实验七-动物骨髓细胞染色体的制备与观察.

[实验目的]

1. 通过青蛙或小白鼠骨髓细胞染色体的制备，初步掌握低渗法制备动物骨髓细胞染色体的方法。

2. 熟悉染色体的形态、种类及青蛙、小白鼠等动物染色体的数目或类别。

[实验原理]

骨髓细胞是具有旺盛分裂能力的细胞，从这些分裂细胞中，可观察到处于分裂中期的染色体，能对一种动物染色体的形态特征、数目进行准确的观察和分析。由于骨髓直接涂片观察到的分裂相少，效果差，因此要对骨髓细胞进行必要的处理。这个处理方法称为低渗法，其基本要求首先是要获得较多的中期分裂相。秋水仙素对分裂期纺锤丝的形成具有破坏作用，当动物被注射适量的秋水仙素后，处于分裂增殖中的骨髓细胞由于纺锤丝不能形成，中期染色体不能正常趋向两极，到达后期、末期，因而大量的细胞处于观察染色体形态最佳的分裂中期。其次是要能够清楚的观察染色体的形态。为了达到此目的，取出的骨髓细胞要经过低渗（kcl溶液）使细胞膨胀、染色体适当的分散。固定（甲醇、冰醋酸）使染色体保持完好的形态。染色（giemsa液）使染色体易分辨、观察。制备优良的标本可获得满意的观察效果。利用动物骨髓制作染色体观察标本取材容易，不需培养，不需无菌操作，比较简便，是生物学实验教学中常用的方法。一般选用的动物有青蛙、蟾蜍、小白鼠、大白鼠等。

[实验用品]

1. 动物：青蛙或小白鼠、大白鼠、蟾蜍，雌雄均可。

2. 试剂：﹪秋水仙素、l氯化钾 (kcl)、3:1甲醇、冰醋酸固定液、吉姆萨（giemsa）染液、香柏油或液体石蜡、二甲苯。

3. 器材：解剖盘、小镊子、剪刀、注射器（2ml、5ml各一支）、刻度离心管、玻璃吸管、预冷载玻片、染色缸、玻片盒、量筒（10ml、50ml、100ml各一支），恒温水浴箱，盘架天平（配备等大的小烧杯两个）、电吹风、显微镜、吸水纸、擦镜纸、酒精灯、火柴。

[实验内容与方法]

一、试剂配制

1. ﹪秋水仙素溶液：秋水仙素2mg，灭活生理盐水（蛙类﹪、哺乳类﹪的nacl）10ml溶解，避光保存。

2. l kc1溶液：

原液： kcl 双蒸水100ml溶解。

使用液：原液1份，双蒸馏水19份混合，

3. 吉姆萨 (giemsa)染液：

原液：吉姆萨染粉，甘油33ml，甲醇33ml，配制时先将giemsa粉置于研体中，加入少量甘油，研磨至无颗粒，再加入余下的甘油，拌匀后放入56℃温箱中保温2小时，然后取出加入甲醇，充分拌匀，滤纸过滤用棕色瓶密封，避光保存，一般要放置2周后才能使用。

使用液：原液1份，磷酸缓冲液9份稀释。使用液不宜长期保存，一般现配现用。

4. 磷酸缓冲液：该液可先配成甲液和乙液，然后混合使用。

甲液：kh2po4蒸馏水100ml溶解。

乙液：na2hpo4·2h20 （或na2hpo4·12h20 ）加蒸馏水100ml溶解。

使用液：甲液，乙液混合，该使用液也不易久放，一般也是现配现用。

二、染色体制备

各种动物骨髓细胞染色体的制备方法基本都采用低渗法，现以青蛙为例，说明其制备的过程。

1. 取健康小鼠一只，按每10g体重由腹腔注入含量为% 的秋水仙素（此步在实验前12～24小时完成，哺乳动物在实验前2～4小时完成）。

2. 将青蛙处死，迅速取出后腿长骨，包括股骨和胫骨，为了获得较多的骨髓细胞，前肢亦可使用。

3. 用剪刀、镊子剥离肌肉及结缔组织，剪去两头的骨结，迅速用5ml注射器抽取l的kcl 溶液，从一头插入骨髓腔冲洗，冲洗液接入刻度离心管内，反复多次，直至骨髓腔变白。此时不要让组织块掉进离心管，如掉入，一定要用镊子或吸管取出。加低渗液至5ml或8ml刻度，放入37℃恒温水浴箱内低渗处理25分钟。

4. 低渗完毕，取出离心管，向离心管中加入1ml左右3﹕1甲醇、冰醋酸固定液进行预固定。1～2分钟后，每两支离心管成对放在天平上配平，使两支管的重量相等，然后将这两支管对应的放入离心机内的孔中，以1 500r/min 离心5～8分钟。

5. 取出离心管，弃去上清液，再加固定液至6～8ml，用玻璃吸管沿离心管壁吹打，使沉淀的细胞团块在固定液中充分均匀，然后放入37℃水浴箱中固定15～20分钟。

6. 再取出离心管，配平后离心5～8分钟，转速同样为1 500r/min。离心完毕，去掉上清液，再加入1ml左右的固定液，用吸管吹打，制成细胞悬液。

7. 取预冷湿玻片一张，用吸管吸取细胞悬液，从30cm左右的高度滴到载玻片上，再用口吹散滴液，置于酒精灯上微微火烤，最后放玻片架或玻片盒中晾干。

8. 将晾干的玻片放入吉姆萨应用液染色缸中，或将玻片平放于桌上，将染液滴在片上染色。染色10分钟后，用蒸馏水或自来水小心冲去染液，电吹风吹干后镜检。

三、染色体观察

将制好的玻片置于显微镜下，首先观察标本的制备效果，检验操作过程是否正确。一般来说，制得好的标本应是细胞多、颜色为紫红色。此时间期细胞由于低渗和固定处理，细胞膜和质已被去掉，镜下看到的仅为膨胀后呈圆形的细胞核。分裂期细胞染色体集中在一起，其外也无细胞膜包裹，染色体之间无重叠，易分辨，臂的长度适中。但最重要的是分裂相要多。分裂相的多少主要取决于秋水仙素的用量和时间。秋水仙素还影响染色体的形态，如用量过大，常使染色体过于缩短，不利于观察。

青蛙体细胞的染色体数目(2n)为26条，性染色体机制为xx - xy，即雌性为xx，雄性为xy。

染色体的形态随青蛙种类不同略有差异，主要表现为亚中着丝粒染色体的序号和数目不同，如黑斑蛙的亚中着丝粒染色体为3、7、8、11、12等5对染色体，金线蛙为3、7、11、12等4对染色体，虎纹蛙为3、6两对染色体。

小白鼠的染色体数目（2n）为40条，但全部为端着丝粒染色体，大小区别不明显，较难分组编号。

图 6-1 小鼠染色体核型

大白鼠的染色体（2n）为42条，家兔的染色体（2n）是44条。

观察染色体时，不需加盖玻片，镜下先用低倍镜调好焦距，找到无离散，无重叠，形态好，可记数的一个分裂相，然后转高倍镜或油镜观察、记数，观察完毕后也不需擦试玻片，这样的玻片可保存数月。

表6-1 几种动物染色体形态特征

动物名称染色体数染色体类型x染色体形态y染色体形态

青蛙26中央、亚中央着丝粒染色

体

中央着丝粒染色

体，介于6～7号

中央着丝粒染色

体，介于8～9号小白鼠40全部为近端着丝粒染色体大小介于5～6号大小介于19～20

号

大白鼠42中央、亚中央近端着丝粒

染色体近端着丝粒染色

体，介于4～5号

近端着丝粒染色

体，介于18～19号

家兔44中央、亚中央近端着丝粒

染色体亚中央着丝粒染色

体，介于5～6号

近端着丝粒染色

体，介于19～20号

[注意事项]

1. 腹腔注射秋水仙素溶液时，注意不要使针头损伤动物内脏。

2. 制片所用离心管、吸管等勿必洗涤干净，否则细胞会滞留于管壁收集不到细胞导致实验失败。

3. 离心时，离心管一定要先平衡，然后在离心机中对应放置。

4. 使用药品时要注意药名标签，注意使用正确浓度。

5. 观察计数染色体数目时，观察的分裂相一般要在10个以上，这样计数才比较准确。

[实验报告与思考题]

绘图

绘制一个你所观察到的动物骨髓细胞染色体分裂相。

思考题

1. 简述青蛙骨髓细胞染色体的制备过程。

2. 制片过程中为什么要进行低渗处理低渗的时间长短对染色体制片效果有何影响

3. 在取骨髓前为什么要给动物注射秋水仙素？

(完整word版)2015 动物细胞培养技术实验报告

一、实验目的 1、学习并掌握动物细胞培养的无菌操作技术。 2、学习并掌握细胞传代培养的方法。 3、学习并掌握用倒置荧光显微镜观察细胞细胞形态。二、实验原理细胞培养（cell culture）：细胞在体外条件下生长，细胞不再形成组织。动物细胞培养（animal cell culture）就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞（使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶）然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。由于细胞具有生长和自我复制的能力，为细胞体外培养和研究提供可能。动物细胞培养可分为原代培养和传代培养。原代培养（primary culture）即直接从动物机体分离、获得组织细胞，在无菌条件下，用胰蛋白酶消化或机械分散等方法，将动物组织分散成单个细胞开始首次培养长出单层细胞的方法。传代培养（subculture）当细胞生长增值达到一定密度，用胰蛋白酶将细胞消化分散成单细胞，将细胞转移到新的培养皿中扩大培养的方法。高等生物是由多细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一群细胞在体内的功能活动是十分困难的，但如果把或细胞拿到体外培养、增殖并进行观察和研究，则方便简单的多。被培养的动物细胞是非常好的实验对象和实验研究材料，对体外培养的活细胞进行研究可以帮助人类探索防治各种疾病途径和机制，也可以人为地诱导和改变细胞的遗传性状和特性，因此，动物细胞体外培养技术是研究细胞分子机制非常重要的实验手段，被广泛应用于医学、生物技术、基因工程等研究领域。三、细胞培养相关设施及材料 1、细胞培养室无菌操作区：只限于细胞培养及其它无菌操作，与外界隔离。孵育区：培养箱设定的条件为37℃，5%CO2。制备区：培养液及有关培养用液体的制备，液体制备后应该在净化工作台进行过滤除菌。储藏区：包括冰箱、干燥箱、液氮罐等。清洗区和消毒灭菌区：清洗区为相对污染区，消毒灭菌区与清洗区分开。 2、细胞培养常用基本设施：荧光显微镜、超净工作台、孵箱、电热鼓风干燥箱、冰箱、液氮罐、消毒器、恒温水浴槽、滤器等。细胞培养常用器皿：培养瓶、培养板、培养皿，玻璃瓶、吸管，离心管、冻存管，注射器，烧杯、量筒等。 3、细胞培养用品的清洗、消毒新玻璃器皿要用5%稀盐酸浸泡，以中和其表面碱性物质：刷洗：硫酸清洁液浸泡：浓硫酸+重铬酸钾+蒸馏水；冲洗：流水冲洗15-20次，蒸馏水冲洗3次，三蒸水漂洗1-3次。所有需灭菌的器械、物品灭菌前均需包装，防止灭菌后污染。使用时放入超净工

初中七年级上册生物观察动物细胞教案

第三节观察动物细胞知识目标：1、进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞。 2、说明人体口腔上皮细胞的基本结构。 3、区别动植物细胞主要不同点。能力目标：提高制作以及观察临时装片的制作。过程与方法：通过学生观察自己的口腔上皮临时装片，教师做指导并提示试验中需要注意的地方，采用谈话法结合试验和挂图，概括动物细胞的基本结构，经过比较，区别动植物细胞，本节内容设置“模拟制作”，将微观结构形象化、立体化，提高了学生的学习兴趣。情感态度与价值观： 1、认同细胞是生物体结构功能的基本单位。重点：1、阐明人体口腔上皮细胞的基本结构。 2、比较动植物细胞的异同点。难点：1、制作临时装片过程中的刮取。 2、制作口腔上皮细胞临时装片。 3、区别动植物细胞的主要不同点教学准备教师准备：观察口腔上皮细胞，明确实验各细节，准备实验用品。学生准备： 1、绘图铅笔、橡皮、实验报告纸。 2、各种果脯，小塑料食品袋、线。教学过程：一、创设情境，导入新课。

二、观察口腔上皮细胞

三、动物细胞结构

四、巩固提高五、板书设计第三节、动物细胞一、植物细胞结构 1、细胞壁 2、细胞膜 3、细胞质（内含液泡、叶绿体） 4、细胞核一、动物细胞结构 1、细胞膜 2、细胞质（无液泡、无叶绿体） 3、细胞核

六、达标练习设计 1、人体或动物体的各种细胞虽然形态不同，基本结构是一样的，都有、和。 2、连线 A 、动物细胞 B 、植物细胞 3、回忆所做“观察植物细胞”和“观察人的口腔上皮细胞”的实验。（1）、试验中用洋葱鳞叶表皮细胞和口腔上皮细胞制作的玻片标本叫。（2）、在制作洋葱鳞片表皮细胞核口腔上皮细胞的实验中，开始在载玻片上分别用滴管滴一滴和。（3）、洋葱鳞片表皮细胞和口腔上皮细胞相比，共同的结构是、和。（4）回忆《制作动物细胞模型》的过程，你认为细胞是平面的还是立体的？（5）、两个实验染色所用的染料都是。七、个性练习设计观察口腔上皮细胞时，小刚发现清晰的细胞上有一小片污物，影响细胞观察。亲爱的同学，在不调换目镜的情况下，你能帮助小刚判断污物在何处吗？请你写出判断的操作方法。教学反思：通过本节教学，锻炼了学生的动手实验能力和观察、归纳能力，学生基本掌握了制作人的口腔上皮细胞临时装片的技能，并通过利用显微镜的观察来归纳出植物细胞与动物细胞的结构异同。在实验操作中，仍存在差错，如盖玻片出现气泡，染色不均匀和绘图不规范等。细胞膜细胞壁细胞质液泡叶绿体细胞核

动物细胞培养教案教学设计

动物细胞培养教案教学设计说课稿说教学目标根据学生的认知特点及教材要求特制定以下目标： 1、知识方面 ⑴动物细胞培养（知道） ⑵动物细胞融合（知道） ⑶单克隆抗体的制备及应用（知道） 2、态度观念方面 ⑴初步培养学生勇于探索，不断创新的精神和合作精神。 ⑵通过向学生介绍几大动物细胞工程的发展动态及一些新的研究成果，使学生明确人们对生命奥秘的揭示愈加广泛和深入，知识不断更新并向前发展。认识到学无止境，形成终生学习的意识。 3、能力方面 ⑴在学习动物细胞培养过程中，学生通过阅读、自学、质疑、讨论、训练、总结等环节，逐步提高获取知识的能力、逻辑思维能力、分析问题和解决问题的能力。 ⑵由植物细胞杂交技术导出动物细胞融合过程，培养学生的知识迁移能力、思维能力。说教学内容单克隆抗体既是本节重点也是难点

分析：动物细胞工程常用的技术手段有动物细胞培养、动物细胞融合、单克隆抗体、胚胎移植、核移植等。其中前三大技术为本节教材的主体内容，而胚胎移植、核移植技术以小字科普读物的形式出现，意在使学生在有所侧重的前提下对动物细胞工程发展概况有一个较全面的了解。在教材重点介绍的三大动物细胞工程技术中，动物细胞培养是其他技术（如单克隆抗体、胚胎移植、核移植等）的基础，其价值更多的是通过其他技术成果来体现的。而动物细胞融合技术目前较为成熟的最重要的用途便是制备单克隆抗体。由此可见，单抗技术应属较高层次的动物细胞工程技术。对他的学习有助于学生较深刻的领悟动物细胞工程的真谛，并从两位诺贝尔奖获得者对单抗独具匠心的实验设计中，深刻体会科学态度、科学方法，尤其是创造性的思维品质在科学研究、发明创造中决定性作用。基于以上认识，单克隆抗体应列为本节的重点内容。同时单克隆抗体技术本身环节多、技术复杂，加之学生对此缺乏必要的认识，所以也是本课的难点所在。说教学方法鉴于学生的学习特点及本节内容设计以下教学方法：指导学生自学动物细胞工程的原理、过程从中得到一些概括性的认知、启发他们进行对比联系、师生共同探究新科技、新成果。资料提供者：

动物细胞培养基本操作

实验一动物细胞培养细胞培养是用无菌操作的方法将动物体内的组织(或器官)取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养．使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。细胞培养的突出优点，一是便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；二是细胞培养便于人们对细胞内结构(如细胞骨架等)、细胞生长及发育等过程的观察。因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的—种简便易行的实验技术，同时我们也不可忽略的另一个因素，那就是它脱离乐生物机体后的—些变化。细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞与传代细胞有一个基本概念。本实验分两次进行．即清洗与消毒和传代细胞的培养与观察。 Ⅰ清洗与灭菌一、实验目的能独立地进行用于细胞培养的各种器皿的清洗与消毒，掌握干热灭菌法、湿热灭菌法和滤过除菌法的操作，了解化学消毒法的使用方法。二、实验原理清洗与消毒是组织培养实验的第一步，是组织培养中工作量最大，也是最基本的步骤。体外培养细胞所使用的各种玻璃或塑料器皿对清洁和无菌的要求程度很高。细胞养不好与清洗不彻底有很大关系。清洗后的玻璃器皿，不仅要求干净透明，无油迹，而且不能残留任何物质。如有毒的化学物质，哪怕残留0．1个，也可能影响细胞生长。灭菌手段的选择十分重要，对不同的物品需采用不同的灭菌方法。假如选用的方法不对，即使达到了无菌却使被灭菌药品丧失了营养价值、生物学特性或其他使用价值也不行。以下在每种灭菌步骤中都介绍其使用范围。三、实验材料、用品

初中生物观察动物细胞教案

观察动物细胞教案学习目标： 1 知识与技能（ 1 ）进一步熟悉制作临时装片和规范使用显微镜观察细胞，说明人口腔上皮细胞的基本结构，区别动植物细胞结构的主要不同点。（ 2 ）了解制作以及观察临时装片的技能。 2 过程与方法（ 1 ）通过制作人口腔上皮细胞的临时装片并规范使用显微镜观察细胞，了解制片的过程，熟悉动物细胞的基本结构。（ 2 ）通过分析模拟制作，进一步了解动物细胞的基本结构。 3 情感态度价值观目标：通过制作人的口腔上皮细胞临时装片，并用显微镜进行观察，养成实事求是的科学态度教学重难点： 1 教学重点：（ 1

）说明人口腔上皮细胞的基本结构。（ 2 ）提高实验能力和观察能力。 2 教学难点：制作临时装片过程中的刮取，并在显微镜下找到人口腔上皮细胞。课前准备教师准备： 1. 生理盐水、稀碘液、消毒牙签、滴管、纱布、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜、擦镜纸、镊子。提前准备几片做好的装片，摆放一台示范镜。制作做多媒体课件。教学过程（板书：§ 2.1.3 观察动物细胞一、实验） Ⅰ 复习显微镜的使用步骤有哪些啊？（ 1 、取镜安放

2 、对光 3 、观察）那使用完显微镜要记得把显微镜进行复位。 Ⅱ 引入那大家学会使用显微镜之后，想不想看看自己的细胞长什么样子呢？它有什么基本结构呢？由于人的细胞和动物细胞的基本形态和结构是一样的。下面我们通过观察自己的口腔上皮细胞，来认识人和动物细胞的基本结构。 Ⅲ 讲授知识一、实验 - 观察人口腔上皮细胞（一）目的要求制作和观察人口腔上皮细胞的临时装片，认识动物细胞的基本结构（二）材料用具生理盐水（ 0.9%

人教版七年级生物上册《动物细胞》教案设计

动物细胞【教学目标】： ①进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞，说明人口腔上皮细胞的基本结构，区别动植物细胞结构的主要不同点。 ②提高制作以及观察临时装片的技能。 ③设计实验、改革实验，开发自己的创新潜能，以此来体会科学探索的思想和方法是不断发展的；继续形成“胆大心细”的心理素质；在“模拟制作”活动中，提高学习生物学的兴趣。【教学重难点】：重点：说明人口腔上皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的相同点和不同点；提高实验能力和观察能力。难点：制作临时装片过程中的刮取（首次观察自己身体上的细胞，学生感到既新鲜又好奇，取材关系到实验效果）细胞结构的观察（与植物细胞相比不易观察，略有难度）；设计实验（应用以往的学习经验，是较高层次的学习）。【教学方法】：实验法【教学设计】：学习内容学生活动教师活动复习：临时装片的制作方法；植物细胞的温故知新提出问题：承前启后，知识导入。引导学生联系自身，提出问题，创设学习情境。

基本结构。明确学习目标实验题目：观察人的口腔上皮细胞 ①想看看自己身上的细胞吗？ ②人的细胞与植物细胞有什么相同和不同之处？激起疑惑：口腔上皮细胞在哪儿？怎样获得？解决心中的疑惑出示题目，交流：“看到题目，你有何疑问？示范取材部位。材料用具提出疑问：生理盐水有什么作用？评价引导、分析方法步骤一、制作人口腔上皮细胞临时装片 ①设计：根据已有的经验，设计实验方案（注意取村、方法、染色剂的变化）； ②制作：同组同学尽量选择不同的方案制作临时装片，增加对比性。参与引导帮助调查二、用显微镜观察人的口腔上皮细胞观察自己制作的临时装片，然后同学间交换观察。借鉴老师摆放的示范镜。发现由于取材、染色的不同而出现的不同效果。巡视提示参与观察绘制细胞感知动物（人）细胞的形态指导、提示、评价

实验四动物细胞的传代培养

实验四动物细胞的传代培养 1. 实验目的（1）了解动物细胞培养的基本知识。（2）了解体外培养细胞的的基本形态类型；学会通过镜检判定体外细胞生长的状态。（3）掌握动物细胞的传代培养法。 2.实验背景与原理 2.1 动物细胞培养的基本概念（1）组织培养：把来自机体内的细胞、组织或器官放在类似于体内的外环境中，使之成活、生长和繁殖。严格又分为细胞培养、组织培养和器官培养。值得注意的是和植物组织培养不同，目前动物组织培养在一般培养条件下难以维持组织的结构和功能，常最终转变成为细胞培养，所以动物细胞与组织培养并无严格区别。（2）原代培养：直接从供体取来的细胞，组织或器官进行的初次培养。通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。（3）传代培养：原代培养物长成单层细胞，达到一定密度时，营养消耗殆尽，需要补充营养，分开扩大培养，使之继续增殖。注意的是传代的这个“代”与细胞分裂的一个世代不同，一代细胞约分裂3~5次，不要混淆。（4）细胞系：原代培养后的细胞经传代即可成为细胞系。若其形态均一，生长增殖稳定，生物性状明确，即可称之为已鉴定的细胞（Certified Cells）。不同种类的细胞成系的难易程度也不同，一般胚胎、更新组织的细胞如造血、上皮等以及

癌细胞较容易成系，而神经等细胞则较难成系。按照其生存期可分为有限细胞系（生存期有限的正常二倍体细胞）和无限细胞系（生存期无限的癌细胞、转化细胞等，大多异倍体） 2.2 动物细胞培养的基本条件体外培养细胞的条件总原则就是要尽可能模拟细胞在体内生长的环境，因此必要的营养、适宜的胞外环境以及严格的无菌条件是主要的三个方面。（1）营养：早期培养主要采用天然的生物性液体，但其成分不确定，难以控制营养成分。现广泛使用的是化学成分明确的各种商品化的合成培养基，其主要成分包括各种氨基酸、维生素、无机盐、葡萄糖等必要的营养物质。培养基中还含有酚红指示剂，使培养基的颜色可显示细胞生长状态。随着细胞数目的增长，酸性代谢物增多，培养基变黄。污染的培养物也会使培养基迅速变黄。培养基在使用前还要加血清，它的主要作用有三点：一是提供生长因子、激素、酶等营养；二是中和有毒物质，对细胞起着保护作用，尤其可中和培养中使用的胰蛋白酶的毒性。第三是提供黏附和伸展因子，是贴壁细胞附壁生长所必不可少的。所以，血清的品质对细胞的生长有很大影响，通常换用新的批次的血清要预先进行血清的筛选实验。一般进口的胎牛血清更有利于细胞的生长，但价格较昂贵，可根据培养细胞的要求选用。另外，有些细胞培养中还需要添加谷氨酰胺（Gln）。（2）胞外环境条件：主要是温度、气体和pH条件。这些胞外环境条件应该符合细胞在体内的生长环境。哺乳动物适宜的培养温度是37℃，鸟类是39℃，爬行类是22~25℃等；大多动物细胞适宜的pH条件都是7.2~7.4，以不超过pH6.8~7.6为宜。在动物细胞培养过程中随着代谢产物的积累，酸性产物增多，

人教版生物选修3：2.2 动物细胞工程教案2

动物细胞工程【教学目标】 1．知识方面（1）动物细胞培养。（2）动物细胞融合。（3）单克隆抗体的制备及应用。 2．态度观念方面（1）初步培养学生勇于探索，不断创新的精神和合作精神。（2）通过向学生介绍几大动物细胞工程技术的发展动态及一些新的研究成果，使学生明确人们对生命奥秘的揭示愈加广泛和深入，知识不断更新并向前发展。认识到学无止境，形成终生学习的意识。 3．能力方面（1）在学习动物细胞培养过程中，学生通过阅读、自学、质疑、讨论、训练、总结等环节，逐步提高独立获取知识的能力、逻辑思维能力、分析问题和解决问题的能力。（2）由植物体细胞杂交技术导出动物细胞融合过程，培养学生的知识迁移能力、思维能力。（3）让学生尝试设计革克隆抗体的制备过程，指导学生掌握获取知识和探索生物科学的基本方法，使学生了解生物科学认识模式以发展学生的创造性能力。【教学重难点】单克隆抗体既是本小节的重点，也是难点内容。【教学过程】一、单倍体抗体的制备：环节一：多数学生会提出如下思路：把产生相应抗体的B淋巴细胞提取出来，用我们所学的动物细胞培养技术经原代培养和传代培养（把单个B淋巴细胞克隆），将该细胞培养成细胞系，能无限传代，大量繁殖，便能从这些细胞中提取单抗了。教师质疑：该方案可行性如何？（引导学生确认为什么单纯地进行B细胞培养行不通。）一些学生提出异议：一个B淋巴细胞不可能渡过原代培养和传代培养过程中的两次危机而达到细胞系水平。因为每经历一次危机，都有大部分细胞被淘汰，只有少部分生存下来，而单

个B淋巴细胞在这个过程中的命运便可想而知了。抓住学生这一认识过程中的矛盾冲突，引领学生进人下一挑战性环节。需解决的难题何在？（B细胞在体外不可能无限增殖）如何使它无限增殖，方法有哪些？（B细胞与瘤细胞融合）环节二：学生思考： (l）单克隆抗体是用哪两种细胞来融合？为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？（2）骨髓瘤细胞是癌细胞吗？（3）整个制备过程为何要经过两次筛选？（4）杂交瘤细胞在小鼠腹腔内培养与在体外培养有何区别？（5）杂交瘤细胞在小鼠腹腔增殖，可否造成小鼠死亡吗？（6）鼠单抗能用于人体疾病的治疗吗？（板画诱导学生探究两次筛选的对象）环节三：假如现在要制备抗SARS病毒的抗体，用我身上的B细胞来融合行吗？为什么？（必须用对应的抗原刺激才会产生特异性的B细胞）二、单倍体抗体的应用制备到的抗体除了可以用于在临床治疗以外，还可以用来干什么？三、细胞核移植阅读→归纳【板书设计】 1．单倍体抗体的制备：获得杂交瘤细胞动物细胞培养提取 2．单倍体抗体的应用：可用于疾病治疗、预防、单抗诊断疾病（“生物导弹”）等。

动物细胞培养技术实验

实验十五动物细胞培养技术及其应用一．实验目的通过本实验使学生掌握细胞培养、细胞检测和细胞表达等成套技术的原理和方法。二. 实验内容 1.培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏等基本技术； 2.细胞生长曲线测定、细胞活性检测等常用技术； 3.细胞污染检测方法与技术； 4.病毒在细胞中的感染与增殖、重组病毒异源蛋白的细胞表达等实用技术。三．实验用品 1. 材料：Sf 细胞、Hi5 细胞等 2. 器材：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、培养基抽滤装置、电泳仪、离心机、pH 计、液氮罐（含液氮）、水浴锅、温度计、培养瓶、血清瓶、5 ml和10 ml 移液管、不锈钢移液管筒、大小不锈钢饭盒、酒精灯、吸耳球、血球计数板、96孔板、 24孔板、无菌冻存管、离心管、记号笔、一次性过滤器、微量加样器、精密pH 试纸、酒精棉球等 3. 试剂与药品：Grace培养基、胎牛血清、甘油、DMSO、双抗（青霉素、链霉素）100 u/ml、 Hank’s液、胰蛋白酶、台盼蓝、液氮、分析纯无水酒精、95%医用酒精、Tris 碱、硼酸、EDTA、琼脂糖粉（电泳用）、dNTPs、Taq酶、支原体检测试剂盒、 DNA提取试剂盒DNeasy Blood & Tissue kit （Qiagen）等。四．实验方法与步骤（一）培养基配制、细胞培养、细胞冻存与复苏 1. 缓冲液及培养基配制 Hank’s液：KH2PO4 0.06g，NaCl 8.0g，NaHCO3 0.35g，KCl 0.4g，葡萄糖1.0g，Na2HPO4·H2O 0.06g，加H2O至 1000ml，高压灭菌。4℃下保存。胰蛋白酶液：称取0.25克胰酶蛋白酶（活力为1：250），加入100ml无Ca2+、Mg2+的Hank’s 液溶解，滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。 4%台盼蓝染液：称取台盼蓝4克，加双蒸水至100 ml。 MTT溶液：MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液或无酚红的Hank’s液中。4℃下保存。Grace培养基：取一份GIBCO公司的Grace培养基粉剂，按说明用量加入1000ml三蒸水100单位／毫升青、链霉素，充分混匀使溶解，调节pH值至6.8左右。 0.22 μm 滤膜抽滤除菌，4℃下保存。此为基础培养基。使用前加入10%胎牛血清。细胞冻存液：基础培养基加入10%DSMO，20%胎牛血清，用前配制。 PBS缓冲液：137 mmol/L NaCl, 2.7 mmol/L KCl, 8.1 mmol/L Na2HPO4, 1.5 mmol/L KH2PO4,

观察动物细胞教案设计

观察动物细胞 ●教学目标知识目标 1．进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞。 2．说明人口腔上皮细胞的基本结构。 3．区别动植物细胞结构的主要不同点。能力目标 1．提高制作以及观察临时装片的技能。 2．通过对动植物细胞间差别的比较提高学生的观察能力。情感目标设计实验、改革实验，开发自己的创新潜能，以此来体会科学探索的思想方法是不断发展的，继续形成“胆大心细”的心理素质；在“模拟制作”活动中，提高学习生物学的兴趣。 ●教学重点 1．说明人口腔上皮细胞的基本结构。 2．比较动植物细胞的相同点和不同点。 3．提高实验能力和观察能力。 ●教学难点 1．制作临时装片过程中的刮取（首次观察自己身体上的细胞，学生感到新鲜又好奇，取材关系到实验效果）。 2．细胞结构的观察（与植物细胞相比不易观察、略有难度）。

3．设计实验（应用以往的学习经验，是较高层次的学习）。 ●教学方法谈话法、实验法。 ●教具准备 1．教师准备：（1）有关制作人的口腔上皮细胞临时装片的多媒体录像。（2）人的口腔上皮细胞结构及洋葱鳞片叶肉表皮细胞挂图各一张。（3）学生分组实验用的生理盐水、稀碘液、消毒牙签、滴管、纱布、镊子、吸水纸、载玻片、盖玻片、显微镜、清水和熬好的清洁的琼脂。 2．学生准备：（1）3H铅笔、橡皮、实验报告纸及一些其他动物材料。（2）各种果脯、小塑料食品袋、线等。 ●课时安排 1课时 ●教学过程［导入新课］教师活动：引入导言用谈话式教学方法引入本节内容。具体活动如下：上节课我们通过制作临时装片，观察并认识了植物细胞的基本结构。那么动物和人体细胞的结构是什么样子的呢它和植物细胞结构一样吗这节课我们就来解决这些问题。［讲授新课］

原代细胞培养和传代培养的方法及其注意事项

初代培养原理将动物机体的各种组织从机体中取出，经各种酶（常用胰蛋白酶）、螯合剂（常用EDTA）或机械方法处理，分散成单细胞，置合适的培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖，这一过程称原代培养。仪器、材料及试剂仪器：培养箱（调整至37℃），培养瓶、青霉素瓶、小玻璃漏斗、平皿、吸管、移液管、纱布、手术器械、血球计数板、离心机、水浴箱（37℃）材料：动物组织块试剂：1640培养基（含20%小牛血清），0.25%胰酶，Hank′s液，碘酒初代消化培养法 1. 准备：取各种已消毒的培养用品置于净化台面，紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。 2. 布局：点燃酒精灯，安装吸管帽。 3. 处理组织：把组织块置于烧杯中，用Hanks液漂洗2~3次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中30~60分钟。 4. 剪切：用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。 5. 消化：或用恒温水浴，或置于37℃温箱消化均可，消化中每隔20分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。 6. 分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000转/分）离心消化液5分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。 7. 计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH要求在7.2~7.4范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3调整。 8. 培养：置于36.5℃温箱培养，如用CO2温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵塞，纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。初代组织块培养法 1. 剪切：把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中，用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污，吸静Hanks液，用眼科剪反复剪切1mm3块为止。 2. 摆布：用弯头吸管吸取若干小块，置于培养瓶中，用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部，小块相互距离以0.5cm为宜，每一25ml培养瓶底可摆布20~30块。 3. 轻轻翻转培养瓶，另瓶底向上，注意翻瓶时勿另组织小块流动，塞好瓶塞，置36.5℃温箱培养2小时左右（勿超过4小时），使小块微干涸。 4. 培养：从微箱中取出培养瓶，开塞，46度斜持培养瓶，箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许，然后缓缓再把培养瓶翻转过来，让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。

最新-七年级生物教案：观察动物细胞

最新-七年级生物教案：观察动物细胞七年级生物教案：观察动物细胞作为一名人民教师，时常需要用到教案，编写教案有利于我们弄通教材内容，进而选择科学、恰当的教学方法。优秀的教案都具备一些什么特点呢？以下是本人精心整理的七年级生物教案：观察动物细胞，欢迎大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。七年级生物教案：观察动物细胞1 一、教材分析 1、教材的地位和作用本节课是生物学人教版七年级上册第二单元第一章第三节的内容，本单元主要是引导学生在细胞水平上认识生物体，教学上会有一定困难。这是因为细胞结构微小，距离学生的生活经验较远。因此，应当多给学生提供用显微镜观察细胞的机会，增加学生对细胞的感性认识。本节课尽管内容比较抽象，但是学生有了前面的植物细胞的观察作为基础，学起来还是比较容易的。 2、三维目标知识目标 ① 进一步熟练制作临时装片和使用显微镜观察细胞，说明人口腔上皮细胞的基本结构。 ② 区别动植物细胞结构的主要不同点。能力目标提高制作以及观察临时装片的技能。情感态度价值观设计实验、改革实验，开发自己的创新潜能，以此来体会科学探索的思想和方法是不断发展的;继续形成“胆大心细”的心理素质;在“模拟制作”活动中，提高学习生物学的兴趣。 3、重点和难点

重点：说明人口腔上皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的相同点和不同点;提高实验能力和观察能力。难点：制作临时装片过程中的刮取(首次观察自己身体上的细胞，学生感到既新鲜又好奇，取材关系到实验效果) 细胞结构的观察(与植物细胞相比不易观察，略有难度); 设计实验(应用以往的学习经验，是较高层次的学习)。二、学情分析七年级的学生还是处于一个好动的年龄，在学生已经观察了植物细胞的结构并有一定的了解下，这节课采用灵活的教学方式，让学生在动手中进一步了解动物细胞的结构。而且在学生实验能力没有得到充分的锻炼下，还不是很强，所以只有充分的感性认识才能吸引学生兴趣，把握课堂的重点。三、设计理念新课程标准提出“提高学生科学素养”，就是要把我们在教学中只注重对学生科学知识的传授转向全面提高学生科学素养的教育，强调学生在生物学知识、科学探究技能、情感态度与价值观等领域的’全面发展。因此，我在教学中遵循“从做中学，学中做”的原则，运用实验法、比较法、多媒体演示法等方法进行教学，学生在教师的指导下可以运用小组合作法、比较法、观察法等方法学习。四、教学环节 (一)创设情境，引入新课复习：临时装片的制作方法;植物细胞的基本结构。温故而知新，提出问题： ①想看看自己身上的细胞吗? ②人的细胞与植物细胞有什么相同和不同之处? 引导学生联系自身，提出问题，创设学习情境，引入新课。 (二)组织实验，合作交流出示题目，交流：“看到题目，你有何疑问? 疑问:人的口腔上皮细胞在哪?怎样取材?引导、分析。 ①设计：根据已有的经验，设计实验方案(注意取材、方法、染色剂的变化); ②制作：同组同学尽量选择不同的方案制作临时装片，增加对比性。

实验五动物细胞的原代培养

实验五动物细胞的原代培养一、实验目的 1．了解原代细胞培养的基本方法及操作过程。 2．学习细胞消化、营养液的配制及酸碱度的调节。 3．初步掌握无菌操作方法。二、实验原理细胞培养（cell culture）是用无菌操作的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动物体内的生理条件，在体外进行培养，使其不断地生长、繁殖，人们借以观察细胞的生长、繁殖、分化以及衰老等过程。细胞培养的突出优点是：便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响；便于人们对细胞内结构（如细胞骨架等）、细胞生长及发育等过程的观察。因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的一种简便易行的实验技术，同时也不可忽略另一个困素，那就是它脱离了生物机体后的一些变化。细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等。为此有必要使学生在细胞培养方面得到一些初步的感性知识，了解动物细胞培养的内基本操作过程，观察体外培养细胞的生长特征，对原代细胞（primary culture cell）与传代细胞（subculture cell）有一个基本的了解。原代细胞培养又称原代培养（primary culture），是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，在体外培养，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分散成为单个游离的细胞，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必需的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节；二是严格控制无菌条件。三、实验仪器、材料和试剂 1．器材：解剖剪、解剖镊、眼科剪（尖头、弯头）、眼科镊（尖头、弯头）、

观察动物细胞和植物细胞教学设计

台州学院生命科学学院 09科学教育2班实验教案实验名称：观察动物细胞和植物细胞姓名：____________ 参与人员：景双双钱志扬柳长隆郑如观察动物细胞和植物细胞教学设计

姓名：景双双钱志扬柳长隆郑如学号：35 36 37 38 课题七年级上第二章第4节细胞（第三课时）观察动物细胞和植物细胞 2011版课程标准对本节内容的要求与活动建议1、学会制作简单的临时装片。 2、熟练掌握显微镜的使用，观察装片，学会绘制简单的生物图。 3、知道细胞的基本结构。学习者的认知起点学习者是七年级的学生，学生在之前的课中认识了生物，认识了生物的分类，也认识了微观的细胞和其结构。细胞作为生物体结构和功能的基本单位是生物学的基础知识，其重要性是显而易见的。上一节课也已经学习使用了显微镜，所以在本节课中要学会如何制作临时装片来进一步巩固显微镜的使用并且进一步对细胞进行观察以及学习生物实验绘图的方法。基于学习者实际所设计的具体教学目标知识与技能目标 1、熟练掌握显微镜的使用和观察方法。 2、学习如何绘制生物绘图，并能够掌握画图技巧。 3、进一步明确动植物细胞的区别。 4、会根据植物细胞装片的制作自己推出动物临时装片制作的过程，并自己动手操作。学习者达到教学目标的证据和表现 1、自己能够使用显微镜观察装片，并且说出一些主要步骤及注意事项。 2、能够观察装片并且具有绘制生物图的能力。 3、能够在观察的基础上说出动植物细胞的不同点和相同点。 4、可以较好的完成动物临时装片的制作。过程与方法目标观察和分析实验及相关的实验注意点的探究学习方式。学生具有敏锐的观察和良好的归纳能力，学会自己制作动物细胞的临时装片。情感态度与价值观目标 1、体会对事物的观察要透过现象看本质； 2、感受科学的发展往往需要付出几代人的共同努力，是一个长期的过程，从而培养协作的精神； 3、初步感受物质世界的统一性和多样性。 4、体会归纳思想的重要性，学会自己去发现和解决问题。 1、能够理论联系实际，将之前所学的动植物细胞的结构与自己制作的临时装片进行对比。 2、学会归纳思想，并且应用到生活实际。科学、技术、社会与环境（STSE）目标知道细胞是生命活动的基本单位，我们只有通过这样对微观世界的学习才能更好的了解生命的本质，为例如农业、生物等提供一些本质性的帮助，为社会服务。体会到细胞对于生命的意义，学会透过现象看本质的方法，科学地看待事物，更好的为以后的学习和工作服务。

实验五细胞的传代培养

实验5 细胞的传代培养一、实验目的熟练掌握动物细胞的传代培养法。二、实验原理哺乳动物细胞的传代培养是几乎所有细胞生物学实验的基础。当细胞在培养瓶中长满后就需要将其稀释分种成多瓶，细胞才能继续生长,这一过程就叫传代。传代培养可获得大量细胞供实验所需。三、仪器、材料与试剂 1仪器 CO2培养箱，倒置显微镜，超净台 2材料培养瓶，试管，移液管，巴斯德吸管，废液缸，75%酒精棉球，酒精灯，细胞。 3试剂完全培养基（RPMLl640或DMEM），0.25%胰蛋白酶，D-Hanks液。四、实验步骤 1.入无菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒双手。 2.倒置显微镜下观察细胞形态，确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热。 3.超净台台面应整洁，用75%酒精溶液擦净。 4.打开超净台的紫外灯照射台面20min左右，关闭超净台的紫外灯，打开抽风机清洁空气。 5.点燃酒精灯,取出无菌试管，刻度吸管；安上橡皮头；插在无菌试管内。 6.打开细胞培养瓶，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。 7.倒掉培养细胞的旧培养基。酌情可用2-3mL Hanks液洗去残留的旧培养基，或用少量胰酶涮洗一下。 8.加入胰酶消化液，盖好瓶盖后在倒置显微镜下观察，当细胞收回突起变圆时立即翻转培养瓶，使细胞脱离胰酶，然后将胰酶倒掉。注意勿使细胞提早脱落入消化液。

9.加入少量的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，再根据分传瓶数补加一定量的含血清的新鲜培养基（7-10mL/大瓶，3-5mL/小瓶）制成细胞悬液，分装到新培养瓶中。盖上瓶盖，适度拧紧后再稍回转，以利于CO2气体的进入，将培养瓶放回CO2培养箱。 10.对悬浮培养细胞，步骤7-9不做。可将细胞悬液进行离心去除旧培养基上清，加入新鲜培养基，然后分装到各瓶中。五、注意事项 1.传代培养时要注意无菌操作并防止细胞之间的交叉污染。所有操作要尽量靠近酒精灯火焰。每次最好只进行一种细胞的操作。培养用液应严格分开。 2.每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。 3.如发现细胞有污染迹象，应立即采取措施，一般应弃置污染的细胞，如果必须挽救，可加含有抗生素的BSS或培养基反复清洗，随后培养基中加入较大量的抗菌素，并经常更换培养基等。六、实验报告 1.试述传代培养的步骤和注意事项，并指出哪些是关键步骤？ 2.细胞传代培养的目的是什么？

常用的五种动物细胞培养方式

?一、半连续式培养 1.半连续式培养又称为重复分批式培养或换液培养。采用机械搅拌式生物反应器系统，悬浮培养形式。在细胞增长和产物形成过程中，每间隔一段时间，从中取出部分培养物，再用新的培养液补足到原有体积，使反应器内的总体积不变。这种类型的操作是将细胞接种一定体积的培养基，让其生长至一定的密度，在细胞生长至最大密度之前，用新鲜的培养基稀释培养物，每次稀释反应器培养体积的1/2~3/4，以维持细胞的指数生长状态，随着稀释率的增加培养体积逐步增加。或者在细胞增长和产物形成过程中，每隔一定时间，定期取出部分培养物，或是条件培养基，或是连同细胞、载体一起取出，然后补加细胞或载体，或是新鲜的培养基继续进行培养的一种操作模式。剩余的培养物可作为种子，继续培养，从而可维持反复培养，而无需反应器的清洗、消毒等一系列复杂的操作。在半连续式操作中由于细胞适应了生物反应器的培养环境和相当高的接种量，经过几次的稀释、换液培养过程，细胞密度常常会提高。 2.半连续式特点： ·培养物的体积逐步增加； ·可进行多次收获； ·细胞可持续指数生长，并可保持产物和细胞在一较高的浓度水平，培养过程可延续到很长时间。该操作方式的优点是操作简便，生产效率高，可长时期进行生产，反复收获产品，可使细胞密度和产品产量一直保持在较高的水平。在动物细胞培养和药品生产中被广泛应用。二、连续式培养 1.连续式培养是一种常见的悬浮培养模式，采用机械搅拌式生物反应器系统。该模式是将细胞接种与一定体积的培养基后，为了防止衰退期的出现，在细胞达最大密度之前，以一定速度向生物反应器连续添加新鲜培养基；同时，含有细胞的培养物以相同的速度连续从反应器流出，以保持培养体积的恒定。理论上讲，该过程可无限延续下去。

人和动物细胞的结构和功能教案7777777777777777

第二节人和动物细胞的结构和功能教学目标：知识：1、阐明人体口腔上皮细胞基本结构； 2、区别动、植物细胞主要不同点。能力：进一步熟练掌握制作临时装片的技能。情感态度与价值观：通过对人的口腔上皮细胞的观察，从而认同细胞是生物结构、功能的基本单位。教学重点分析：说明人口腔上皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的相同点和不同点在观察及了解了植物细胞的结构特点之后，学生自然而然会联想到动物细胞，两种细胞是否相同，有什么不同之处，等等。所以本节课最终落实到说明人口腔上皮细胞的基本结构，比较动植物细胞的相同点和不同点上。教学难点分析：制作临时装片并观察口腔上皮细胞的过程尽管通过洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片的制作，学生已经初步掌握了临时装片制作的方法步骤，但是由于初一的学生刚刚接触显微镜，对于他们来说，本节课的实验仍然是个难点。尤其是观察到人口腔上皮细胞，因为它很小。教学策略：本节教学要使学生在观察过洋葱鳞片叶表皮细胞的基础

上，通过观察自己的口腔上皮细胞，进一步掌握制作和观察临时装片的技能，概括出动物细胞的基本结构，再通过比较，区别动、植物细胞的不同点。临时装片的制作及应用显微镜对临时装片进行观察仍然是本节课的重点和难点，应该在整个教学过程中反复落实临时装片制作的方法步骤。可以在课前先带领学生复习巩固显微镜的使用及临时装片制作过程的方法及注意事项，然后再进入新课。课前准备：实验室准备，包括显微镜、载玻片、盖玻片、消毒牙签、稀碘液等等。教学设计：时间教学环节教师活动学生活动媒体说明 2分钟导入上节课我们观察了植物细胞的结构，让我们一起来复习一下。植物细胞由哪些部分组成？你认为动物细胞和植物细胞是不是一样呢？你想看看自己身上的细胞吗？以人的口腔上皮细胞为例，学生思考，发言回顾旧知识，进入新的知识情境。

动物细胞培养及外源基因的导入

“细胞生物学大实验”实验指导动物细胞培养及外源基因的导入细胞培养是现代生物学研究中应用最为广泛的技术之一。它的突出优点，一是研究对象是活的细胞，可长时期地监控、检测甚至定量评估其形态、结构和生命活动等；二是可以人为地严格控制研究条件，便于研究各种物理、化学、生物等外界因素对细胞生长、发育和分化等的影响，有利于单因子分析；三是研究的样本可以达到比较均一性。常用的细胞系均是性质均一的细胞，需要时还可采用克隆化等方法使细胞进一步纯化；四是研究的内容便于观察、检测和记录。体外培养的细胞可采用显微镜，电镜等直接观察记录，充分满足实验的要求。另外还具有研究范围比较广泛，研究费用相对经济等优点。然而，细胞培养也有其局限性。由于培养的细胞脱离了机体复杂的环境条件，其细胞形态和功能都会发生一定程度的改变。尤其是体外反复传代、长期培养的细胞，有可能发生染色体非二倍体改变等情况。因此，应将体外培养的细胞视为一种既保持动物体内原细胞一定的性状又具有某些改变的特定的细胞群体。由于细胞培养技术的优点是其他实验方法和技术所不能比拟的，所以近年来细胞培养技术在分子生物学、细胞生物学、遗传学、老年学、免疫学、肿瘤学和病毒学等很多领域都得到了广泛的应用，其中对于分子生物学家及细胞生物学家而言，应用细胞培养对感兴趣的基因产物进行定位、运动及功能研究变得越来越重要。在克隆一个基因后的下一步，往往是将其导入不同类型细胞，以分析其表达，测定表达对细胞生长的影响，或将高表达的基因产物纯化。将外源DNA 导入哺乳动物细胞有两种途径：稳定（永久）或暂时性转染。稳定转染的目的是将转移基因整合到细胞染色体DNA上，形成稳定表达转移基因的细胞系。一般需要共转染一个选择标记，用于追踪转染成功的细胞或转染效率。暂时性转染的目的是为了分析转移基因的暂时转录或表达，一般在转染后1-4天内进行。针对培养细胞的外源DNA导入已发展出多种技术，其中常用的有磷酸钙介导的转染，DEAE-葡聚糖介导的转染，脂质体介导的转染，电穿孔法等。这4种方法除DEAE-葡聚糖法外，均可用于暂时性转染和永久性转染。但它们有各自适用的细胞系。培养的细胞不同，其在摄取和表达外源DNA的能力上可能存在几个数量级的差异。因此针对细胞系优化并比较几种不同方法的效率很重要。 Graham和Vander EB（1973）首次报告了用Ca3(PO4)2-DNA沉淀将腺病毒SV40导入哺乳动物细胞的方法，Wigler等（1978）证明这种方法也能用于导入并在哺乳动物染色体上稳定整合外源DNA。至今对于磷酸钙介导的DNA转染的确切机理仍不清楚。一般认为转移DNA通过内吞作用进入细胞质，然后进入细胞核，而CaPO4处理被认为是产生了一种能促使DNA附着在细胞表面的环境。

细胞实验室

一．建设方案之动物细胞培养实验室（设备片）在生命科学科领域中细胞学有着至关重要的地位，近年来细胞学发展迅速，并取得了相当大的进展，细胞学相关实验室的建设也是各个研究院及院校生物学科必备的实验室。细胞相关实验所需仪器及耗材种类繁多，接下来就细胞培养实验室常用仪器作下简单介绍：一、纯水系统细胞培养用水一般要求双蒸水（0.8MΩ以上），实际上普通蒸馏水经玻璃器皿中按标准方法蒸馏二次得到的双蒸水是不能满足要求的，而且水中的内毒素直接参与细胞凋亡，血清中内毒素含量越低，对细胞毒性越小，越利于细胞的生长和传代；内毒素含量过高，会直接导致细胞提前老化。因此建议配置正式的水纯化系统。二、液氮罐为了保存细胞，特别是不易获得的突变型细胞或细胞株，要将细胞冻存。冻存的温度一般为液氮温度-196℃，因此，需要液氮罐。在此环境中，一般细胞可以保存十年具有活性。三、超净工作台/生物安全柜细胞培养对无菌环境要求很高，在细胞操作时，一般需要在100级空气质量条件下进行，因此超净工作台或生物安全柜就必须配备。四、CO2培养箱 CO2培养箱是细胞培养的必备仪器，它为细胞提供了一个体外培养的舒适环境，如适宜的温度、湿度、酸碱度、O2浓度等。细胞在体外培养时很容易受到各种细菌、微生物的感染，因此，CO2培养箱的灭菌和抑菌能力就显得尤为重要。五、恒温水浴从液氮或超低温冰箱中取出细胞冻存管需要立即放于37℃水浴中快速复苏之后才传代培养，因此，恒温水浴也是细胞实验室必备仪器。六、超低温冰箱细胞的冻存过程需要一系列程序降温，一般4℃下存放30 min，转放-20℃ 1 hour，再转入-70至-80℃过夜，之后才可以转移到液氮内(-196℃)，这时就必须配备一台-86℃超低温冰箱。一般超低温冰箱保存细胞可达数月，对于不需要长期冻存的细胞，可暂时放于超低温冰箱保存。七、离心机细胞培养需要离心收集传代细胞，所以需要配置低速的常温离心机，对于后期细胞内容物的