超滤离心法降低重组人脱细胞真皮基质牛血清白蛋白残留量检测中基质效应的实验研究

牛血清白蛋白的提取与鉴定演示教学

如有侵权请联系网站删除 牛血清白蛋白的提取与鉴定 一、实验目的 1. 掌握牛血清白蛋白的提取与鉴定方法 2.掌握盐析法、透析法及电泳法 二、实验原理 牛血清白蛋白是牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38g/100ml），分子量68kD。等电点4.8。应用相同浓度硫酸铵盐析法将血清中白蛋白与其它球蛋白分离，最后用透析法除盐，即可提取白蛋白。再利用电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠度等有关，对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。 三、操作步骤 （一）盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS（磷酸盐缓冲生理盐水）稀释血清，摇匀后，逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL，边加边摇，充分混匀，然后静止放臵10分钟，再离心（2000r/min）10min，将上清液倾入试管中。 （二）透析（1 ）取干净的比色板，在各孔内滴加一滴纳氏试剂 （2）透析袋未放入水中时，立即取水中液体检查有无NH4+ (3)取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内，使透析袋下半部侵入水中，对蛋白液进行透析，常用玻璃棒搅拌袋外（烧杯中）液体，以缩短透析时间。 (4)每隔2分钟检查一次，更换蒸馏水多次，用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+，观察颜色变化并记录，直至袋内盐分透析完毕。 (5)将袋内液体倾入试管，即得牛血清白蛋白溶液。 （三）电泳（1）点样取一张膜条，将薄膜无光泽面向下，放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透，取出，用干净滤纸吸去多余的缓冲液，以薄膜的无光泽面距一端1.5㎝处作点样线，将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。标准液点一次，待测液点三次。 （2）电泳将点样后的膜条臵于电泳槽架上，放臵时膜条无光泽面向下，点样端臵于阴极，待平衡5min后，打开电源，调节电泳仪的电压为160伏，通电60min，关闭电源后用镊子将膜条取出。 （3）染色将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中，染2分钟取出，立即浸于漂洗液中，分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5min，直至背景漂洗干净为止，用滤纸吸干薄膜。（4）鉴定比较样品与待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果，看位置是否一致。 四、仪器和试剂 仪器：离心管、离心机、试管、玻璃纸、烧杯、比色板、滴管、玻璃棒、电泳仪、醋酸纤维素薄膜、天平 试剂：牛血清待测液、牛血清样品、PBS（磷酸盐缓冲生理盐水，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2）配制的0.9%NaCl溶液）、pH7.2饱和硫酸铵溶液、纳氏试剂、巴比妥缓冲液、氨基黑10B染色液、漂洗液 五、预测结果位置一致，实验成功。若在待测液的电泳结果中出现其他球蛋白的黑带区域，则说明提取不够纯。 六、参考文献[1]陆红玲.生物化学与分子生物学实验教程.西安:第四军医大学出版社,2010 精品资料

脱细胞异体真皮基质医用组织补片

脱细胞异体真皮基质医用组织补片（AEM） 商品名称：瑞诺○R 一、技术原理 脱细胞生物组织补片利用脱细胞专利技术，对生物真皮进行生物和化学处理，完全脱除各种可被宿主识别的、能够引起免疫排斥反应的细胞成分，同时完整保留细胞外基质成分和三维框架结构。植入宿主体内后，不引起免疫排斥反应；更可诱导宿主细胞进入三维框架结构并生长、繁殖，同时产生新的细胞外基质成分，形成宿主自身组织。 二、组织修复材料的种类特点 自体组织：二次创伤、供源不足等； 化学补片：异物刺激、慢性炎症反应等，为病理性修复； 生物补片： 1.提取合成生物补片：无天然三维框架结构，填充覆盖作用，会很快降 解。 2.脱细胞生物补片：保留天然三维框架结构，是一种生理性修复。 这种绝好的框架结构是主要包括胶原蛋白、弹性蛋白、非胶原糖蛋白以及蛋白多糖等主要成分的结构。其中胶原蛋白纤维是组织中的主要力学元素，其强度和刚度较大，而弹性蛋白纤维的可逆拉伸度较好，两者互补正好构成了理想基质的机械力学性能。这种生物材料进入组织缺损区的修复愈合过程是通过内源性组织再生的过程来完成的。完全不同于聚合材料的组织修复过程。 内源性组织再生过程包含了3个步骤：（1）植入基质的快速再血管化和循环中的干细胞进入损伤组织，植入基质内管道与宿主管道结合，循环中的间叶细胞

样干细胞通过血管化后的完整管道位移于移植组织内，并开始纤维原细胞的转录而重入基质。干细胞进入移植物是对植入基质中的生物活性信号蛋白和生长因子的反应。而细胞下沉于基质中是经过特殊粘连机制来完成的；（2）细胞的再塑。一旦宿主细胞快速移位到整个移植基质内，即出现纤维原细胞。移植基质被宿主细胞充填完成后，呈现正常细胞浓度。因为移植基质不是经过化学性铰链处理，这些充填入基质内的宿主细胞的蛋白质经历了正常分解和再生过程；（3）最后阶段称为转换。再塑后的细胞精心制作新的基质成为再生宿主组织，并恢复成它的起源结构、功能性和生理性状态。当我们了解了生物材料的组织愈合过程是“内源性组织再生过程”后，发现与高分子补片组织修复的不同结果有：○1没有过量的瘢痕组织；○2没有聚合体异物存留在体内而发生的长期慢性炎症过程。○3由于可再血管化，与合成补片相比具有更好的抗感染能力。 三、应用 1.脱细胞生物组织补片与腹壁外科 腹壁外科首先面对的问题是：解决因为先天性腹壁薄弱和后天性损伤 （外伤、手术感染和腹壁肿瘤切除腹壁组织）造成的腹壁缺损引起的一 系列问题。虽然近年来合成医用材料给腹壁外科医生提供了一种解决问 题的方法，但应用合成材料仍然不能解决：婴幼儿腹壁缺损、感染性腹 壁缺损、复杂性全腹壁缺损的修复等问题。瑞诺同种异体脱细胞真皮医 用组织补片，弥补了合成修复材料使用中的限制，为腹壁外科医生提供 了全面的腹壁组织缺损修复的解决方案。建议在以下情况下选用: （1）婴幼儿腹壁缺损（2）嵌顿性或绞窄性腹壁疝 （3）腹壁缺损伴有污染或感染创面（4）食道裂孔疝

牛的牛血清白蛋白残留检测酶联免疫分析(ELISA)

牛的牛血清白蛋白残留检测酶联免疫分析（ELISA） 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用 目的：本试剂盒用于测定牛血清，血浆及相关液体样本中类牛血清白蛋白残留检测的含量。 实验原理： 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛的牛血清白蛋白残留检测水平。用纯化的牛的牛血清白蛋白残留检测抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入类牛血清白蛋白残留检测，再与HRP标记的类牛血清白蛋白残留检测抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的类牛血清白蛋白残留检测呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛的牛血清白蛋白残留检测浓度。 试剂盒组成： 试剂盒组成48孔配置96孔配置保存 说明书1份1份 封板膜2片（48）2片（96） 密封袋1个1个 酶标包被板1×48 1×96 2-8℃保存 标准品：2700ng/L0.5ml×1瓶0.5ml×1瓶2-8℃保存标准品稀释液 1.5ml×1瓶 1.5ml×1瓶2-8℃保存酶标试剂 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存样品稀释液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂A液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存显色剂B液 3 ml×1瓶 6 ml×1瓶2-8℃保存终止液3ml×1瓶6ml×1瓶2-8℃保存浓缩洗涤液（20ml×20倍）×1瓶（20ml×30倍）×1瓶2-8℃保存 样本处理及要求： 1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上 清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。 2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心 20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。 3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程 中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

【9A文】脱细胞真皮基质分析报告

前言 大面积深度烧伤或其他创伤导致皮肤真皮成分缺损，通过刃厚小皮片或微粒植皮技术虽然能使创面愈合，但由于其缺乏真皮层，导致愈合后创面弹性差，凸凹不平，易挛缩且不耐摩擦。移植自体皮瓣或全厚及中厚皮片固然是最好的方法，但大面积深度烧伤后，能作为供皮区的部位已很少，供皮区又将形成同等程度的缺损，日后形成瘢痕。为解决这一问题，国内外学者致力于寻找一种理想的真皮替代品。 1.脱细胞真皮基质概述 脱细胞真皮基质（acellulardermalmatriRADM）是用物理、化学等方法将人或动物皮肤中的表皮层及细胞成分彻底去除仅保留真皮中含胶原网架的细胞外基质。 脱细胞真皮基质由于完全没有了细胞成分和Ⅰ、Ⅱ型细胞相容性抗原的主要免疫活性,故一般不会诱发排斥反应。但脱细胞真皮基质保留有正常胶原的三维结构和真皮中含胶原支架的细胞外基质能为组织细胞的再生提供一个良好的支架结构，具有创面覆盖、组织缺损填充、引导组织再生和支架等作用。 脱细胞真皮基质中无细胞成分,免疫活性低,不会诱发免疫反应。它保留了表皮和真皮间的基底膜,移植后可形成真皮面和基底膜面。基底膜面可支持断层皮片的生长,这对表皮细胞的增殖分化以及移植皮的外观和功能起着重要作用,同时也有利于种子细胞的點附增殖等。真皮面利于脱细胞真皮基质的快速血管化,为成纤维细胞的增殖提供支架,有助于胶原成分改建,促使成纤维细胞排列分布规则,形成结构形态正常的胶原纤维,此外,还有诱导、调节宿主细胞和新生血管长入,促进上皮形成等作用。此外,细胞外基质蛋白也可以促进表皮细胞的再生。因此,脱细胞真皮基质可作为真皮替代品,在为烧伤创面提供真皮的同时,可明显减少瘢痕形成。是一种理想的真皮替代材料。 1.1脱细胞真皮基质的制备方法 根据来源的不同脱细胞真皮基质分为异体脱细胞真皮基质（来源主要为尸体皮）和异种脱细胞真皮基质（来源为动物皮以猪皮和牛皮为主）两种。制备过程都是尽可能的去除具有抗原性的细胞(表皮细胞、毛囊、皮脂腺、汗腺及真皮中血管内皮细胞、成纤维细胞等),保留完整的胶原纤维成分和组织基本结构。早期

牛血清白蛋白的提取与鉴定

第八次实验： 牛血清白蛋白的 提取与鉴定 一、实验名称牛血清白蛋白的提取与鉴定 二、实验目的1、掌握盐析法提取牛血清白蛋白 2、掌握血清蛋白醋酸纤维素薄膜电泳法 鉴定牛血清白蛋白 3、了解用溴甲酚绿鉴定血清蛋白 三、实验原理1，蛋白质是水化作用较强的高分子物质， 向其加入碱土金属的中性盐类可是蛋白质胶粒脱水并失去 电荷，从溶液中沉淀出来。球蛋白在半饱和的硫酸铵溶液 中可析出，而清蛋白则需在饱和的硫酸铵溶液中可析出。 可将血清中白蛋白与其它球蛋白分离，最后用透析法除盐， 即可提取白蛋白。2，利用电泳过程中带电粒子的移动速度

与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠 度等有关，可对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。3，血清中 的白蛋白与溴甲酚绿在ph=4.2的条件下结合生成绿色化合 物，溶液由黄色变为绿色，而球蛋白基本不与之反应，缩 短反应时间可去除干扰，其颜色的深浅与白蛋白浓度成正 比，可用于鉴定牛血清白蛋白。 四、实验步骤 （一）盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS磷酸盐缓冲生理盐水稀释血清，摇匀后，逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL，边加边摇，充分混匀，然后静止放臵10分钟，再离心（4000r/min）10min，将上清液倾入试管中。 （二）透析取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内，使透析袋下半部侵入水中，对蛋白液进行透析，常用玻璃棒搅拌袋外（烧杯中）液体，以缩短透析时间。更换蒸馏水多次，用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+，观察颜色变化，直至袋内盐分透析完毕。将袋内液体倾入试管，即得牛血清白蛋白溶液。（三）BCG法鉴定 白蛋白+溴甲酚绿ph=4.2 绿色复合物 或（三）电泳鉴定

脱细胞异体真皮基质在开放性乳突切开中的应用

脱细胞异体真皮基质在开放性乳突切开中的应用 摘要目的探讨脱细胞异体真皮基质（ADM）在开放性乳突切开中的应用效果。方法回顾性分析71例中耳炎患者的临床资料，随机分为观察组（38例）和对照组（33例）。观察组应用ADM覆盖术腔，对照组术腔内未贴敷任何材料。术后比较两组的术腔上皮化时间及恢复情况。结果术后随访两组患者，观察组愈合情况优于对照组；观察组术腔上皮化平均时间为（3.2±0.5）周，对照组为（13.2±2.8）周，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论开放性乳突根治术中应用脱细胞异体真皮基质贴覆术腔，利于提升手术疗效，值得临床推广。 关键词脱细胞异体真皮基质；乳突根治术；上皮化 【Abstract】Objective To investigate the application effect of acellular dermal matrix （ADM）in open mastoidectomy. Methods Clinical data of 71 otitis media patients were retrospectively analyzed. They were randomly divided into observation group （38 cases）and control group （33 cases）. The observation group received ADM for cavity covering，and the control group had no cavity covering material. Cavity epithelization time and recovery condition of the two groups were compared after operation. Results Follow-up was taken for the two groups. The observation group had better recovery condition than the control group. The observation group had an average cavity epithelization time as （3.2±0.5）weeks，and that of the control group was （13.2±2.8）weeks. The difference between the two groups had statistical significance （P＜0.05）. Conclusion Application of acellular dermal matrix for cavity covering in open mastoidectomy is helpful for improving curative effect，and this method is worthy of clinical promotion. 【Key words】Acellular dermal matrix；Radical mastoidectomy；Epithelization 脱细胞异体真皮基质（acellular dermal matrix，ADM）为临床较常使用的一种真皮支架和基底膜，取自哺乳动物皮肤组织，经脱细胞冷冻干燥形成。随着ADM临床应用技术愈发成熟，近些年来，于开放性乳突病变切除术中应用ADM的报道也逐步增多[1]。曾有研究表明[2]，采用ADM一期覆盖乳突根治术可有效规避对术腔造成重复创伤。基于此研究背景，本文主要探讨了脱细胞异体真皮基质在开放性乳突切开中的应用效果，以为中耳炎的临床诊疗提供参考依据。选取2011年2月～2014年2月本院收治的骨疡型中耳炎及胆脂瘤型中耳炎患者71例，回顾性分析其临床诊疗资料，现报告如下。 1 资料与方法 1. 1 一般资料选取本院2011年2月～2014年2月诊疗的71例（骨疡型及胆脂瘤型）中耳炎患者为研究对象。所有患者均于知情了解手术操作方法及预后效果情形下自愿接受手术治疗。将71例患者随机分为观察组（38例）和对照组

脱细胞真皮基质分析报告

脱细胞真皮基质分析报告 Prepared on 22 November 2020

前言 大面积深度烧伤或其他创伤导致皮肤真皮成分缺损，通过刃厚小皮片或微粒植皮技术虽然能使创面愈合，但由于其缺乏真皮层，导致愈合后创面弹性差，凸凹不平，易挛缩且不耐摩擦。移植自体皮瓣或全厚及中厚皮片固然是最好的方法，但大面积深度烧伤后，能作为供皮区的部位已很少，供皮区又将形成同等程度的缺损，日后形成瘢痕。为解决这一问题，国内外学者致力于寻找一种理想的真皮替代品。 1.脱细胞真皮基质概述 脱细胞真皮基质（acellulardermalmatrixADM）是用物理、化学等方法将人或动物皮肤中的表皮层及细胞成分彻底去除仅保留真皮中含胶原网架的细胞外基质。 脱细胞真皮基质由于完全没有了细胞成分和Ⅰ、Ⅱ型细胞相容性抗原的主要免疫活性,故一般不会诱发排斥反应。但脱细胞真皮基质保留有正常胶原的三维结构和真皮中含胶原支架的细胞外基质能为组织细胞的再生提供一个良好的支架结构，具有创面覆盖、组织缺损填充、引导组织再生和支架等作用。 脱细胞真皮基质中无细胞成分,免疫活性低,不会诱发免疫反应。它保留了表皮和真皮间的基底膜,移植后可形成真皮面和基底膜面。基底膜面可支持断层皮片的生长,这对表皮细胞的增殖分化以及移植皮的外观和功能起着重要作用,同时也有利于种子细胞的点附增殖等。真皮面利于脱细胞真皮基质的快速血管化,为成纤维细胞的增殖提供支架,有助于胶原成分改建,促使成纤维细胞排列分布规则,形成结构形态正常的胶原纤维,此外,还有诱导、调节宿主细胞和新生血管长入,促进上皮形成等作用。此外,细胞外基质蛋白也可以促进表皮细胞的再生。因此,脱细胞真皮基质可作为真皮替代品,在为烧伤创面提供真皮的同时,可明显减少瘢痕形成。是一种理想的真皮替代材料。 脱细胞真皮基质的制备方法 根据来源的不同脱细胞真皮基质分为异体脱细胞真皮基质（来源主要为尸体皮）和异种脱细胞真皮基质（来源为动物皮以猪皮和牛皮为主）两种。制备

牛血清白蛋白

BSA牛血清白蛋白 牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent。 CAS号：9048-46-8 英文名称：Bovine albumin 英文同义词：nhsa;BSA-C;AC-BSA;ALBUMIN, PIG;albumenpowder;SERUM ALBUMIN;ACETYLA TED BSA;BSA ACETYLATED;Bovine albumin;BSA, METHYLA TED 中文名称：牛血清白蛋白 中文同义词：蛋白粉；牛白蛋白；卵蛋白粉；血清蛋白；血清白蛋白；牛血蛋白质；复合氨基酸；牛血清蛋白；牛血清白蛋白；血清白蛋白（牛） CBNumber: CB5107573 分子式：N/A 英文别名：Bovine serum albumin 化学性质 储存条件: 2-8°C 溶解度: PBS: >40 毫克/毫升 form : lyophilized powder Merck : 13,8542 稳定性：Stable. Incompatible with strong oxidizing agents and strong acids. Refrigerate. EPA化学物质信息：Albumins, blood serum(9048-46-8) 用途 1、用于生化研究、遗传工程和医药研究 2、用作医药保健食品、调味品 3、维持渗透压、pH缓冲、载体作用 4、在PCR体系中有助于Taq酶的稳定性及活性，可以提高PCR的效率

脱细胞真皮基质体内转归的研究进展.

脱细胞真皮基质体内转归的研究进展 发布时间:[1970-01-01] 滨州医学院学报2008年2月第31卷第1期 脱细胞真皮基质体内转归的研究进展 刘道峰(综述,左金华(审校 (滨州医学院附属医院口腔外科,滨州市,256603 关键词脱细胞真皮基质;组织再生;成纤维细胞 脱细胞真皮基质(acellular dermal matrix,ADM是最近几年兴起的一种天然生物材料,最初用作真皮替代物,已有ADM在神经外科、耳鼻咽喉、烧伤整形、牙周等学科领域的研究和应用报道[1~4],但对于ADM异体移植后的最终生物学转归,存在较大争议。本文着重就其异体移植后的生物学转归及其机制的研究进展作一综述。 一、ADM 的结构与特性 ADM在制备过程中去除了表皮和真皮中的细胞成分,仅保留真皮的不溶性基质成分,具有低抗原性、快速血管化和一定的稳定性。ADM[5]为规则的三维网状支架,Ⅰ型胶原纤维占主要地位,构成ADM的基本骨架;Ⅲ型胶原纤维减少至原来的一半;Ⅳ型胶原纤维和Ⅶ型胶原纤维几乎消失。弹力蛋白明显减少,层粘连蛋白损失较多,硫酸软骨素消失殆尽,纤维连接素明显减少,糖蛋白几乎完整保存。 二、ADM 的转归研究 ADM 是无细胞的组织支架,植入受区给创面提供了足够的真皮组织,即形成了一个理想的生物支架,引导新生血管长入和上皮爬行,又大大减轻愈后疤痕形成和创面挛缩的程度。伴随血管长入和成纤维细胞迁移其中,宿主机体对ADM 逐步进行改建。

关于ADM 的体内结局,学术界持有两种观点:①部分学者报道大约在4~6周时ADM的降解与成纤维细胞分泌的基质量达到动态平衡,新生胶原纤维与ADM原有胶原网架并存, ADM被视为自体组织。Cummings等[6]观察到术后6个月发现新生成纤维细胞、血管和胶原纤维贯穿ADM中,原有的弹性纤维仍有保留。Sclafani等[7]观察ADM移植后1年,初始6个月ADM不断被改建,面积不断缩小,余下的6个月保持一个稳定的量,不再有明显变化。②多数学者认为ADM在体内逐渐被降解替代,最终完全替换为自体组织或相似组织,这一过程时间长短不一。 Chaplin等[1]应用ADM修复硬脑膜缺损,术后1个月时ADM已完全血管化,3个月时ADM 与周围硬脑膜不易区分,达到临床修复目的。Thakker等[8]采用ADM 包裹羟磷灰石(HA或多聚乙稀(PP作眶内植入物,1.5个月时HA组胶原纤维和血管大部分长入,PP组有少部分长入(主要在AD附近;3个月时两组胶原纤维与血管完全长入,ADM与眶内植入物密贴牢不可分,并与周围组织融合,实现植入物的固位,这比单纯采用眶内植入物的固定要早和牢固。 Tark等[9]采用ADM复合角质形成细胞修复猪全层皮肤缺损,6个月时创面组织学观察揭示成纤维细胞侵入支架中,血管网明显,ADM上出现复层角化细胞,透明层形成,与正常皮肤在构造上基本一致。Wei等[10]采用ADM增加附着龈高度,术后个月ADM与游离龈及根部牙槽粘膜的分界不甚清楚,上皮层厚度中等,有角化,上皮与固有层交界面平坦,结缔组织中包含浓密的胶原纤维和分散的弹性纤维,形态与层次基本等同于正常粘膜。谢卫国等[11]观察到6个月时发现ADM原有的疏松海绵状结构已逐步转变为与正常真皮类似的结构。Pahari等[12]应用ADM延长大鼠肠粘膜的长度,取得满意效果,术后6个月ADM皮片延伸为完整而坚实的肠粘膜,二者在组织学上难以鉴别。Buinewicz等[13]使用ADM修复腹壁缺损观察到术后8个月,ADM转化为筋膜样组织,与原先的筋膜发挥同样的生理功能。Witt等[14]使用ADM修复大疱性表皮松解症,1年后观察胶原和弹性纤维成熟并按照正常皮肤形式排列,实现临床愈合。Gaspar等[3]将ADM直接置于重度烧伤后暴露的骨面,表面再覆盖半厚皮片,术后2年组织学观察,上皮显示正常的结构和角化;在上皮与真皮连接

牛血清白蛋白分离提纯工艺

课程设计说明书 课程名称：生物分离工程 设计题目：牛血清白蛋白的分离提纯工艺 院系：环境与化学工程学院 学生姓名：孙盼盼 学号：41004020111 专业班级：10级生物工程01班 指导教师：王晓军 2013年6月20日

目录 1.设计任务书 (1) 2.设计背景 (1) 2.1 牛血清白蛋白分离提纯的简介 (1) 2.2 牛血清白蛋白分离提纯的意义 (1) 3.设计原理 (2) 4.设计工艺流程及设计方案说明 (2) 4.1对原材料的粗分级分离 (3) 4.2对粗分离成分进行细分级分离 (3) 4.3 蛋白的结晶与重结晶 (3) 4.4 对分离出的蛋白质进行纯度鉴定 (3) 4.5 牛血清白蛋白质分离提纯的整个工艺流程 (3) 5.操作过程 (4) 5.1蛋白质分离的准备阶段 (4) 5.2细分级分离设备的设计 (4) 5.3蛋白质的纯度鉴定 (8) 6.参考文献 (8) 7.课程设计心得 (9)

1.设计任务书 现有一混合物料液中含有酪蛋白（分子量：57000Da，pI 4.5）、β-乳球蛋白（分子量：35000Da，pI 5.1）、α-乳白蛋白（分子量：14000Da，pI 4.2）和牛血清白蛋白（分子量：66200Da，pI 4.7），设计一个分离纯化工艺纯化其中的牛血清白蛋白。 2.设计背景 2.1 牛血清白蛋白分离提纯的简介 蛋白质是（protein）是生命的物质基础，没有蛋白质就没有生命。因此，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。机体中的每一个细胞和所有重要组成部分都有蛋白质参与。蛋白质占人体重量的16%~20%，即一个60kg重的成年人其体内约有蛋白质9.6~12kg。人体内蛋白质的种类很多，性质、功能各异，但都是由20多种氨基酸按不同比例组合而成的，并在体内不断进行代谢与更新。 蛋白质具有很多生物化学共性，运用相关性质进行蛋白质的分离制备多种不同的单一蛋白质，更好的为人们所有。蛋白质的分离提纯技术已经很成熟，相关的工艺流程包含各种不同的分离提纯设备，这些设备运用蛋白质的不同原理对其进行分离纯化，单一蛋白质的分离提纯在现实生活中具有重要意义！ 2.2 牛血清白蛋白分离提纯的意义 牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38g/100ml），分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫

实验二牛血清白蛋白的提取与鉴定

牛血清白蛋白的提取与鉴定 一、实验目的掌握牛血清白蛋白的提取与鉴定方法 二、实验原理 牛血清白蛋白是牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38 g/100 ml），分子量68 kD。等电点4.8。应用相同浓度硫酸胺盐析法将血清中白蛋白与其它球蛋白分离，最后用透析法除盐，即可提取白蛋白。再利用电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的粘稠度等有关，对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。 二、实验步骤 （一）盐析取离心管一支加入牛血清2 ml、加入等量PBS（磷酸盐缓冲生理盐水）稀释血清，摇匀后，逐滴加入pH 7.2饱和硫酸铵溶液2ml，边加边摇，充分混匀，然后静止放置10分钟，再离心（4000 r/min）10 min，将上清液侵入试管中。 （二）透析取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100 ml烧杯内，使透析袋下半部侵入水中，对蛋白液进行透析，常用玻璃棒搅拌袋外（烧杯中）液体，以缩短透析时间。更换蒸馏水多次，用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+，观察颜色变化，直至袋内盐分透析完毕。将袋内液体倾入试管，即得牛血清白蛋白

溶液。 （三）电泳 （1）点样取一张膜条，将薄膜无光泽面向下，放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透，取出，用干净滤纸吸去多余的缓冲液，以薄膜的无光泽面距一端1.5 cm处作点样线，将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。 （2）电泳将点样后的膜条置于电泳槽架上，放置时膜条无光泽面向下，点样端置于阴极，待平衡5 min后，打开电源，调节电泳仪的电压为160V，通电60 min，关闭电源后用镊子将膜条取出。 （3）染色将膜条直接浸入盛有氨基黑10B的染色液中，染2分钟取出，立即浸入漂洗液中，分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5 min，直至背景漂洗干净为止，用滤纸吸干薄膜。 （4）鉴定比较样品与待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果，看位置是否一致。 四、实验仪器和试剂 仪器：离心管、离心机、试管、玻璃纸、烧杯、比色磁盘、滴管、玻璃棒、电泳仪、醋酸纤维素薄膜、分光光度计。 试剂：牛血清待测液、牛血清样品、PBS（磷酸盐缓冲溶液，用0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2）配制的0.9% NaCl溶液）、pH7.2饱和磷酸铵溶液、纳氏试剂、巴比妥缓冲液、氨基黑10B染色液、漂洗液、0.4N氢氧化钠溶液。 五、预测结果 位置一致，实验成功。若在待测液的电泳结果中出现其他球蛋白的黑带区域，则说明提取不够纯。 六、参考文献 【1】陆红玲. 生物化学与分子生物学实验教程。西安：第四军医大学出版社，2010. 巴比妥缓冲液（pH8.6）取巴比妥5.52g与巴比妥钠30.9g，加水使溶解成2000ml，即得。

牛血清白蛋白-9048-46-8(MSDS)

牛血清白蛋白-9048-46-8（MSDS） 牛血清白蛋白 化学品安全技术说明书 第一部分化学品及企业标识 化学品中文名称: 牛血清白蛋白化学品英文名称: Bovine albumin 企业名称: Shenzhen Biochemilogic Co. Ltd. 地址: 广东省深圳市宝安区龙华镇大浪明君工业园A2栋4楼邮编: 518109 电子邮件地址: 传真号码: 企业应急电话: 技术说 明书编码: 生效日期: 2010年02月26 日国家应急电话: 第二部分成分/组成信息 纯品 , 混合物 ? 化学品名称:牛血清白蛋白有害物成分:牛血清白蛋白浓度: ?95% CAS No.:9048-46-8 第三部分危险性概述 危险性类别: 无资料侵入途径: 吸入，食入，经皮吸收。健康危害: 刺激眼睛，呼吸系统和消化系统，引起皮肤过敏。环境危害: 对环境有危害，曝光或遇 热分解对大气可造成污染。燃爆危险:无资料 第四部分急救措施 第 1 页共 6 页 牛血清白蛋白皮肤接触: 立即脱去被污染的衣服，用清水或肥皂水彻底冲洗 皮肤至少15分钟， 如果暴露皮肤的外观发生了变化或疼痛，就医。眼睛接触: 立即提起眼睑， 用大量流动清水冲洗至少15分钟。即使没用急性疼

痛或外观变化，一定要就医。吸入: 迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。如呼吸困难，不能进 行人工呼吸，给输氧，就医。食入:不能催吐，喝2-4杯牛奶或水，立即就医。 第五部分消防措施 危险特性:在足够的浓度下与空气可形成爆炸性混合物。有害燃烧产物: 一氧化碳、二氧化碳、刺激性和有毒烟雾和气体。灭火方法及灭火剂: 消防人员必须穿全身防护服，戴防护眼镜，佩戴自给式呼吸 器。使用适合周围环境的灭火设施。灭火剂:雾状水、泡沫、 干粉、二氧化碳。灭火注意事项: 没有配备全身防火防毒服和供氧设备请不要待在危险区。 第六部分泄露应急处理 应急处理: 应急处理人员须穿戴化学防护衣进入现场。化学品未经处理严禁向环 境排放。消除方法: 隔离泄漏污染区，限制出入。切断火源。确保有足够的通风，建议应 急处理人员戴防尘面具(全面罩)，穿防毒服。避免扬尘，小心扫起， 置于袋中转移至安全场所，防止流入水渠。收集回收或运至废物处理 场所处置。 第七部分操作处置与储存 操作注意事项: 密闭操作，全面通风。防止粉尘释放到车间空气中。操作人员必 第 2 页共 6 页 牛血清白蛋白

牛血清蛋白BSA

牛血清白蛋白 简介 牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent。 CAS号：9048-46-8 英文名称：Bovine albumin 英文同义词：nhsa;BSA-C;AC-BSA;ALBUMIN, PIG;albumenpowder;SERUM ALBUMIN;ACETYLATED BSA;BSA ACETYLATED;Bovine albumin;BSA, METHYLATED 中文名称：牛血清白蛋白 中文同义词：蛋白粉；牛白蛋白；卵蛋白粉；血清蛋白；血清白蛋白；牛血蛋白质；复合氨基酸；牛血清蛋白；牛血清白蛋白；血清白蛋白（牛） CBNumber: CB5107573 分子式：N/A 英文别名：Bovine serum albumin 化学性质 储存条件: 2-8°C 溶解度: PBS: >40 毫克/毫升 form : lyophilized powder Merck : 13,8542 稳定性：Stable. Incompatible with strong oxidizing agents and strong acids. Refrigerate. EPA化学物质信息：Albumins, blood serum(9048-46-8)

用途 1、用于生化研究、遗传工程和医药研究 2、用作医药保健食品、调味品 3、维持渗透压、pH缓冲、载体作用 4、在PCR体系中有助于Taq酶的稳定性及活性，可以提高PCR的效率，在酶切反应缓冲液中加入BSA，通过提高溶液中蛋白质的浓度，对酶起保护作用。防止酶的分解和非特异性吸附，能减轻有些酶的变性，能减轻有些不利环境因素如加热，表面张力及化学因素引起的变性的。 生产方法 以牛血为原料分离出血清，用硫酸铵分级沉淀后，经辛酸处理精制而得。 贮存方法 每10克加100毫升水进行溶解，或用PBS溶解也可，视用途而决定。然后分装成小支。若不使用防腐剂可贮存在零下20或30摄氏度的恒温柜中，若使用防腐剂（如0.1%叠氮化钠）则可贮存在零上4摄氏度的环境下。一般可存放数月不变质。防腐剂可能对牛血清白蛋白的效果造成影响，应慎用。 编辑本段结构与作用 成分结构 牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38g/100ml），分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白（BSA），又称第五组分，是牛血清中的一种球蛋白，包含583个氨基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为Blocking agent。它是牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38g/100ml），分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%，含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺，含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸组成17个二硫键，在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。

牛血清白蛋白粒径及团聚作用

1介绍 牛血清白蛋白（BSA）是一种小的稳定且中等程度的非反应性蛋白质，通常用作实验室蛋白质浓度标准，在各种免疫测定中用作阻断剂或作为细胞培养补充剂。作为牛血中最丰富的血清蛋白，养牛业的副产品，BSA是一种相对便宜且易于获取的化合物。 根据文献，BSA标准粒径是7.1nm、分子量是66.5kDa。牛血清白蛋白在压力条件下显示出自然的二聚趋势，BSA二聚体的分子量是132kDa。磷酸盐缓冲盐水（PBS）是一种水基盐溶液，与哺乳动物细胞等渗，可将pH值稳定在中性值（通常pH7.4）。缓冲液广泛用于溶解蛋白质，重悬细胞或作为生物样品的运输溶液。 为了突出样品制备方法对溶解蛋白质结构的影响，我们溶解纯的BSA在去离子水或PBS中。我们接下来比较两种BSA溶液用Litesizer?测试的粒径和分子量数值。 2实验设计 制备了两种不同的BSA储备溶液。 样品1包含BSA（≥96%，通过冷乙醇分馏获得）溶解于0.2um过滤的去离子水。 样品2包含相同来源的BSA溶解于PBS（0.01M，pH7.4） 每个样品制备四种不同浓度（8，4，2和1mg/mL），在25℃通过Litesizer? 500在石英池中进行测试。 对于粒径测试，使用8mg/mL样品。运行回合数、测试角度和滤光、聚焦位置由仪器自动确定。 分子量测试用侧向散射dn/dc比例0.185mL/g进行。四个不同的BSA浓度用于生成德拜图。甲苯用作参考物质。 粒径和分子量测试都重复三次。

3结果与讨论 3.1粒径结果 Litesizer用动态光散射（DLS）来计算悬浮颗粒的水合动力学直径。如图1，溶解于水的BSA显示双峰的粒径分布，正如光强粒径分布曲线可见的两个明确的峰。第一个峰对应平均粒径小于3nm，远小于BSA 单体预期的7nm，第二个峰平均粒径是22nm，大于BSA二聚体预期的粒径值。因此，BSA单体和BSA二聚体在这个样品中都不能观察到。 这表明一定程度的变性或团聚发生。 图1 去离子水溶解的BSA光强粒径分布 相反，PBS溶解的BSA样品DLS结果显示清晰的单峰粒径分布（图2）。粒径平均值是12.4nm（见表1），结果表明BSA的PBS溶液主要包含BSA二聚体。

牛血清蛋白简介

基本信息 【词条中文名称】牛血清白蛋白【词条拼音名称】Níuxuèqīng báidànbái 牛血清白蛋白 【词条英文名称】Bovine albumin 【词条英文别名】Bovine serum albumin 【词条分类性质】名词词组，偏正词组【词条适用范围】医学领域，药学领域【CAS 数字登录号】9048-46-8 BSA简介 BSA结构 CAS号：9048-46-8 英文名称：Bovine albumin 英文同义词：nhsa;BSA-C;AC-BSA;ALBUMIN, PIG;albumenpowder;SERUM ALBUMIN;ACETYLATED BSA;BSA ACETYLATED;Bovine albumin;BSA, METHYLATED 中文名称：牛血清白蛋白 中文同义词：蛋白粉；牛白蛋白；卵蛋白粉；血清蛋白；血清白蛋白；牛血蛋白质；复合氨基酸；牛血清蛋白；牛血清白蛋白；血清白蛋白（牛） CBNumber: CB5107573 分子式：N/A 英文别名：Bovine serun albumin 化学性质 储存条件: 2-8°C 溶解度: PBS: >40 mg/mL form : lyophilized powder Merck : 13,8542 稳定性：Stable. Incompatible with strong oxidizing agents and strong acids. Refrigerate. EPA化学物质信息：Albumins, blood serum(9048-46-8) 用途 1、用于生化研究、遗传工程和医药研究 2、用作医药保健食品、调味品

牛血清白蛋白的提取与鉴定

牛血清白蛋白的提取与鉴定 一、实验目的 1.掌握牛血清白蛋白的提取与鉴定方法 2.掌握盐析法、透析法及电泳法 二、实验原理 牛血清白蛋白是牛血清中的简单蛋白，是血液的主要成分（38g/100ml），分子量68kD。等电点4.8。应用相同浓度硫酸铵盐析法将血清中白蛋白与其它球蛋白分离，最后用透析法除盐，即可提取白蛋白。再利用电泳过程中带电粒子的移动速度与粒子荷电量、电场强度、粒子重量与半径及介质的黏稠度等有关，对牛血清白蛋白进行分离与鉴定。 三、操作步骤 （一）盐析取离心管一支加入牛血清2mL、加入等量PBS（磷酸盐缓冲生理盐水）稀释血清，摇匀后，逐滴加入pH7.2饱和硫酸铵溶液2mL，边加边摇，充分混匀，然后静止放臵10分钟，再离心（2000r/min）10min，将上清液倾入试管中。 （二）透析（1）取干净的比色板，在各孔内滴加一滴纳氏试剂 （2）透析袋未放入水中时，立即取水中液体检查有无NH4+ (3)取玻璃纸一张，折成袋形，将离心后的上清液倒入袋内，用线扎紧上口（注意要留有空隙），用玻璃棒悬在盛有半杯蒸馏水的100mL烧杯内，使透析袋下半部侵入水中，对蛋白液进行透析，常用玻璃棒搅拌袋外（烧杯中）液体，以缩短透析时间。 (4)每隔2分钟检查一次，更换蒸馏水多次，用纳氏试剂检查袋外液体的NH4+，观察颜色变化并记录，直至袋内盐分透析完毕。 (5)将袋内液体倾入试管，即得牛血清白蛋白溶液。 （三）电泳（1）点样取一张膜条，将薄膜无光泽面向下，放入培养皿中的巴比妥缓冲液中使膜条充分浸透，取出，用干净滤纸吸去多余的缓冲液，以薄膜的无光泽面距一端1.5㎝处作点样线，将牛血清样品与待测的牛血清白蛋白溶液分别用点样器在同一张薄膜的点样线处不同位置点样。标准液点一次，待测液点三次。 （2）电泳将点样后的膜条臵于电泳槽架上，放臵时膜条无光泽面向下，点样端臵于阴极，待平衡5min后，打开电源，调节电泳仪的电压为160伏，通电60min，关闭电源后用镊子将膜条取出。 （3）染色将膜条直接浸于盛有氨基黑10B的染色液中，染2分钟取出，立即浸于漂洗液中，分别在漂洗液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ中各漂洗5min，直至背景漂洗干净为止，用滤纸吸干薄膜。（4）鉴定比较样品与待测液中白蛋白在薄膜上的电泳结果，看位置是否一致。 四、仪器和试剂 仪器：离心管、离心机、试管、玻璃纸、烧杯、比色板、滴管、玻璃棒、电泳仪、醋酸纤维素薄膜、天平 试剂：牛血清待测液、牛血清样品、PBS（磷酸盐缓冲生理盐水，用0.01mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.2）配制的0.9%NaCl溶液）、pH7.2饱和硫酸铵溶液、纳氏试剂、巴比妥缓冲液、氨基黑10B染色液、漂洗液 五、预测结果位置一致，实验成功。若在待测液的电泳结果中出现其他球蛋白的黑带区域，则说明提取不够纯。 六、参考文献[1]陆红玲.生物化学与分子生物学实验教程.西安:第四军医大学出版社,2010