华西药学院 历年分子生物学 考题及参考答案
华西药学院2009-2010学年上学期分子生物学考题答案
2013年1月22日晚
使用说明：此答案仅供参考，如有谬误，还请见谅！
一、英文翻译【12*0.5=6分】
1 SNP 单核苷酸多态性
2 Transposon 转座子
3 RNA splicing RNA剪接
4 Attenuator 衰减子
5 determination of DNA sequence DNA序列测定
6 Interrupted gene 断裂基因
7 DDRP DNA指导的DNA聚合酶8 CRP 分解代谢基因活化蛋白
9 site-specific in vitro mutation 体外定向突变10 frameshift mutation 移码突变（这个过时了，不考）
11 translocation 移位12 primase 引物酶
二、名词解释【10*2=20分】
1 Enhancer 增强子：指远离转录起点，决定基因表达的时空特异性，增强启动子转录活力的一段DNA序列。
2 Molecular chaperone 分子伴侣：细胞内能够帮助新生肽链正确折叠和装配组装成为成熟蛋白质的一类蛋白因子，在真核生物和原核生物中广泛存在。
3 semidiscontinous replication 半不连续复制：一条链上的DNA在DNA聚合酶的作用下以5'-3'方向连续合成一条长的DNA链，而另一条另一条链的DNA合成是不连续的，即先合成一段段短的DNA片段，再将这些短片段连成DNA长片段，这样的过程称为半不连续复制
4 supergene family 超基因家族: 来源相同、结构相似，但功能却不尽相同的一大批基因，这一大批基因分属于不同的基因家族，总称为超基因家族
5 promoter 启动子：RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列，是RNA聚合酶起始转录需要的辅助因子
6 mic RNA 干扰mRNA的互补RNA，即反义RNA，通过碱基互补和特定mRNA的SD序列、起始密码子AUG以及它们的上下游的部分核苷酸序列结合，从而抑制mRNA的翻译
7 reverse transcription 逆转录：以RNA为模板合成DNA，这与通常转录过程遗传信息从DNA到RNA的方向相反，故称为逆转录作用，通常又叫做RNA指导的DNA合成。
8 stringent response 严紧反应（这个过时了，不考）
9 gRNA（这个过时了，不考）
10 physical map物理图谱:以一段已知的核苷酸序列的DNA为“位标”，以碱基对Mb或Kb 等物理距离为图距的基因组图。
三、填空【60*0.5=30分】
1、RNA生物合成抑制剂有【】、【】、【】三种，其中碱基类似物是属于【】（这个过时了，不考）
2、Southern印迹杂交是鉴别【DNA 】靶分子的杂交，Northern印迹杂交是鉴别【RNA】靶分子的杂交，而Western印迹杂交可以用来分析【蛋白质】
3、端粒的复制依赖【端粒酶】的催化，以【RNA】为模板通过【逆转录】方式来完成
4、RNA聚合酶对转录起始的调控主要是通过【σ亚基替换】来调控，这是因为【σ因子】能够识别DNA分子上的RNA合成的起始信号，不同的【σ因子】会竞争性的与核心酶结合，而且【环境】的变化可以诱导产生特定的【σ因子】，从而开启特定的基因。
5、DNA复制后修复主要有【重组修复】和【SOS修复】两大类，其中【SOS修复】属于差错倾向性修复。
6、根据突变带来的效果，DNA突变可分为【无义突变】、【同义突变】和【错义突变】，
其中【同义】突变并没有改变蛋白质产物的氨基酸序列，是因为碱基的改变只是使一个密码子变成了它的【简并密码子】。
7、蛋白质的生物合成过程中，肽链的延长由若干个循环组成，每一个循环包括【进位】、【成肽】和【移位】三个步骤。
8、Trp操纵子结构基因E和D，B和A之间保持翻译步调一致的机制是通过【基因重叠】实现【翻译偶联】。
9、TaqDNA聚合酶是在【PCR】技术中使用的一个重要工具酶，其最大特点是【耐热】，但是由于TaqDNA聚合酶不具有【3'-5'外切酶】活力，因此其没有校对功能。
10、乳糖操纵子同时独立地受到【正】、【负】两个系统的调控，只有当【cAMP-CAP 】结合到【CAP结合位置】上和【阻遏蛋白】脱离【操纵基因】时，才开始结构基因的转录。
11、典型转座子都含有【】和【】两个基本序列，如果按【】分类，可以分为【】和【】。（不考了，过时了）
12、染色质从形态上可以分为【常染色质】和【异染色质】，其中【常染色质】是一种【松懈伸展】的DNA状态，可以进行活跃的复制和转录。
13、tRNA的功能位点有【氨基酸接受位点】、【识别氨酰-tRNA合成酶位点】【反密码子位点】和【核糖体识别位点】。
14、致癌RNA病毒是以【出芽】方式从细胞中释放，不会使宿主细胞裂解，其致癌机理是通过【前病毒的癌细胞基因编码的蛋白质】使细胞发生癌变，病毒RNA通过【逆转录】生成dsDNA并整合到宿主DNA序列中是病毒致癌的重要环节，因此【逆转录酶】是新药设计和疾病治疗的重要靶酶。
15、RDDP具有【依赖RNA的DNA聚合酶】、【依赖DNA的DNA聚合酶】和【RNaseH】活力。
16、保证DNA复制忠实性的三大防线是【复制系统的忠实性】、【损伤修复】、【复制后修复】。
四、不定项选择【7*2=14】【此处以往年判断并说明理由题代替】
1、复制子是从启动子到终止子之间的一段DNA序列。
参考答案：错，因为复制子是从复制起点到复制终点的一段DNA序列，参与的是DNA的复制，而启动子和终止子参与的是转录过程。
2、顺反子与基因是同义语。
参考答案：错，因为顺反子是一段编码蛋白质的核苷酸序列，只是一段编码序列，而基因不仅包含编码序列，还应包括调控序列。
3、核酸分子杂交技术的目的是扩增DNA。
参考答案：错，因为核酸分子杂交技术的目的是定性或定量地测量特定的核苷酸序列
4、从模版的使用情况来讲，DNA转录是对称的，全保留的。
参考答案：错，因为转录是不对称的
5、经过剪接的mRNA遗传信息不全来自DNA。
参考答案：错，因为经过剪接的mRNA遗传信息全部来自DNA（自己再拓展一下吧，结合剪接的概念和特点）
6、真核生物的mRNA是多顺反子RNA。
参考答案：错，真核生物的mRNA是单顺反子RNA
7、PCR扩增产物的特异性是由模板的纯度确定的。
错，PCR扩增产物的特异性是由引物决定的。
五、简答题【30分】
1、比较转录和复制的异同点 答：
2、简述核糖体的活性中心
答：A.mRNA 结合位点 B.Aa-tRNA 结合位点 C. 肽基-tRNA 结合位点 D.tRNA 排出位点 E 肽酰转移酶位点
3、比较DDDP 、DDRP 、RDDP
DDRP
DDDP
RDDP
概念 DNA 指导的RNA 合成
DNA 指导的DNA 合成
RNA 指导的DNA 合成
参与反应 转录 复制 逆转录 模板 DNA DNA RNA 原料 NTP dNTP dNMP 合成方向 5'-3'
5'-3'
5'-3' 特点 需镁离子，模板，不需要引物，能直接启动一条新
链合成 需镁离子，模板，需要引物，不能直接启动一条新
链合成
需模板和引物 忠实性
低，缺乏校对功能
高
低，缺乏校对功能
4、抗肿瘤药物分为哪几种种类，每一种的作用机理是什么，请举例说明。 参考答案：（1）针对逆转录酶的抗肿瘤药，如AZT ，抗HIV 药 （2）RNA 合成抑制剂 如烷化剂 （3）抗代谢肿瘤药，如长春新碱。
5、请简述操纵子的基因表达调控思想。 参考答案（不一定对）：操纵子水平的调控主要有以下三种类型： （1）诱导型操纵子（乳糖操纵子）（2）阻遏操纵子（色氨酸操纵子）（3）cAMP-CAP 正调控系统。
乳糖操纵子同时独立地受到正、负两个系统的调控，只有当cAMP-CAP 结合到CAP 结合位置上和阻遏蛋白脱离操纵基因时，才开始结构基因的转录。其基因调控思想为：结构基因只是提供了编码蛋白质一级结构的一种潜在可能性。 6、【原文为英文】假设一个细菌DNA 复制水平较低，而其细胞内DNA 聚合酶I 、III ，连接酶、解链酶，SSB 和旋转酶均正常，dnaA 、B 、C 也均正常，染色体中oriC 区域也为正常水平，为何该细菌DNA 复制水平比较低。 参考答案（不一定对）：缺少引物酶，同时也缺乏原料 7、构建一个已知分子大小氨基酸序列的真核生物蛋白的原核表达系统，经过以下三个步骤： 1）从组织和细胞中分离提取RNA
转录
复制
概念 DNA 指导的RNA 合成
DNA 指导的DNA 合成
合成原料 NTP dNTP 聚合酶 DDRP DDDP 合成方向 5'-3'
5'-3'
模板 不对称转录，只有一条链做模板
两条链分开各自同作为模板
忠实性 低，DDRP 缺乏校对功能
高 调控
主要是转录起始
主要是复制起始
2）PCR扩增RNA并逆转录为DNA
3）将DNA整合到载体上
问：
1）从组织细胞中提取的RNA应该是哪一种，为什么
2）PCR扩增的引物有什么要求，为什么
3）有人认为此过程过于繁琐，可直接用蛋白质来制作DNA序列，此方法是否可行，为什么
参考答案（不一定对）：
（1）mRNA，因为只有mRNA才能逆转录为DNA
（2）A.a.5'端引物应与待扩增片段5'端上游的一小段DNA序列相同，引导信息链的合成；
b.3'端引物应与待扩增片段3'端上游的一小段DNA序列互补，引导互补链的合成
B.因为引物决定PCR扩增产物的特异性和长度。
（3）不能，因为此系统为原核生物的基因系统，原核生物的基因为连续基因，不具内含子，而真核生物的基因为不连续基因，有内含子，在转录时需要进行加工，原核系统无法做到！
补充：
05-06年分子生物学(重题不再写)
一翻译
1.replicon 复制子
2.SSB：单链结合蛋白
3.nucleic acid hybridization核酸分子杂交
4.DNA ligase DNA连接酶
5.RDRP RNA指导的RNA聚合酶
6.PDI 蛋白质二硫键异构酶
7.nucleosome 核小体8.exon 外显子
9.okazaki fragment 冈崎片段
二、名解
1.telomerase 端粒酶：是由一条RNA和蛋白质组成的复合物，为逆转录酶，能够以其自身携带的RNA为模板逆转录合成DNA
2.分子伴侣（上面已有，不再赘述）
3.semi-reservative replication 半保留复制：DNA在复制时，两条链解开分别作为模板，在DNA聚合酶的催化下按照碱基互补配对的原则合成两条与模板链互补的新链，以组成新的DNA分子，新合成的DNA分子与亲代DNA的碱基顺序完全一致，由于子代DNA中一条链是新合成的，一条链来自亲代DNA，故称为半保留复制。
4.超基因家族（上面已有，不再赘述）
5.operon 操纵子：由几个功能相关的结构基因和调控区组成的一个基因表达的协同单位。
6.micRNA （上面已有，不再赘述）
7.translational repression 翻译阻遏，利用阻遏物对翻译进行调控的机制，cp通过特异性结合到rep基因的核糖体结合位点上阻遏rep基因的翻译
8.hnRNA 核内不均一RNA 真核生物的原初转录物是分子量极大的前体，在核内加工过程中会形成分子大小不等的中间物，称为核内不均一RNA
9.gRNA（上面已有，不再赘述）
10.严紧反应（上面已有，不再赘述）
三、填空
1.tRNA对Aa的选择性主要通过【氨酰-tRNA合成酶的专一性】来实现，而tRNA对mRNA 的选择则是通过【密码子与反密码子的配对】来实现的
四、问答
1简述原核生物DNA复制有关的酶类及其功能：
参考答案：A.DNA连接酶：连接DNA
B.DNA解链酶：水解双链DNA
C.引物酶：启动RNA引物的合成
D.DNA旋转酶：又称拓扑异构酶II，兼具内切酶和连接酶活力，能放松复制叉前方的正超螺旋，便于解链
E.SSB（单链结合蛋白）：选择性地结合在解开的单链DNA上，防止DNA单链重新形成双螺旋结构
F.DNA聚合酶：催化新生DNA的合成
2.以操纵子的基因表达调控为例，说明RNA聚合酶对启动子或操纵子的选择主要由细菌赖以生存的培养基的营养成分决定的。
3.答：在原核生物的基因表达调控中RNA聚合酶对启动子或操纵子的选择主要由细菌赖以生存的培养基的营养成分决定的，其调控机制主要是通过诱导型操纵子的调控机制来实现的。
例：乳糖操纵子的调控，当环境中含有葡萄糖时，葡萄糖的分解代谢产物使细胞内cAMP
处于低水平，CAP失活，无法打开结构基因，乳糖操纵子关闭。如果环境中没有葡萄糖时，乳糖操纵子也不一定打开，因为如果培养基中没有乳糖等诱导物的话，调节基因编码的阻遏蛋白会结合到操纵基因上，阻碍RNA聚合酶的结合。此时结构基因仍处于关闭状态，只有当培养基中只含有乳糖时，一方面，乳糖的诱导作用使阻遏蛋白失活，不结合到操纵基因上，另一方面培养基中葡萄糖的缺乏使细胞的cAMP水平提高，CAP激活，RNA聚合酶与启动子结合，从而打开结构基因，使细菌开始合成与乳糖分解代谢有关的酶。
3.什么是多核糖体和核糖体循环？
答：(1)多核糖体：一个mRNA分子与一定数目的单个rb结合而成
（2）核糖体循环：在蛋白质合成的起始阶段，核糖体以游离的大小两个亚基参与，并在mRNA 分子的协助下组成完整的核糖体，完成蛋白质的合成过程，在蛋白质合成结束后，核糖体又分解成大小两个亚基，游离的核糖体亚基可以参与下一轮的蛋白质合成或再次组装成为稳定的核糖体。稳定的核糖体颗粒只有解离或游离亚基才能参与蛋白质合成。
4、抗肿瘤药物分为哪几种种类，每一种的作用机理是什么，请举例说明。(上面已有，不再赘述）
06-07级
一、翻译
1.enhancer 增强子
2.messenger 信使RNA
3.genome 基因组
4.DDRP DNA指导的RNA聚合酶
5.DNA polymerase DNA聚合酶
6.genetic code 遗传密码
其他皆为重复，不再打出
二、名解
1.半保留复制（已有）
2.基因：gene 指DNA分子中能够编码一条多肽链或RNA，并具有一定长度的片段，不仅包括编码RNA或蛋白质肽链的核酸序列，还包括为保证转录所必需的调控序列
3.反义mRNA
4.逆转录
5.阅读框架reading frame 指mRNA中从起始密码子AUG到终止密码子之间的一段可翻译的核苷酸序列，对应的是一个蛋白质的氨基酸序列
6.顺式作用元件：与相关基因处在同一DNA分子上起调控作用的DNA序列。
7.反式作用因子：对基因表达具有调控作用的可扩散性蛋白因子
8.衰减子：attenuator 操纵子前导区类似于终止子结构的一段DNA序列
三、填空
1.DNA聚合酶的【3'-5'外切酶活性】具有【校对】作用，可以【切除错配的核苷酸序列】
2.DNA复制的机理是【半保留复制】，复制的方式是【半不连续复制】，所有的DNA都是在特定的【复制起点】开始复制，，而复制的方式有【单向复制】和【多向复制】
3.操纵子是由功能相关的【结构基因】及其【调控区】所组成的一个基因表达的协同单位，是原核生物在【转录】水平进行表达调控的基本单元，是原核生物基因的【组织形式】和【表达调控】的单位
4.大肠杆菌的RNA聚合酶是由【σ因子】和【核心酶】两部分组成的，其中【核心酶】的作用是催化RNA链的【延伸】反应，而【σ因子】的作用是负责模板链的选择和转录起始，而且不同的【σ因子】会打开不同的基因
5.mRNA的帽子结构具有【为rb对mRNA的结合提供信号】和【保护mRNA分子免受5'端外切酶的降解作用】两方面的生理功能
6.PCR是由【变性】、【退火】、【延伸】三个基本步骤组成的循环
7.蛋白质的生物合成过程中，【mRNA】是指令氨基酸掺入的模板，【tRNA】是携带氨基酸的工具，【核糖体】是蛋白质的合成场所。
8.在原核生物中，翻译延伸的调控主要是通过【稀有密码子】来进行调控，如果基因中含较多【稀有密码子】，基因的表达效率必然很低，这是因为【稀有密码子所对应的tRNA含量少】
四、简述
1.真核生物的基因特征。
答：a.真核基因都由一个结构基因与相关的调控区域组成，转录产物为单顺反子mRNA
b.基因组含大量重复序列
c. 存在多拷贝基因，形成基因家族和超基因家族
d.真核生物基因组内非编码序列占90%以上
e.大多数真核生物的结构基因为不连续基因（断裂基因）
f、真核生物基因组DNA的末端有端粒结构
g.真核生物基因组存在细胞器基因组，如叶绿体基因组和线粒体基因组
对比：原核生物的基因特征：
（1）功能上密切相关的基因构成操纵子
（2）多顺反子mRNA
（3）结构基因重复序列少
（4）蛋白质基因通常以单拷贝形式存在
（5）RNA基因（编码rRNA,tRNA）常是多拷贝的
（6）结构基因连续，转录产物mRNA一般不需要加工，可直接进行翻译
（7）单个染色体呈环状，DNA并不和蛋白质固定结合
（8）DNA大部分用于编码蛋白质，只有很少不编码的DNA序列
2.保证DNA复制忠实性的原理/机制
答：1DNA聚合酶的高度专一性（严格遵守碱基互补配对原则，且错配率为7×10-6）
2.DNA聚合酶的校对功能（错配碱基被3'-5'外切酶切除）
3.起始时以RNA为引物
3.比较DDDP、DDRP、RDDP（已有）
4.试述增强子、衰减子、启动子和终止子
答：(1).启动子（promoter）:RNA聚合酶识别、结合和开始转录的一段DNA序列，是RNA 聚合酶起始转录需要的辅助因子，属顺式作用元件
(2).终止子（terminator）:提供转录终止信号的RNA（DNA）序列
(3).增强子Enhancer ：指远离转录起点，决定基因表达的时空特异性，增强启动子转录活力的一段DNA序列。属顺式作用元件
(4).衰减子attenuator：操纵子前导区类似于终止子结构的一段DNA序列.属负调控元件
5.比较转录和复制的异同点（已有）
6.试述原核生物基因表达调控的特点
答：（1）.基因表达主要取决于环境因素的诱导及细胞对环境条件的适应
（2）.主要是转录水平的调控
（3）.操纵子是转录调控的主要形式
（4）负调控占主导
7.对比：真核生物基因表达调控的特点：
（1）.能在特定时间和特定细胞中激活特定的基因
（2）多层次调控
（3）有瞬时调控和发育调控，后者为真核基因表达调控的精髓
（4）以正调控为主
五、判断对错（只给正确答案）
1.在同一操纵子中，结构基因的表达差异主要取决于环境因素的诱导和细胞对环境条件的适应
2.阅读框架：指mRNA中从起始密码子AUG到终止密码子之间的一段可翻译的核苷酸序列，对应的是一个蛋白质的氨基酸序列
3.正调控对基因表达具有开启和激活作用
4.PCR扩增产物的特异性和长度由引物决定
5.从模板的使用情况看，转录是不对称的
6.在mRNA与氨基酸之间起接头作用的是tRNA
7.真核生物的mRNA是单顺反子
另一份卷子的补充
（08级的）
一、翻译
1.silencer 沉默子
2.transcription activation domain 转录激活域、
3.HTH 螺旋-回折=螺旋
4.HD 同源异型域
二、名解
1.gene family 基因家族：是具有显著相似性的一组基因，来源相同】结构相似，编码相似的蛋白质产物。
2.增强子
3.gRNA
4..Linkage map :连锁图谱，又称遗传图谱（genetic map）,以具有遗传多态性的遗传标记为“坐标”，以遗传学距离（厘摩，cm）为图距的基因组图
5.hnRNA
6.Operon
7.Promoter
8.Reverse transcription
9.Reading frames
10.Semi-discontinuous replication
三、填空
1.分子伴侣是细胞内能够帮助新生肽链【正确折叠和装配组装】成为成熟蛋白质的一类蛋白因子。作用机制可能为通过【疏水相互作用】来识别并延伸肽链的【骨架部分】
2.核糖体功能位点【mRNA结合位点】【Aa-tRNA结合位点】【肽基-tRNA结合位点】【tRNA排出位点】【肽酰转移酶位点】
四、简答题
1.简述真核生物基因转录水平调控的特点，解释相同的信号序列表达不同的作用及不同的信号序列表达相同的作用（题目大意是这样）
参考答案（不一定对）：（1）a.RNApol必须依赖转录因子与启动子结合后，才能进入启动子区域参与组装转录起始复合物b.以正调控为主c通过顺式作用元件和反式作用因子的相互作用来实现。
（2）a不同σ因子竞争性地与核心酶结合，使不同的信号序列表达相同的作用
b.环境的变化诱导产生特定的σ因子，从而开启特定的基因，故相同的信号序列表达不同的作用
现代分子生物学_复习笔记完整版.doc
现代分子生物学 复习提纲 第一章绪论 第一节分子生物学的基本含义及主要研究内容 1 分子生物学Molecular Biology的基本含义 ?广义的分子生物学：以核酸和蛋白质等生物大分子的结构及其在遗传信息和细胞信息传递中的作用为研究 对象，从分子水平阐明生命现象和生物学规律。 ?狭义的分子生物学：偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA的复制、转录、表达和调控 等过程，也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 1.1 分子生物学的三大原则 1) 构成生物大分子的单体是相同的 2) 生物遗传信息表达的中心法则相同 3) 生物大分子单体的排列（核苷酸、氨基酸）的不同 1.3 分子生物学的研究内容 ●DNA重组技术（基因工程） ●基因的表达调控 ●生物大分子的结构和功能研究(结构分子生物学） ●基因组、功能基因组与生物信息学研究 第二节分子生物学发展简史 1 准备和酝酿阶段 ?时间：19世纪后期到20世纪50年代初。 ?确定了生物遗传的物质基础是DNA。 DNA是遗传物质的证明实验一：肺炎双球菌转化实验 DNA是遗传物质的证明实验二：噬菌体感染大肠杆菌实验 RNA也是重要的遗传物质-----烟草花叶病毒的感染和繁殖过程 2 建立和发展阶段 ?1953年Watson和Crick的DNA双螺旋结构模型作为现代分子生物学诞生的里程碑。 ?主要进展包括： ?遗传信息传递中心法则的建立 3 发展阶段 ?基因工程技术作为新的里程碑，标志着人类深入认识生命本质并能动改造生命的新时期开始。 ? 第三节分子生物学与其他学科的关系 思考 ?证明DNA是遗传物质的实验有哪些？ ?分子生物学的主要研究内容。 ?列举5～10位获诺贝尔奖的科学家，简要说明其贡献。
分子生物学试题及答案
分子生物学试题及答案
分子生物学试题及答案一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。
除了5’ 3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（ IF-2 ）和（IF-3 ）。4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。 5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（ DNA重组技术）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（ hnRNA在转变为mRNA 的过程中经过剪接，）、
微生物分子生物学技术
一、质粒DNA提取及琼脂糖凝胶电泳 （一）碱变性法提取质粒DNA 质粒(Plasmid) 是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。 分离和纯化质粒DNA的方法很多,但这些方法基本包括三个步骤：即细菌的培养和质粒DNA的扩增，细菌菌体的裂解; 质粒DNA的提取与纯化。 本实验学习用碱变性方法提取质粒DNA。 【原理】 细菌培养物加入SDS和NaOH 碱性溶液处理后，菌体裂解，可使细菌的质粒DNA、染色体DNA和RNA 一起从细胞内释放出来，经琼脂糖凝胶电泳，因各种核酸分子的迁移率不同将上述核酸分成不同的带。用溴化乙锭（EB）染色后，在紫外线灯下可看到各种核酸带发出的荧光。根据荧光的位置，可区分不同的核酸带。 【材料】 1．菌株E.coli JM109（pUC19），E.coli RRI（pBR322） 2．试剂溶液Ⅰ( 50 mM葡萄糖, 25 mM Tris.Hcl PH 8.0, 10 mM EDTA) 溶液II ( 0.2 N NaOH，1%SDS) 用前新配制 溶液III ( 5 mM KAc溶液PH4.8) TE缓冲液(10mMTris.Hcl ,1mMEDTA PH8.0) LB液体培养基( 胰蛋白胨10g,，酵母粉5g, Nacl 10g. 加蒸馏水溶解，用NaOH调PH 至7.5，加水至1000 ml,15磅高压灭菌15分钟)。 【方法】 1．接种细菌于5ml LB液体培养基中，370C培养过夜。 2．3000 rpm/min,离心15min，弃上清。加入100ul 溶液1悬起细菌沉淀。 3．加入200ul前新配制的溶液II ，颠倒EP管5次混合均匀，置冰浴2min。 4．加入150ul溶液III温和地混匀，12000 rpm/min,离心5min。 5．吸取上清清亮裂解液放入另一新EP 管中，加等体积酚-氯仿-异戊醇抽提2次，12000 rpm/min,离心2min。（若不做酶切，此步可省略）吸取上清放入另一新EP 管中，加入二倍体积的冷乙醇，12000 rpm/min,离心10min。 6．弃乙醇，干燥后用30ul TE缓冲液洗下核酸，待电泳检测。 （二）琼脂糖凝胶电泳 琼脂糖凝胶电泳技术（Agarose gel electroghoresis）是分离、鉴定和提纯DNA片断的有效方法。凝胶分辨率决定于使用材料的浓度，并由此决定凝胶的孔径。琼脂糖凝胶可分辩0.1~6.0kb的双链DNA片段。琼脂糖凝胶电泳是一个电场作用。它首先利用琼脂糖的分子筛效应，此外，在弱碱性条件下，DNA分子带负电荷，从负极向正极移动。根据DNA分子大小、结构及所带电荷的不同，它们以不同的速率通过介质运动而相互分离。借助溴化乙锭（EB）能与双链DNA结合的作用，利用EB染色，并通过紫外线激发即可观察被分离DNA片段的位置。 【材料】 1．琼脂糖、10×TAE电泳缓冲液（40m MTris ,20 mM NaAc,1mM EDTA PH8.0） 2．载体缓冲液（0.25%溴酚蓝，30%甘油）、溴化乙锭水溶液（10mg/ml ） 3．凝胶槽、电泳仪 【方法】 1．取琼脂糖0.9g，加入100ml 1x TAE电泳缓冲液于250ml烧瓶中，1000C加热溶解。 2．平衡凝胶槽，放好两侧挡板，调节好梳子与底板的距离（一般高出底板0.5~1mm）。 3．铺板：在溶解好的凝胶中加入终浓度为0.5ug/ml 的溴化乙锭水溶液，轻轻混匀，待冷至500C左右倒入凝胶槽，胶厚一般为5~8mm。 4．待胶彻底凝固后，去掉两侧挡板，将凝胶放入盛有电泳液的槽中（加样孔朝向负极端，DNA由负极向正极移动），使液面高出凝胶2~3mm，小心拔出梳子。 5．DNA 样品与载体缓冲液5：1混合并加入凹孔中（样品不可溢出）。
2011年四川大学华西药学院706药学综合
2011年四川大学华西药学院706药学综合（转自小木虫） 一部分：物理化学 单选题14道3分一道，每章节都涉及 计算题1道8分，参看第四章完全不互溶双液体系水蒸气消耗系数蒸出有机物的百分质量分数 二部分：分析化学 1~10题单选11~20多选均3分一道 判断题20道2分一道总体难度不大，但个别几道比较偏。分析化学覆盖面相当的广泛，无论书上有无现成的都很可能考到，要求考生复习过程中看书要多注意细节，多做练习题，真题等，不仅仅是四川大学的练习题。 三部分：有机化学 排序题5道4分一道，难度不是很大，要求考生复习多注意细节，多做练习题，第五版教材和第六版教材结合看。 化学方程式50分5分一道，个别题偏难 合成题30分10分一道，11年的第二道比较难的原因涉及磷酸基的去除，仅看教材的话（非常抱歉我看了那么多遍人卫版的教材包括药科大的练习册真的没见过磷酸基的去除，曾经见过一博士师兄的笔记本他还说磷酸基是易离去基，可能刑其毅的书有讲到），其余两道难度适中，但这都是主观题，要求不仅仅是做出来。 四部分：生物化学 名词解释12分2分一道，其中信号肽和反义核酸我见过但没仔细记过，所以到最后一刻为了不开天窗乱编的，其余难度不大。 选择题填空题呵呵这两道单分多少忘记了，总体难度适中，个别细节问题有时候是很难把握的。简答题15分5分一道酶的比活力及其意义；遗传中心法则；造成蛋白质变性的主要原因及在蛋白质分离提纯过程中的注意事项....O(∩_∩)O~《药物分析生物学》这本书的考试内容是融合在生物化学书中的，各个学校学的不一样，有些生物化学学得比较远把遗传这些都学了的，就不用再花时间看《药物分子生物学》了。 2012年的同学多多加油哦O(∩_∩)O~仔细复习打牢基础是关键，多做练习特别是真题是王道，复习过程是非常艰辛的，特别是分析化学是看完一遍几天不看又会忘记，细节实在太多了，有些题考得也是在太偏太细了有时候只能靠猜，但直觉也需要实力做基础，总之就是无论复习有多困难要相信自己！祝大家考研成功！有梦想的人很伟大，为梦想而踏实奋斗的人更伟大！ 2009年四川大学华西药学院药学综合考研试题（转自小木虫） 09华西药学综合 物理化学部分 25道选择题，每个章节均有3，4题，但是主要是考基础，不用过多的做难题，抓住课本基础是关键 分析化学部分 60分选择题，10个单选，10个多选，也不是很难，多选题考得会比较广，不是看书就可以搞定的也会比较细，40分20道选择题 有机化学部分 30分排序题，这部分不是很难，40分方程式，比较难，和以前真题有较大出入，30分合成题也是很难，有机建议多做题找感觉
分子生物学实验指导(精)
分子生物学实验指导 生物技术教学室编 宁夏大学生命科学学院 2008年8月
实验一分子生物学实验技术多媒体演示 [目的要求] 通过多媒体试验录像进一步掌握分子生物学基本操作技术。 [教学方式] 多媒体光盘演示。 [实验内容] 基本的分子生物学实验操作技术包括核酸凝胶电泳技术；质粒提取；转化；重组体的筛选；PCR技术等。
实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA [目的要求] 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术 [实验原理] 琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应，DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50 kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭（Ethidum bromide ,EB），在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带，在电场中，pH8.0条件下，凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。 琼脂糖凝胶有如下特点： (1) DNA的分子大小在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比，分子越大迁移得越慢。 (2) 琼脂糖浓度一个特定大小的线形DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。 (3) 电压低电压时，线状DNA片段迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场强度的增加，不同分子量DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长，随着电压的增加，琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小。要使大于2kb的DNA片段的分辨率达到最大，所加电压不得超过5v/cm。 (4) 电泳温度DNA在琼脂糖凝胶电泳中的电泳行为受电泳时的温度影响不明显，不同大小的DNA片段其相对迁移速率在4℃与30℃之间不发生明显改变，但浓度低于0.5%的凝胶或低熔点凝胶较为脆弱，最好在4℃条件下电泳。 (5) 嵌入染料荧光染料溴化乙锭用于检测琼脂糖凝胶中的DNA，染料嵌入到堆积的碱基对间并拉长线状和带缺口的环状DNA,使其刚性更强,还会使线状迁移率降低15%。 (6) 离子强度电泳缓冲液的组成及其离子强度影响DNA电泳迁移率。在没有离子存在时（如误用蒸馏水配制凝胶，电导率最小，DNA几乎不移动，在高离子强度的缓冲液中（如误加10×电泳缓冲液），则电导很高并明显产热，严重时会引起凝胶熔化。
分子生物学实验复习题
分子生物学实验复习题 1.实验中为什么选用RNA而非DNA作为模板调取目的基 因？ 因为真核生物，DNA出了含有编码序列外还含有非编码序列（内含子），而我们只需目的基因这段序列。RNA是经过加工的，没有内含子，通过提取高质量的RNA再进行逆转录即可得到不含内含子的cDNA，即所需的目的基因。2.RNA提取过程中的注意事项有哪些？ （1）所有玻璃器皿均应于使用前180℃干烤3h或更长时间，塑料器皿可用0.1％DEPC浸泡或用氯仿洗涤。 （2）全部实验过程最好戴一次性手套，接触可能污染了RNA酶的物品后，应更换手套。 （3）配制的溶液应尽可能用0.1％DEPC在37℃处理12h 以上，然后高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，用经DEPC处理过的无菌蒸馏水配制，然后用0.22um 滤膜过滤除菌。 3.逆转录反应，有哪几种引物可用？如何进行选择？（1）引物：OligodT：①长度适宜，一般为15~30个碱基；G+C含量，一般为40%~60%；②4种碱基应随机分布；③引物自身不应存在互补序列；④2个引物之间不应有多于4个碱基的互补；⑤引物3′端不应有任何修饰；⑥引物5′端可以修饰 4.简述用氯化钙方法制备感受态细胞转化原理？ （1）正在生长的大肠杆菌在0℃下加入到低渗的CaCl2溶液中，便会造成细胞膨胀成球（感受态细胞）。（2）感受态细胞与外源质粒DNA形成一种粘着在细胞表面上的队DNAase抗性的羧基钙磷酸复合物。（3）42℃下作短暂的热刺激期间，这种复合物便会被细胞吸收。（4）进入受体细胞的DNA分子通过复制，表达实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。（5）将经过转化后的细胞在筛选培养基中培养，即可筛选出转化子。 5.转化过程中要注意哪些因素 细胞生长状态和密度、质粒的质量和浓度、试剂的质量、防止杂菌和杂DNA的污染 6.简述质粒DNA提取原理 在pH12.0~12.6碱性环境中，细菌的线性大分子量染色体DNA变性分开，而共价闭环的质粒DNA虽然变性，但仍处于拓扑缠绕状态。将pH调至中性并有高盐存在及低温的条件下，大部分染色体DNA、大分子量的RNA和蛋白质在去污剂SDS的作用下形成沉淀，二质粒DNA仍然为可溶状态。通过离心，可去除大部分细胞碎片、染色体DNA、RNA 及蛋白质，质粒DNA尚在上清中，然后用酚、氯仿抽提进一步纯化质粒DNA。 7.请列举4种阳性克隆的筛选方法和鉴定方法 （一）采用遗传学方法可筛选特定的重组体DNA 1.利用抗性标记可筛选出带有载体的细菌克隆 2.利用不同标记可筛选出带有重组体的细菌克隆 ①插入灭活法利用特定抗性基因的失活进行筛选②α-互补筛选是利用功能互补的基因片段 （二）核酸杂交法适合从文库中筛选特定的DNA （三）PCR技术可对特定的DNA进行直接鉴定 （四）酶切鉴定是利用限制酶酶切图谱鉴定特定的DNA 8.简单谈一下如何选定酶切鉴定时所用的酶 限制性内切酶的选用必须根据载体和插入片段上酶切微点来确定。 酶切鉴定是必须的，基于下述： 限制性图谱个体特异性，不同的载体或DNA分子物理图谱不同，酶切后片段大小不一样，电泳图谱一样。 统一载体连接不同的DNA片段，不同的载体连接统一片段（片段上也有位点）酶切图谱是不同的。插入法（单酶单切点）或替代法（双酶双位点）酶切，一般来说用3种限制酶切：可鉴定载体及插入片段的大小、方向、切后并电泳分析，以确定是否得到预期的rDNA。 9.简述克隆大鼠的GAPDH基因的主要步骤 ①TRlzol试剂提取小鼠肝脏总RNA②核酸的定量③电泳检测④PCR产物4℃保存或琼脂糖凝胶电泳检测⑤从琼脂糖凝胶中分离回收PCR产物⑥6GAPDH基因的TA克隆、连接、转化 10.Trizo:是直接从细胞或组织中提取总RNA 的试剂，内含 异硫氰酸胍，酚等物质，异硫氰酸胍能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎。核酸由于核蛋白二级结构的破坏而解离下来。异硫氰酸胍同时抑制细胞释放出的核酸酶，保持RNA 的完整性。 11.荧光定量PCR中，请说明阈、基线、Ct值的概念。 Baseline（基线）： 在PCR开始几个循环内所发散的荧光信号，这段时间内定量PCR仪器还未能检测到PCR产物的扩增，缺省设置为3-15个循环的荧光信号（背景荧光信号）。 Threshold（阈值）： 用来确定Ct的荧光强度。是在荧光扩增曲线上认为设定的一个值，它可以设定在荧光信号指数扩增阶段在 任意位置上，一般荧光阈值的设置是基线（背景）荧 光信号的标准偏差的10倍。 Ct值：到达阈值荧光信号所需要的循环数。 12.在做荧光定量PCR实验时要注意些什么？ (1)在操作中，应使用不含荧光物质的一次性手套（经常替换）、一次性转移器吸头（带滤嘴自卸式），不能用手直接接触毛细管、离心管的底部。 (2)操作台、移液器、离心机、PCR扩增仪等仪器设备应经常用10%次氯酸或75%乙醇擦拭消毒。每次实验前后用10%次氯酸和70%乙醇擦拭移液器、操作台。 (3)配制反应体系时，应注意移液器的使用方法，所有的液体都要缓慢加至管底，不要加至管壁，所有液体的混匀要用振荡器进行，不能用移液器吹打，反映体系配制完毕后低速离心数秒，避免产生气泡。 13.影响质粒转染效率的因素有哪些？ 转化率：转化效率/细胞总数
基于载体材料表面修饰的靶向给药系统尹宗宁,熊迎新四川大学华西药学院
基于载体材料表面修饰的靶向给药系统 尹宗宁，熊迎新 四川大学华西药学院，成都 610041 摘要：为使制剂达到较理想的靶向效果，可采用一些特殊的高分子材料作为传送药物的载体，另外还可通过增加载体材料的表面亲水性、改变载体表面电荷以及连接特异性单抗或受体等表面修饰途径，提高制剂给药的靶向性。 关键词：表面修饰，载体材料，靶向给药 External modification for target-oriented drug delivery Systems YIN Zong-ning, XIONG Ying-xin West China School of Pharmacy, Sichuan University, Chengdu 610041 Abstract: In order to enhance the target-oriented effect of preparations，a certain kind of special macromolecule-material should be adopted as drug carrier. In addition, some external modification methods should be used，such as increasing carrier material’s surfase hydrophilicity, and altering its charge character, connecting monoclone antibody or acceptor。In this way ，the preparations’target-oriented ability will be highly improved。 Keywords: external modification，carrier material，target-oriented drug delivery systems 近年来，许多新型给药系统如纳米粒、脂质体等，都具有靶向、缓释、控释、降低全身毒副作用等优点，是目前制剂学最具发展潜力的一个领域。然而也存在一些缺点，最主要表现在进入体内后不稳定，实际到达靶区的药量有限，与理想的靶向制剂还有一定差距。人体对外来异物有很高的识别能力，当载药纳米粒、脂质体等进入人体后会被肝脾内的单核巨噬细胞系统(MPS)识别，随后被清除体外，对于需要靶向至肝脾以外的药物，这就严重影响了药物的疗效。但如果选择了合适的载体材料，并对该载体材料进行了恰如其分的表面修饰，那么结果可能会不一样。此类载体材料必须无毒，而且要有良好的生物相容性，可生物降解，不与药物发生化学反应以致失去药效，同时给药后能以一定的速度释药。对载体材料进行表面修饰可使给药系统具有更高的靶向性。目前常用如下几种方法。 增加载体材料的表面亲水性 1.1 用于制备纳米粒的载体材料 机体MPS系统识别异物的机制是，当异物进入体内后许多蛋白成分迅速吸附于纳米粒表面。影响因素考察结果表明除了纳米粒的粒径大小外，表面的疏水性也决定了纳米粒对血液成分中蛋白质(调理素)的吸附。调理素（opsonin系血清中的一种抗体物质，它能使细菌或其他外源物质易受感染从而促进MPS的吞噬作用）附着于纳米粒表面称为调理作用，这是纳米粒与吞噬细胞间的桥梁。曾有人专门做了聚苯乙烯纳米粒蛋白吸附的动力学研究，结果表明阿朴脂蛋白A-I，C-Ⅲ，E，J，纤维蛋白原和白蛋白都是吸附于纳米粒表面的主要蛋白成分。倘若增加纳米粒的表面亲水性，就可减少调理素的吸附。由于聚乙二醇(PEG)具有柔韧的亲水性长链结构，又可生物降解，用它进行表面修饰与其他长循环系统相比，更有利于增加纳米粒表面稳定性，控制药物释放，因此是目前研究最多的用于修饰的载体材料。经PEG修饰的纳米粒具有长循环特征，减少肝脾的摄取主要取决于相对分子质量和表面PEG的密度。如PEG链的相互距离从6.2nm降到5.1nm时，阿朴脂蛋白的吸附可降低90％以上，再进一步减小距离对蛋白吸附的影响就很小了[1]。PEG对载体的保护作用主要是因为它那柔软、易变形的高分子亲水链在纳米粒表面形成一层厚厚的“云层”，阻止其他聚合物与之发生相互作用，空间位阻和范德华力与相互作用的自由能紧密相关。PEG的亲水性柔韧长链及其高密度覆盖层是减小蛋白吸附的必要条件，表面PEG链的密度比长短对于空间位阻效应和范德华力更为重要[2,3]。要想用PEG修饰载体，首先应对PEG进行活化，对PEG的末端
分子生物学实验报告
分子生物学实验 院系：生命科学与技术学院 专业：生物科学（基地） 班级： 201101班 学号： 姓名： 分子生物学基础实验 分子生物学实验技术已成为生物化学及分子生物学以及相关学科院系教学科研不可缺少的一部分。为提高学生在分子生物学技术方面的动手能力，生物技术综合实验室主要开设常用而基本的分子生物学实验技术。它的内容包括质粒DNA的制备；DNA的重组；PCR基因扩增等等。 实验一质粒DNA的小量制备 一、实验原理 要把一个有用的外源基因通过基因工程手段，送进细胞中去进行繁殖和表达，需要运载工具，携带外源基因进入受体细胞的这种工具就叫载体（vector）。载体的设计和应用是DNA体外重组的重要条件。作为基因工程的载体必须具备下列条件:(1)是一个复制子，载体有复制点才能使与它结合的外源基因复制繁殖；（2）载体在受体细胞中能大量增殖，只有高复制率才能使外源基因在受体细胞中大量扩增；（3）载体DNA链上有1到几个限制性内切酶的单一识别与切割位点，便于外源基因的插入；（4）载体具有选择性的遗传标记，如有抗四环素基因（Tc r），抗新霉素基因（Ne r）等，以此知道它是否已进入受体细胞，也可根据这个标记将受体细胞从其他细胞中分离筛选出来。细菌质粒具备上述条件，它是基因工程中常用的载体之一。 质粒（plasmid）是一种染色体外的稳定遗传因子，大小在1～120kb之间，具
有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。质粒具有自主复制和转录能力，能使子代细胞保持它们恒定的拷贝数，可表达它携带的遗传信息。它可独立游离在细胞质内，也可以整合到细菌染色体中，它离开宿主的细胞就不能存活，而它控制的许多生物学功能也是对宿主细胞的补偿。 质粒在细胞内的复制，一般分为两种类型：严密控制型（stringent control）和松弛控制型（relaxed control）。前者只在细胞周期的一定阶段进行复制，染色体不复制时，它也不复制。每个细胞内只含有1个或几个质粒分子。后者的质粒在整个细胞周期中随时复制，在细胞里，它有许多拷贝，一般在20个以上。通常大的质粒如F因子等，拷贝数较少，复制受到严格控制。小的质粒，如ColE Ⅰ质粒（含有产生大肠杆菌素E1基因），拷贝数较多，复制不受严格控制。在使用蛋白质合成抑制剂－氯霉素时，染色体DNA复制受阻，而松弛型ColEⅠ质粒继续复制12－16h，由原来20多个拷贝可扩增至1000－3000个拷贝，此时质粒DNA占总DNA的含量由原来的2％增加到40％－50％。本实验分离提纯化的质粒pBR322、pUC19就是由ColE Ⅰ衍生的质粒。 所有分离质粒DNA的方法都包括三个基本步骤:培养细菌使质粒扩增；收集和裂解细菌；分离和纯化质粒DNA。采用溶菌酶可破坏菌体细胞壁，十二烷基硫酸钠（SDS）可使细胞壁解，经溶菌酶和阴离子去污剂（SDS）处理后，细菌染色体DNA 缠绕附着在细胞壁碎片上，离心时易被沉淀出来，而质粒DNA则留在清液中。用乙醇沉淀、洗涤，可得到质粒DNA。 质粒DNA的相对分子量一般在106－107范围内，如质粒pBR322的相对分子质量为2.8×106，质粒pUC19的相对分子质量为1.7×106。在细胞内，共价闭环DNA（covalently closed circular DNA，简称cccDNA）常以超螺旋形式存在。如果两条链中有一条链发生一处或多处断裂，分子就能旋转而消除链的张力，这种松弛型的分子叫做开环DNA（open circular DNA，简称ocDNA）。在电泳时，同一质粒如以cccDNA形式存在，它比其开环和线状DNA的泳动速度快，因此在本实验中，自制质粒DNA在电泳凝胶中呈现3条区带。 二、实验目的 1．掌握最常用的提取质粒DNA的方法和检测方法。 2．了解制备原理及各种试剂的作用。 三、实验材料和试剂
分子生物学实验思考题答案
分子生物学实验思考题答案 实验一、基因组DNA的提取 1、为什么构建DNA文库时，一定要用大分子DNA 答、的大小(即数目)取决于基因组的大小和片段的大小，片段大则文库数目小一些也可以包含99%甚至以上的基因组。而文库数目小则方便研究人员操作和文库的保存。所以构建文库要用携带能力大的载体尽量大的DNA片段. 2、如何检测和保证DNA的质量？ 答、用看，有没有质白质和RNA等物质的污染，还可以测OD，用OD260/280来判断，当OD260/OD280< ，表示蛋白质含量较高当OD260/OD280> ，表示RNA含量较高当OD260/OD280=～，表示DNA较纯。 实验二、植物总RNA的提取 1、RNA酶的变性和失活剂有哪些？其中在总RNA的抽提中主要可用哪几种？ 答、有DEPC,Trizol，氧钒核糖核苷复合物，RNA酶的蛋白抑制剂以及SDS，尿素，硅藻土等；在总RNA提取中用PEPC,Trizol 2、怎样从总RNA中进行mRNA的分离和纯化。 答、、利用成熟的mRNA的末端具有polyA尾的特点合成一段oligo(dT)的引物，根据碱基互补配对原则，可将mRNA从总RNA中分离出来 实验四、大肠杆菌感受态细胞的制备 1、感受态细胞制备过程中应该注意什么？ 答、A）细菌的生长状态：不要用经过多次转接或储于4℃的培养菌，最好从-80℃甘油保存的菌种中直接转接用于制备的菌液。细胞生长密度以刚进入时为宜，可通过监测培养液的OD600 来控制。DH5α菌株的OD600为时，细胞密度在5×107 个/mL左右，这时比较合适。密度过高或不足均会影响转化效率。 B）所有操作均应在无菌条件和冰上进行；实验操作时要格外小心，悬浮细胞时要轻柔，以免造成菌体破裂，影响转化。 C）经CaCl2处理的细胞，在低温条件下，一定的时间内转化率随时间的推移而增加，24小时达到最高，之后转化率再下降（这是由于总的活菌数随时间延长而减少造成的）；D）化合物及的影响：在Ca2+的基础上联合其他二价金属离子（如Mn2+或Co2+）、DMSO或等物质处理细菌，可使转化效率大大提高（100-1000倍）； E）所使用的器皿必须干净。少量的或其它化学物质的存在可能大大降低细菌的转化效率； 2、感受态细胞制备可用在哪些研究和应用领域？ 答、在中将导入受体细胞是如果受体细胞是细菌则将它用Ca2+处理变为质粒进入。 实验五、质粒在大肠杆菌中的转化和鉴定 1、在热激以后进行活化培养，这时的培养基中为什么不加入抗生素？ 答、活化培养用的一般是SOC培养基，这种培养基比LB培养基营养，此时进行的活化培养只是为了让迅速复苏，恢复分裂活性，此时的细胞还不具抗性，加入会细胞会死亡。 2、什么是质粒？根据在细菌中的复制，质粒有几种类型？用于基因重组的主要用到哪些质粒？ 答、是细菌体内的环状。
华西药学院-天然药物化学题目分享及参考答案【精华】
关于天然药物化学的一些原题分享和参考答案 2013年1月22日 写在前面：此分享凡出现页码均为人卫版第五版书上页码，为让用新教材的同学方便查阅 考证，将会附上章节，另外对于生物碱这一章的教学内容是不按教材上的，是按老版第五版 的内容上，不过到时上这块的王锋鹏老师会给我们人手复印一份的，不用担心哈！另外对于 天然药化的学习，个人没有什么好的见解，按老师给的思考题来看书应该效率会比较高，另 外最好加上习题集的题目，可以选择性做，因为我们10级这次考试就是习题集上每章的题 目加上00、01、03、87、91级的几份考题的综合，其中习题集大概占了30%，01级的题 目占了60%，其他考卷占了有10%.所以大家到时一定要多多做原题哈！ 另外，这份题目里的答案只是参考答案，不一定都是对的，如有谬误，还请见谅哈！好了， 不多说了，开始进入正题！ 01级题目及其他题目 一、写出下列化合物的结构类型： 1 a. 第七章 第四节 Vs b. 答案：1a.齐墩果烷型五环三萜 1b.乌苏烷型五环三萜（P278） 2.a Vs b. . （大概是这个，可以看一下01级 (这个10级考到了) 的纸质版，上面有哈） 答案：a 托品烷类生物碱 （P357 第九章第三节） Vs b.单萜类吲哚生物碱 注：还有一个可能考的是简单吲哚类生物碱，回去看一看 3. a. Vs b. P149 第四章 第一节 四 HO 4310813141720H H 125679111215161819212223 24252627282930HO 4310813141720H H 192324252627282930
分子生物学实验技术考试题库
一、名词解释 1.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。 8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。
11.离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。 15.多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组：发生在DNA同源序列之间，有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map)，它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合
现代分子生物学课后答案(朱玉贤_第三版)上
第一章绪论 2.写出DNA和RNA的英文全称。 答：脱氧核糖核酸（DNA, Deoxyribonucleic acid），核糖核酸（RNA, Ribonucleic acid）4.早期主要有哪些实验证实DNA是遗传物质？写出这些实验的主要步骤。 答：一，肺炎双球菌感染实验，1，R型菌落粗糙，菌体无多糖荚膜，无毒，注入小鼠体内后，小鼠不死亡。2，S型菌落光滑，菌体有多糖荚膜，有毒，注入到小鼠体内可以使小鼠患病死亡。3，用加热的方法杀死S型细菌后注入到小鼠体内，小鼠不死亡； 二，噬菌体侵染细菌的实验：1，噬菌体侵染细菌的实验过程：吸附→侵入→复制→组装→释放。2，DNA中P的含量多，蛋白质中P的含量少；蛋白质中有S而DNA中没有S，所以用放射性同位素35S标记一部分噬菌体的蛋白质，用放射性同位素32P标记另一部分噬菌体的DNA。用35P标记蛋白质的噬菌体侵染后，细菌体内无放射性，即表明噬菌体的蛋白质没有进入细菌内部；而用32P标记DNA的噬菌体侵染细菌后，细菌体内有放射性，即表明噬菌体的DNA进入了细菌体内。 三，烟草TMV的重建实验：1957年，Fraenkel-Conrat等人，将两个不同的TMV株系（S株系和HR株系）的蛋白质和RNA分别提取出来，然后相互对换，将S株系的蛋白质和HR株系的RNA，或反过来将HR株系的蛋白质和S株系的RNA放在一起，重建形成两种杂种病毒，去感染烟草叶片。 6.说出分子生物学的主要研究内容。 答：1，DNA重组技术；2，基因表达调控研究；3，生物大分子的结构功能研究----结构分子生物学；4，基因组、功能基因组与生物信息学研究。 第二章染色体与DNA 3.简述真核生物染色体的组成及组装过程 真核生物染色体除了性细胞外全是二倍体，DNA以及大量蛋白质及核膜构成的核小体是染色体结构的最基本单位。核小体的核心是由4种组蛋白（H2A、H2B、H3和H4）构成的扁球状8聚体。 蛋白质包括组蛋白与非组蛋白。组蛋白是染色体的结构蛋白，它与DNA组成核小体，含有大量赖氨酸核精氨酸。非组蛋白包括酶类与细胞分裂有关的蛋白等，他们也有可能是染色体的结构成分 由DNA和组蛋白组成的染色体纤维细丝是许多核小体连成的念珠状结构。 1.由DNA与组蛋白包装成核小体，在组蛋白H1的介导下核小体彼此连接形成直径约10nm的核小体串珠结构，这是染色质包装的一级结构。 2.在有组蛋白H1存在的情况下，由直径10nm的核小体串珠结构螺旋盘绕，每圈6个核小体，形成外径为30nm，内径10nm，螺距11nm的螺线管，这是染色质包装的二级结构。 3.由螺线管进一步螺旋化形成直径为0.4μm的圆筒状结构，称为超螺线管，这是染色
中外微生物学史上著名的十大人物
中外微生物学史上着名的十大人物 XX （生物制药二班生命科学学院黑龙江大学哈尔滨 150080） 摘要：在浩瀚的历史长河中，有这么一群人，不断地探索着这个神奇的世界，让我们知道这个世界上还有我们肉眼看不到的生物，我们永远不会忘记他们所作的贡献。 关键词：微生物学发展史；十大人物；生平事迹； Ten Public Figures in History of Microbiology at Home and Abroad XX (The 2th class of Biological Pharmaceutics,College of Life, Science,Heilongjiang University, Harbin, 150080) Abstract: In the vast history, so a group of people, constantly exploring the magical world, let us know in this world and our invisible creatures, we will never forget their contributions. Key words: the history of microbiology; ten public figures; life story and contributions; 自古以来，人类在日常生活和生产实践中，已经觉察到微生物的生命活动及其所发生的作用。在留下来的石刻上，记有酿酒的操作过程。中国在时期，就已经利用微生物分解有机物质的作用，进行沤粪积肥。但到17世纪中叶，微生物学的研究才取得重大进展。此后，欧洲涌现出一批又一批伟大的微生物学家。19世纪末，随着欧洲建立的一些细菌培养技术被教会医院的引入应用，中国人开始逐步了解微生物学，一大批学者投入微生物学的研究并取得了显着成就。 1673年，有个名叫列文虎克（Antoni van Leeuwenhoek，1632-1723）的荷兰人用自己制造的显微镜观察到了被他称为“小动物”的微生物世界。他给英国皇家学会写了许多信，介绍他的观察结果，他发现了杆菌、球菌和原生动物，表明他实实在在看到并记录了一类从前没有人看到过的微小生命。因为这个伟大的发现，他当上了英国皇家学会的会员。所以今天我们把列文虎克看成是微生物学的开山祖。不过，在列文虎克发现微生物后差不多过了200年，人们对微生物的认识还仅仅停留在对它们的形态进行描述上，并不知道原来是这些微小生命的生理活动对人类健康和生产实践有那样的重要关系。虽然他活着的时候就看到人们承认了他的发现，但等到100多年以后，当人们在用效率更高的显微镜重新观察列文虎克描述的形形色色的“小动物”，并知道他们会引起人类严重疾病和产生许多有用物质时，才真正认识到列文虎克对人类认识世界所作出的伟大贡献。 路易斯-巴斯德（Louis Pas-teur，1822—1895）是法国微生物学家、化学家，近代微生物学的奠基人。像牛顿开辟出经典力学一样，巴斯德开辟了微生物领域，他也是一位科学巨人。巴斯德一生进行了多项探索性的研究，取得了重大成果，是19世纪最有成就的科学家之一。他用一生的精力证明了三个科学
2013华西药学院706药学综合回忆版
华西药学院706药学综合回忆版 有机化学 今年的仍然没有变，1.性质比较2.写产物3.大合成 没啥好说的，每年都出的不一样，把习题册弄活吃透，都做会就差不多了，反正也不难。要强调的一点是，历年真题中的有机题也要都做懂，今年就考了几个往年真题中的让大多数考生似是而非的的题。 今年的有机化学相对比较简单吧。 分析化学 今年分化题型略有改变，增添了名词解释，1.名词解释2.选择（单选，多选）3.判断题 名解虽然是新题型，但是都考的比较基础，只要平时看分化时将一些重点概念掌握了就没问题了，我记得应该有：振动弛豫，化学位移，荧光效率等一共十个，每个两分，都很基础，大家不用担心。 至于选择题，我想给学弟学妹们重点强调的是，一定要把历年分化选择题做个遍！一定要每个题都弄懂！因为分化出题老师实在是太懒了！！！今年选择题有90%以上都是原题，连答案都没变啊！！！有木有！！！但是，话又说回来，川大历来没有公布标准答案，这就需要我们自己下功夫，一定要把每个题都弄懂，要有根有据，强烈建议提前一点整理准备，不懂得大胆地向老师请教！ 判断题的话也大多都是原题，40%左右的新题，比较基础，但是考的都是细节，所以要求我们复习分化时一定要注意细节，多看，多总结！这也是历年来学姐学长们所强调的。 物理化学 今年物理化学题型与去年又有变化，今年物化取消了去年坑爹的填空题，重回正轨，具体有1.单选题2.计算题 单选题的话大多数都是原题，少于30%的新题，知识点与往年相比也没有变化，还是那句话，使用好真题你就能拿下药综，在复习物化时一定要关注知识点，而不是答案，切记！。。。虽然考试时答案也没变- -！ 计算题今年有两道16分，第一题是有关能量效率计算什么的（抱歉我真的忘了，因为这题完全看不懂，做不会T oT），这题确实不会只好瞎写了，希望有战友能回忆起来的话帮我添上谢谢。第二题是相平衡的计算，先要求画图，然后是产率的计算，非常基础和简单，应该是习题册的原题，同时也是去年的原题。。。。。12年考过。 生物化学 今年生物化学的题型的改动，取消了名词解释和简答题（真劲爆啊），1.英译汉2.选择题3.填空题 英译汉大家不用担心，非常简单，全部考的重要的概念和技术的英文全称，要求你写出英文简写与汉语即可，比如PCR ,VLDL 等，大家在复习时只要对重点概念的英文全称加以留意即可。 选择题都比较基础，有原题但不多，且分值也不高。 今年最大的变化时简答题没了，师兄我苦逼的日日夜夜都白瞎了。。。。填空题的话也都比较基础，多看看书也就能做个七七八八了。
分子生物学实验课件
实验一、菌株复壮与单菌落菌株的获取 一、实验目的 学习细菌培养的LB培养基及抗生素抗性筛选培养基的配制，掌握高压灭菌和获取细菌单菌落菌株两种基本实验操作技能。 二、实验材料、设备及试剂 1、实验材料 大肠杆菌（E. coli）DH5α菌株：R-，M-，Amp- 2、实验设备 恒温摇床，电热恒温培养箱，无菌工作台，高压灭菌锅 3、试剂 酵母浸膏，蛋白胨，氯化钠，琼脂，卡那霉素 三、实验步骤 液体LB（Luria-Bertain）培养基配方： 蛋白胨(typtone) 1.0% （1 g/100 ml） 酵母提取物(Yeast extraction)0.5% （0.5g/100 ml） 氯化钠 1.0% （1 g/100 ml） PH 7.0 固体LB培养基：每100 ml液体培养基中加入1.5g琼脂粉 请按试剂瓶上的编号使用相应编号的药勺取药，防止药品相互污染！ (1)每组按上述液体LB培养基配方，以配制100ml的量称取药品放入烧杯。 (2)用量筒量取约80 ml 蒸馏水注入烧杯中，玻棒搅拌使药品完全溶解后用100ml量筒定容 至100ml。 (3)pH试纸检测pH值，并用1 N NaOH或1 N HCl调节pH值至7.0。 (4)将100ml溶液分装入两个三角瓶，每瓶为50ml。 (5)按固体培养基配方称取适量琼脂粉分别放入两个三角瓶中，以配制成两瓶50ml固体LB培 养基。 (6)两个三角瓶分别用锡纸包扎瓶口。并用记号笔在三角瓶上标注各组标记。 (7)把装有培养基三角瓶放入灭菌锅中，盖上锅盖，以对称方式拧紧锅盖，打开排气阀通电加 热，至有连续的白色水蒸气从排气阀排出时，关闭排气阀。当高压锅温度（气压）指示器指示锅温度升高至121℃（0.1Mpa）时，调节电压（或利用手动开关电源的方式）使高压