(完整版)OMEGAdna提取说明书

材料与仪器：离心机（至少14000g）、1.5ml或2ml无核酸酶离心管、水浴锅、无水乙醇、氯仿、异戊醇、无酶水。

试验之前：先用absolute ethanol稀释DNA Wash Buffer Concentrate,每瓶DNA Wash Buffer Concentrate加80ml（200份装）

试验步骤：

1.使用mortar和pestle在liquid nitrogen中研磨样品（不超过50毫克），放入1.5ml microcentrifuge tube。

2.加350ulBuffer ML1和25ul Proteinase K,涡旋混匀，60℃孵育（最少30分钟），大多数孵育不超过4小时或者37℃孵育1晚。

3.裂解产物加350ul氯仿和异戊醇的混合溶液（24:1），涡旋混匀。10000g室温离心2min，转移上清液到1.5ml microcentrifuge tube，避免含有污染物和抑制剂的乳白色界面。

4.估计步骤3 supernatant体积，加等集体的Buffer MBL，涡旋15s混匀，70℃孵育10min。

5.加步骤3等体积的无水乙醇，涡旋15s混匀。（tips:300ul上清液+300ul Buffer MBL+300ul absolute ethanol）

6.把柱子和提供的2ml收集管装配好，加步骤5的溶液750ul，10000g 室内离心1min,倒掉被离心的液体，重复利用提供的2ml收集管。

7.把步骤5剩余的混合物按照步骤6的方法离心，但抛弃提供的2ml 收集管。

8.把柱子放在新的2ml收集管，加500ul HB Buffer,10000g，30s，第一次洗柱子。

9.重复利用2ml收集管，加700ul DNA Wash Buffer,10000g,1min,抛弃被离心的液体，重新利用2ml收集管。

10.重复步骤9，加700ul DNA Wash Buffer,室温15000g,2min（这一步关键是去除微量的乙醇，以防其感染下游的实验）。

11.把柱子放入1.5ml离心管，预热Elution Buffer60-70℃,加50-100ul到柱子内，室温下浸泡2min，10000g，1min离心。

12.使用50-100ul Elution Buffer,重复洗脱步骤，再次收集DNA样品。