几种水质指示微生物检测方法的研究进展
几种水质指示微生物检测方法的研究进展
发表时间：2016-02-01T16:26:25.957Z 来源：《健康世界》2015年11期供稿作者：孙菊华帕提古丽.要力大西[导读] 新疆阿图什市疾病预防控制中心本文就大肠杆菌。产气荚膜梭菌及脊髓灰质炎病毒的检测方法、进展及前景做了综述
新疆阿图什市疾病预防控制中心 845350
摘要：检测水中指示微生物是估计污染状况的重要途径，本文就大肠杆菌。产气荚膜梭菌及脊髓灰质炎病毒的检测方法、进展及前景做了综述
关键词：大肠杆菌；产气荚膜梭菌；脊髓灰质炎病毒；检测方法
水中致病微生物种类繁多，现在还不能用单一方法来分离和鉴定水中微生物，也没有课从饮用水中定量分离出数量很少病原体的有效方法，所以，通常以水中指示微生物代替致病微生物进行检测，从而估计污染状况，已提出的指示微生物包括大肠杆菌，细菌总数，产气荚膜梭菌、大肠杆菌噬菌体及枯草芽孢黑色变种、脊髓灰质炎病毒，其中大肠杆菌一直被作为常规水质细菌学指标；产气荚膜梭菌为厌氧菌，用做指示菌有其独特之处；脊髓灰质炎病毒近年来微生物被提出有可能成为水病毒的较好指标，故本文选择这三种指示微生物，对他们的检测方法及其优缺点和进展进行综述。
1.大肠菌群
大肠菌群作为粪便污染及评价消毒效果的指标已有80余年的历史，目前各国水质卫生标准将其作为水细菌群的常规检测方法比较普及1.1 经典方法
1.1.1 多管发酵法将适量水样接种于一系列有培养基的试管中进行培养，根据产生阳性反应的试管数量来估计原始水样中菌的最大可能数（MPN），其中培养基主要有：矿质改良的谷氨酸盐培养基（MMGM），麦康凯氏胆盐肉汤。此法可用于各种类型的水，特别是浊度较高的水，而且所需设备价廉、简便，阳性结果易于辨认；又受固有误差的限制，在确定阳性结果之前还要做确证试验，故费事（约72h）、费力。
1.1.2 滤膜过滤法 100ml水样通过滤膜过滤后，将滤膜置于选择性培养基表面进行培养，然后计数并鉴定滤膜上的菌落。其中选择性培养基主要有：伊红美蓝琼脂、品红亚硫酸钠琼脂，此法能迅速的获得结果（48h）手续简便，尤其在检查大量水样时可现场过滤，将滤膜放于培养基上带回实验室，不仅可避免携带水样等繁琐手续，而且缩短时间；但此法不能分辨发酵乳糖的细菌是否产气，其次如果非大肠菌群生长过多，则会干扰大肠菌群生长，此外它不适用于混浊度高的水。
2.产气荚膜梭菌
产气荚膜梭菌属于梭状芽孢杆菌属，为革兰氏阳性短粗杆菌，专性厌氧，有荚膜，芽孢椭圆形，一般位于次极端，但很少见，由于产气荚膜梭菌的特性，作为水质污染微生物，但产气荚膜梭菌的检测方法得以解决。
2.1 经典方法
2.1.1 MPN 法将适量水样接种于一系列有培养基（增菌性梭状芽孢杆菌培养基）的试管中进行厌氧培养48h，根据产生阳性反应（培养管变黑）的试管数量来估算原始水样中的MPN此法可用于各种类型的水；但仅能提供水样中含菌量的估计值，易受固有误差限制，在确定阳性结果前还需做确证实验故费（约72h）费力。
2.1.2 倾注法将0.5ml水样接种于有选择性培养基的培养皿中，干燥倾注上层选择培养基，凝固后进行厌氧培养24h，然后计数并鉴定培养基上生长的菌落，选择性培养基主要有：SFP培养基，TSC培养基等，此法能较迅速地获得结果，较简单，尤其在大量水样检查时可现场完成，从而避免携带水样等繁琐手续，但不适于浑浊度较高的水。
2.2 其他方法
2.2.1 免疫学方法 Bartholomew[8]用ELISA方法检测产气荚膜梭菌，以兔抗体产气荚膜梭菌外毒素（CPE）血清与产气荚膜梭菌反应，结果表明该法较敏感（检出5ng/g）特异性强，而且仅需24h；但需要专业人员和特殊设备。Berry[9]提出用反相被动乳胶凝集试验（LAT）检测产气荚膜梭菌，试验结果发现LAT与ELIAS敏感性和特异性相似，却省时。无需特殊设备。但需孵育过夜。以后又有学者[10]报道用竞争性红细胞免疫法（ELIAS）法更敏感，（检出2ug/L），且方法为用免疫学检测环境水中产气荚膜梭菌提供条件。
2.2.2 分子生物学方法有报道[11]用合成的DNA探针检测肠毒性产气荚膜梭菌；Fach 和Guillon[12]用PCR法扩增产气荚膜梭菌的α-外毒素基因，凝胶电泳进行检测，发现PCR法特异性，敏感（检出250fg/g）快速（约4h）；产气荚膜梭菌外毒素基因已被克隆，核酸测序表达于E.coli中，这分子生物方法为水中产气荚膜梭菌的检测开辟了新途径，使敏感.特异、快速地检测中产气荚膜梭菌为可能。
脊髓水质炎病毒呈园颗粒，核心为单分子正链RNA，病毒RNA蛋白衣壳所包围，无囊膜，蛋白衣壳由60非共价键连接的衣壳子粒组成，构成一个方对称的20面体，PV在天然水中存在相对比较普遍[13]抵抗力较其它肠道病毒强。被提出可能作为水病毒污染的指示微生物，检测水中PV前一般要经过水样的浓缩，浓缩方法常用的有微孔滤膜吸附洗脱法，氢化铝吸附沉淀和聚乙二醇脱水透析法，它的检测方法主要有以下几种。
2.1 蚀斑试验法
繁殖20-40瓶Hep-2或RD细胞，将瓶中的液体吸出，加浓缩后的病毒悬液于每瓶细胞面上，并使其均匀分布，放置1-2h，然后倒置于35°C培养一周，观察蚀斑形成，进行计数，此法相对简单易做，可以定量，但耗费力，不经济。
检测水中指标微生物方法很多，一般分为经典方法。免疫学方法、分子生物学方法三类；经典方法历史悠久，比较熟悉且克精确计数，但费时费力；免疫学方法和分子生物学方法发展迅速，逐步应用，这两种方法都能缩短检测时间，但不能准确计数，分子生物学方法更敏感、特异、简便、随着新技术的不断发展，将会为水中指示微生物提供更迅速可靠的检测手段，从而更有效地确定污染状况。以保证水质卫生安全。
参考文献：
[1]Federal Register.Fed Regist，1990；55：22752-22756
养殖场饮用水微生物检测方法的建立
养殖场饮用水微生物检测方法的建立 养殖场饮用水质量直接关系到畜禽健康及生产水平。养殖场饮用水受到微生物污染会引起畜禽肠道疾病反复发作。养殖场饮用水受到微生物污染的途径很多：浅井水和地表水易受畜禽粪便污染；供水塔、贮水池及输水管道长期不清洗会造成微生物滋生；饮水线中残留有药物载体（淀粉、葡萄糖等）会成为细菌长期滋生的基质。养殖场应该定期检测饮用水的微生物指标，为开展饮水系统的清洁与消毒工作提供依据。 人的饮用水微生物指标由专业机构检测，依据 GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》，动物饮用水和人的饮用水微生物指标最好一致，但是养殖场饮用水易受污染，尤其是饮水线末端的水，因此养殖场饮用水微生物检测需求多，频繁送水到专业机构检测既不现实又不经济。笔者多次对养殖场饮用水进行微生物检测，总结出一套简便易行的检测方法，检测结果与GB/T5750.12-2006的标准方法有很好的一致性，适于在养殖场或基层畜牧兽医实验室推广应用。 1实验原理 1.1评价指标
评价水质清洁度有三个重要指标：菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群。总大肠菌群指自然环境中的大肠菌群，用提高培养温度的方法可以将自然环境中的大肠菌群与粪 便中的大肠菌群区分开，因此耐热大肠菌群的检出是水质被粪便污染的标志。 1.2指标限值 养殖场贮水池、水塔、饮水线入口三处水质的微生物学指标是：菌落总数 自来水的饮用标准及常见的检测指标 一、自来水能否饮用？ 自来水厂生产的水是符合饮用标准的。但是，这并不表明它是标准的饮用水。原因有二：（1）自来水在生产过程中用氯净化水虽可杀死病原微生物等有害物质，但加入氯本身又可造成新的化学污染。氯可与水中的有机物生成三氯甲烷，它是一种致癌物质。同时，氯还破坏营养，易导致心脏病。（2）在自来水的管网中，长距离管道运输，管道陈旧生锈，城市高楼水箱和楼群蓄水池不清洁或常年使用不消毒，都可造成二次污染。二次污染使细菌、病毒和藻类繁殖，再加上原有的氯及氯化物、铁锈、重金属、放射性物质、使水体浑浊、有异味，其害无穷。所以说，自来水并不是标准的饮用水。在各种污染日益加重的环境下，我们喝到身体里的水一定要有严格的标准。还水的本来面目，喝纯净水才符合人体的需要，并且喝生水比喝开水更有利于人的健康。因为开水失去氧气太多，喝开水不利于向人体供氧。可能有的朋友要说，我喝了一辈子自来水，身体不照样挺好的吗？其实不然，首先，人体的疾病是个积累和渐进的过程，如果您不饮或少饮不洁的水，身体肯定比现在更健康。其次，现在的水环境也不能与若干年前相比。以前的水污染主要来源于有机物和自然界的污物，主要污染物质为细菌和病毒，因此，经过煮沸后的自来水基本可以达到消毒的目的。而现代水污染我们以上已经讲到，主要是工业废水中的化学污染和重金属，而这些污染物通过把水煮沸的办法是不可能去除掉的。因此，煮沸的开水同样不是标准的饮用水。 二、为什么自来水有时发浑、发白、发黄 1．发浑的原因主要是因城市供水管道实发性爆管，在抢修过程中带入了泥沙。当打开供水阀门恢复通水时，泥沙随着水流的冲击，可能造成局部、短时的浑水现象，很快就会恢复正常。 2．发白的原因主要是供水管网中溶入了空气，经压力作用分解成微小气泡（凭肉眼观察不到），气泡的紧密排列就会感觉到流出的水呈乳白色，当在容器中静止数分钟后，随着气泡消失，水就会变清。这种现象不会影响到自来水水质。另一种原因，某些二次供水储水池（箱）微生物超标，投加了漂白粉产生一种轻微白灰色。漂白粉主要成分为Ｃａ（ＣｌＯ）２、Ｃａ（ＯＨ）２、ＣａＣｌ２等成分，主要有效成分是次氯酸钙：２Ｃａ（ＣｌＯ）２＋２Ｈ２Ｏ＝Ｃａ（ＯＨ）２＋ＣａＣｌ２＋２ＨＯＣｌ。当放水后，流出水的颜色是一种轻微白灰色，并能闻到轻微刺鼻氯气味，待静置数分钟后，有很少量微小颗粒沉淀物（一般情况不会有）。这种现象不会危害人体健康。如你感兴趣的话，可以用白色透明杯观察水的颜色。打开水龙头放水，将水流入杯中后观察水的颜色，如水发白，你可以观察到白色逐渐从杯底向上变清，这就是水中溶入了气体的现象。也就是水中微小气泡逐渐从杯底向上逸出，逐步变清，而且透明。如水中投加漂白粉，流入杯中水，排除气泡形成水发白外，观察杯中水仍然有轻微白灰色，能闻到轻微氯气味。 3. 发黄原因有两个。一是从用户总表后第一个阀门至用户家中的镀锌管道因长年使用或管材质量问题造成锈蚀而形成的自来水二次污染。这种现象在早晨尤为突出。二是使用二次供水设施水的用户，因产权单位未按规定定期清刷、清毒水池及水箱，容易造成自来水的二次污染。 三、常见水处理技术 随着人类物质生活的提高,环境污染的程度也日趋严重,特别是对水的污染尤为严重,为了人类的健康,而产生了净化水的概念,最原始的水处理方法是通过沉淀的方法,是混浊的水变清, 但这只能除去水中的泥沙等肉眼能见大颗粒,而对看不见的有害菌束手无策,进而人们用消毒 生活饮用水标准检验方法 微生物指标 1 菌落总数 1.1平皿计数法 1.1.1范围 本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。 本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定 1.1.2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 1.1. 2.1 菌落总数 standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数 1.1.3 培养基与试剂 1.1.3.1 营养琼脂 1.1.3.1.1 成分： A 蛋白胨10g B 牛肉膏 3 g C 氯化钠5g D 琼脂10g~20g E 蒸馏水1000mL 1.1.3.1.2 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43kPa（121℃，151b）灭菌20min，储存于冷暗处备用。 1.1.4 仪器 1.1.4.1 高压蒸汽灭菌器。 1.1.4.2 千热灭菌箱。 1.1.4.3 培养箱36℃±1℃。 1.1.4.4 电炉。 1.1.4.5 天平。 1.1.4.6 冰箱。 1.1.4.7 放大镜或菌落计数器。 1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。 1.1.4.9 灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。 1.1.5 检验步骤 1.5.1 生活饮用水。 1.1.5.1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL 已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。 设为首页 加入收藏 联系站长首页食品资讯政策法规生产技术质量管理检验技术仪器设备食品标准资料中心食品图库食品人才食品安全食品课堂专业英语食品专题食品网刊食品网址食品百科个人空间食品论坛 水质微生物 一、水质微生物及指示菌 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。 一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。 水体中的致病性微生物一般并不是水中原有微生物，大部分是从外界环境污染而来，特别是人和其它温血动物的粪便污染。水中常见的致病性细菌主要包括：志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、小肠结炎耶尔森氏菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等。 在实际控制中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对各种可能存在的致病微生物一一进行检测，而一般利用对指示菌的检测和控制，来了解水体是否受到过人畜粪便的污染，是否有肠道病原微生物存在的可能，从而评价水的质量，以保证水质的卫生安全。 目前，世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪便污染较好的指示菌。 我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌，GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准》规定，生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个。 在某些情况下，水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。 二、水质微生物检验方法 GB5750-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。 （一）细菌总数的检测： 微生物检验（完整版） 名解 微生物：是一群个体微小结构简单肉眼不能看见的微小生物的总称 种：亲缘关系较近的微生物群体在进化发育阶段上有一定的共同形态和生理特征 微生物学：生物学的一个分支是研究微生物在一定条件下的形态结构生理生化遗传变异特性及微生物的进化分类生态等生命活动规律以及微生物之间与人类动植物自然界互相关系的一门科学 抗生素：是由某些微生物在代谢过程中产生的能抑制或杀灭某些其他微生物和肿瘤细胞的微量生物活性物质 细菌素：是某些细菌菌株产生的一类具有抗菌作用的蛋白质 条件致病菌：正常菌群在宿主体内具有相对稳定性一般不致病 消毒：指杀死物体上的病原微生物但不一定能杀死细菌芽孢的方法 灭菌：指杀灭物体上所有的微生物的方法 防腐：指防止或抑制微生物生长繁殖的方法 无菌：指没有货的微生物的存在 质粒：是细菌染色体外的遗传物质也是环状闭合的双联DNA分子比染色体小存在于细胞质中可自主复制 突变：是指细菌遗传物质的机构发生突然而稳定的改变所致的变异现象可遗传给后代 基因转移：外源性物质由供体菌转入受体细胞内的过程 基因重组：供体菌的基因进入受体菌细胞并在其中自行复制与表达或矛受体菌DNA整合在一起的过程 病毒：是一类个体微小结构简单只含一种核酸只能在活的易感细胞内以复制方式增殖的 非细胞型微生物 复制周期：病毒的增殖被人为分成吸附穿入脱壳生物合成装配成熟与释放七个步骤的完整过程 缺陷病毒：是指因病毒基因组不完整或因基因某一点改变而不能进行正常增殖的病毒 顿挫感染：病毒进入宿主细胞若细胞缺乏病毒复制所需的酶能量和必要成分等则病毒无法合成自身成分不能够装配和释放子代病毒的现象 干扰现象：两种病毒感染同一种细胞时可发生一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象 人工自动免疫：是将疫苗等免疫原接种于人体刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答使机体获得特异性免疫力 人工被动免疫：是指注射含某种病毒特异性中和抗体的免疫血清等一系列细胞因子是机体立即获得特异性免疫 干扰素：是由病毒或干扰素诱生剂作用于中性粒细胞成纤维细胞或免疫细胞产生的一种糖蛋白 致病性：一定种类的病原微生物在一定的条件下能在特殊的宿主体内引起特定疾病的能力半数致死量：在规定时间内通过一定途径能使一定体重或年龄的某种动物半数死亡或感染需要的最小病原体数量或毒素量 急性感染：发作突然病程较短一般是数天或数周 局部感染：病原体侵入机体后局限就在一定部位生长繁殖引起病变的一种感染类型 毒血症：致病菌侵入宿主体后只在机体局部生长繁殖病菌不进入血液循环但其产生的外毒素入血引起特殊的毒性症状 败血症：致病菌侵入血流后在其中大量繁殖并产生毒性产物引起全身性毒性症状 内毒素血症：革兰阴性菌侵入血流并在其中大量繁殖崩解后释放出大量毒素也可有病灶 生活饮用水微生物检验方法和评价标准分析 发表时间：2018-01-12T16:04:32.283Z 来源：《中国误诊学杂志》2017年第23期作者：刘杰 [导读] 在本文中，笔者将针对生活饮用水中的卫生检测进行讨论，特别是针对总大肠菌群的两种检验方法进行讨论。 天津市宁河区疾病预防控制中心检验科 301500 摘要：生活饮用水对社会上生存的每一个人来说都是必不可少的，国家政府和相关部门要保障人们的生活质量水平和身心健康就必须要重视起用水安全问题，这样才能更好的维持社会的安全和稳定。在本文中，笔者将针对生活饮用水中的卫生检测进行讨论，特别是针对总大肠菌群的两种检验方法进行讨论，希望能够帮助民众在未来更加安全、放心的用水。 关键词：生活饮用水；微生物检验；方法和评价 伴随着社会经济建设的不断发展，人们的生活水准也有了质的飞跃。在当前这个时代，由于时代不断地进步，以及民众自身经济水平的提高，对生活质量也有了更高的要求。而生活饮用水的质量问题，就是民众最为关注的问题之一。这不仅仅是因为生活饮用水关系到民众日常的生活和生产，更是因为生活饮用水的质量直接关系到民众的身体健康。对于普通人来说，水是必不可少的。从生理学上来解释，水不仅仅是人体构成的重要物质之一，同时对于人体体温的调节以及人体的新城代谢都有着极为重要的作用。在这样的情况下，不仅仅是民众个体，政府自然而然也会重视起生活饮用水的质量问题。而我国政府，更是根据社会情况的不同，多次修改了生活饮用水的质量标准，希望能够为民众带来更加便捷、绿色的生活。 一般情况，生活饮用水都需要经过过滤、沉淀、消毒等步骤，让水中有害的微生物有效减少后再进行供水使用，避免造成人体上的不适。然而，从目前的情况上来看，水源污染、用水质量不合格、供水管道损害等情况时有发生，威胁到民众的用水安全。因此，在这样的情况下，如何提高生活饮用水质量，保障民众的用水安全就成了国家政府和相关部门最为重要的议题之一。而除开因为供水管道损害在供水过程中造成的水污染，加强生活饮用水微生物检验就成了保障用水安全的重要手段之一。就目前我国的情况来说，对于生活饮用水的质量需要达到在2006年底由卫生部和国家标准化管理委员会修订并于2007年7月1日全面实施的《生活饮用水卫生标准》（GB5749-2006）的要求。新的《生活饮用水卫生标准》对于水质的要求更加严格，水质指标从原来的35项增加至106项，总共增加了71个项目。而在这71个项目中，对于微生物指标也增加了4项，同时规定CFU/mL为100，并且绝对不能检出总大肠菌群。在本文中，笔者就将针对总大肠菌群的两种检测方法进行分析，判断出其中的差别。 一、多管发酵法 对管发酵法是针对民众生活饮用水中总大肠菌群的检测方法之一。此方法是根据总大肠菌群的特性来进行。由于总大肠菌群属于革兰氏阴性无芽胚杆菌，因此当培养温度达到37摄氏度的时候，如果进行24小时的培养，那么就会发酵乳糖并产出酸和糖，同时还具有厌氧和需氧的特性。 （一）实验器材 冰箱、灭菌试管、灭菌吸管、载玻片、试管（带试管塞）、小倒管、试管架、量筒、酒精灯、恒温箱、移液管、吸耳球、接种环、蛋白胨培养液、EC培养液、烧杯、玻璃棒、电子天平、取样勺、标签纸、记号笔、灭菌锅、蒸馏水、洗瓶、其他辅助实验器材等（二）实验步骤 1）首先要在双料乳糖蛋白胨培养液以及单料蛋白胨培养液中放入不同量的水样。水样的量可选取10mL和1mL，而蛋白胨培养液分别需要10mL。在此之后，还需要采取1mL的水样与9mL的无菌生理盐水混合到一起。然后再将此溶液取1mL放进单料乳糖蛋白胨培养液中，并且对于每一种稀释度的样品进行5管接种。 2）在进行水样取样的时候，如果发现水源被污染的十分严重，那么就需要加大稀释度。而如果水样少于1mL的时候，那么在稀释的时候应当稀释10倍再进行接种。当然在接种的时候应当采取逐次递增的方式来进行稀释，稀释的时候还需要注意，所采用的吸管必须要是灭菌吸管。 3）在接种之后，就需要将其放入恒温为37摄氏度的恒温箱中进行培养，培养应当要持续24小时。24小时之后，需要对试管进行观察，看其中是否有酸和气的产生。如果没有产生酸和气，那么对于总大肠菌群的检测结果为阴性。如果有，那么还需要进行其他的操作来进行检验。 4）当发现试管中溶液产生了酸和气的时候，首先要将溶液放置于伊红美蓝琼脂板之中进行转种，并且在放入恒温箱中进行时间为24小时的培养。24小时之后对伊红美蓝琼脂板上的菌落进行观察并进行染色，随后再采用镜检的方式来查看其结果。如果证实为革兰氏阴性无芽胚杆菌，那么还需要使用乳糖蛋白胨培养液来进行培养，并且同样需要放置于恒温箱中度过24小时的培养期。如果发生了产酸气的现象，那么总大肠菌群结果则为阳性。 二、滤膜法 使用滤膜法对总大肠菌群进行检测，可以十分精确的检测出水样中的总大肠菌群。采用滤膜法主要是采用对水样过滤的方式来进行，其大致的操作方法就是通过对乳糖黏贴微孔滤膜，然后再在恒温箱中进行培养，通过观察是否有产酸产气的现象以此来检测出水样中的总大肠菌群。 （一）实验器材 0.45 μm 微米孔滤膜、分度吸管、恒温箱、电子天平、冰箱、显微镜、试管、酒精灯、锥形瓶、载玻片、抽滤设备、无齿镊子等其他辅助实验器材。 （二）实验步骤 1）采用滤膜法首先要做的就是灭菌，而灭菌时所常见的手法有两种，一种是滤器灭菌法，一种是滤膜灭菌法。滤器灭菌法是使用火焰进行高温灭菌，通常灭菌时间会需要20~25分钟。而滤膜灭菌法就是将滤膜加入烧杯之中，之后倒入蒸馏水，通过将水连续煮沸的方法来达到灭菌的目的，煮沸的次数需要连续3次。 2）在灭菌之后要做的就是对水样进行过滤。在进行水样过滤的时候需要用到灭菌滤膜和无齿镊子。将滤膜取出后放到无菌滤床上， 龙源期刊网 https://www.360docs.net/doc/2412856462.html, 生活饮用水中微生物检验分析 作者：牟驰谢明岐胡腊生 来源：《健康必读（上旬刊）》2019年第02期 【摘要】目的：研究居民生活用水中微生物情况，对生活饮用水的质量进行检测。方法：从2017年6月到2017年12月，对市民生活饮用水检测点进行采集124份水样，水质管 控半年后于2018年1月到2018年6月，对相同市民生活饮水检测点进行采集124份水样，根据水质检验标准结合实际情况对市民生活饮用水中微生物情况进行检验，对比同一检测点生活饮用水中微生物情况。结果：研究表明，检测治理前采集的124份水样，其中118份水样合格，合格率为（95.16%），检测水质管控采集的124份水样，其中123份水样合格，合格率为（99.19%），水质管控水样合格率显著高于治理前。对比两份采集水样中耐热大肠杆菌、总大肠杆菌和细菌总数，水质管控生活饮用水微生物检验结果明显高于治理前。其结果差异具有统计学意义（P 【关键词】生活饮用水；微生物检测；合格率； 【中图分类号】R47 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783（2019）02-0221-02 水在人类生活以及社会发展进程中起着至关重要的作用，人体组织中含70～80%水分，由于自然水资源中存在杂质、细菌、微生物等，如果直接饮用会引发人类机体一些疾病，所以，需要对大自然中水资源进行系统规范的治理之后才能成为居民生活用水。生活饮用水作为人类生活的基本需求，对居民日常生活意义重大[1]。近年来，由于社会快速发展的过程中，工业 水平日益发展，各类工厂不断增加，加之气候、环境变化的影响，水资源污染日趋严重[2]。 因此为了解居民生活饮用水中微生物情况，对市民生活饮用水检测点进行治理前后饮用水中微生物进行检测，具体检测报告如下。 1 资料与方法 1.1 一般资料： 从2017年6月到2017年12月，对市民生活饮用水检测点进行采集124份水样，为治理 前水样；经过半年水质管控后于2018年1月到2018年6月，对相同市民生活饮水检测点进行采集124份水样，为水质管控后水样，根据水质检验标准结合實际情况对治理前后市民生活饮用水中微生物情况进行检验。 1.2方法 为保障居民安全饮用水，有效治理应用水资源，参考世界卫生组织修订的《饮用水水质准则》以及充分考虑当地实际情况，定期检测生活用水中微生物情况。①水样采集，对生活饮用水中微生物情况进行检测分析，评价水质情况。首先需要对水样进行采集，确保水样具有代表 生活饮用水标准检验方法水样的采集与保存GB/T 5750.2-2006 1范围 本标准规定了生活饮用水及其水源水样的采集、样品保存和采样质量控制的基本原则、措施和要求。 本标准适用于生活饮用水及其水源水样的采集和样品保存。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本规范的条款.，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准.然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件.其最新版本适用于本标准。 GB 5749生活饮用水卫生标准 GB/T 12998水质采样技术指导 GB/T 12999水质采样样品的保存和管理技术规定 GB 17051 二次供水设施卫生规范 3采样计划 采样前应根据水质检验目的和任务制定采样计划，内容包括：采样目的、检验指标、采样时间、采样地点、采样方法、采样频率、采样数量、采样容器与清洗、采样体积、样品保存方法、样品标签、现场测定项目、采样质量控制、运输工具和条件等。 4采样容器 4.1应根据待测组分的特性选择合适的采样容器。 4.2容器的材质应化学稳定性强.且不应与水样中组分发生反应，容器壁不应吸收或吸附待测组分。 4.3采样容器应可适应环境温度的变化，抗震性能强。 4.4采样容器的大小、形状和重量应适宜，能严密封口，并容易打开，且易清洗。 4.5应尽量选用细口容器，容器的盖和塞的材料应与容器材料统一。在特殊情况下需用软木塞或橡胶塞时应用稳定的金属箔或聚乙烯薄膜包裹，最好有蜡封。有机物和某呰微生物检测用的样品容器不能用橡胶塞，碱性的液体样品不能用玻璃塞。 实验六水中细菌总数和大肠菌群的检测 摘要：本实验以测定公园河流水的细菌总数和大肠菌群的数量，来测定特定地点的水质情况。初步介绍了一种通用的方法来检测水源的健康指标，判定水体的质量。对该实验点的水源作出了定性的评价，以及关于试验中如何提高梯度重复的精度的分析。 关键字：河流水；细菌总数测定；大肠菌群；EMB培养 前言 各种天然水中常含有一定数量的微生物。水中细菌总数往往同水体受有机污染程度呈正相关，因而是评价水质污染程度的重要指标之一。细菌总数是指1mL水样中所含细菌菌落的总数[cfu/g(mL)]，可用稀释平板计数法检测。水中大肠菌群的数量可用来判断水源是否被粪便污染，并可间接推测水源受肠道病原菌污染的可能。 特征：G-无芽孢杆菌，兼性厌氧、在37℃24h内能发酵乳糖产酸、产气。 多管发酵法 初发酵：适当稀释样品，乳糖发酵培养，产酸产气； 分离培养：伊红美蓝（EMB）平板上划线分离，出现紫色、粉红色特征性菌落； 复发酵验证：挑取特征性菌落进行乳酸复发酵验证。 材料和方法 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基：用于水中细菌总数测定 牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5.0 g，琼脂8g，蒸馏水1000ml；pH 7.0 乳糖胆盐蛋白胨培养基：用于初发酵 1×：蛋白胨20g、牛胆盐5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL（调pH值后加）、水1000mL、pH 7.2－7.4 三倍浓缩液（3×）：除水以外，其余成分取三倍用量 分装：1×的培养基分装9ml/管，3×的培养基分装5ml/管或50ml/瓶，均装上德汉氏小管。灭菌条件：115℃，15min。 EMB培养基：用于大肠菌群菌落鉴定 脱水培养基，按说明书操作，水用量为90%。 水源：紫竹院河水 仪器：高压灭菌锅、无菌培养皿、试管、吸管、接种环、德汉氏小管、温箱、载玻片、酒精灯、显微镜等。 试剂：牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂粉，伊红美兰琼脂培养基、水、乳糖、0.04%溴甲酚紫水溶液、胆盐、革蓝氏染色试剂 具体实验步骤： 1），相关器械的灭菌操作，以及前往紫竹院取少量的样品水。 2），按照上述的配料，无菌操作配置培养基。 3），细菌总数的测定：取上述样品水，一次稀释10-1,10-2,10-3,3个浓度。对于每个浓度，取1ml稀释液加入冷却好的牛肉膏蛋白胨培养基中，立即混匀，每个浓度重复一次。将平皿倒置培养在37℃的温箱24h，计算平皿的细菌总数。 1．目的：使生活饮用水检查操作规范化、标准化。 2．范围：生活饮用水微生物限度检查 3．职责：生活饮用水微生物限度检查操作人员 4.引用标准：GB5749-2006 中国药典2015年版四部 5．内容 5.1主要设备、仪器及用具 5.1.1 生化培养箱、恒温水浴锅、0.45μm滤膜及薄膜过滤器、灭菌柜、乙醇灯等。 5.1.2玻璃器皿锥形瓶、培养皿（直径90mm）、量筒、试管、刻度吸管等。刻度吸管、量筒用前应洗涤干净。吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm适宜疏松的棉花，置不锈钢盒内。锥形瓶、量筒、试管均应加硅胶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃灭菌30 min，备用。 5.2操作步骤： 5.2.1需氧菌总数：采用薄膜过滤法处理。 5.2.2用10ml无菌水，润湿滤膜，取供试液10ml 2份，分别过滤；取出滤膜，菌面朝 上，贴于R2A琼脂培养基上； 5.2.3用10ml无菌水，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照； 5.2.4将上述计数平板倒置于30-35℃培养箱中培养5天，逐日观察菌落生长情况，点计 菌落数并报告； 标准规定：每1ml需氧菌总数不得过100cfu。 5.2.5菌数报告规则以1ml供试液的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1报告菌数（每张滤膜过滤1ml供试液）。 5.3耐胆盐革兰氏阴性菌标准规定：不得检出。 5.3.1菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌 种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。大肠埃希菌［CMCC（B）44102］ 铜绿假单胞菌［CMCC（B）10104］ 5.3.2菌液制备接种大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂培养基中，30一35 ℃培养18一24小时；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数不大于100cfu的菌悬液。 菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2-8℃可在24小时内使用。 5.3.3 操作步骤 5.3.3.1供试液制备和预培养取供试品10ml 3份，分别接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，制成1:10的供试液。一份作为供试品，一份加入不大于100cfu的大肠埃希菌菌悬液1ml，一份加入不大于100cfu的铜绿假单胞菌菌悬液1ml，作为阳性对照。取10ml灭菌水同法操作，作为阴性对照在20-25℃培养，培养约2小时。5.3.3.2 定性试验分别取上述10ml供试品的预培养物接种至100ml肠道菌增菌液体培养基中，30-35℃培养48小时，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上30-35℃培养24小时。如果平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰氏阴性菌；阳性对照应生长良好。 5．4大肠埃希菌 5.4.1 操作步骤 5.4.1.1 供试液的制备和增菌培养：取供试液100ml 2份，分别接种至1000m l的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，一份加入不大于100cfu 的试验菌做为阳性对照，在 30-35℃培养18-24小时， 5.4.1.2选择和分离培养：取上述培养物1mL接种至100mL 麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24-48 小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18-72小时，阳性对照应检出相应的控制菌。 5.4.1.3阴性对照试验取试验用的稀释剂，同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。 5.4.1.4结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上，有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，验证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上，没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性、判供试品未检出大肠埃希菌。 生活饮用水水质监测项目都哪八项？ 具体来讲，生活饮用水卫生标准可包括两大部分：法定的量的限值，指为保证生活饮用水中各种有害因素不影响人群健康和生活质量的法定的量的限值；法定的行为规范，指为保证生活饮用水各项指标达到法定量的限值，对集中式供水单位生产的各个环节的法定行为规范。 生活饮用水水质标准和卫生要求必须满足三项基本要求： 1．为防止介水传染病的发生和传播，要求生活饮用水不含病原微生物。2．水中所含化学物质及放射性物质不得对人体健康产生危害，要求水中的化学物质及放射性物质不引起急性和慢性中毒及潜在的远期危害（致癌、致畸、致突变作用）。 3．水的感官性状是人们对饮用水的直观感觉，是评价水质的重要依据。生活饮用水必须确保感官良好，为人民所乐于饮用。 生活饮用水水质标准共35项。其中感官性状和一般化学指标15项，主要为了保证饮用水的感官性状良好；毒理学指标15项、放射指标2项，是为了保证水质对人不产生毒性和潜在危害；细菌学指标3项是为了保证饮用水在流行病学上安全而制定的。 随着经济和工农业的迅速发展，化学物质对水的污染越来越引起政府和广大居民的关注，生活饮用水卫生标准更引起了有关部门的重视，为了和国际先进标准接轨，卫生部于2001年6月颁布了《生活饮用水卫生规范》，自2001年9月1日起实施。《生活饮用水卫生规范》是在《生活饮用水卫生标准》GB5749-85的基础上修改而成，该规范共包括生活饮用水水质卫生规范、生活饮用水输配水设备及防护材料卫生安全评价规范、生活饮用水化学处理剂卫生安全评价规范、生活饮用水水质处理器卫生安全与功能评价规范、生活饮用水集中式供水单位卫生规范、涉及饮用水卫生安全产品生产企业卫生规范和生活饮用水检验规范。《生活饮用水水质卫生规范》中水质指标共96项，常规检测项目34项，非常规检测项目62项，与《生活饮用水卫生标准》GB5749-85相比，增加和修改了某些指标，加强了对有机污染的监测，对人体健康危害大的指标限值更加严格。基本上是一个既符合国情，又与国际接轨的生活饮用水卫生规范。通过卫生部和各级卫生行政部门的宣传贯彻，目前已在全国范围内得到较好的落实。 今后广大人民群众可通过有关部门定期发布的饮用水水质公告，对照生活饮用水卫生标准或规范，随时了解饮用水水质状况，使饮用水卫生标准更贴近群众的生活，在保护人群身体健康，提高生活质量方面发挥重要的作用。 《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006） 随着经济的发展，人口的增加，不少地区水源短缺，有的城市饮用水水源污染严重，居民生活饮用水安全受到威胁。1985年发布的《生活饮用水卫生标准》（GB5749－85）已不能满足保障人民群众健康的需要。为此，卫生部和国家标 中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验方法微生物指标Standard examination methods for drinking water一Microbioloical parameters 1、菌落总数 1.1平皿计数法1.1.1范围本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定。1.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。1.1. 2.1菌落总数standard plate - count 加cteria水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落的总数 1.1.3培养基与试剂1.1.3.1营养琼脂1.1.3.1.1成分：A 蛋白陈10gB 牛肉膏3g C 氯化钠5g D 琼脂10g——20g E 蒸馏水1000ml1.3.1.2制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4一7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43 kPa (121℃，15lb）灭菌20 min，储存于冷暗处备用。 1.1.4仪器 1.1.4.1高压蒸汽灭菌器。 1.1.4.2干热灭菌箱。 1.1.4.3培养箱36℃士2℃。 1.1.4.4电炉。 1.1.4.5天平。 1.1.4.6冰箱。1.1.4.7放大镜或菌落计数器。1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。1.1.4.9灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等1.1.5检验步骤1.1.5.1生活饮用水1.1.5.1.1门以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注人灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照1.1.5.1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃士1℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样1 ml 中的菌落总数1.1.5.2水源水1.1.5. 2.1以无菌操作方法吸取lml充分混匀的水样，注入盛有9ml、灭菌生理盐水的试管中，混匀成1 : 10稀释液。1.1.5.2.2吸取I : 10的稀释液工ml注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成l ：10稀释液。按同法依次稀释成l : 1000 , l : 10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。1.1.5.2.3用灭菌吸管取未稀释的水样和2个——3个适宜稀释度的水样1ml，分别注入灭菌平皿内以下操作同生活饮用水的检验步骤。1.1.6菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。1.1.7不同稀释度的选择及报告方法1.1.7.1首先选择平均菌落数在30一300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例1）1.1.7.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30一300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如表1中实例2）若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（如表l中实例3）若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见表l中实例4）。1.1.7.3若所有稀释度的 生活饮用水中水中微生物的检验 发表时间：2011-05-31T15:18:53.950Z 来源：《中外健康文摘》2011年第8期作者：葛子龙[导读] 生活饮用水已经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少。 葛子龙 (黑龙江省安达市卫生局卫生监督所 151400) 【中图分类号】R123.1 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085 (2011)8-0254-01 【关键词】生活饮用水中水中微生物检验 生活饮用水已经过沉淀、过滤、加氯消毒等处理，含微生物很少，但当其水源水不洁或处理达不到要求时，仍然会含相当量的微生物甚至含有致病性微生物。供水管道破损及二次供水等环节也可能导致生活饮用水的污染。因此生活饮用水的微生物安全性日常检测是很重要的。我国生活饮用水水质标准(GB5749-85)中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100个/ml，总大肠菌群不得大于3个/L。细菌总数相关的检验方法为平皿计数法，总大肠菌群为多管发酵法和滤膜法(GB5750-85)。生活饮用水卫生标准和标准检验法修订版已在报批中(简称“报批稿”，下同)，“报批稿”中规定生活饮用水中细菌总数不得大于100cfu/ml，总大肠菌群和粪大肠菌群不得检出(0 MPN/100ml)。cfu即菌落形成单位(colony forming units)，MPN为最近似数。细菌总数相关的检验方法为平皿计数法，总大肠菌群和粪大肠菌群为多管发酵法和滤膜法。大肠菌群的测定结果采用了国际上通用的cfu/100ml(或 MPN/100ml)为单位，以利于与国外的测定结果具可比性。“报批稿”中还增加了粪大肠菌群(fecal coliform)的测定项。粪大肠菌群的基本性状与总大肠菌群相似，而且是总大肠菌群的一部分，但在44.5℃仍能生长，这又与总大肠菌群不同。粪大肠菌群细菌来源于人和温血动物的粪便。检出粪大肠菌群表明已被粪便污染，有可能存在其他肠道致病菌或寄生虫等病原体的危险。因此粪大肠菌被列为重要的卫生指标菌。 可疑污染的生活饮用水或疫区的生活饮用水有必要进行致病菌或病毒等相关致病性微生物的检验。 一样本采集 采集的水样必须具有代表性。在采集样品的整个操作过程中，必须注意无菌操作；采样容器需经过严格的灭菌；并保证在水样的采集、运送、保存过程中不受任何污染。在采取自来水样品时，先用酒精灯将水龙头烧灼灭菌，灭菌后把水龙头完全旋开，放水5～10min，待积留于水管中的水排净后再行取样。取井水及江、河、湖、水库等地面水水样时，应在距水面10～15cm深处采样。采集含有余氯的水样时，应在采样瓶内于灭菌前加入适量的硫代硫酸钠溶液(可加1ml 30g/L硫代硫酸钠溶液于500ml采样瓶中)以还原余氯。水样在运送保存时应避免阳光直射，最好使用棕色瓶。水样采集、运送和保存应有详细的记录，如应记录清楚采样地点、水样来源、采样人、采样时间、水温、pH值、保存条件、运送方式等。水样采集后应在4h内检验。 二细菌总数检验—平皿计数法(生活饮用水标准检验方法，GB5750-85) (一)材料与试剂 同水源水细菌总数检验。 (二)检验步骤 1.以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1ml充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15ml已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。 2.待冷却凝固后，反转平皿，使底面向上，置于36℃±1℃培养箱内培养24h，进行菌落计数，即为1ml水样中的细菌总数。 3.菌落计数及报告方法同水源水细菌总数检验。 (三)注解 同水源水细菌总数检验。 三总大肠菌群检验—多管发酵法(生活饮用水标准检验方法，GB5750-85) (一)材料与试剂 锥形瓶，其他同于水源水总大肠菌群检验-多管发酵法。 (二)检验步骤 1.初发酵试验：在2个各装有已灭菌50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的大试管或烧瓶中(内有倒管)，以无菌操作各加入水样100ml；在10支装有已灭菌5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的试管中(内有倒管)，以无菌操作各加入水样10ml，混匀后置于37℃恒温箱内培养24h。 2.平板分离及复发酵试验步骤均同水源水总大肠菌群检验——多管发酵法。 3.根据证实有总大肠菌群存在的阳性管(瓶) (三)注解 饮用水的大肠菌群检测目前仍沿用20世纪70年代的方法即接种量为300ml(100ml接种2管，10ml接种10管)。该法的实验结果与饮用水的标准相配合。由于接种的水样量大，故方法的精确度较高。检验注意事项见水源水总大肠菌群检验——多管发酵法。 参考文献 [1] 徐陆妹,陈荣乐.生活饮用水中氨氮检测方法的研究. 中国卫生检验杂志, 2010年03期. [2] 韩宏大.安全饮用水保障集成技术研究[D];北京工业大学;2006年. [3] 朱光灿.饮用水中微囊藻毒素降解机理与去除技术研究[D];河海大学;2004年. 生活饮用水标准检验方法-------测试题 第一部分 一、单项选择：(每题只有一个正确答案；请将正确答案填在()内) 1.以下哪个是生活饮用水标准检验方法（A） A.GB/T5750-2006 B.GB/T6682-2008 2.生活饮用水标准检验方法是（C） A.根据《生活饮用水卫生标准》内容 B.传承以《生活饮用水标准检验法》与《生活饮用水检验规范》（2001）为基础。 C,A+B 3.感官性状和一般化学指标不包括：(D) A.色度 B.浑浊度 C.肉眼可见物 D.铅 4.常规指标-毒理指标不包括：(D) A.汞 B.硒 C.氰化物 D.铜 5.水质的感官性状和一般理化指标是指(BCD) A.是对人体健康的直接定量影响的指标 B.指使人能直接感觉到的水的感官指标 C.是反映水质总体性状的理化指标 D.一般理化指标超标常常引起感官指标超标 6.以下有关水质微生物指标说法正确的是(ABCD) A.要评价水质卫生状况，需借助指示微生物判断样品污染程度，间接指示致病微生物有无存在的可能 B.水中菌落总数可作为评价水质清洁程度和考核净化效果的指标 C.大肠菌群指示水体是否存在肠道传染病菌可能性的指标 D.如果水样中检出大肠埃希氏菌或耐热总大肠菌群，说明水体可能已受到粪便污染发生，存在肠道传染病菌可能性，必须采取相应措施 7.适用于饮用水的检验方法的标准是(C) A.《生活饮用水输配水设备及防护材料卫生安全评价规范》（2001版） B.GB3838-2002《地表水环境质量标准》 C.GB/T5750-2006《生活饮用水标准检验法》 D.《生活饮用水集中式供水单位卫生规范》（2001版） 二、多项选择：(每题有多于一个正确答案；请将正确答案填在()内) 1.感官性状和一般化学指标包括：（ABCD） A.PH值 B.铝 C.铁 D.锰 2.常规指标-毒理指标包括：（ABCD） A.砷 B.镉 C.铬（六价） D.铅 3.常规指标-微生物放射性指标包括：（ABCD） A.菌落总数 B.总大肠菌群 C.耐热大肠菌群 D.总α放射性 三、判断题（你认为正确,请在括号中画T，你认为错误的画F） 1.生活饮用水标准检验方法是根据《生活饮用水卫生标准》内容，传承以《生活饮用水标准检验法》与《生活饮用水检验规范》（2001）为基础。（T） 2.感官性状和一般化学指标包括：色度、浑浊度、肉眼可见物。（T） 目的 本SOP制订饮用水的微生物检测检验操作规程。 职责 实验室管理人员负责确保实验室人员接受该规程的正确培训并执行该规程。相关实验室人员负责正确执行下述规程。 定义 微生物限度检查包括一般细菌和大肠埃希菌检查 程序/范围 A.仪器 B.培养基和缓冲液 PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 营养琼脂培养基 胆盐乳糖培养基 MUG培养基 麦康凯琼脂培养基 C.器具 D.培养基和缓冲液的配制 1. PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液 称取PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液16.09 g，放入装有1 L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121 ℃高压灭菌15分钟。 2.营养琼脂培养基 称取营养琼脂培养基33 g，放入装有1 L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121 ℃高压灭菌15分钟。 3. 胆盐乳糖培养基 称取胆盐乳糖培养基35.8g ,放入装有1L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121℃高压灭菌20分钟。 4. MUG培养基 称取MUG培养基23.4g ,放入装有1L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，115℃高压灭菌20分钟。 5. 靛基质试液 取对二甲氨基苯甲醛1.0g，加入95%乙醇95ml，充分振摇，使完全溶解后，取盐酸20ml徐徐滴入。 6.麦康凯琼脂培养基 称取麦康凯琼脂培养基55g ,放入装有1L纯化水的不锈钢锅内，搅拌加热煮沸至 完全溶解，分装至三角瓶或螺旋盖瓶，121℃高压灭菌15分钟。 E．操作程序 1.一般细菌的检验方法 a.取10 mL饮用水，置90 mL的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液中(制备双份)，摇 匀，以无菌操作将饮用水与缓冲液的混合液倒进无菌玻璃过滤杯中，打开真空泵进行过滤或者将混合液倒进HTY-100微生物限度检验仪中过滤。待样品经薄膜全部过滤完后, 滤膜分别菌面朝上贴于营养琼脂培养基平皿上，取pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液替代样品同法操作,做为阴性对照. b. 培养：细菌（营养琼脂培养基平皿）于30-35 ℃培养箱培养3天。 c. 标准：一般细菌每1mL不得过 100cfu。 2.大肠埃希菌的检查方法 a.增菌培养：供试品：取饮用水10ml接种至100ml的胆盐乳糖培养基（BL）中于30- 35℃培养箱培养18～24小时。 阳性对照：取饮用水10ml和1ml（10～100cfu）大肠埃希菌接种至100ml的胆盐乳糖培养基（BL）中于30-35℃培养箱培养18～24小时。 b.阴性对照：取PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液10ml接种至100ml的胆盐乳糖培养基 （BL）中于30-35℃培养箱培养18～24小时。 c.进一步培养：取上述供试品、阳性对照、阴性对照的培养物0.2ml，接种至含 5mlMUG培养基的试管内，同时用未接种的MUG培养基作本底对照。30-35℃培养箱培养。 d.于5、24小时在365nm紫外灯下观察，若MUG管内培养物呈现荧光，为MUG阳性； 不呈现荧光，为MUG阴性。 e.观察后，沿培养管的管壁加入数滴靛基质试液。液面呈玫瑰红色，为靛基质阳性； 呈试剂本色，为靛基质阴性。本底对照应为MUG阴性和靛基质阴性。 f.判定：如MUG阳性、靛基质阳性，判供试品检出大肠埃希菌;如MUG阴性、靛基质 阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。 g.如MUG阳性、靛基质阴性，或MUG阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培养基的 培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基的平板上，培养18～24小时。 h.若平板上无菌落生长或生长的菌落与下表所列的菌落形态特征不符，判供试 品未检出大肠埃希菌。若平板上生长的菌落与下表所列的菌落形态特征相符或疑 似，应进行分离、纯化、染色镜检和适宜的鉴定试验，确认是否为大肠埃希菌。自来水的饮用标准及常见的检测指标
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