细胞生物学实验教案大全
细胞生物学实验教案
【经典学习资料，收藏必备】
实验一、细胞形态结构与几种细胞器的观察
【实验目的】
在普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构，掌握生物绘图的方法。
【实验原理】
细胞在形态上是多种多样的，有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都由细胞膜（动物）、细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。细胞中的各种细胞器，如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等，一般经过一定固定染色处理后，大多数在光学显微镜下是可以看见的（图）。细胞器的形态结构在普通光学显微镜下与电子显微镜下所看到的结构有很大的差别。
（自拍图）
（a）（b）
（c）（d）
图 1 细胞形态结构
a. 柿胚乳细胞示胞间连丝；
b. 马蛔虫受精卵分裂中期示中心粒；
c. 兔的神经细胞中高尔基体；
d.小鼠肝细胞线粒体
【实验仪器、材料和试剂】
1. 仪器：复式显微镜、擦镜纸
2．材料：洋葱根尖切片、小白鼠肝切片、兔神经节切片、马蛔虫受精卵切片3．香柏油或石蜡油、二甲苯
【方法与步骤】
一、洋葱根尖切片细胞的观察
先用低倍镜观察根尖的纵切面，注意分生区、伸长区、成熟区细胞的异同，然后再仔细观察细胞的形态结构，特别注意细胞的形状、大小，以及细胞壁、细胞核、核仁、细胞质、液泡的形态结构。
二、兔神经节细胞切片高尔基体的观察
先在低倍镜下找到兔神经节细胞，然后转用高倍镜观察，可看到细胞内淡黄色的背景上有黄褐色的细胞核，核的周围分布着许多深褐色的（硝酸银镀染）高尔基体，呈弯曲的线状，颗粒状，少量分散在细胞质。
三、小白鼠肝细胞切片线粒体的观察
先用低倍镜后用高倍镜观察，可见到许多肝小叶，每小叶有许多紧密排列成索状的多角形的肝细胞，细胞中央有大而圆的细胞核。这时，转用油镜观察，可见到细胞质内分布着许多被苏木精染成深紫色的线粒体，呈颗粒状和线状。
四、马蛔虫受精卵切片中心体的观察
1．取马蛔虫受精卵切片，在显微镜下找到充满子宫腔的受精卵，每个马蛔虫受精卵外围有一层较厚的卵膜，膜内有宽大的围卵腔，各围卵腔内有处在不同分裂期的卵细胞。找到分裂中期的细胞，在细胞中央被染成蓝色条状或棒状的结构，这就是染色体。在染色体两侧可见各有一个较小的，亦被染成蓝色的小粒，称中心粒。在中心粒的周围可见呈放射状的星丝。
实验一、细胞的显微测量
【实验目的】
掌握显微测微计的基本原理及使用方法。
【实验原理】
细胞长度、面积、体积的测量是研究正常的或病理组织细胞的基本方法之一。在显微镜下用来测量细胞长度的工具叫显微测量计，由目镜测微尺（ocular micrometer）和镜台测微尺（stage micrometer）组成，两尺要配合使用。目镜测微尺是放在目镜内的一直径为2cm圆形玻片上，里面有100等分格的刻度尺。每一小格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。镜台测微尺是一块特制的载玻片，在它的中央由一片圆形盖片封固着一具有精细刻度的标尺，标尺全长为lmm，分为100等份的小格，每小格的长度为0.01 mm（10μm），标尺的外围有一小黑环，便于找到标尺的位置。显微测量时，先用镜台测微尺标定目镜测微尺每小格所表示的实际长度。在测量细胞时，移去镜台测微尺，换上被测标本，用目镜测微尺即可测得观察标本的实际长度。
【实验仪器、材料和试剂】
（一）仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、解剖剪、解剖镊、注射器、载玻片、盖玻片、试管、无菌采血针
（二）材料：血涂片
（三）试剂：生理盐水、瑞氏（Wright）染色液
【方法与步骤】
1．制片
（1）人血涂片：用采血针刺取耳垂血，制成薄血涂片，晾干后瑞氏染色。（2）蟾蜍血装片：用注射器直接取蟾蜍心脏血，用生理盐水稀释后制成细胞悬液，制成装片。
2．长度测量
（1）取下目镜，将目镜测微尺的刻度面向下放入目镜内的视场光阑上，再旋上上透镜。
（2）将镜台测微尺盖片面朝上放在载物台上，用低倍镜观察，调节焦距看清镜台测微尺的刻度。
（3）移动镜台测微尺，同时转动目镜，使目镜测微尺与镜台测微尺平行靠近，并将两尺的“0”点刻度线或某刻度线对齐。然后从左向右查看两尺刻度线另一重合处，分别记录重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。以下式计算目镜测微尺每小格表示的实际长度：
台镜测微尺格数×10μm
目镜测微尺每小格实际长度＝－－－－－－－－－－－－－－
目镜测微尺格数
（4）移去镜台测微尺，换上血涂片，用目镜测微尺测量细胞所占小格数并乘以目镜测微尺每小格代表的实际长度，即为被测细胞的实际长度
3．厚度测量法
测量细胞的厚度，最简便的方法是利用显微镜上的微调焦轮上的标尺对细胞厚度进行测量。先将焦点面与被测物体的上端对齐一致，记下轮上的度数，然后旋转微调轮，使焦点面与下端对齐一致，再记下度数，两者之差，便是所测物体的厚度。此法简单但不精确。
【注意事项】
1．如果需换用高倍镜或油镜测量时，要用同样的方法重新计算高倍镜或油镜下目镜测微尺每小格的实际长度。
2．在测量时要注意将被测物体放在视野中央，因为这个位置镜像最清晰，相差最小。
3．每一种被测物体（细胞）需反复测量数个或数十个，采用其平均值。
【作业】
1．测量十个红细胞长的长度，求其平均值。
2．根据测量结果写实验报告。
附1：根据长度测量结果计算细胞、细胞核的体积及核质比
椭圆形ν＝4／3πab2 （a、b分别为长短半径）
圆球形ν＝4／3πR3 （R为半径）
核质比NP＝V
n ／V
c
一V
n
（V
n
为核体积，V
c
为细胞体积）
附2：镜台移动尺的使用
一些较精细的显微镜的镜台上装有标本推进器，它有纵横可移动的游标尺，既可测量标本的长度，又可确定标本的位置。游标尺由主标尺和副标尺组成，主标尺
刻有lmm的刻度，副标尺刻有9／10刻度，读数精度为0.1mm，读数时先看副标尺的位置，再看副标尺和主标尺的重合点即可读出。
实验二、细胞中多糖和过氧化物酶的定位
【实验目的】
掌握显示细胞中多糖和过氧化物酶反应的原理和方法。
【实验原理】
高碘酸—雪夫试剂反应，简称PAS反应。主要是利用高碘酸作为强氧化剂，这种强氧化剂能打开C-C键，使多糖分子中的乙二醇变成乙二醛，氧化所得到的醛基与Schiff试剂反应形成紫红色化合物。颜色的深浅与糖类的多少有关。细胞内的过氧化物酶能把联苯胺氧化为蓝色或棕色络合物，根据蓝色或棕色的出现来表示过氧化物酶的存在。
【实验仪器、材料和试剂】
（一）仪器
显微镜、镊子、染色钵、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸等
（二）材料
马铃薯块茎、洋葱根尖或洋葱鳞茎
（三）试剂
1．高碘酸溶液：
高碘酸（HIO4·2H2O）0.4g，
95%乙醇35ml，
M/5醋酸钠溶液（2.72g醋酸钠溶于100ml H2O）5ml，
蒸馏水10ml
2．Schiff试剂（配法见Feulgen反应）
3．亚硫酸水溶液（配法见Feulgen反应）
4．70%乙醇
5．联苯胺溶液：
在0.85%盐水内加入联苯胺至饱和为止，临用前加入20%体积的H2O2 ，每2ml 加一滴。
6．0.1%钼酸铵溶液：
称取0.1g钼酸铵溶于100ml 0.85%盐水
【方法与步骤】
（一）细胞中多糖的测定：高碘酸—雪夫（PAS）反应
1．把马铃薯块茎用刀片徒手切成薄片。
2．浸于高碘酸溶液5～15min 。
3．移入70%乙醇中浸片刻。
4．Schiff试剂染色15min 。
5．亚硫酸溶液洗三次，每次1 min。
6．蒸馏水洗片刻。
7．装片镜检。
（二）细胞中过氧化物酶的测定：联苯胺反应
1．把洋葱根尖徒手切成20～40μm厚的薄片或用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块。
2．浸在溶有0.1%钼酸铵的0.85%盐水溶液中5min（钼酸铵的作用是催化剂）。3．浸在联苯胺溶液内2min至切片出现蓝色。
4．在0.85%盐水溶液中洗1min 。
5．将薄片置于载玻片上展开，盖上盖玻片，显微镜检查。
【作业】
1．简述PAS反应及联苯胺反应的原理。
2．绘图示细胞中多糖及过氧化物酶的分布。
实验三、细胞融合
（一）原理
细胞融合（cell fusion）是在自然条件下或利用人工法(生物的、物理的、化学的)，使两个或两个以上的细胞合并成一个具有双核或多核细胞的过程，又称细胞杂交（cell hybridization）。人工诱导细胞融合始于20世纪50年代，并迅速成为一门新兴技术。不仅同种细胞可以融合，种间远缘细胞也能融合，甚至于动植细胞之间也能融合。因此，细胞融合技术目前广泛应用于细胞生物学、遗传学和医学研究等各个领域。
诱导细胞融合的方法有三种：生物方法（病毒）、化学方法（聚乙二醇PEG）、物理方法（电激或激光）。某些病毒如：仙台病毒、副流感病毒和新城鸡瘟病毒的被膜中有融合蛋白（fusion protein），可介导病毒同宿主细胞融合，也可介导细胞与细胞的融合。紫外线灭活此类病毒后可用于诱导细胞融合。化学和物理方法可引起细胞膜上膜脂分子结构的改变和重排。去掉作用因素之后，质膜恢复原有的有序结构，在恢复过程中便可诱导相接触的细胞发生融合。
聚乙二醇(polyethyleneglycol，PEG)法是目前最常用的细胞融合方法。此法的优点操作简单，融合效果稳定。PEG诱导融合的机制尚不完全清楚。一般认为PEG（化学结构为HOH 2C (CH20CH2)nCH2OH）含有非常丰富的羟基，亲水性非常好，能引起细胞膜上脂质分子的酯键与极性基团的重排，使两细胞接触点处脂类分子发生疏散和重组，从而使细胞发生融合。相对分子质量在200-6000的PEG 均可用作细胞融合剂。
(二)材料
1．仪器:
光学显微镜,离心机,恒温水浴锅。
2．材料
新鲜鸡红细胞,无菌注射器,6号针头,刻度离心管,试管,载玻片,盖玻片。
3．试剂
PEG4000,Hanks液,甲基蓝染液,75%乙醇
D-hanks液是一种平衡盐溶液
主要用于洗涤细胞和组织的也是合成培养基的基础液。如果含有钙镁离子的话当用消化液消化细胞时钙镁离子会破坏消化液的活力影响消化作用
（三）方法
1. 取新鲜鸡血以0.85%生理盐水制成5-10%的悬液
2. 称取0.5克PEG4000(MW=4,000)放入试管内,在酒精灯上融化之,迅速加入0.5ml 37℃预热的Hanks液，混匀制成50%的PEG溶液.放入37℃水浴中待用。
3. 取上述5-10%的鸡红细胞悬液1ml放入离心管中,再加入5ml Hanks液混匀,室温1,000rpm离心5分钟,小心弃去上清液，用指弹法将细胞团块弹散。
4. 取上述50%PEG溶液0.5ml,在1分钟内滴加到鸡红细胞悬液,边加边轻轻摇动混匀。待PEG全部加入后静置1分钟左右。此全部过程都要求在37℃水浴内进行。
5. 缓慢滴加9ml Hanks液以终止PEG的作用,在37℃水浴内静置5分钟。
6. 离心弃上清后,取一滴融合后的细胞悬液滴片,加一滴甲基蓝染液染色，加盖玻片后镜检。
7. 在高倍镜下计数200个细胞（包括融合细胞与非融合细胞），计算细胞融合率。（四）结果
在高倍镜下可以看到两个或两个以上鸡红细胞融合在一起，形成一个异核体。融合细胞体积增大，细胞内可见2个或2个以上细胞核。要注意辨别融合细胞与重叠的鸡红细胞。
细胞融合率：指在显微镜的几个视野内，已发生融合的细胞核总数与该视野内所有细胞(包括已融合的细胞)的细胞核总数之比，通常以百分比表示。
融合率（P）＝(融合细胞核数/细胞核总数)×100％
【作业】
1. 绘制高倍镜下所见细胞融合图像；
2. 计算细胞融合率。
实验四、细胞膜的通透性
【实验目的】
了解分子量、脂溶性大小、电解质和非电解质溶液对细胞膜透性的影响。
【实验原理】
细胞膜在不断变化的环境中，必须保持自身的稳恒状态，才能生存。细胞膜允许一些物质通透，又能降低甚至阻挡另一些物质的通透，所以细胞膜具有选择通透性。水分子可以自由通过细胞膜，当细胞处于低渗液环境时，水分子大量渗
到细胞内，使细胞膨胀，进而破裂，血红蛋白释放到介质中，由不透明的红细胞悬液变为红色透明的血红蛋白溶液，这就是溶血现象。溶血现象可作为测量物质进入红血细胞速度的一种指标。
红细胞置于乙二醇、丙三醇（甘油）、葡萄糖等摩尔浓度的高渗液中，乙二醇等分子进入红血细胞，使细胞内的渗透性活性分子的浓度大为增加，继而导致水的摄入，使细胞膨胀，细胞膜破裂，发生溶血。溶血现象发生的快慢与进入细胞的物质的分子量大小有关。分子量大的进入细胞慢，发生溶血所需时间也长。非极性化合物易溶于脂溶剂，但在水中溶解度甚小。碳链越长，脂溶性越大。一种化合物在脂溶剂中的溶解度与其在水中溶解度之比，叫分配系数。
各种非电解质溶液，只要单位面积中所含的分子数相同，就具有相同的渗透压。电解质溶液，如氯化钠与葡萄糖分子数相等时，氯化钠产生的渗透压要大的多。具有相同渗透压的某非电解溶液与某电解质溶液浓度之比，叫等渗系数。用ⅰ来表示。
ⅰ= 葡萄糖的等渗摩尔浓度/ 氯化钠的等渗摩尔浓度
发生溶血者为低渗液，所以把发生溶血的前一管溶液的浓度近似视为红细胞等渗。
【实验仪器、材料和试剂】
（一）仪器、用具
小烧杯、试管、试管架、刻度吸管、注射器、秒表
（二）材料
含适量肝素的兔血或鸡血
（三）试剂
1M乙二醇水溶液、1M丙三醇水溶液、1M葡萄糖水溶液、3M甲醇、3M乙醇、3M丙醇、M/8、M/9、M/10、M/12、M/14葡萄糖溶液、M/12、M/13、M/14、M/16、M/18氯化钠溶液
【方法与步骤】
（一）分子量大小对膜通透性的影响
1．在编号的三支试管中，分别用吸管吸入2ml 1M乙二醇，1M丙三醇，1M葡萄糖高渗液。
2．先后分别用注射器滴加两滴血液，用手指按住管口，倒置一次。
3．观察溶血时间，最长延至10min。
4．将实验结果列入如下所示的表格中。
1．编号的三支试管分别加入2ml 3M的甲醇、乙醇、丙醇溶液。
2．分别先后加入两滴血液，按住管口倒置一次。
3．观察溶血时间。
4．将实验结果记入如下所示的表格中。
1．将试管编号，注明溶质名称及摩尔浓度。
2．按编号分别加入不同浓度的葡萄糖及氯化钠溶液2ml。
3．每管各加入两滴血液，按住管口，倒置一次。
4．室温放置15min ，观察发生溶血的浓度，确定等渗浓度。
实验五、植物细胞骨架的光学显微镜观察
【实验目的】
了解细胞骨架的结构特征及其制备技术。
【实验原理】
细胞骨架（cytoskeleton）是由蛋白质丝组成的复杂网状结构，根据其组成成分和形态结构可分为微管、微丝和中间纤维。它们对细胞形态的维持，细胞的生长、运动、分裂、分化，物质运输，能量转换，信息传递，基因表达的起到重要作用。当用适当浓度的TritonX-100处理细胞时，可将细胞质膜中和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提，但细胞骨架系统的蛋白质不受破坏而被保存，经用戊二醛固定，考马斯亮蓝R250染色后，可在光学显微镜下观察到由微丝组成的微丝束为网状结构（图），这就是细胞骨架。
自摄图片：
洋葱细胞骨架
【实验仪器、材料和试剂】
（一）仪器
普通光学显微镜、50ml烧杯、玻璃滴管、容量瓶、试剂瓶、载玻片、盖玻片、镊子、小剪刀、吸水纸、擦镜纸
（二）材料洋葱鳞茎
（三）试剂
、lmM EGTA［乙二l．M-缓冲液：50mM 咪唑、50mM KCl、0.5mM MgCl
2
醇四乙酸］、0.lmM EDTA、lmM琉基乙醇或DTT（二硫苏糖醇）2．6mM （pH6.8）磷酸缓冲液（用NaHCO
调pH ）
3
3．1%TritonX-100，用M-缓冲液配制
4．0.2%考马斯亮蓝R250，其溶剂为：甲醇46.5ml、冰醋酸7ml、蒸馏水46.5ml 5．3%戊二醛，用2液配6．50%、70%、95%乙醇
7．叔丁醇
8．正丁醇
9．二甲苯
10．中性树胶
咪唑：稳定PH值，缓冲作用。KCL：提供离子，对骨架起聚合作用。MgCL2:提供离子，对骨架起聚合作用。EGTA：螯合Ca离子Ca离子对聚合不利。EDTA：螯合Ca离子Ca离子对聚合不利。巯基乙醇：起还原作用，稳定骨架结构
【方法与步骤】
l. 撕取洋葱鳞茎内表皮（约lcm2大小若干片）置于装有pH6.8磷酸缓冲液的50ml烧杯中，使其下沉。
2. 吸去磷酸缓冲液，用l%TritonX-100处理20～30分钟。
3. 吸去TritonⅩ-100，用M-缓冲液洗三次，每次10分钟。
4. 3%戊二醛固定0.5～1小时。
5. pH
6.8磷酸缓冲液洗三次，每次10分钟。
6. 0.2%考马斯亮蓝R250染色20～30分钟。
7. 用蒸馏水洗l～2次，细胞置于载玻片上，加盖玻片，于普通光学显微镜下观察。
8. 如观察效果好，可制作成永久切片：
在有样品的50ml烧杯中，顺序通过如下药物：50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇、1/2 V 95%乙醇+ 1/2 V叔丁醇、叔丁醇（每级5～10分钟）；或正丁醇→正丁醇→二甲苯→二甲苯（每级5～10分钟），然后捞取样品，平展于载玻片上，经镜检，效果好的，可加一滴中性树胶，盖上盖玻片，即成永久片。
【作业】
1. 绘出植物细胞骨架微丝结构图。
2. 分析和论述在光学显微镜下观察到的细胞骨架的形态特征。
实验六、细胞核与线粒体的分级分离
【实验目的】
了解差速离心法分离细胞器的原理，以及练习使用差速离心法分离哺乳动物的细胞核与线粒体。
【实验原理】
用组织匀浆的方法在悬浮介质中进行差速离心制备线粒体。在一给定的离心场中，球形颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的黏度。在一均匀悬浮介质中离心一段时间后，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同而停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。细胞器中最先沉淀的是细胞核，其次是线粒体，其它更轻的细胞器和大分子可依次再分离。
悬浮介质通常用缓冲的蔗糖溶液，它属于等渗溶液，比较接近细胞质的分散相，在一定程度上能保持细胞器结构和酶的活性，有利于分离，此外，该方法中采用的氯化钙有稳定核膜的作用。整个操作应注意使样品保持4℃，避免酶失活。线粒体的鉴定用詹纳斯绿B（Janus green B）活性染色法。
【实验仪器、材料和试剂】
（一）仪器、用具
高速冷冻离心机、显微镜、天平、玻璃匀浆器、解剖刀剪、烧杯、量筒、离心管、高速离心管、玻璃漏斗、尼龙布、载玻片、盖玻片
（二）材料
大白鼠
（三）试剂
1．0.9%生理盐水，
2．0.25 M蔗糖／3 mM氯化钙匀浆液，
3．1%甲苯胺蓝溶液，
4．0.02%詹纳斯绿B染液
【方法与步骤】
一、细胞核的分离提取
1．实验前大鼠空腹12小时，击头处死，迅速剖腹取肝，在冰浴的小烧杯中剪成小块（去除结缔组织），尽快置于冰冷的生理盐水中，反复洗涤，尽量除去血液，用滤纸吸去表面的液体。
2．剪碎的肝组织移入玻璃匀浆管中，加入适量匀浆液，进行匀浆（注意保持冰浴状态），快速匀浆20～30次后，用蔗糖／氯化钙预湿的尼龙布过滤于离心管中。3．将装有滤液的离心管以2000rpm/min，4℃离心10min，取上清液，移入高速离心管中，并保存于冰浴中，待分离线粒体用。
4．收集的沉淀以少量蔗糖／氯化钙溶液重新悬浮，以3000rpm/min离心10min，取上清液，移入高速离心管中，并保存于冰浴中，待分离线粒体用。
5. 收集的沉淀以少量蔗糖／氯化钙溶液重新悬浮，以4000rpm/min离心15min，弃上清。
5．洗涤过的沉淀以少量溶液重新悬浮，制备成细胞核悬液，滴一滴于干净的载玻片上，作涂片，自然干燥。
6．涂片用1%甲苯胺蓝染色，在光镜下观察。
二、差速离心分离提取线粒体
1．将装有上清液的高速离心管配平衡后，5000rpm/min离心10min，弃上清，收集沉淀。
2．加入0.25 M蔗糖／3 mM氯化钙溶液1ml，用吸管吹打成悬液，10000rpm/min，4℃离心10min，将上清液吸入另一试管中，沉淀加入0.1ml 蔗糖／氯化钙溶液制成悬液。
3．取上清液和沉淀物悬液，分别滴一滴于干净载玻片上，各滴一滴0.02%詹纳斯绿B染液，染色20min，镜检（为利于线粒体的有氧呼吸，不必加盖玻片）。可见有活性的线粒体进行活跃的运动，并且着色成蓝绿色。
【注意事项】
1．动物材料实验前可空腹过夜，以降低肝脏组织中的脂肪含量，便于实验操作。2．实验中必须注意保持细胞器的完整性，避免过于剧烈的机械操作。尤其是线粒体在保持了呼吸氧化功能时才能经活性染色法检测。
3．由于核沉淀中可能依然存在大量因为粘连或缠绕而沉淀的线粒体，所以可酌情将步骤4中洗涤核沉淀后离心得到的上清，与步骤3的上清合并加以利用。4．由于线粒体进行活性染色法的检测，所以样品制备好后应尽快染色，不要放置过久。
【作业】
光镜或油镜下观察制备的细胞核与线粒体样本。
实验七、液泡系和线粒体的活体染色
【实验目的】
掌握动、植物细胞活体染色的原理和有关的技术。
【实验原理】
活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色，但又无毒害的一种染色方法。目的在于显示生活细胞内的某些天然结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致引起细胞的死亡。活体染色技术可用来研究生活状态下的细胞结构和生理、病理状态。
液泡是细胞内浓缩产物的主要场所，有十分重要的功能。中性红（neutral red）是液泡的特殊染色剂，只将液泡染成红色。在细胞处于生活状态时，细胞质和细胞核不被中性红染色。
线粒体是细胞内的一个重要细胞器，是细胞进行呼吸作用的场所。詹纳斯绿B（Janus green B）对线粒体具有专一性的染色，是毒性最小的碱性染料。Janus green B染色是由于线粒体中的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态，呈蓝绿色，而周围的细胞质被还原成无色的色基（图）。
图洋葱鳞茎表皮细胞线粒体
【实验仪器、材料和试剂】
（一）仪器：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、解剖刀、吸管、载玻片、盖玻片、擦镜纸、吸水纸
（二）材料：洋葱鳞茎、小白鼠或兔子、青蛙
（三）试剂：
1．Ringer溶液
氯化钠8.5g （变温动物用6.5g）
氯化钙0.12g
碳酸氢钠0.20g
氯化钾0.14g
磷酸氢二钠0.01g
葡萄糖2.0g
加蒸馏水至1000ml
2．1%—1/3000中性红溶液
称取0.5g中性红溶于50ml Ringer液，稍加热（30～40℃）使之很快溶解，用滤纸过滤，装入棕色瓶于暗处保存，否则易氧化沉淀，失去染色能力。
临用前，取1%中性红溶液1ml，加入29ml Ringer溶液混匀，装入棕色瓶备用。3．1%—1/5000詹纳斯绿B（Janus green B）溶液
称取0.5g詹纳斯绿B溶于50ml Ringer溶液中，稍加热（30～40℃）使之很快溶解，用滤纸过滤，即成1%原液。
临用前，取1%原液，加入49ml Ringer溶液混匀，即成1/5000工作液，装入棕色瓶备用，以保持它的充分氧化能力。
【方法与步骤】
一、液泡系的活体染色与观察
（一）蛙（蟾蜍）胸骨剑突软骨细胞的液泡系活体染色观察
解剖蛙（蟾蜍），剪取胸骨剑突软骨最薄部分一小块，放入载玻片中央的1/3000中性红染液中，染色5～10min。然后用吸管吸去染液，滴加Ringer液，盖上盖玻片，用油镜观察。可见软骨细胞为椭圆形，细胞核及核仁清楚易见，在细胞核上方的胞质中，有许多被染成玫瑰红色的大小液泡，这一特定的区域叫做高尔基区。（二）植物细胞液泡的活体染色
撕取洋葱鳞茎内表皮，放在加有一滴1/3000的中性红染液的载玻片中，染色5-10min，用吸水纸吸去中性红染液，换上Ringer液，盖上盖玻片，显微镜观察，可见到被染成砖红色的中央大液泡。
二、线粒体的活体染色
（一）动物细胞线粒体活体染色的观察
1．取样染色：用水溺死兔子，置于解剖盘中，迅速打开腹部，取肝边缘较薄的肝组织一小块，放入盛有Ringer液的表面皿内，洗去血液。
2．取另一干净表面皿，滴加1/5000詹纳斯绿B（Janus green B）溶液，再将肝组织块移入染液，但不可将组织块完全浸没，要让组织上面部分半裸露在外面，这样细胞内的线粒体酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即可（一般须染20～30min）。
3．分离细胞：染色后，用两根解剖针同时左右手操作，将两根针压住组织块，然后用右手稍稍用力拉开组织块，这样就会有一些细胞或细胞群和组织块分离开。
4．装片：用吸管将分离的细胞吸起，滴一滴在载玻片上，盖上盖玻片，显微镜观察。在高倍镜或油镜下观察，可见肝细胞中的线粒体染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状，在细胞核周围分布特别多。
（二）植物细胞线粒体的活体染色
1．用吸管吸取1/5000詹纳斯绿B染液，滴一滴在干净的载玻片上，然后用镊子撕取洋葱鳞茎内表皮一小块，置于染液中，染色10～15min。
2．吸去染液，加一滴Ringer液，注意使内表皮展平，盖上盖玻片，显微镜观察。在高倍镜下，可见表皮细胞中央被一大液泡所占据，细胞核被挤至旁边，线粒体染成蓝绿色，呈颗粒状或线条状。
【作业】
1、简述液泡系中性红活体染色及线粒体Janus green B活体染色的原理。
2、分别绘图示液泡和线粒体形态和分布。
实验八、DNA的细胞化学——Feulgen反应
【实验目的】
了解Feulgen反应的原理，掌握有关的操作方法。
【实验原理】
DNA是由许多单核苷酸聚合成的多核苷酸，每个单核苷酸又由磷酸、脱氧核糖和碱基构成。DNA经1N盐酸水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的双键打开，使脱氧核糖的第一碳原子上形成游离的醛基，这些醛基与Schiff试剂反应。Schiff 试剂是由碱性品红和偏重亚硫酸钠相作用，形成无色的品红液，当无色品红与醛基结合形成紫红色的化合物。因此凡有DNA的地方，都能显示紫红色。紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色基团，所以具有颜色。材料不经过水解或预先用热的三氯醋酸或DNA酶处理，得到的反应是阴性的，从而证明了Feulgen反应的专一性。
【实验仪器、材料和试剂】
（一）仪器、用具
显微镜、恒温水浴箱、温度计、解剖针、酒精灯、试管、烧杯、载玻片、盖玻片、吸水纸。
（二）材料
洋葱鳞茎或根尖
（三）试剂
1．1N 盐酸的配制
取82.5ml比重1.19的浓盐酸加蒸馏水至1000ml。
2．Schiff试剂的配制及保存称取0.5g碱性品红加入到100ml煮沸的蒸馏水中（用三角烧瓶），时时振荡，继续煮5分钟（勿使之沸腾），使之充分溶解。然后冷却至50℃时用滤纸过滤，滤液中加入10ml 1N HCl，冷却至25℃时，加入0.5g
Na
2S
2
O
5
（偏重亚硫酸钠或钾），充分振荡后，塞紧瓶塞，在室温暗处静置至少
24小时（有时需2～3天），使其颜色退至淡黄色，然后加入0.5g活性炭，用力
振荡1分钟，最后用粗滤纸过滤于棕色瓶中，封严瓶塞，外包黑纸。滤液应为无色也无沉淀，贮于4℃冰箱中备用。如有白色沉淀，就不能再使用，如颜色变红，可加入少许偏重亚硫酸钠或钾，使之再转变为无色时，仍可再用。
3．亚硫酸水
取200ml自来水，加10ml 10%偏重亚硫酸钠（或偏重亚硫酸钾）水溶液和10ml 1N HCl，三者于使用前混匀。
【方法与步骤】
1．将洋葱根尖或鳞茎内表皮放在1N HCl中，加热到60℃水解8～10 min。
2．蒸馏水水洗。
3．Schiff试剂遮光染色30min。
4．用新鲜配制的亚硫酸水溶液洗3次，每次1min。
5．水洗5min。
6．将根尖放在载玻片上，镊子捣碎，盖上盖玻片，压片（洋葱表皮可省去压片这一步）。
7．显微镜检查。
结果：细胞中凡有DNA的部位应呈现紫红色的阳性反应。
对照片：
方法一先将材料放在5%三氯醋酸中90℃水浴15min，主要把DNA抽提掉，然后按步骤1—7制片观察。
方法二材料不经1N HCl水解，直接放在Schiff试剂中染色，然后按步骤4—7制片观察。
【作业】
1、简述Feulgen反应的原理和实验的关键步骤。
2、绘图示洋葱根尖细胞或鳞茎表皮细胞DNA的分布部位。
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导
细胞生物学实验指导目录 一．显微镜的使用 实验一、几种光学显微镜的使用 实验二、参观电子显微镜及生物超薄切片标本制备 二．细胞形态结构 实验三、细胞大小的形态观察——测微尺的使用 实验四、细胞活体染色技术 实验五、植物细胞骨架光学显微观察 实验六、胞间连丝观察 三．细胞化学 实验七、鉴定RNA的细胞化学方法——Branchet反应 实验八、DNA显色的观察——Feulgen反应 实验九、固绿染色法鉴定细胞内酸性蛋白与碱性蛋白 实验十、多糖及过氧化酶的显示 实验十一、核仁组成区的银染显示与观察 四．细胞生理 实验十二、细胞膜的通透性 实验十三、细胞电泳 五．细胞和组织培养技术 实验十四、植物原生质体的分离和融合 实验十五、植物细胞的培养与观察 实验十六、动物细胞融合 实验十七、动物细胞的培养与观察 六．细胞化学成分的分离 实验十八、细胞器的分离、纯化——细胞分级分离 实验十九、荧光的细胞化学测定 实验二十、细胞活力的鉴别 实验一几种光学显微镜的使用
一、实验目的 了解几种光学显微镜的结构、工作原理、主要用途和使用方法；掌握使用普通显微镜提高分辨力的方法。 二、实验原理 (一)基本原理 一般实验室经常使用的光学显微镜都是由物镜、目镜、聚光器和光阑组成，普通显微镜它们的放大原理及光路图如下： AB物体．A1B l第一次成像，A2B2第二次成像，O l目镜．O2物镜， F1为O l的前焦点，F2为O2的前焦点 各种光学显微镜的光学放大原理基本相同，各种特殊用途的光镜不过只是在光源、物镜、聚光器等方面作了改动，或在其它方面增设了某些特殊的设备。 (二)几种光学显微镜 l、普通光学显微镜： 普通光学显微镜也叫复式显微镜，是最常见，最简单的显微镜。它适于观察一般固定的，有色的透明度较高的标本。其最大分辨力一般为0.2微米，从构造上可分光学、机械和电子三大系统。 2、暗视野显微镜： 暗视野显微镜是以丁达尔现象(Tyndall phenomenon)(即光的微粒散射现象)为基础设计的,它使用了特殊的聚光器进行斜射照明,因光源中心束不直入物镜，所以视野黑暗，而被检细胞器因斜射照明发生衍射和反射，所以发亮可见。暗视野显微镜可用增加光照方法增加物体与背景的反差，因而可观察到0．2—0．004微米直径的微小粒子，但它分不清被检物的细微构造，它常用于观察物体的存在与运动。而暗视野显微镜与普通光学显微镜的区别，主要在于聚光器的不同，致使照明方法有别。确切地说，称暗视野显微镜为暗视野照明更为贴切。它是照明光线仅照亮被检样品而不进入物镜。使视野背景暗黑，样品明亮的照明方法。 3、相差显微镜： 相差是指同一光线经过折射率不同的介质其相位发生变化并产生的差异。相位是指在某一时间上，光的波动所达到的位置。
细胞生物学教案(完整版)汇总
细胞生物学教案 （来自https://www.360docs.net/doc/2215904236.html,）目录 前言 第一章绪论 第二章细胞结构概观 第三章研究方法 第四章细胞膜 第五章物质运输与信号传递 第六章基质与内膜 第七章线粒体与叶绿体 第八章核与染色体 第九章核糖体 第十章细胞骨架 第十一章细胞增殖及调控 第十二章细胞分化 第十三章细胞衰老与凋亡
前言 依照高等师范院校生物学教学计划，我们开设细胞生物学。 一、学科本身的重要性 要最终阐明生命现象，必须在细胞水平上。细胞是生命有机体最基本的结构和功能单位，生命寓于细胞之中，只有把各种生命活动同细胞结构相联系，才能在细胞水平上阐明各种生命现象。世界著名生物学家Wilson（德国人）曾说过：“一切生物学问题的答案最终要到细胞中去寻找”。 二、学科发展特点 细胞生物学涉及知识面广、内容浩繁且更新迅速。它同生物化学、遗传学形成生命科学的鼎立三足，既是当代生命科学发展的前沿，又是生命科学赖以发展的基础。 三、欲达到的目的 通过系统地学习细胞生物学，丰富细胞学知识，以适应当代人类社会知识结构发展的需求，也是为考研做准备。 本课程讲授51学时，实验21学时，共72学时。 参考资料 1 De.Robertis，《细胞生物学》，1965年（第四版）；1980年（第七版）《细胞和分子生物学》 2 Avers，“Molecular Cell Biology”， 1986年 3 Alberts，《细胞的分子生物学》，“Molecular biology of the cell”，1989年 4 Darnell，《分子细胞生物学》，1986年（第一版）；1990年（第二版）“Molecular Cell Biology”5郑国錩，细胞生物学，1980年，高教出版社；1992年，再版 6 郝水，细胞生物学教程，1983年，高教出版社 7 翟中和，细胞生物学基础，1987年，北京大学出版社 8 韩贻仁，分子细胞生物学，1988年，高等教育出版社；2000年由科学出版社再版 9 汪堃仁等，细胞生物学，1990年，北京师范大学出版社 10 翟中和，细胞生物学，1995年，高等教育出版社，2000年再版 11 郑国錩、翟中和主编《细胞生物学进展》， 12翟中和主编《细胞生物学动态》，从1997年起（1—3卷），北师大出版社 13徐承水等，《分子细胞生物学手册》1992，中国农业大学出版社 14徐承水等，《现代细胞生物学技术》1995，中国海洋大学出版社 15徐承水，《细胞超微结构研究》2000，中国国际教育出版社 学术期刊、杂志 国外：Cell、Science、Nature、J.Cell Biol.、J.Mol. Biol. 国内：中国科学、科学通报、实验生物学报、细胞生物学杂志等
(完整版)分子生物学实验技术考试题(卷)库
一、名词解释 1.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。 8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。
11.离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。 15.多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组：发生在DNA同源序列之间，有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map)，它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合
细胞生物学实验
1. 什么是细胞培养？ 细胞生物学实验 指从动物活体体内取出组织，并将其分散为单个细胞（机械或酶消化），在体外模拟体内的生理环境，使其在人工培养条件下保持生长、分裂繁殖、细胞的接触性抑制以及细胞衰老过程等生命现象。 最常见的细胞一般有两种，一种是原代细胞，另一种是传代细胞。 原代细胞是指动物组织经过胰酶或胶原酶等酶类的消化，使其分散，从而获得单个细胞，再使这些单个细胞生长于培养容器中的过程。大多数组织可以制备原代细胞，但制备的方法略有不同，制备的细胞生长快慢及难易程度也不相同。 不同的原代细胞，其形态也不尽相同。一般将10代以内的细胞称之为原代细胞。 传代细胞一般指无限繁殖的细胞系，理论上这类细胞可以无限次的传代。做实验的时候也会经常使用这类细胞，如Hela、293、Vero 等细胞。 2. 细胞的生长周期 游离期：细胞刚接种到新的培养容器中到贴壁前的一段时期，这个时期的长短由细胞类型决定，从几分钟到几个小时不等。 贴壁期：细胞从游离状态变为贴附到培养器皿表面并展现出一定细胞形态的时期。 潜伏期：细胞在完成贴壁后，并不会马上进行增殖，会进行增殖所必须的物质和能量的储备，这个时候称之为潜伏期。
对数生长期：细胞在完成物质和能量储备后，开始大量的增殖的时期。这个时期的细胞活力旺盛，且状态稳定，我们所做的绝大多数实验都是在这个时期开展的。 停止期：随着细胞的生长，细胞密度越来越大，由于营养物质的消耗、细胞间的接触抑制等因素，细胞生长缓慢，甚至停止生长。这个时候，我们就要给细胞进行传代了，使细胞可以继续进行增殖，保持旺盛的活力。 3. 细胞生长所需要营养条件 细胞的培养所需要的营养成份一般来自于基础培养基（比如DMEM培养基）和血清。 基础培养基：主要是提供细胞生长所需要的氨基酸（组成蛋白质的基本单位）、维生素（细胞代谢中辅酶的组成成分）、无机离子（K+，Na+等）、碳水化合物（碳源和能量来源）和一些激素等营养物质。 血清：主要是提供一些基础培养基不能提供的生长因子和低分子的营养物质，此外它还有促进细胞的贴壁、中和有害重金属离子等作用。如果只提供基础培养基而不提供血清，绝大多数细胞是无法生长的。血清对于我们实验的重要性就不言而喻了，那么什么样的血清才算是合格的血清呢？ 合格的血清需要通过各种检测，包括无细菌，无真菌，无支原体检测，无病毒污染。血清一般呈现为淡黄色，透明状液体，由于含有大量的蛋白质等成分，会略有黏稠。以全式金公司的TransSerum EQ Fetal Bovine Serum (FS201-02)为例，它通过了牛腹泻病毒、牛副
(完整版)细胞生物学实验测试题
细胞生物学实验测试题 1、试述荧光显微镜的原理和用途。（并操作） 原理：荧光显微镜是以紫外线为光源，用以照射被检物体，使之发出荧光，然后在显微镜下观察物体的形状及其所在位置。 （滤光镜片：获得所需波长的激发光；光源：高压汞灯） 用途：荧光显微镜用于研究细胞内物质的吸收、运输、化学物质的分布及定位等。细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光； 另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜就是对这类物质进行定性和定量研 究的工具之一。 2、试述酸性磷酸酶显示法的原理及主要步骤。 原理：酸性磷酸酶（ACP）是溶酶体的标志酶，通常酸性磷酸酶在pH 为5左右时发挥作用能水解磷酸酯而释放出磷酸基，PO43-与底物中硝酸 铅反应生成磷酸铅沉淀物。由于这些沉淀物是无色的，需再与黄色的硫化 铵反应，生成棕黄色到棕黑色的硫化铅沉淀而被显示出来。其反应过程如 下： β-甘油磷酸钠+酸性磷酸酶→甘油+PO43- PO43-+Pb(NO3)2 →Pb3(PO4)2↓ Pb3(PO4)2+(NH4)2S →PbS↓(棕黑色) 主要步骤： 1、前处理：获取小白鼠或大白兔腹腔液（猪肝） 2、制片： （1）、将腹腔液（肝细胞悬液）滴一滴于冰冻的干净载玻片上，用牙签涂开，自然干燥。 （2）、放入10%中性福尔马林固定液中固定30min。 （3）、蒸馏水中漂洗,3-5次。（洗去固定液） （4）、磷酸酶作用液，37°C，30Min。 （5）、蒸馏水中漂洗3次，5min一次。（洗去游离铅离子） （6）、1%硫化铵处理（3-5min）; （7）、吉姆沙染液复染15min;（使细胞核、轮廓显示出来） （8）、制片观察。 结果：阳性细胞内有大小不等的棕色或棕黑色的颗粒即为酸性磷酸酶。 对照实验：标本放入作用液前先用高温（50℃）处理 30min，使酶失去活 性，做好标记，其他步骤相同。 3、试述DNA的Feulgen染色法的原理及主要步骤。 原理：DNA经稀盐酸（1mol/L HCL溶液）处理后，可使嘌呤碱与脱氧
医学细胞生物学实验课教学大纲.
医学细胞生物学实验课教学大纲 (供临床医学专业七年制使用) 汕头大学医学院细胞生物学与遗传学教研室 2007年6月
前言 细胞生物学是生命科学中最重要的基础学科和前沿学科，细胞生物学课程是培养医学生基础理论知识、实践能力、创新能力的关键环节。优秀的细胞生物学课程高等医学院校课程体系建设的重要内容。结合汕头大学医学院人才培养目标，我们将锻造理论与实践、临床与基础重组渗透，能力培养贯穿始终的、特色鲜明的医学细胞生物学课程体系作为本课程建设的目标，力争通过本课程的学习使临床医学专业学生掌握细胞生物学的基本原理、研究方法，掌握相关疾病的分子机制，提高科学素养，为其今后的终身学习、临床实践、科学研究奠定良好基础。 实验课教学是理论教学的重要补充，是人才培养的关键环节。在实验教学上我们以科研与教学相结合、科研应用于教学为指导思想，坚持实验内容的先进性和综合性，创造条件改善和提高学生的动手能力，为培养学生基本科研技能奠定基础。力争通过实验课学习使学生掌握医学细胞生物学的基本理论和实验技能，提高学生独立分析问题和解决问题的能力，培养学生学习的主动性，使其具备一定的科研思维和科研能力，提高科学素养，为其今后的终身学习、临床实践和科学研究奠定良好基础。 七年制细胞生物学实验课程包括基础性实验-综合设计性实验-科研活动三个层次的实验课课程体系。通过该课程体系对七年制学生实验能力进行全程培养。本教学大纲规定基础性实验和综合设计性性实验的内容。科研活动的内容和要求由学生和教师讨论后自行确定。 汕头大学医学院细胞生物学与遗传学教研室 2007年5月
七年制医学细胞生物学实验课内容 实验项目名称学时层次教学手段 实验一数码互动系统使用及细胞 基本形态观察4 基础实验 数码互动系统讲授 示教讨论 实验二细胞生理活动观察 4 基础实验数码互动系统多媒体演示 讲授、示教讨论 实验三细胞染色体标本制备 与观察4 基础实验 数码互动系统 讲授、示教讨论 实验四细胞的原代与传代培养 6 基础实验数码互动系统多媒体演示 讲授、示教讨论 实验五细胞组分的分离与鉴定>12 综合实验讨论多媒体 实验六细胞骨架对细胞、细胞器的影响>12 综合实验 讨论 多媒体 实验七药物对细胞增殖与凋亡 的影响>12 综合实验 讨论 多媒体 实验八定位信号与蛋白亚细胞 定位>12 综合实验 讨论 多媒体 大学生科研活动项目科研活动综合应用多种教学手段
细胞生物学实验
实验室规则和要求 一般规定 1.上课第一天请先熟悉环境，牢记“安全”是进行任何实验最重要的事项。 2.在实验室内请穿著实验衣（最好长及膝盖下），避免穿著凉鞋、拖鞋（脚 趾不要裸露）。留有长发者，需以橡皮圈束于后，以防止引火危险或污染实验。 3.在实验室内禁止吸烟、吃东西、饮食、化妆、嚼口香糖、嬉戏奔跑，食 物饮料勿存放于实验室的冰箱中，实验桌上勿堆放书包、书籍、衣服外 套及杂物等。 4.所有实验仪器、耗材、药品等均属实验室所有，不得携出实验室外。每 组分配之仪器、耗材请在课程开始前确定清点与保管，课程结束后如数 清点缴回。公用仪器请善加爱惜使用。实验前后，请把工作区域清理擦 拭，并随时保持环境清洁。 5.实验前详阅实验内容，了解实验细节的原理及操作，注意上课所告知的 注意事项。实验进行中有任何状况或疑问，随时发问，切勿私自变更实 验程序。打翻任何药品试剂及器皿时，请随即清理。实验后，适切记下 自己的结果，严禁抄袭，确实关闭不用之电源、水、酒精灯及瓦斯等。 6.身体不适、睡眠不足、精神不济或注意力无法集中，请立即停止实验。 实验时间若延长，请注意时间的管制及自身的安全，不可自行逗留实验 室。 7.实验完毕，请清理实验室、倒垃圾、灭菌、关闭灯光及冷气，离开实验 室前记得洗手。 8.任何意外事件应立即报告教师或实验室管理人员，并应熟知相关之应变 措施。
药品 1.使用任何药品，请先看清楚标示说明、注意事项，翻阅物质安全资料， 查明是否对人体造成伤害，使用完毕请放回原位。 2.新配制的试剂请清楚注明内容物、浓度、注意事项及配制日期，为避免 污染，勿将未用完的药剂倒回容器内。 3.挥发性、腐蚀性、有毒溶剂（如甲醇、丙酮、醋酸、氯仿、盐酸、硫酸、 -巯基乙醇、甲醛、酚等）要在排烟柜中戴手套量取配制，取用完应随即盖好盖子，若不小心打翻试剂，马上处理。 4.有毒、致癌药剂例如丙稀酰胺（神经毒）、溴化乙啶（突变剂）、SDS（粉 尘）请戴手套及口罩取用，并勿到处污染，脱下手套后，养成洗手的好 习惯。 5.使用后的实验试剂和材料，应放在专用的收集桶内。固体培养基、琼脂 糖或有毒物品不得倒入水槽或下水道中。 6.使用刻度吸管取物时，切勿用嘴吸取，请用自动吸管或吸耳球。 仪器 1.使用仪器前先了解其性能、配备及正确操作方法，零件及附件严禁拆卸， 勿私自调整，并注意插座电压（110V或220V）之类别。 2.使用离心机时，离心管要两两对称、重量平衡，离心机未停下不得打开 盖子。冷冻离心机于开机状态时，务必盖紧盖子，以保持离心槽之低温并避免结霜。 3.电源供应器有高电压，切勿触摸电极或电泳槽内溶液，手湿切勿开启电 源。
细胞生物学实验新教案
辽东学院本科教案 课程教案（ 2010—2011学年第二学期） 课程名称：细胞生物学实验 周学时：2 教学周数：16 授课班级：农业B0902 任课教师：王丹丹 农学院
教案（首页）
实验一显微镜的使用及显微摄影技术 授课时数：（本次课学时数——2） 教学课型：实验课 一、教学目的与要求 1．了解显微镜各部分的名称，结构和功能，学习普通光学显微镜，荧光显微镜，倒置显微镜等的构造和使用方法. 2．掌握显微摄影的基本方法，学会显微镜的视差校正，曝光控制。 二、教学重点与难点 1．了解显微镜各部分的名称，结构和功能，学习普通光学显微镜，荧光显微镜，倒置显微镜等的构造和使用方法. 2．掌握显微摄影的基本方法，学会显微镜的视差校正，曝光控制。 三、实验原理： 随着科学技术的发展，显微镜检方法由最传统的明视野、暗视野发展出了相差法、偏光方法；荧光方法也由透射光激发进展为落射光激发，使荧光效率大为提高；微分干涉相衬方法基于偏光方法，而巧妙地利用了微分干涉棱镜，使之能应用于医学与生物学的样品，又能应用于金相样品的分析与检验。 四、作业、讨论、实验（实训）、案例 1.简述使用显微镜的注意事项； 2.简述使用油镜的具体步骤？ 五、参考资料 中国生物论坛https://www.360docs.net/doc/2215904236.html,/ 六、教学内容与教学过程（教学设计） 提出本学期的学习计划及上课要求 讲授本节内容 一、课前准备 二、讲解原理、步骤、注意事项及演示 三、学生操作：实验方法与步骤 1、普通光学显微镜的基本构造及使用方法； 2、荧光显微镜的基本构造及使用方法；
3、倒置显微镜的基本构造及使用方法； 4、自动曝光显微摄影的方法。 七、课后小结 实验二植物细胞骨架的光学显微镜观察授课时数：（本次课学时数——2） 教学课型：实验课 一、教学目的与要求 通过对洋葱内皮细胞的处理，了解植物细胞骨架的结构特征及其制备技术与显微形态观察。 二、教学重点与难点 了解植物细胞骨架的结构特征及其制备技术与显微形态观察。 三、实验原理： 细胞骨架在细胞中呈由蛋白纤丝交织成的立体网状结构，并且处于动态变化中。细胞骨架在胞质、细胞核、质膜、胞壁中都有分布，参与细胞形态维持、物质运输、信号转导等作用。处于不同生理状态的细胞其细胞骨架有变化，可根据细胞骨架推测细胞所处生理阶段。 四、作业、讨论、实验（实训）、案例 3.绘制你所观察到的植物细胞骨架图象； 4.戊二醛、考马斯亮兰R250、TritonX-100是什么？在本实验中各起什么作 用？ 五、参考资料
提交细胞生物学实验教案
细胞生物学实验 Cell Biology Experiment 目录 1.显微镜的结构及细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定 2.液泡系和线粒体的活体染色 3.叶绿体的分离与观察 4.DNA的细胞化学——Feulgen反应 5.多糖的显示——PAS反应 6.细胞内碱性蛋白和总体蛋白的原位显示 7.细胞骨架的光学显微观察和永久制片技术 8.植物原生质体的制备与融合 9.蚕豆根尖微核试验 10.膜的通透性 11.血细胞的分化和不同类型血细胞的观察 实验报告要求 1．注意页面四边留白，不要挤到页边！ 2．抬头填写完整。 3．注意事项自己总结，不要抄袭！ 4．组长检查后上交存档。 生物绘图注意事项 1．2H 以上绘图铅笔削尖、绘图橡皮、直尺 2．边看显微镜边按视野中实际情况绘图，以精确为主，不能艺术加工。 3．应找到最典型、最能说明绘图目的的物像来绘图。先轻勾出轮廓，检查无误后，再以准确清晰的线作最后描绘。
①实线表示轮廓，虚线表示被遮蔽但需表现的轮廓，线粗细应均匀有规律 ②圆点的疏密表示明暗、凹凸（越暗的地方点越多）点点时笔尖直立，点大小、疏密要均匀、整齐、浑圆，不能像“，”。 4．用尺向右侧引出水平指示线，线右端平齐字注在右侧。图下方写上所画图的名称及放大倍数。图的右侧和下方需写文字说明，所以图应绘在绘图纸上偏左上方的位置。 5．一幅图只要详细画出部分结构，其余勾画出轮廓即可。 规范不规范 实验一普通显微镜的使用及细胞形态观察、大小测量和死活细胞鉴定 一、实验目的 1．熟悉普通光学显微镜的基本构造和性能，掌握使用方法。 2．了解细胞的一般形态和基本结构。 3．掌握显微测微尺的使用，对细胞大小有一直观认识。 4．了解鉴定死活细胞的方法。 二、实验原理 1．显微测微尺的使用 镜台测微尺：表示绝对长度，长1 mm，分成100小格，每小格为0.01mm。不被用来直接测量，而是用它来校正目镜测微尺，故其质量对所测微体影响极大。 目镜测微尺：是一块比目镜筒内径稍小的有标尺的圆形玻璃片，标尺长10毫米、分为100格。需要镜台测微尺校正为绝对长度再测定细胞大小。 2．死活细胞鉴定:台盼蓝是一种低毒的活体染色剂，只能透过质膜受损的细胞或死细胞。 三、实验用品 1．试验材料： 洋葱内表皮细胞口腔上皮细胞、 （人的口腔上皮细胞是扁平、 多边形的，形状不很规） 2．试剂 0.2%台盼蓝溶液 3．仪器
细胞生物学实验教案大全
细胞生物学实验教案 【经典学习资料，收藏必备】
实验一、细胞形态结构与几种细胞器的观察 【实验目的】 在普通光学显微镜下识别细胞和细胞器的形态结构，掌握生物绘图的方法。 【实验原理】 细胞在形态上是多种多样的，有球形、椭圆形、扁平形、立方形、梭形、星形等。虽然细胞的形状各异，但是它们却有共同的基本结构特点，都由细胞膜（动物）、细胞壁（植物）、细胞质和细胞核组成。细胞中的各种细胞器，如线粒体、高尔基体、中心体、核仁、染色体等，一般经过一定固定染色处理后，大多数在光学显微镜下是可以看见的（图）。细胞器的形态结构在普通光学显微镜下与电子显微镜下所看到的结构有很大的差别。 （自拍图） （a）（b） （c）（d） 图 1 细胞形态结构 a. 柿胚乳细胞示胞间连丝； b. 马蛔虫受精卵分裂中期示中心粒； c. 兔的神经细胞中高尔基体； d.小鼠肝细胞线粒体 【实验仪器、材料和试剂】 1. 仪器：复式显微镜、擦镜纸 2．材料：洋葱根尖切片、小白鼠肝切片、兔神经节切片、马蛔虫受精卵切片3．香柏油或石蜡油、二甲苯 【方法与步骤】
一、洋葱根尖切片细胞的观察 先用低倍镜观察根尖的纵切面，注意分生区、伸长区、成熟区细胞的异同，然后再仔细观察细胞的形态结构，特别注意细胞的形状、大小，以及细胞壁、细胞核、核仁、细胞质、液泡的形态结构。 二、兔神经节细胞切片高尔基体的观察 先在低倍镜下找到兔神经节细胞，然后转用高倍镜观察，可看到细胞内淡黄色的背景上有黄褐色的细胞核，核的周围分布着许多深褐色的（硝酸银镀染）高尔基体，呈弯曲的线状，颗粒状，少量分散在细胞质。 三、小白鼠肝细胞切片线粒体的观察 先用低倍镜后用高倍镜观察，可见到许多肝小叶，每小叶有许多紧密排列成索状的多角形的肝细胞，细胞中央有大而圆的细胞核。这时，转用油镜观察，可见到细胞质内分布着许多被苏木精染成深紫色的线粒体，呈颗粒状和线状。 四、马蛔虫受精卵切片中心体的观察 1．取马蛔虫受精卵切片，在显微镜下找到充满子宫腔的受精卵，每个马蛔虫受精卵外围有一层较厚的卵膜，膜内有宽大的围卵腔，各围卵腔内有处在不同分裂期的卵细胞。找到分裂中期的细胞，在细胞中央被染成蓝色条状或棒状的结构，这就是染色体。在染色体两侧可见各有一个较小的，亦被染成蓝色的小粒，称中心粒。在中心粒的周围可见呈放射状的星丝。 实验一、细胞的显微测量 【实验目的】 掌握显微测微计的基本原理及使用方法。 【实验原理】 细胞长度、面积、体积的测量是研究正常的或病理组织细胞的基本方法之一。在显微镜下用来测量细胞长度的工具叫显微测量计，由目镜测微尺（ocular micrometer）和镜台测微尺（stage micrometer）组成，两尺要配合使用。目镜测微尺是放在目镜内的一直径为2cm圆形玻片上，里面有100等分格的刻度尺。每一小格表示的实际长度随不同的显微镜、不同放大倍数的物镜而不同。镜台测微尺是一块特制的载玻片，在它的中央由一片圆形盖片封固着一具有精细刻度的标尺，标尺全长为lmm，分为100等份的小格，每小格的长度为0.01 mm（10μm），标尺的外围有一小黑环，便于找到标尺的位置。显微测量时，先用镜台测微尺标定目镜测微尺每小格所表示的实际长度。在测量细胞时，移去镜台测微尺，换上被测标本，用目镜测微尺即可测得观察标本的实际长度。 【实验仪器、材料和试剂】 （一）仪器：显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、解剖剪、解剖镊、注射器、载玻片、盖玻片、试管、无菌采血针 （二）材料：血涂片 （三）试剂：生理盐水、瑞氏（Wright）染色液 【方法与步骤】
细胞生物学试验指导
细胞生物学实验指导 细胞生物学的发展总是依赖于技术和实验手段的进步,所以学习细胞生物学的技术和方法至关重要。 实验一普通显微镜及其使用（装片观察） 一、目的要求： 1、掌握显微镜的构造、油浸系的原理、使用方法、保护要点。 2、参观了解其他各类显微镜。 二、材料：普通光学显微镜及其他显微镜、细菌标本片、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 三、方法和步骤： 1、介绍普通光学显微镜的构造 机械部分：镜座、镜臂、镜筒、转换器、载物台、调焦螺旋。 光学部分：接目镜、物镜、反光镜、聚光器。 2、油镜的原理及使用方法 原理：油镜头的晶片细小，进入镜中的光线亦少，光线经聚光器，通过载玻片进油镜时，由于空气介质和玻璃介质的折射率不一样，光线因折射而损失，使视野更暗。在载玻片和油镜之间加上和玻璃折光系数相同的香柏油，光线直接进入镜头，不发生折射，视野明亮，便于观察。 3、如何维护显微镜：机械部分的维护，光学部分的维护。 4、注意事项： （1）观察油镜载片时，先在载片上有菌影的地方滴1-2滴香柏油，然后放载物台中央，眼侧面看，慢慢降低油镜浸入香柏油中，镜头几乎接触标本。再用左眼在接目镜观察，同时慢慢旋动粗螺旋提起镜筒至能模糊看到物象时，再转动微调螺旋，直至看清晰为止。注意镜头离开油，就不能看清，重新按刚才的步骤进行。 （2）油镜使用过后，立即用擦镜纸擦拭镜头，如油渍已干，则可用香柏油粘二甲苯擦拭镜
头，再用干净擦镜纸擦去二甲苯。 5、观察几种细菌标本片。 6、示教看相差显微镜和荧光显微镜。 四、作业及思考题： 1、油镜的原理是什么？ 2、光线强弱如何调节？与哪些部件有关？ 实验二、细胞膜的渗透性 实验目的 了解细胞膜的渗透性及各类物质进入细胞的速度。 实验原理 将红细胞放入数种等渗溶液中，由于红细胞对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促使水分进入细胞，引起溶血，由于溶质透入速度互不相同，因此溶血时间也不相同。 实验用品 一、器材 50ml烧杯, 试管（1～10cm）, 10ml移液管, 试管架。 二、材料 羊血。 三、试剂0.17mol/L氯化钠，0.17mol/L氯化胺，0.17mol/L醋酸胺，0.17mol/L硝酸钠，0.12mol/草酸胺，0.12mol/硫酸钠，0.32mol/葡萄糖，0.32mol/甘油，0.32mol/乙醇，0.32mol/丙酮。 实验方法 一、羊血细胞悬液 取50ml小烧杯一个，加1份羊血和10份0.17mol/L氯化钠，形成一种不透 明的红色液体，此即稀释的羊血。
细胞生物学实验教案
植物组织培养 一、实验目的 1、掌握植物细胞无菌培养技术。 2、了解不同激素对细胞的不同诱导作用。 二、实验原理 植物组织培养是20世纪60年代以来植物细胞生物学中发展起来的一项生物技术。它是借用无菌操作方法，培养植物的离体器官，组织或细胞，使其在人工合成的培养基上，通过细胞的分裂、增殖、分化、发育，最终长成完整的再生植株。 植物组织培养技术的研究，不仅具有重大的理论意义，而且在生产实践中也已显示了广阔的应用前景。组织分化与形态建成问题，快速繁殖与去除病毒，花药培养与单倍体育种，幼胚培养与试管受精，抗体突变体的筛选于体细胞无体系变异，悬浮细胞培养与次生物质生产以及超低温种质保存等方面的深入研究与实际应用，都必须借助植物组织培养技术的基本程序和方法，深刻理解植物细胞的全能性。 三、实验用品 1、材料 半夏无菌苗。 2、仪器 卧式灭菌锅、超净工作台、烘箱、培养箱或培养室。 3、用具 镊子、刀、牛皮纸、marker笔、棉线。 4、器皿 试剂瓶(50、100、1000ml)、三角瓶(100ml)、刻度吸管(0.5、1、5、10ml)、培养皿(直径9～11cm)。 1、药品与试剂 1).药品(见下表) 2).70％酒精 四、实验方法 1、培养基的配制 配制培养基前先要配制母液。母液分大量元素、微量元素、铁盐及有机物质四类。(各类成分浓度、用量详见下表)。 表1 MS培养基母液配制(单位：mg) 类别成分规定量称取量母液体积(ml) 扩大倍数 配1升培养基 的吸取量(ml) 大量KNO3 1900 19000 1000 10 100 NH4NO3 1650 16500
元素MgSO4·7H2O 370 3700 KH2PO4170 1700 CaCl2·2H2O 440 4400 微量元素MgSO4·4H2O 22.30 2230 1000 100 10 ZnSO4·7H2O 8.6 860 H3BO3 6.2 620 KI 0.83 83 Na2MoO4·2H2O 0.25 25 CuSO4·5H2O 0.025 2.5 CoCl2·6H2O 0.025 2.5 铁盐Na2-EDTA 37.25 3725 1000 100 10 FeSO4·7H2O 27.85 2785 有机物质甘氨酸 2.0 100 500 100 10 盐酸硫胺素0.4 20 盐酸吡哆素0.5 25 烟酸0.5 25 肌醇100 5000 1).大量元素母液(10倍液) 分别称取10倍用量的各种大量无机盐，依次溶解于大约800ml热的(60～80℃)蒸馏水中。一种成分完全溶解后再加入下一种，最后加水定容至1000ml后装入试剂瓶中，冰箱内贮存备用。 2).微量元素母液(100倍液) 分别称取100倍用量的微量无机盐，依次溶解于800ml重蒸水中，加水定容至1000ml。 3).铁盐母液(100倍液) 称取100倍用量的Na2-EDTA(乙二胺四乙酸钠)和FeSO4·7H2O溶于800ml重蒸水中，最后定容到1000ml。 4).有机物质母液(100倍液) 分别称取50倍用量的各种有机物质，依次溶解于400ml重蒸水中，定容至1000ml，装入棕色试剂瓶中，贮存冰箱备用。 除了上述四种母液外，培养基中经常附加的各种生长素和细胞分裂素也要配成母液贮存，临用时按浓度定量吸取加入。 5).生长素 如2，4－D、IAA、NAA等。准确称取20mg，先用2ml 95％乙醇溶解，然后加水，定容至20ml，浓度为1mg/ml，再放置冰箱内贮存备用。 6).细胞分裂素 如激动素(Kt)、6-卞基嘌呤(6-BA)。准确称取20mg，先用2ml的1mol/L HCl或NaOH溶解，然后加水，定容至20ml，浓度为1mg/ml，再放置冰箱内贮存备用。 2、1L培养基的配制与分装 1).取1000ml烧杯一只，加大量元素10倍母液100ml，微量元素100倍母液10ml，铁盐100倍母液10ml，有机物质100倍母液10ml。然后加水至800ml，加蔗糖30g，NAA终浓度0.25mg/L,6-BA0.75mg/L。待蔗糖充分溶解后用1mol/L的NaOH或HCl调酸碱度为pH5.8-6.0。 2).取一个250mL的烧杯，加200mL蒸馏水。煮沸后加8g琼脂条，待煮到一定境界后，液体为白色，
最新细胞生物学实验
第五章物质的跨膜运输与信号传递 一．教学目标：1深刻理解被动运输、主动运输和内吞外排的概念，以及物质跨膜运输的重要意义；2．理解细胞信号传递的主要特点，掌握甾类激素信号 通路、cAMP信号通路、磷脂酰肌醇信号通路和EGF受体信号通路的主 要环节。 二．重点：跨膜运输的方式和细胞通讯的信号通路。 三．难点：跨膜运输的机制。 四．授课方式与教学方法：讲授、讨论、多媒体辅助教学。 五．教学内容: 细胞膜是细胞与细胞外环境之间的一种选择性通透屏障，物质的跨膜运输对细胞的生存和生长至关重要。多细胞生物是一个繁忙而有序的细胞社会，这种社会性的维持不仅依赖于细胞的物质代谢与能量代谢，还有赖于细胞通讯与信号传递，以协调细胞的行为。 第一节物质的跨膜运输 一.被动运输（passive transport） ◆定义：通过简单扩散或协助扩散实现物质由高浓度向低浓度方向的跨膜转运。转运的动力来自物质的浓度梯 度，不需要细胞提供能量。 ◆类型：简单扩散（simple diffusion）、协助扩散（facilitated diffusion） ◆膜转运蛋白： ?1.载体蛋白（carrier proteins）——通透酶（permease）性质； 介导被动运输与主动运输。 ?2.通道蛋白（channel proteins）——具有离子选择性，转运速率高；离子通道是门控的；只介导被动运输膜转运蛋白通道蛋白(被动运输)膜转运蛋白 载体蛋白单运输 (被动运输+主动运输) 共运输 协同运输 对向运输 细胞膜上的运输蛋白： 载体蛋白：通过构象变化运输物质 通道蛋白：形成通道、运输物质 载体蛋白:膜上一类转运蛋白，可特异的、可逆的与某物质结合，通过构象变化将物质从膜的一侧运到另一侧。又称通透酶，与运输物质的结合与酶的动力学相似。 通道蛋白:形成亲水的通道，允许一定大小和一定电荷的离子通过。因运转的几乎都是离子，又称离子通道. 通道蛋白形成通道：
细胞生物学实验
细胞培养基本理论 一细胞培养概述 细胞培养（cell culture）模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。 群体培养（mass culture）将大量细胞置于培养瓶中，让其贴壁或悬浮生长，形成均匀的单层细胞或单细胞悬液。 克隆培养（clone culture）即将少数的细胞加入培养瓶中，贴壁后彼此间隔距离较远，经过繁殖每一个细胞形成一个集落，称为克隆。 组织培养（tissue culture）指把活体的组织取出，分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。 特点：1.，组织不失散，细胞保持原有的组织关系。2，形成生长(cut growth)或形成由扁薄细胞构成的单层细胞培养物。3，在体外生长时，细胞间呈相互依存、互相影响的关系。 器官培养（organ culture）将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。 特点：1，培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1 年。2，观察受限，只能用组织切片的方法观察或用透射电镜、扫描电镜观察。 细胞培养优点：.1．活细胞：同时、大量、均一性、重复性；2．可控制：各种物理、化学、生物等因素可调控；3．研究方法多样：倒置、荧光、电子、激光共焦显微镜、流式细胞术、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记；4．应用广：不同物种、年龄、组织，正常或异常缺点：人工所模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同；当细胞被置于体外培养后， 生活在缺乏动态平衡的环境中，时间久了，必然发生变化。 三细胞的形态和类型由不同生长方式造成的差异 呈悬浮生长时，因生长在液体环境中，胞内渗透压高于周围液体环境，因此胞体基本呈圆形。呈贴附于支持物上生长的细胞，开始为圆形，很快过渡成扁平形，并逐渐恢复至原先的细胞形态. 细胞来源：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 细胞按生长方式：贴壁型细胞（Monolayer cells）；悬浮型细胞（Suspension cells）绝大多数有机体细胞属贴壁型细胞，只有少数细胞类型如某些肿瘤细胞和白细胞可在悬浮状态下生长。 按细胞形态(贴壁细胞）：成纤维型细胞；上皮型细胞；其它，不定型 贴壁型生长细胞或锚着依存性细胞 处于体外培养状态下的贴附生长型细胞在形态上表现单一而失去了在体内原有的某些特征。形态各异反映其胚层起源。如来源于内外胚层的细胞多呈上皮型；来自中胚层的则易呈成纤维细胞型。分为成纤维型细胞；皮型细胞；游走型细胞；多形型细胞 贴壁型细胞形态比较 成纤维型细胞：梭形或不规则三角形；中央有卵圆形核；胞质向外伸出长短不同的突起；中胚层间质起源 上皮型细胞：扁平不规则多角形；细胞中央有圆形核；紧密相连单层膜样生长；内、外胚层细胞如皮肤、表皮衍生物、消化管上皮等 游走型细胞：散在生长，一般不连成片；细胞质经常伸出伪足或突起；活跃的游走或变形运动；羊水细胞培养的早期 多形细胞型：难以确定规律和稳定的形态；如神经组织的细胞等
细胞生物学实验步骤
冻存细胞的复苏 1、于液氮罐中取出冻存管。 2、37℃水浴锅中摇动，使之快速融化。 3、超净台内酒精棉球擦拭，打开冻存管，吸出细胞悬液，注入离心管中，再滴加2倍培养液，混匀。 4、离心：1500转/分，3分钟，弃上清。 5、吸取2-3ml培养液加入到离心管中，吹打制悬，接种到培养瓶中，37℃培养。 组织块法培养骨骼肌细胞 1、将新生大鼠处死，再用酒精棉球擦拭其全身消毒，带入超净台内于肩关节和髋关节处剪取四肢（去爪），置培养皿中。 2、PBS液中，清理血污，剥去皮肤。 3、用PBS液洗涤两次，并剔除脂肪，结缔组织，血液等杂物。 4、用将肌组织从骨骼上剪切下来，PBS液清洗后转移至干净培养皿中。 5、加少量培养液，将组织剪成1mm3小块，用吸管将其转移到培养瓶，贴附与瓶底面。翻转瓶底朝上，将培养液加至瓶中，培养液勿接触组织块。入37℃培养箱静置0.5-1小时，轻轻翻转培养瓶，使组织浸入培养液中（勿使组织漂起），37℃继续培养。 贴壁细胞的传代和冻存 1、超净台中打开细胞培养瓶，用吸管将培养液吸出。 2、加入PBS液，使其覆盖培养瓶底部，轻轻摇动后倒掉。 3、加入消化液，以覆盖整个培养瓶底部，盖好瓶盖，于倒置显微镜下观察，待 见到细胞质回缩、细胞间隙增大后于超净台内倒掉消化液。 4、加培养液终止消化。 5、用吸管吸取培养瓶中的培养液，反复吹打瓶壁，制备细胞悬液。 6、将细胞悬液吸入离心管中，离心1500转/分，3分钟，倒掉上清。 7、加入3ml培养液于离心管中，吹打制悬。 8、取2ml细胞悬液进行接种后，剩余细胞悬液继续离心1500转/分，3分钟。 9、去上清，加入1ml冻存液，制悬，转移到冻存管，再按照-4℃1小时→-20℃ 2小时→-80℃2小时→液氮的顺序进行冻存。 细胞计数
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍
常用分子生物学和细胞生物学实验技术介绍 (2011-04-23 11:01:29)转载▼ 标签：分子生物学细胞生物学常用实用技术基本实验室技术生物学实验教育 常用的分子生物学基本技术 核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 固相杂交 固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。 斑步杂交（dot hybridization） 是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用限制性内切酶消化或凝胶电永分离核酸样品，可在同一张膜上同时进行多个样品的检测；根据斑点杂并的结果，可以推算出杂交阳性的拷贝数。该法的缺点是不能鉴定所测基因的相对分子质量，而且特异性较差，有一定比例的假阳性。 印迹杂交（blotting hybridization）
医学细胞生物学实验教学大纲
医学细胞生物学实验教学大纲 实验一显微镜的操作与使用 3学时 实验二有丝分裂 3学时 实验三鸡血细胞融合 3学时 实验二有丝分裂 【目的要求】 (1)掌握动、植物细胞有丝分裂过程各期的特点及主要区别。 (2)掌握有丝分裂标本临时压片技术。 【实验原理】 细胞经过生长和分裂而完成增殖的全过程称细胞增殖周期。不同分裂方式的细胞其增殖周期表现形式不同。 无丝分裂是低等生物增殖的主要方式，由于其过程简单而迅速，没有染色体组装、纺锤体形成等一系列变化，故又称直接分裂。在高等动物体内可发生在某些迅速增殖的组织f如口腔上皮)、体外培养细胞，创伤修复、病理性代偿组织(伤口附近、炎症)中。有丝分裂是高等生物体细胞增殖的主要方式，由于其过程较为复杂，细胞内发生一系列复杂的丝状结构变化(染色体组装、有丝分裂器的形成)后，细胞才进行分裂，故又称为间接分裂。 【实验用品】
(1)器材：显微镜、载玻片、盖玻片、眼科镊、培养皿、刀片。 (2)试剂：Carnoy固定液(甲醇：冰醋酸=3：1)，70％乙醇溶液，1mol／L HCl苯酚品红染液。 (3)标本：马蛔虫子宫切片、洋葱根尖纵切片。 (4)材料：洋葱根尖或水仙根尖。 【内容与方法】 (一)动物细胞有丝分裂观察 (1)标本制备：马蛔虫子宫石蜡切片，铁苏木精染色。 (2)观察：先在低倍镜下观察。在马蛔虫子宫切面上可见子宫腔内有许多近圆形的受精卵细胞，大多处于不同的分 裂时期。每个受精卵细胞外均围有一层厚的受精卵膜，它与受精卵细胞间的空隙为围卵腔。在有些受精卵细胞外表面或受精卵膜内可见有极体附着。注意在切片标本的几个子宫切片中寻找和观察处于间期和有丝分裂不同时期的细胞，转换高倍镜仔细观察它们的形态变化(图6---2)。 间期(interphase)：细胞质内有两个近圆形的细胞核，二为雌原核，一为雄原核。两个原核形态相似，不易分辨。细胞核内染色质分布比较均匀，核膜完整，细胞核附近胞质中有中心体(central body)存在。 前期(prophase)：雌雄原核相互靠近，核仁(nucleolus)消失，染色质逐渐浓缩成扭曲细丝状染色丝(chromatin fiber)，进一步缩短变粗，形成短棒状染色体(chromosomc)。前期核膜消失，两对中心粒(centri0le)分离，周围出现星射线并分别向细胞的两极移动。 中期(metaphase)：染色体排列在细胞中央，形成赤道板(equatorialplate)。由于细胞切面不同，此期有侧面观和极面观两种不同图像。侧面观染色体排列在细胞中央，两极各有一个中心体，其周围有星射线。中心体之间纺锤丝与染色体着丝点相连，这些结构总称为有丝分裂器。极面观可见六条染色体平排于赤道面上，此时染色体已纵裂为二，但尚未分离。 后期(anaphase)：纵裂后形成的子染色体在纺锤丝的牵引下分别向两极移动，成为相等的两群。细胞拉长，中部的细胞膜开始凹陷。 末期(telophase)：两极的子染色体逐渐解体、模糊，变成染色质态。核膜、核仁也相继重新出现，纺锤丝星射线消失，细胞膜的凹陷加深，最后横缢成两个子细胞。 (二)植物细胞有丝分裂观察 1．洋葱根尖纵切片的观察 (1)标本制备：洋葱根尖石蜡纵切片，铁苏木精染色。 (2)观察：取洋葱根尖纵切片标本．在低倍镜下观察，洋葱根尖由尖端向上可分为三个区域。 1)根冠区：位于尖端，细胞排列较疏松的区域。 2)生长区：位于根冠区上方，细胞方形或扁方形，排列紧密，细胞有强烈的分裂增生能力，大都处于分 裂期的各个不同时期。 3)延长区：位于生长区上方，细胞延长成长方形，细胞多处于分裂间期。先在低倍镜下找到生长区，换 高倍镜观察，辨认处于不同分裂时期的细胞。 间期：细胞核内染色质分布均匀，核形态明显，核内可见l一2个染色很深的核仁。