平上皮细胞。EC极薄，厚度约为0.1～1μm，长约25～50μm，宽约10～15μm，在体内呈梭形，相邻细胞之间借少量粘合质彼此嵌合，细胞长轴与血流方向平行。其超微结构特点是在胞质中含有的特殊颗粒，称Weibel-palade小体（内含有与凝血有关的第Ⅷ因子相关抗原）；细胞间有紧密连接的缝隙相连。EC除了能保持血管壁内表面的光滑和通透性外，还有多种生物学功能：维持正常的血液流动性，分泌多种生物活性物质，在调节细胞生长，改变脂质代谢，维持血管壁的完整性，调节血管张力和选择性通透性以及免疫调节方面起到重要作用。EC功能的异常，与血栓形成、动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病及肿瘤扩散，免疫疾病都有密切关系。体外培养中的EC形态呈"鹅卵石样"镶嵌排列，细胞长满后呈接触抑制现象。 2．培养方法EC生长在血管内表面，由于其所处的独特位置不利于观察和研究，所以体外培养EC显得特别重要，目前已有多种种属（人、牛、猪、兔、大鼠等），多种组织（脐带动脉、静脉、肺动脉、主动脉、脑毛细血管、心脏毛细血管等）的EC能在体外培养成功。人们将培养器皿预先用明胶或纤连蛋白或胶原等粘附蛋白包被后，形成人工的EC下基质层，可促进EC的粘附与生长。 2.1 方法原理用酶消化法，酶消化＋机械刮脱法或单纯刮脱法将EC分离下来，在适宜的条件下可贴壁并长成致密单层。 2.2 介绍几种主要EC的分离 2.2.1 酶消化法大血管内皮细胞的分离 2.2.1.1 人脐带动、静脉（或其它大血管） a．在37℃水浴中，预热培养用的所有无菌溶液，备用。 b．在无菌条件下，取健康产妇分娩后新鲜的婴儿脐带（25cm左右，不超过6h），选择无夹痕、无扭曲、无凝血阻塞的部分，放入含有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml链霉素的D-Hanks液中，在脐静脉或脐动脉的两端插入磨平的注射器针头用丝线扎紧，用注射器从一端注入D-Hanks液冲洗血管，直到流出的液体无血迹。 c．注入0.1%胶原酶（1型）溶液，待血管内残留的D-Hanks液流尽后，用注射器封注另一端针头，继续注入胶原酶溶液，致血管充盈，放入37℃无菌的D-Hanks液中，消化15min 后取出。 d．收集血管内酶溶液，并且注入含20%小牛血清的M199培养液（pH 7.2）冲洗血管收集合并于同一容器内，以1000r/min离心7～10min。 e．去上清液，加入20%小牛血清的M199培养液重新悬浮细胞备用。 f．其它大血管如牛主动脉，猪主动脉等，可在无菌下分离，然后用线结扎血管各分支，再依上述步骤分离EC。 2.2.2 酶消化法小血管内皮细胞的分离 2.2.2.1 兔主动脉，大鼠主动脉因血管较小，分支极细，不能采用上述方法消化。 a．将动物主动脉取出后放D-Hanks中，将血管外的脂肪细组织分离干净，用丝线结扎血管一端，然后用探针顶住该端，将整条血管翻转，使内膜翻在外面。将另一端折入腔内0.5cm，并用丝线结扎紧，以防外膜外露及避免酶液进入外膜腔内。 b．用D-Hanks液清洗干净外翻的内膜面，然后血管浸泡在含0.1%胶原酶溶液的小瓶内，盖上瓶盖在37℃水浴中轻轻摇荡消化，使EC离散下来，消化15～20min后，见酶液稍有混

实验一巨噬细胞吞噬功能实验

实验一巨噬细胞吞噬功能实验 1、【实验原理】 (1)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞，具有活跃的吞噬功能。能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。MΦ受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。 (2)此实验采用体内法，即：在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞30min 后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美蓝染色，油镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞中的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异免疫水平。 2、【实验步骤】（1）试验前3d，小白鼠腹腔注射6％无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。（2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml，轻揉腹部，使红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用吸管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴 0.03％xx溶液，盖上盖玻片。（4）低倍镜下找到观察区域后，换高倍镜下进行观察，计数 3、【实验结果】 4、【结果分析】（1）如图所示，在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可以看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。

（2）镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。 (3)由于未将腹腔液和冷美蓝溶液充分混合均匀，使得视野中出现大片深染区域。总体实验结果较好，视野中央可见清晰的吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞。 5、【注意事项】（1）涂片的薄厚要适当，否则影响计数。（2）小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。（3）如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。（4）剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。（5）被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。实验二双向琼脂扩散实验 1、【实验原理】（1）可溶性抗原与相应抗体特异性结合，两者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下，经一定的时间，可形成肉眼可见的沉淀线/环的现象，称为沉淀反应。（2）琼脂扩散是指为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中所呈现的一种沉淀反应。当对应的抗原、抗体在半固体琼脂终相遇，且二者比例适当时，便出现可见的白色沉淀线，这组沉淀线是一组抗原、抗体的特异性复合物。当琼脂中有多组不同的抗原、抗体存在时，便各自依其扩散速度的差异，再适当的部位形成独立的沉淀线。因此，琼脂扩散不仅用于疾病的诊断，更广泛地用于抗原成分的分析。（3）双向琼脂扩散试验是定性实验。将可溶性抗原与相应抗体分别加人琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。如

(产品管理)气管支架使用产品说明书

（产品管理）气管支架使用产品说明书

MICRO-TECH Stent and Introducer system 食道支架产品使用说明书NO.1 【品名】MTN型形状记忆钛镍合金食道加膜支架【主要成分】钛、镍和硅橡胶【结构】编织/机织支架、被覆硅橡胶薄膜【形状】壹端或俩端为喇叭口形、杯口形、球形、蘑菇形等的圆柱形【型号】MTN-S-G 【规格】直径16-22mm，长度40-120mm。【用途】用于食道、贲门和吻合口狭窄的扩张治疗及食道瘘的堵瘘治疗【特点】 1、钛镍形状记忆合金自膨式食道及吻合口支架具有优良的生物相容性和耐腐蚀性，同时具有稳定的记忆特性和超弹性。于0-10℃（或冰水）环境中支架为软化状态，于壹定范围内可改变形状，易于放入φ8mm的置入器中。于人体内（环境温度大于33℃之上）将支架由置入器中放出，可逐步恢复到原来形状。支架产生持续柔和的径向扩张力，作用于食道内壁上，使狭窄部位逐步扩张且恢复通畅。 2、支架于体温下具有良好的超弹性，能顺从食道的蠕动，从而既保持食道通畅又无太多不舒适感。机织支架的结构经特殊设计，病人不适感更小。 3、支架俩端圆滑，无尖角或毛刺，减少对食道壁的损伤。 4、被覆于支架表面的硅橡胶薄膜具有良好的生物相容性，耐胃酸腐蚀，可抑制肿瘤向食道内生长或可封堵食道瘘口。【适应证】有手术禁忌的食道癌、贲门癌、化学损伤或其他创伤造成的食道狭窄，术后吻合口狭窄经多次扩张无效者及肿瘤复发者、贲门失弛缓症、食道气管瘘、食道纵隔瘘等。

MICRO-TECH Stent and Introducer system 食道支架产品使用说明书NO.2 【使用方法】 1、支架长度选择：壹般支架长度要超过狭窄段30～40㎜，植入食道后支架下端超过狭窄段10～20㎜，上端高出20㎜左右； 2、支架直径选择：应根据患者情况选用不同直径的支架，壹般食道狭窄选用φ20㎜的支架，因放射治疗引起的狭窄宜用φ16～18㎜的较柔软的支架或机织支架，端部形状以杯/球形较为适宜； 3、术前壹天行钡餐拍片，确定狭窄部位的位置，狭窄段直径及长度，以选择适当地支架； 4、术前6小时禁食，术前10分钟以2％利多卡因口咽喷雾局麻，肌注15～20mg654-2，松弛食道平滑肌，减少消化道分泌物； 5、于X光监视下操作，经口先插入导管，经食道达胃部，再插入硬导丝至胃部；狭窄严重者，经口插入泥鳅导丝至胃部再沿泥鳅导丝插入导管，经导管交换硬导丝且将导丝盘于胃部后撤出导管,沿导丝插入置入器，确定位置正确后释放支架(位置的确定及释放支架的方法详见不同的置入器说明)。于内镜下操作，内镜的活检孔兼起导管的作用，狭窄严重内镜不能通过时，需于X线下操作； 6、对具有不同使用功能的置入器的具体使用方法见附录(附录中的标志为包装盒所装的置入器(或支架和置入器套装))。【注意事项】 1、必须由经过培训的医师操作；

生化培养箱标准操作规程

1.目的规范SPX-100B-Z型生化培养箱的使用、维护与保养。 2.范围适用于SPX-100B-Z型生化培养。 3.职责 QC人员对本规程的实施负责，部门负责人监督实施。 4.规程 4.1准备操作 4.1.1接通电源，打开电源开关，使开关在“通”的位置（“I”为通，“O”为断），设备进入上电状态。此时即可开始温度和时间的设定操作。 4.1.2温度/时间键可进行温度与时间切换： 4.1.3温度设定：按一下温度/时间键，仪表的温度设定指示灯亮。按设定键SV状态，设定窗三个数字中有一个数闪烁，再按移位键（<）将闪烁数位移至需设定位，然后按△或▽键即可改变温度设定值到所需温度（最小值0℃），最后按下设定键将设定值存入单片机，此时左显示窗测量温度，右显示窗显示设定温度。 4.1.4时间设定：按下温度/时间键，仪表的时间设定指示灯亮。按设定键TV状态，设定窗三个数字中有一个数闪烁，再按移位键（<）将闪烁数位移至需设定位，然后按△或▽键即可改变时间设定值，直到所需时间（最小值1h），最后按下设定键将设定值存入单片机，此时左显示窗测量时间，右显示窗显示设定时间。 4.1.5定时功能：仪器送电时，定时功能开始启动。定时结束后，输出关闭。加热器和制冷压缩机停止工作，培养箱内温度逐渐达到外界环境温度。 4.1.6状态指示：设定完成后设备按设定好的参数运行。当测量温度低于设定温度时，设备进入加热状态，加热指示灯亮。反之，当测量温度高于设定温度时，设备进入制冷状态。当测量温度高于设定温度4℃时，警报指示灯亮，蜂鸣声也发出鸣叫。 4.1.7参数修改：运行中若要修改温度、时间参数，再按程序2.2.1、2.2.2进行修改。 4.1.8快速设定：在设定参数时，三个数字中有一个数闪烁，若按△键则设定值末位数加 1；若按此键不放开，约3秒钟后，设定值连续加1；若按▽键则设定值末位数减1；若按此键不放开，约3秒钟后，设定值连续减1。 4.2清洁、维护与保养 4.2.1仪器使用完毕后，及时清洁仪器表面，如仪器表面有污迹，可用软布沾清洁剂清洗，并填写使用记录。 4.2.2驱潮处理方法：每季度按使用条件通电加温运行5小时，并每隔2小时开一次门放掉潮气，以驱除电气部件的潮气，避免损坏有关器件。

单核吞噬细胞系统

单核吞噬细胞系统 mononuclear phagocyte system,MPS 血液中的单核细胞和由其衍生的各种组织器官中的巨噬细胞（m）的总称，组织中的巨噬细胞随所在器官的不同而有不同的名称（图1[单核吞噬细胞的分布]）。具有强大的吞噬能力。主要功能为：①通过清除损伤和衰老的细胞及变异细胞维持机体自身稳定，即在机体内起“清洁工”的作用；②非特异地吞噬和破坏侵入机体的病原体和其他异物；③在机体的特异性免疫中，处理并呈递抗原信息给淋巴细胞，诱导免疫反应和调节免疫应答。 ..梅契尼科夫于1882年在许多动物中观察到吞噬现象，并首先提出巨噬细胞一词。K.A.Z.阿绍夫1913年把全身各处对胶体染料有强吞噬力的细胞归纳为网状内皮系统。这包括血窦及淋巴窦的内皮细胞，脾脏、淋巴结等器官中的网状细胞以及单核细胞、巨噬细胞；他认为网状细胞可能变为巨噬细胞，它们共同起源于间充质细胞。后来发现网状细胞及内皮细胞无明显的吞噬能力，并且它们的起源不同。1969年拉尔夫?范?菲尔特根据单核细胞的分化过程，提出单核吞噬细胞系统(MPS)一词，用以取代网状内皮系统一词。单核细胞是这样分化的：造血干细胞→嗜中性粒细胞和巨噬细胞集落形成细胞（CFU-GM，为嗜中性粒细胞和单核细胞的共同前体细胞）→原单核细胞→幼单核细胞→单核细胞。各种组织中的巨噬细胞均由血液中的单核细胞迁移到组织中进一步成熟而形成，从单核细胞到巨噬细胞的变化是一个连续的过程，二者的功能又相同，所以实际应用中二者常相提并论，其用名也十分混乱，后者又称吞噬细胞、组织细胞、大单核细胞，等等。 MPS细胞的形态单核细胞是血液中白细胞的一种，占白细胞总数的3～8％(240～480个/mm)，在赖特（原译瑞氏）氏染色血涂片上,单核细胞呈圆形或椭圆形,直径10～18m，平均约15m，是最大的白细胞。细胞质为弱嗜碱性,染色浅灰蓝色，内有大小不等的直径约0.1～0.2m的嗜天青颗粒（为溶酶体），核呈肾形或马蹄形。嗜天青颗粒的过氧化物酶呈阳性，细胞核周围脂酶呈阳性，这两种组织化学染色是鉴定单核细胞的重要方法。在透射电子显微镜下，单核细胞有发育较好的各种细胞器,还可见许多小沟,可能为吞饮小泡。巨噬细胞体积大，直径超过20m，细胞内含有酸性水解酶的溶酶体。在扫描电镜下，巨噬细胞表面有很多微绒毛和伪足，吞噬和消化异物功能强。MPS细胞的膜表面抗原和受体MPS的细胞表面具有特异性抗原（如CD）,主要组织相容性类和类抗原，其中类抗原常称为Ia（免疫相关）抗原，纤维粘连蛋白，IgG的Fc段受体，补体C3b受体，淋巴因子受体和淋巴细胞受体等。这些抗原和受体都与MPS 发挥多方面的免疫功能有关。 MPS细胞的异质性表现在两个方面：①不同组织器官中的巨噬细胞的异质性，如腹腔巨噬细胞的能量代谢以糖酵解为主，而肺泡巨噬细胞的能量代谢以有氧氧化为主。大鼠的腹腔巨噬细胞对T细胞增殖有辅助作用，而肺泡巨噬细胞对T细胞增殖反而有抑制作用。另外,两者在趋化性、补体受体等方面也有一定程度的差异，这种差异是组织局部适应的结果。②同一组织中MPS细胞的异质性，根据单核细胞是否具有能与单克隆抗体Mac-120结合的表面抗原，可将人外周血中的单核细胞分为Mac-120和Mac-120两个亚群，有Mac-120的单核细胞能刺激T细胞的增殖。根据Ia抗原的有无可将豚鼠腹腔的巨噬细胞分为Ia和Ia两群,Ia的巨噬细胞具有辅助活性。 MPS的功能MPS参与非特异性免疫反应。MPS的细胞能非特异地吞入破坏多种病原体和其他异物。对颗粒性物质的吞入称为吞噬作用，对胞外液体的吞入称为吞饮作用,这些都是消耗能量的主动过程。图2[巨噬细胞对细菌的吞噬作用及其后果]示巨噬细

THERMO_二氧化碳培养箱中文说明书

THERMO FORMA 370/371&380/381 高温灭菌，气套CO2培养箱操作手册

目录一．参数设置二．参数校准三．系统信息四．报警信息五．高温消毒

一、参数设置 a 设置温度 Thermo Forma 370系列的co2培养箱工作温度围为10℃–50 ℃，此温度受环境温度的影响。出厂时，厂家将温度设定为10℃，在此设置下，所有的加热器都将关闭。按以下步骤设置温度： 1.按“MODE”到“SET”位置。 2.按“←→”直到显示“TEMP XX.X”信息 3.按“↑↓”设置所需要的温度值。 4.按“ENTER”保存设定值。 5.按“MODE”到“RUN”位置或按“←→”选择其他的参数。 b.设置过温温度 370系列的co2培养箱具有了第二级温度监控系统来监测箱体的温度。这是机器的一个自我保护功能。一旦温度不能控制，机器将关闭所有的加热器。箱体的报警温度是过温温度的±1℃。厂家设定过温温度是40℃，但是过温温度最高可设定为55℃。若设置温度高于过温温度，机器将给过温温度自动增加1℃。一般过温温度应高于设置温度1℃。按以下步骤设置过温温度: 1.按“MODE”到“SET”位置。 2.按“←→”直到显示“O TEMP XX.X”信息。 3.按“↑↓”设置所需要的过温温度值。 4.按“ENTER”保存设定值。 5.按“MODE”到“RUN”位置或按“←→”选择其他的参数。 c.设置CO2浓度带有T/CCO2传感器的培养箱，出厂时厂家已校准，校准时的环境是温度：37℃，高湿度，CO2：10%在腔体为37，高湿度，10%的CO2浓度下被校准过。因此如果设置温度为37，湿度盘放满了水，需要的CO2浓度不超过10%，CO2的浓度可以立即设定。否则，培养箱就的稳定12小时后才可设定CO2浓度值。所有培养箱的CO2浓度围是0.0%-20%。出厂时厂家设定的CO2浓度为0.0%。在此浓度下，CO2控制和报警系统都将关闭。按以下步骤设置CO2浓度值；

大鼠大脑皮层星形胶质细胞原代培养及传代

大鼠大脑皮层星形胶质细胞原代培养及传代、试剂 Poly-L-lysine (Sigma,P2636) DMEM (Invitrogen,11995-065) 二、器械手术器械：眼科剪x2、眼科镊直、弯各x2、显微镊x2 （金钟，WA3050）、显微剪 x1 3ml 移液管( Biologix, 30-0138A1) 南京军区总院神经内科实验室许丽丽 2012-12-01 1) 2) 3) FBS (Invitroge,10099-141) 4) HBSS, no Calcium, no Magnesium (Invitrogen, 14170-112) 5) 0.25% Trypsin-EDTA ( Invitrogen, 25200-056) 6) DPBS (HyClone ，SH30028.01B ) 7) dd H 2O 8) 75％酒精 1) 2) 100 ml 小烧杯 3) 200 目不锈钢筛 4) 细胞计数器（求精） 5) 50ml 离心管( Corning ， 430828)、 15ml 离心管( Corning ， 430790) 6) 25ml 培养瓶( Corning ， 430639)或 75ml 培养瓶( Corning ， 430641) 7) 100ml 玻璃瓶（蜀牛） 8) 直径为 60mm 的培养皿 LabServ,310109010) 9)

10) 过滤器( Millex-GP, SLGP033R)B 11) 注射器：50ml、5ml 各1 12) Pipette and pipette tips 13) 冰袋、手套、口罩

血管内皮细胞培养

血管内皮细胞（endothelial cell, EC）体外培养 1．概述血管内皮细胞（endothelial cell, EC）是衬于心，血管和淋巴管腔内表面的一种单层扁平上皮细胞。EC极薄，厚度约为0.1～1μm，长约25～50μm，宽约10～15μm，在体内呈梭形，相邻细胞之间借少量粘合质彼此嵌合，细胞长轴与血流方向平行。其超微结构特点是在胞质中含有的特殊颗粒，称Weibel-palade小体（内含有与凝血有关的第Ⅷ因子相关抗原）；细胞间有紧密连接的缝隙相连。EC除了能保持血管壁内表面的光滑和通透性外，还有多种生物学功能：维持正常的血液流动性，分泌多种生物活性物质，在调节细胞生长，改变脂质代谢，维持血管壁的完整性，调节血管张力和选择性通透性以及免疫调节方面起到重要作用。EC功能的异常，与血栓形成、动脉粥样硬化、高血压等心血管疾病及肿瘤扩散，免疫疾病都有密切关系。体外培养中的EC形态呈“鹅卵石样”镶嵌排列，细胞长满后呈接触抑制现象。 2．培养方法EC生长在血管内表面，由于其所处的独特位置不利于观察和研究，所以体外培养EC显得特别重要，目前已有多种种属（人、牛、猪、兔、大鼠等），多种组织（脐带动脉、静脉、肺动脉、主动脉、脑毛细血管、心脏毛细血管等）的EC能在体外培养成功。人们将培养器皿预先用明胶或纤连蛋白或胶原等粘附蛋白包被后，形成人工的EC下基质层，可促进EC的粘附与生长。 2.1 方法原理用酶消化法，酶消化＋机械刮脱法或单纯刮脱法将EC分离下来，在适宜的条件下可贴壁并长成致密单层。 2.2 介绍几种主要EC的分离 2.2.1 酶消化法大血管内皮细胞的分离 2.2.1.1 人脐带动、静脉（或其它大血管） a．在37℃水浴中，预热培养用的所有无菌溶液，备用。 b．在无菌条件下，取健康产妇分娩后新鲜的婴儿脐带（25cm左右，不超过6h），选择无夹痕、无扭曲、无凝血阻塞的部分，放入含有100 U/ml的青霉素和100 μg/ml链霉素的D-Hanks液中，在脐静脉或脐动脉的两端插入磨平的注射器针头用丝线扎紧，用注射器从一端注入D-Hanks液冲洗血管，直到流出的液体无血迹。

单核巨噬细胞系统与正常红细胞系统详解

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单核-巨噬细胞系统单核-巨噬细胞系统（mononuclear phagocyte system、MPS）是高等动物免疫系统的一部份，由可以进行吞噬作用的细胞组成。包括血液中的单核细胞和组织中固定或游走的巨噬细胞，在功能上都具有吞噬作用。单核-巨噬细胞均起源于骨髓干细胞，在骨髓中经前单核细胞分化发育为单核细胞，进入血液，随血流到全身各种组织，进入组织中随即发生形态变化。当血液中的单核细胞进入组织转变为巨噬细胞后，一般不再返回血液循环。巨噬细胞在组织中虽有增殖潜能，但很少分裂，主要通过血液中的单核细胞补充。单核-巨噬细胞系统的细胞具有吞噬能力，除了吞噬细菌等外来病原，还可吞噬自身老旧的细胞（如库普弗细胞吞噬红细胞）、抗原

抗体复合物、蓄积的脂质等，并可在吞噬外来抗原后与辅助T细胞进行抗原呈现，活化特异性免疫反应。吞噬细胞与淋巴球、肥大细胞、粒细胞等有互相促进或抑制的交互作用，单核吞噬细胞系统的失调会造成疾病。正常红细胞系统的介绍正常红细胞系统在成熟过程中的变化特点骨髓中幼红细胞存在于血窝(nlst)或血岛(Island)中，形成红细胞集落，常常是中心性网状。脱核后红细胞的大小常常可作为各种原因贫血诊断依据、如巨幼细胞贫血，小细胞贫血以及正细胞贫血等。在发育过程中其特点：(1)细胞由大逐渐变小；(2)细胞核中异染色质凝聚不断增加，核仁从明显到逐渐消失；(3)细胞成熟时整个细胞核诽出细胞外；(4)细胞质内核蛋白体、线粒体由多到少、最后消

恒温培养箱说明书

电热恒温培养箱使用说明书 ●此＂使用说明书＂务请送至最终操作人员手中！ ●在开始操作之前务请阅读并理解＂使用说明书＂的全部内容．对于误操作而引起的不良后果，本公司概不负责。 ●＂使用说明书＂中的内容在今后可能进行变更与完善，到时公司将不另行通知，敬请谅解。 ●客户在使用过程中如发现异常现象，请及时与本公司联系。 ●阅读＂使用说明书＂请妥善保管以随时查阅，同时请务必填妥并寄出您的保修卡（寄至本公司售后服务中心）。

产品型号DHP-9052 制造编号制造日期2015-04-24

目录（一）安全提示 (2) （二）概述 (3) （三）结构简介 (3) （四）技术指标 (3) （五）工作原理 (3) （六）安装与调试 (3) （七）温度设定法 (4) （八）安全注意事项 (5) （九）维修及保养 (5) （十）电器原理图 (5) （十一）故障处理 (6) （十二）其他 (7) （一）安全提示

！请用户务必遵守以下所列各项安全注意事项 1.培养箱必须有效接地。 2.必须使用与培养箱要求一至的电源。 3.不允许随意接长或剪短产品电源连线。 4.不允许放易燃、易爆、易挥发及含有腐蚀性的物品进行干燥烘培。 5.不得将手或物件随意插入进风或出风口。 6.培养箱出现故障，务必请专业人员进行维修。安全警告 1．必须充分阅读理解干燥箱使用说明书后，才可进行操作。 2．更换熔断器及电器部分维修时必须拔下电源插头。 3．培养箱长期不用，必须拔下电源插头。（二）概述电热恒温培养箱是工农业生产、科学研究、大学、仪器医疗卫生等,单位实验室的必需设备,供细菌培养、育种、发酵及温度不高于60℃的其它恒温试验用. （三）结构 1.本产品外壳体用优质薄钢板冲压而成,表面喷塑,内胆为SUS304不锈钢,双重密封,保温材料为优质硅酸棉.箱内装有微型风扇,微风循环，箱内温度均匀. 2.温控装置采用自适应温度控制液晶显示,无须控温参数调节,控温精度高,无超调,具有定时功能, 超温保护功能,定时时间9999分钟. 3.电器控制部分在顶部,使用维护方便. （四）技术指标

液压支架使用说明

ZFS7200/17/29H型放顶煤工作面液压支架ZFG7200/22/30H（A）型放顶煤过渡液压支架使用说明书沈阳煤炭科学研究所 2003年4月

目录一、概述二、支架的组成、用途及特点三、主要技术特征四、适应条件及配套设备五、主要结构部件及作用六、液压系统七、主要液压元件八、支架的验收、运输及井下安装九、支架的使用、操作和维护十、常见故障、原因及处理

一、简述 ZFS7200/17/29H型放顶煤工作面液压支架ZFG7200/22/30H型放顶煤过渡液压支架是根据我国厚及特厚煤层且矿压较大的地质条件，并针对使用现场的具体使用条件和用户具体要求，在吸取国内外同类型支架优点基础上设计、制造的两种高工作阻力、高强度、大插板支撑掩护式低位放顶煤支架。两种支架与采煤机、前、后两部输送机及端头支架配套使用，可实现水平工作面或倾角小于10 的倾斜工作面厚或特厚煤层的割煤、移架、支护、放煤和运煤机械化作业，为推进与完善我国的综放开采，增加工作面单产，提高经济效益，减轻工人劳动强度，实现安全生产，提供了两种较为理想的国内外工阻最高的综放支护设备。两种支架均为四柱倒置四连杆支撑掩护式低位大插板放煤型式。四根立柱支撑顶梁，主要承受顶板的垂直压力，并通过底座传递到底板上；通过布置在前、后两排立柱内的倒置宽整体四连杆与顶梁及底座铰接，使支架升降按一定的双纽线轨迹运动，并承受支架所受的水平力和侧向力；尾梁由两个内径为160mm（过渡架180mm）千斤顶支撑，内设行程800mm的大插板，用来掩护支架后部空间并放煤，顶梁和尾梁均带有固定和活动侧护板调节架间距；前梁带有伸缩梁和护帮板，使得该支架支撑能力大，切顶与防护性能好，支架纵横向稳定性较强。 ZFS7200/17/29H型放顶煤工作面支架、ZFG7200/23/32H型放顶煤过渡支架主要参数合理，结构比较完善，功能较为全面，材料及制

小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案

小鼠星形胶质细胞原代培养及分离纯化实验方案经过相关文献阅读，参考了众多对于小胶质细胞培养方案，对比了不同方案的利弊优缺，整合了相对符合本实验室条件和实验要求的方法，如有其他变更方案，以修改后为准。 1. 实验材料与试剂剪刀、小镊子、小毛刷、DMEM/F12培养液、胎牛血清、马血清、0.25%，0.05%胰蛋白酶、PBS液、青霉素、链霉素、培养皿离心管、50 mL 细胞培养瓶、CO2 恒温细胞培养箱、倒置相差显微镜、细胞板、荧光标记二抗、0.4% Trypan Blue 染色液、抗小鼠OX42单克隆抗体和新生SD小鼠等试剂配比： (1) DMEM 10:10:1 DMEM, 10%FBS, 10%Horse Serum, 1% Penicillin/Streptomycin (P/S) (2) DMEM 5:5:1 DMEM, 5% FBS, 5% of Horse Serum, 1% P/S (3) SERUM FREE MEDIUM + GROWTH FACTORS（DMEM/F12无血清培养基+生长因子） 25μg/ml转铁蛋白，10nM生物素，30 nM亚硒酸钠，1μg/ml putrescine（腐胺），5μg/m l胰岛素，20 nM hydrocortisone（氢化可的松），20 nM progesterone（孕激素），1％P / S+生长因子（5ng/ ml的血小板衍生生长因子PDGF-AA和5ng / ml碱性成纤维细胞生长因子bFGF）胰蛋白酶/ EDTA 溶液0.05％胰蛋白酶+0.02％EDTA在W / O内Ca2+ / Mg2 +的HBSS DMEM/F12 containing 25 μg/ml transferrin, 10 nM biotin, 30 nM sodium selenite, 1 μg/ml putrescine, 5 μg/ml insulin, 20 nM hydrocortisone, 20 nM progesterone, 1% P/S + Growth Factors (5 ng/ml PDGF-AA and 5 ng/ml bFGF)Trypsin/EDTA solution 0.05% Trypsin + 0,02% EDTA in HBSS w/o Ca2+/Mg2+

血管内皮细胞功能与心血管疾病关系的研究进展

血管内皮细胞功能与心血管疾病关系的研究进展摘要：血管内皮细胞（VEC）功能与心血管疾病的发生和发展密切相关, 本文综述了血管内皮细胞合成与释放的一氧化氮、内皮素、血管紧张素Ⅱ等多种生物活性物质及VEC功能紊乱与心血管疾病的关系，研究VEC功能与心血管疾病形成之间的相互关系将为心血管疾病的治疗提供新思路、新策略。关键词：血管内皮细胞；一氧化氮；内皮素；血管紧张素Ⅱ；心血管疾病现已证明VEC除了完成血液和组织液的代谢交换以外，还是机体最大的内分泌腺【1】，可以产生和分泌十余种生物活性物质，具有维持正常的血管张力、血液的正常状态和动态平衡等作用，并通过其屏障和分泌功能，影响着炎症反应的发生、发展，参与调节机体的免疫应答。VEC功能紊乱在高血压、心力衰竭、动脉粥样硬化（AS）等心血管疾病的发病过程中具有重要意义。 1血管内皮细胞功能【2】 VEC的功能极其重要和复杂。1维持血管内膜的光滑，防止血小板及白细胞粘附，防止有害物质侵入血管壁。2具有半透膜的作用，维持血液、组织液中物质的交换。3合成并释放多种生物活性物质，如一氧化氮（NO），PGI2,，内皮素（ET）等，调节血管张力，维持正常血压。4合成致栓及抗栓物质，维持其动态平衡，如肝素，组织型纤溶酶原激活物（t-PA）及血管性假血友病因子（vWF）等。5 合成胶

原基底膜及血管平滑肌保护层。6合成血管生长因子及血管紧张素转化酶（AEC）。7影响血管壁对脂蛋白等物质的代谢。 2血管内皮细胞功能的标志物质【3~5】 2.1 一氧化氮(NO)。NO由血管EC释放，EC以L一精氨酸和分子氧作为底物，在NO合酶作用下生成NO 继之进入邻近的平滑肌细胞，激活鸟苷酸环化酶分解GTP使c—GMP增加，导致血管平滑肌舒张。NO还有抑制血管平滑肌增殖、抗血小板聚集和抗血栓形成作用【 3.5】。基础状态下，EC作为血藏感受器，转化血液切变力的机械信号为化学剌激，促使NO释放，维持血管张力和血流量相对恒定。乙酰胆碱、5_羟色胺、P物质，缓激肽、凝血酶、腺苷、TXA2、组胺{细胞因子如白介素-1、肿瘤坏死因子以及内毒素，都能促使NO释放。 2．2 PGI2。EC通过环氧化酶及前列环素合成酶途径代谢花生四烯酸产生PGI2，再通过第二信使cAMP发挥生物学效应。凝血酶、缓激肽、组胺，腺苷、高密度脂蛋白、TXA2、白三烯、血小板生长因子、组织缺氧和血流动力学应激等，促使EC释放PGI2。PGI2和NO 协同扩张血管，防止血小板聚集和抗血栓形成【5】。 2．3ET1988年Yanagisawa【6】从猪主动脉EC中分离提纯出21 个氨基酸组成的多肽,称内皮素。ET 受体中B型主要分布在EC,激活后可使EC释放NO、PGI2,但其舒血管效应常被A型受体兴奋所致平滑肌细胞强烈而持久的收缩所掩盖。有实验表明,给大鼠持续滴注ET1 后血液浓缩,微动脉和微静脉收缩,微循环血流量减少,血栓形成;

SPX-100150250B-Z型生化培养箱使用说明书

SPX-100/150/250B Z型生化培养箱使用说明书上海跃进医疗器械厂

SPX-100/150/250B-Z型生化培养箱使用说明书一、概述 SPX型生化培养箱是具有冷热控制的高精度恒温设备,可用于植物培养，育种试验，细菌、霉菌、微生物的培养、保存，水体分析的BOD 测定以及其它用途的恒温试验。是生物遗传工程、医疗、卫生防疫、药检、农牧水产等科研单位理想的试验设备。二、结构特点本机箱体采用优质薄板加工而成，表面涂装牢固、美观。箱门中间装有双层中空玻璃视窗，并附有箱内照明，使试验物品一目了然。内胆采用镜面不锈钢薄板，四角圆弧形加工制成，箱内温度均匀性好，经久耐用，清洗方便。控温部分采用以单片机技术的新型智能数显温度调节仪，用户可根据不同要求，通过操作控制面板的触摸键对温度及时间进行设定、调节，达到试验目的。三、工作原理培养箱由位于箱内温度传感器所感受到的实际温度转换成电信号，经微电脑来控制加热器或制冷压缩机工作，从而达到所需温度。四、技术参数 1、公称容积：100L、150L、250L； 2、控温范围：5～50℃； 3、温度波动允差：±1℃（100L、150L）±1.5℃（250L）； 4、温度均匀度允差：±1.5℃（100L、150L）±2℃（250L）； 5、电源电压：交流220V/50Hz；

6、输入功率：280W（100L）320W（150L、250L）； 7、工作环境：环境温度10~30℃相对湿度70%以下； 8、制冷剂：R12； 9、设备类别：I类B型。五、安装 1．本设备需安装于避开阳光直射，通风干燥的室内，设备与墙壁必须有10CM以上距离。 2．箱体可用底部调节螺钉调节，使箱体安置平稳。 3．本设备使用交流220V/50Hz电源，供电电路中必须有可靠接地线，保证使用安全。六、使用方法 1、接通电源，打开电源开关，使开关处于“通”的位置，设备进入上电状态。此时即可开始温度和时间的设定操作。 2、温度/时间键可进行温度与时间切换： 1）温度设定：按一下温度/时间键，仪表的温度设定指示灯亮。按设定键进入SV状态，设定显示窗三个数字中有一个数闪烁，再按移位键（< ）将闪烁数位移至需设定位，然后按∨或∧键即可改变温度设

掩护式液压支架说明书

. 前言经过近30 年的发展和努力, 我国液压支架的设计、制造水平在不断提高, 特别是在缓倾斜中厚煤层的液压支架方面积累了相当丰富的经验, 架型已基本趋于成熟、完善, 在品种和质量方面与国际先进水平相比差距越来越小。但在控制元件和控制系统方面, 与先进国家的产品相比还有较大差距。所以, 今后除应继续针对我国国情和煤层具体条件, 开发一些新架型、新品种外, 还应在改进支架控制系统和提高支架的工作可靠性方面下功夫。近年来, 我国采煤综合机械化的水平有所提高, 随着综合机械化采煤技术的不断发展和新型大功率采煤机、工作面输送机的出现, 要求支架与之相配套, 但若支架的控制系统不作相应的改进, 是满足不了这一要求的。到目前为止, 我国国产液压支架的控制方式仍然停留在跟机手把单向邻架控制或本架控制水平。这种控制方式, 虽然具有控制系统简单、制造容易、造价较低和对煤层地质条件变化适应性较强的优点, 但它存在严重缺点: ①工人劳动条件差, 安全性差; ②移架速度慢, 影响采煤机效率的发挥; ③通风条件差,支架故障率高; ④支架支护效能的发挥程度与操作人员的经验多少和技能高低有密切关系。液压支架实现自动控制后, 就可有效地克服上述缺点, 实现对支架的电液控制, 而且有多种控制方式可供选择, 人员可在较安全的地方集中对整个工作面的支架进行远程控制或程序控制

1.液压支架的概述 1.1液压支架的组成液压支架由顶梁、底座、掩护梁、立柱、推移装置、操纵控制系统等主要部分组成。 1.2液压支架的用途在采煤工作面的煤炭生产过程中，为了防止顶板冒落，维持一定的工作空间，保证工作人员安全和各项作业正常进行，必须对顶板进行支护。而液压支架是以高压液体作为动力，由液压元件与金属构件组成的支护和控制顶板的设备，他能实现职称、切顶、移动和推移输送机等一套工序。实践表明液压支架具有支护性能好、强度高、移架速度快安全可靠等优点。液压支架与可弯曲输送机和采煤机组成综合机械化采煤设备，它的应用对增加采煤工作面产量、提高劳动生产率、降低成本、减轻工人的体力劳动和保证安全生产是不可缺少的有效措施。因此，液压支架是技术上先进、经济上合理、安全上可靠，是实现采煤综合机械化和自动化不可缺少的主要设备。 1.3液压支架的工作原理液压支架在工作过程中，必须具备升、降、推、移四个基本动作，这些动作时利用泵站供给的高压乳化液通过工作性质不同的几个液压缸来完成的。

星形胶质细胞,少突胶质细胞分离培养新方法研究

星形胶质细胞,少突胶质细胞分离培养新方法研究.df 星形胶质细胞,少突胶质细胞分离培养新方法研究.pdf相关资源推荐少突胶质细胞星形胶质细胞分离方法细胞星形胶质细胞,少突胶质细胞分离培养新方法研究.pdf 下载:0金币:0【药理学学习指导】第十二章-中枢神经系统药理学概论下载:0金币:2药理学(第七版)第十二章中枢神经系统药理学概论下载:0金币:2【神经病学PPT课件】多发性硬化下载:0金币: 0【药理学学习指导】中枢神经系统药理学概论下载:0金币:0中枢神经系统（天津铁厂职工医院放射中心王献忠）下载:0金币:0 新的疼痛分子机制：星形胶质细胞内的强啡肽和DREAM 蛋白.p下载:0金币:0缺氧处理后鼠脑星形胶质细胞基因表达谱的初步分析.pdf下载:0金币:0星形胶质细胞缝隙连接对缺血性脑卒中的影响.pdf下载:0金币:0星形胶质细胞,少突胶质细胞分离培养新方法研究.pdf下载:0金币:0柴胡皂苷a对PTZ诱导大鼠海马星形胶质细胞TNF-α释放及其下载:0金币:0柴胡皂苷a对体外培养大鼠海马星形胶质细胞激活的抑制作用.pd下载:0金币:0

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第十二章免疫系统

第十二章免疫系统一、教学大纲要求掌握淋巴细胞的分类及各类淋巴细胞在免疫应答中的作用，掌握胸腺、淋巴结和脾脏的结构特点和功能；熟悉淋巴组织的分类及其结构特点，熟悉单核吞噬细胞系统的组成、分布和功能特点；了解抗原提呈细胞与免疫的关系，淋巴细胞再循环的概念和意义，了解扁桃体的结构特点。二、试题部分 (一)、填空题 1.胸腺是培育形成细胞的器官，骨髓是培育形成细胞的器官，然后细胞分别迁移到相应部位。 2.T细胞可分为三个亚群.( )、( )和( )。 3.脾的白髓包括、和( )。 4.含有大量( )的组织称淋巴组织，可将其分为( )和( )两种，后者又被称为( )。 5.淋巴结的皮质由( )、( )及( )构成。 6.淋巴结副皮质区又称，位于皮、髓质交界处，主要由组成，此区含有特殊的血管，即，是淋巴细胞进入淋巴组织的通路。 7.淋巴结的皮质淋巴窦窦壁最内层有细胞，其外有薄层和纤维及一层扁平的细胞。 8. 脾的实质分为( )和( )。 9. 脾血窦的窦壁由一层( )的内皮细胞排列而成，细胞间隙，内皮外有不完整的( )及环行( )围绕。 10.动脉周围淋巴鞘是围绕动脉的淋巴组织，相当于淋巴结的区，为胸腺依赖区，含有大量的细胞。 11.人类的中枢淋巴器官包括和。 (二)、单选题 1.构成免疫系统的核心成分是( ) A.淋巴细胞 B.巨噬细胞 C.浆细胞 D.肥大细胞 E.交错突细胞 2.中枢淋巴器官的一个重要特点是( ) A.培育效应性T细胞或B细胞 B.淋巴细胞增殖不受抗原的直接影响 C.出生前结构、功能未发育完善 D.较周围淋巴器官发生早 E.均以网状细胞和网状纤维为支架 3.艾滋病病毒特异性地破坏何种细胞而导致免疫瘫痪( ) A.辅助性T细胞 B.抑制性T细胞 C.细胞毒性T细胞 D.记忆性B细胞 E.初始B细胞 4.关于单核吞噬细胞系统的描述哪项错误( ) A.具有较强的吞噬作用 B.参与免疫应答 C.分泌多种生物活性物质 D.来源于血液内的单核细胞 E.包括血窦内皮细胞和网状细胞 5.抗原提呈细胞存在于( )