4种常用药物对七彩神仙鱼的急性毒性试验

4种常用药物对七彩神仙鱼的急性毒性试验
4种常用药物对七彩神仙鱼的急性毒性试验

4种常用药物对七彩神仙鱼的急性毒性试验

1 材料和方法

1.1 药物厂家

选用的4种药物为:福尔马林(分析纯37%~40%甲醛水溶液,巨化集团公司试剂厂生产);高锰酸钾(化学纯,平湖化工试剂厂生产);敌百虫(90%的晶体,江苏武进兽药三厂生产);亚甲基兰(化学纯,上海试剂三厂生产)。

1.2 试验鱼

试验鱼为当年的七彩神仙幼鱼,体长2.5~3 cm,体高2.2~2.7 cm。试验前在室内水族箱内暂养3d 后挑选体健无病,规格基本一致的个体作为试验对象,试验期间不投喂。

1.3 试验条件

试验在60cm×30cm×45cm的水族箱内进行,试验用水为充分曝气后的自来水,每缸放水50 L。pH6.2~6.5,DO4~5mg/L,水温 28 ℃。

1.4 试验方法

在预试验的基础上,确定试验液的浓度区间,试验浓度按等对数间距设置5个浓度组和1个对照组,每组设2个重复。按表1 先配制好试验液。然后各随机放入七彩神仙鱼20尾,每24h换试验液1次,及时取出死亡个体。试验开始后,前8h做连续观察,然后记录24h,48h及96 h试验鱼的死亡个数和存率。

1.5 计算方法

利用直线内插法分别求算24及48h的半致死浓度(TLm24及TLm48),安全浓度

则按下述公式计算:安全浓度=TLm48×0.3/(TLm24/TLm48)2

2 结果

2.1.1 高锰酸钾浓度为 10 mg/L时, 3 h 后鱼体出现不安反应,游动无力, 5

h 后就出现死亡,12 h 死亡率达 50 %, 24 h 死亡率达 80 %, 48h 死亡率100 %。浓度为 6.69 mg/L时,经 12 h出现死亡, 24 h 死亡率为 30 %, 48 h 死亡率为 50 %, 24 h 死亡率为 100 %。浓度为 4.47、2.99 和 2 mg/L组 24 h 内均未出现死亡。

2.1.2 敌百虫浓度为 2 mg/L时, 2 h 后鱼体出现不安,少数鱼浮于水面打转而不能正常游动,呼吸缓慢,频率低, 3 h 后就出现死亡, 24 h死亡率达100 %。浓度为 0.95 mg/L时, 24 h死亡率为 20 %, 48 h 死亡率为 30 %,96 h 死亡率为60 %。浓度为0.45、 0.21和 0.1 mg/L组24 h 内均未出现死亡。

2.1.3 福尔马林浓度为 150 mg/L 时, 2 h 后对刺激反应迟钝,游动缓慢, 4

h 后就出现死亡,24 h 死亡率达100 %。浓度为113.98 mg/L时,24h 死亡率为 40 %, 48 h死亡率为 50 %, 96 h死亡率为 100 %。浓度为 86.60 mg/L 时, 24 h死亡率为 10 %, 48 h 为 20 %, 96 h 为 70 %。浓度为 65.81 mg/L 和 50 mg/L组 24 h 内均未出现死亡。

2.1.4 亚甲基兰浓度为 15 mg/L时, 4 h 后鱼体出现不安反应, 8 h 后就出现死亡, 24 h 死亡率达 80 %, 48 h 死亡率为 90 %, 96 h 死亡率为100 %。

浓度为 9.12 mg/L时, 24 h 死亡率为 30%, 48 h 死亡率为 45 %, 96 h 死亡率为80 %。浓度为 5.5 mg/L时 24 h 死亡率为 10 %。浓度为3.31 mg/L 和 2 mg/L组 24 h 内均未出现死亡。

4 种药物对七彩神仙鱼的急性毒性试验见表 2。

2.2 各种药物对七彩神鱼的半致死浓度和安全浓度

表 3 为各种药物的 24 h 半致死浓度(TLm24)、 48 h 半致死浓度(TLm48)及安全浓度。药物的毒性大小以 TLm值表示, TLm值越小,对七彩神仙鱼的毒性越高,依 24 h 半致死浓度 TLm的大小将各类药物对七彩神仙鱼的毒性排列如下:敌百虫>高锰酸钾>亚甲基兰>福尔马林。

3 讨论

3.1 在渔业生产上,鱼药种类繁多,不同种鱼对各种药物的敏感性也存在差异。许多学者曾研究了高锰酸钾、敌百虫、亚甲基兰、福尔马林对其它鱼类的毒性作用,但是对七彩神仙鱼这一名贵热带鱼的毒性研究较少。本试验表明敌百虫、高锰酸钾、亚甲基兰、福尔马林对七彩神仙鱼的安全浓度分别为:0.47、 1.47、 2.12和 31.41 mg/L,在试验的药物中晶体敌百虫最为敏感,安全浓度为 0.47 mg/L,敌百虫是在水产业中主要用于治疗鱼类的寄生虫病及浮游动物如枝角类和桡足类等。对七彩神仙鱼的安全浓度处于一般鱼类常用浓度0.2~ 0.5 mg/L范围,可以在生产中使用。

3.2 高锰酸钾一般在观赏鱼养殖中用于水体消毒和毒杀原生动物, 1.47 mg/L 的安全浓度对寄生虫毒杀效果较差,生产中一般加大浓度作为浸洗药物。

3.3 亚甲基兰一般在七彩神仙鱼感染小瓜虫病时作为治疗药物,但单独使用时并不理想,一般应加大药物浓度作短时间浸洗用。

3.4 福尔马林安全浓度较高为 31.41 mg/L,在生产上作为遍洒药物时,用药量较大,经济上不合算,因此一般情况下不作为泼洒药物,而只作为浸洗药物。

急性毒性(GB20592-2006)

化学品分类、警示标签和警示性说明安全规范急性毒性 GB20592-2006 化学品分类、警示标签和警示性说明安全规范急性毒性Safety rules for classification,precautionary labeling and precautionary statements of chemicals-Acute toxicity 前言 本标准第4章、第6章、第7章、第8章为强制性的,其余为推荐性的。 本标准与联合国《化学品分类及标记全球协调制度》(GHS)的一致性程度为非等效,其有关技术内容与GHS中一致,在标准文本格式上按GB/T 1.1—2000做了编辑性修改。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会(SAC/TC251)提出并归口。 本标准负责起草单位:天津出入境检验检疫局。 本标准参加起草单位:中国疾病预防控制中心、中化化工标准化研究所、浙江出入境检验检疫局。 本标准主要起草人:王利兵、李宁涛、尚为、冯智颉、刘绍从、张园、陈文。 本标准自2008年1月1日起在生产领域实施;自2008年12

月31日起在流通领域实施,2008年1月1日~12月31日为标准实施过渡期。 化学品分类、警示标签和警示性说明安全规范急性毒性 1 范围 本标准规定了化学品引起的急性毒性的术语和定义、分类、判定流程、类别和警示标签、类别和标签要素的配置及警示性说明的一般规定。 本标准适用于化学品引起的急性毒性按联合国《化学品分类及标记全球协调制度》的危险性分类、警示标签和警示性说明。 2 规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。 GB 6944—2005 危险货物分类和品名编号 联合国《化学品分类及标记全球协调制度》(GHS) 联合国《关于危险货物运输的建议书规章范本》 3 术语和定义 急性毒性acute toxicity 经口或经皮肤摄入物质的单次剂量或在24 h内给与的多次剂量,或者4 h的吸入接触发生的急性有害影响。

药物急性毒性试验LD50的方法

精品文档 药物急性毒性试验LD 50的方法 对全新结构的药物或中草药复方,先通过小批量动物的摸索,找出0%和100%估计致 死量(即Dmin和Dmax),再求出i值。 (1)用10倍稀释的药物浓度系列,用少量动物(每组2~3只),找出大致死亡范围。如: 上述结果提示,大致死亡范围为:50~500 mg/kg。 (2)再用1、2、4、8……等2倍稀释的药物浓度系列,每组4只,找出Dmin和Dmax。如: Dmax :当出现4/4死亡时,如其前一组为3/4死亡,则取4/4组的剂量为Dmax ;如前一组为1/4或2/4死亡,考虑到4/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率低于70%,为慎重 起见,可将4/4组的剂量乘以2作为Dmax。 Dmax=400 X 70% X 2=560 mg/kg Dmin :当出现0/4死亡时,如其后一组为1/4死亡,则取0/4组的剂量为Dmin ;如后一组大于1/4,考虑到0/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率高于70%,为慎重起见,可 将0/4组的剂量除以2作为Dmin。 Dmin=50 十70% 十2~ 35 mg/kg (3)本法用较少的动物和药物,寻找出正式实验时最高死亡率不低于70%,最低死亡率不高于30%点剂量范围在确定了Dmax和Dmin以后,可求得组间距(i值): lg Dmax-lgDmin i= ------------------------------ n-1 (4)以Dmin的对数为起点,向上退出n组动物的各组剂量的对数值,求出反对数即可得出各组的剂量值。 注意:①LD50测定中剂量组数的设计,除符合统计学要求外,还应根据预试验所提供 的药物的毒性情况而定。②一般而言,在实际工作中,设4~5个剂量组,组距以0.65~0.85 为宜。③小鼠每组10只(雌雄各半),大鼠不应少于6~8只。

小鼠的急性毒性试验

五种农药对小鼠的急性毒性试验 绪论 随着现代农业的飞速发展,农药的应用越来越广泛,在农林作物的病虫防治中,农药一直发挥着巨大作用,尤其是本世纪60-70年代,人们大量使用农药,几乎使粮食产量增长一倍,但随着农药长期的、大量的、不合理的使用,导致了对环境的严重污染并对人体健康产生极大的影响。它们对动、植物和人类的危害越来越严重。一方面它们可以直接进入生物体内引起急性、慢性中毒和畸变,同时还通过径流、排污、挥发等途径进入土壤、大气和水体,引起各种生态环境下生物的死亡,并通过食物链的富集影响人类的食品安全。目前,因农药使用与管理失控而引发的一系列水域环境污染以及食品安全等问题,已引起政府相关部门和业内学者的广泛重视。当前,随着有机氯农药的禁用,菊酯类和有机磷类等成为我国目前使用较广泛的农药。 《中华人民共和国农药管理条例》指明,农药是指用于预防、消灭或者控制危害农业、林业的病、虫、草和其他有害生物以及有目的地调节植物、昆虫生长的化学合成物或者几种物质混合物及其制剂。农药残留是指农药使用后残存于环境、生物体和食品中的农药及其衍生物和杂质的总称。动植物在生长期间、食品在加工和流通中均可受到农药的污染,导致食品中农药残留。 相关报道表明,农药利用率一般为10%,约90%的残留在环境中,过多地使用农药,大量未被利用的农药经过降雨、农田渗滤和水田排水等进入水体,同时,还有大量散失的农药挥发到空气中,最后汇入水域,沉降积淀在土壤中,通过农作物吸收和食物链进入人体进行累积,并对人体健康造成危害。目前中国一些食品,如茶叶、大米、肉、蛋等食品中农药残留量常超过规定标准,过多的残留量对人体健康会造成危害。为此,论述农药残留对人体健康的危害效应及其毒理机制和防治措施,以期对防治食品中农药残留对人体健康的危害提供理论依据。 在哺乳类实验动物中,由于小鼠个体小,饲养管理方便,生产繁殖快,质量控制严格,价廉可以大量供应,又有大量的具有各种不同特点的近交品系,突变品系,封闭群及杂交一代动物,小鼠实验研究资料丰富参考对比性强;更重要一点乃是全世界科研工作者均用国际公认的品系和标准的条件进行试验,其实验结果的科学性、可靠性、重复性高,自然会得到国际认可。 本文以百草枯、甲氰菊酯、乐果、草甘膦和敌敌畏五种常用农药为实验材料, 检测了它们对

急性毒性试验

试验目的:急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次(间隔6-8小时),观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应,为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计提供参考信息等。 一、啮齿类动物单次给药的毒性试验 (一)试验条件 1.动物品系:常用健康的小鼠、大鼠。选用其他动物应说明原因。年龄一般为7-9周龄。同批试验中,小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%.实验前至少驯养观察1周,记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。 2.饲养管理:动物饲料应符合动物的营养标准。若用自己配制的饲料,应提供配方及营养成分含量的检测报告;若是购买的饲料,应注明生产单位。应写明动物饲养室内环境因素的控制情况。 3.受试药物:应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。 (二)试验方法: 由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异,毒性也不同,有的很难观察到毒性反应,实验者可根据受试药物的特点,由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。 1.伴随测定半数致死量(LD50)的急性毒性试验方法。 2.最大耐受剂量(MTD)试验方法:最大耐受剂量,是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。 3.最大受试药物量试验方法:在合理的浓度及合理的容量条件下,用最大的剂量给予实验动物,观察动物的反应。 4.单次口服固定剂量方法(Fixed-dose procedure)。选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。 实验动物首选大鼠,给药前禁食6-12小时,给受试药物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感,首先用雌性动物进行预试。根据受试药物的有关资料,由上述四个剂量中选择一个作初始剂量,若无有关资料作参考,可用500mg/kg作初始剂量进行预试,如无毒性反应,则用2000mg/kg 进行预试,此剂量如无死亡发生即可结束预试。如初始剂量出现严重的毒性反应,那就用下一个挡次的剂量进行预试,如该动物存活,就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。每个剂量给一只动物,预试一般不超过5只动物。每个剂量试验之间至少应间隔24小时。给受试药物后的观察期至少7天,如动物的毒性反应到第7天仍然存在,尚应继续再观察7天。 在上述预试的基础上进行正式试验。每个剂量最少用10只动物,雌雄各半。根据预试的结果,由前面所述的四种剂量中选择出可能产生明显毒性但又不引起死亡的剂量;如预试结果表明,50mg/kg引起死亡,则降低一个剂量档次试验。

实验二 经口急性毒性试验

毒理学实验二经口急性毒性试验 一、实验目得 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LD50得试验设计原则 3、小鼠得经口灌胃技术 二、试剂与材料 1、实验动物: (1)动物品种:健康成年ICR小鼠,体重18g~22g (2)样品来源:首都医科大学实验动物部 2、器材:注射器(1ml)、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。 3、试剂:敌敌畏(1400mg/ml)、苦味酸染液(标记用)。 三、实验内容 1、健康实验动物得选择与性别鉴定 选择健康得雄性小鼠(健康标准:毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎,废弃。) 肛门与生殖孔距离:大者为雄性,小者为雌性 2、实验动物称重、编号与随机分组 选择体重在18-22 g得小鼠,采用随机分组得方法(动物按体重分为几个体重段,再从每个体重段分出各组动物),每组10只小鼠,用黄色得苦味酸饱与液标号1 ~9,10号小鼠不标记、 3、受试化学物溶液得配制 (1)确定灌胃量:0、1ml/10g (2)确定最高给药量,计算溶液浓度,估计给药总体积 (3)药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定,右手持灌胃器,插入动物口腔,沿咽后壁徐徐插入食道,深度为口腔至剑突得距离。 5、毒性体征得观察与LD50计算 (1)毒性体征得观察: 染毒后注意观察小鼠中毒得发生、发展过程及死亡数与死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间,记录死亡情况及时间,观察期为30 min (2)LD50得计算: a、实验各组剂量得确定:设5组,每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为: d为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用lgLD0依次加d,取反对数,即可得出各组剂量。 b、LD50得计算(见附件):

鱼的急性毒性试验

鱼的急性毒性试验 一、实验目的和要求: 通过本试验,熟悉和掌握鱼类急性毒性试验的设计、条件、操作步骤,以及试验结果的计算、分析和报告等全过程。 二、实验原理: 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏,当水体中的污染物达到一定程度时,就会引起一系列中毒反应,例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变直至死亡。在规定的条件下,使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液,实验至少进行24h,最好以96h为一个实验周期,在24h、48h、72h、96h时记录实验鱼的死亡率,确定鱼类死亡50%时的受试物浓度。鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效成都,也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 三、实验材料: 1.实验鱼的选择和驯养 12×6 小锦鲤鱼体长7-12cm 体宽3-5cm 体重 7-12g 不同浓度的苯酚(mg/L)0、24、48、96、192、384 2、实验仪器设备 (1)实验容器 实验容器一般用玻璃或其他化学惰性材质制成的水槽。容器体积可以根据试验鱼的体重确定,通常以每升水中鱼的负荷不得超过2g(最好为1g)。一些小型鱼类幼鱼可选择500ml 或1000ml烧杯为实验容器。容器的深度必须超过16cm,水体表面积越大越好。同一实验应采用相同规格和质量的容器。为防止鱼类跳出容器,可在容器上加上网罩。实验容器使用后,必须彻底洗净,以除去所有毒性残留物。 (2)其他 吸光光度计 3、实验用水:曝气水 四、操作步骤: 1、设置5个浓度组,1个空白对照组,选择不同浓度的苯酚(mg/L)0、24、48、96、 192、384。每个浓度放入12条小锦鲤鱼。采用直接投毒方式,将配制的苯酚溶液直接倒入水槽中,搅拌均匀。分别分为1、2、3、4、5、6组。染毒后观察其活动状况,并

实验二 经口急性毒性试验

毒理学实验二经口急性毒性试验 1、实验目的 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LD50的试验设计原则 3、小鼠的经口灌胃技术 二、试剂和材料 1、实验动物: (1)动物品种:健康成年ICR小鼠,体重18g~22g (2)样品来源:首都医科大学实验动物部 2、器材:注射器(1ml)、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。 3、试剂:敌敌畏(1400mg/ml)、苦味酸染液(标记用)。 3、实验内容 1、健康实验动物的选择和性别鉴定 选择健康的雄性小鼠(健康标准:毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎,废弃。) 肛门与生殖孔距离:大者为雄性,小者为雌性 2、实验动物称重、编号和随机分组 选择体重在18-22 g的小鼠,采用随机分组的方法(动物按体重分为几个体重段,再从每个体重段分出各组动物),每组10只小鼠,用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。 3、受试化学物溶液的配制 (1)确定灌胃量:0.1ml/10g (2)确定最高给药量,计算溶液浓度,估计给药总体积 (3)药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定,右手持灌胃器,插入动物口腔,沿咽后壁徐徐插入食道,深度为口腔至剑突的距离。 5、毒性体征的观察和LD50计算 (1)毒性体征的观察:

染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间,记录死亡情况及时间,观察期为30 min (2) LD50的计算: a、实验各组剂量的确定:设5组,每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为: d为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用lgLD0依次加d,取反对数,即可得出各组剂量。 b、LD50的计算(见附件): C、求半数致死量的95%可信区间 4、实验过程 1、人员分工:本次实习同学分两个大组(A组和B组),分别在不同实验室。每大组分5个小组,分别处理雌雄动物,每小组10只动物。 集体活动:1、 2、 3、 4、5 组各1人,进行受试物配制。 各小组活动: 每小组1人(共4人),进行动物标记。(1-10号) 每小组1人(共4人),进行体重记录。(1-10号) 每小组1人(共4人),进行灌胃。(1-10号) 每小组1人(共4人),根据体重吸取受试物(0.1ml/10g)

什么是急性毒性试验

什么是急性毒性试验 急性毒性试验,其实就是一种毒性研究,当然对我们来讲对这种常识问题,很多人都不会去注重,因为毕竟不是作为学术研究的人,但是对这些常识有一些基本的常识了解,其实对我们的生活,也可以带来一定的帮助功效,下面就为大家具体介绍一下,什么是急性毒性试验。 急性毒性试验是指一次或24小时每多次染毒的试验,是毒性研究的第一步。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量(浓度),观察急性中毒表现,经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等,以提供受试物质的急性毒性资料,确定毒作用方式、中毒反应,并为亚急性和慢性毒性试验的观察指标及剂量分组提供参考。试验概述及染毒方法 概念和实验目的 急性毒性是指机体(人或实验动物)一次(或24小时内多次)接触外来化合物之后所引起的中毒效应,甚至引起死亡。

但须指出化合物使实验动物发生中毒效应的快慢和剧烈的 程度,可因所接触的化合物的质与量不同而异。有的化合物在实验动物接触致死剂量的几分钟之内,就可发生中毒症状,甚至死亡。而有的化合物则在几天后才显现中毒症状和死亡,即迟发死亡。此外,实验动物接触化合物的方式或途径不同,“一次”的 含义也有所不同。凡经口接触和各种方式的注射接触,“一次” 是指在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内。而经呼吸道吸入与经皮肤接触,“一次”是指在一个特定的期间内实验动物持续 地接触受试化合物的过程,所以“一次”含有时间因素。 以上就是关于急性毒性试验的内容介绍,希望通过这些介绍,每个人对这些常识,都有一定的认识和了解,虽然说很多时候在生活当中,我们运用不到,但是毕竟对这种常识有一定的了解,对自己身体的保护,也是比较有利的。

急性毒性试验[1]

实验一急性毒性试验(Acute Cytotoxicity Test) 一、实验目的: 了解生物材料急性毒性的含义,掌握急性毒性试验的基本方法。 二、实验原理: 医学上通常指的急性毒性试验是对药物而言的,并以半数致死量(median lethal dose, LD50)来衡量药物急性毒性的大小。所谓LD50是指某一药物使试验动物总体死亡一半的剂量,由于LD50是剂量反应曲线上最敏感的一点,而且有易测、准确和重复性好的优点,以此作为药物使用的安全指标。但对于生物材料而言,它与药物在体内的反应机理不同,大多数生物材料不能计算LD50,所以在试验过程中,通过对实验动物进行动物静脉或腹腔注射试验材料或其浸提液来观察实验动物体重在24、48和72h的变化、运动、呼吸状态以及死亡情况作为评价的指标,判定某种生物材料的急性毒性作用。 三、实验对象:小鼠 四、实验器材和药品: 聚甲基丙烯酸羟乙酯(PHEMA),蒸馏水,生理盐水(0.9%),注射器(1ml),量筒(10ml),小烧杯(50、100ml),高压消毒器。 五、实验步骤: 1.浸提液制备: 按评价标准裁剪试样,选择适当浸提温度制备浸提液。 2.将10只体重在17~23g间的健康、未做过其他实验的小鼠随机分为实验组和对照组,每组5只。 3.将浸提液按每公斤小鼠体重注射50ml于实验组小鼠尾静脉(50ml/kg),用生理盐水按同样方法作空白对照。 4.记录试样表面积和使用浸提液的容量;记录注射后24h、48h、72h两组小鼠的体重,观察其各种生物学反应情况。 六、评价方法:

2.结果判断标准: 2.1 在72h观察期内,注射材料浸提液的动物反应不大于对照组动物,则认为该材料符合急性毒性试验要求。 2.2在72h观察期内,注射材料浸提液动物中有2只以上出现轻度毒性症状或仅1只动物出现明显毒性症状死亡,或实验组5只动物的体重均下降,即使无其他中毒症状都要进行重复试验。 2.3 重复试验的动物数量应加倍,即每组需10只小鼠。浸提液应该重新制备。重复试验若符合2.1 项要求,则认为该材料合格。 2.4 如实验组动物有2只以上发生死亡或3只以上出现明显毒性症状或动物普遍出现进行性体重下降,则不需要重复试验,可认为该材料不符合急性毒性试验要求。 附:小鼠静脉注射方法 小鼠的尾部有三条静脉,一般采用两侧的静脉。把动物固定在暴露尾部的固定器内(可用烧杯、铁丝罩或粗试管邓物代替固定器)。拔去尾部静脉走向的毛,置尾巴于40~500C 温水中浸泡几分钟,或用75%乙醇棉球反复擦抹,使尾部血管扩张。行尾部注射时,尽量采用与尾部平行的角度进针,抽吸法不能验证是否穿刺成功,开始注药时应尽量缓慢,仔细观察,如果有白色皮丘出现,说明未刺入血管,应重新向尾部方向移动针头,再次穿刺,直至注射时无皮丘出现,才能正式注射药物,有时在注射药物的同时可见静脉血被进去的药物向前推进。 实验二致热源试验(hypersusceptibility test) 一、实验目的: 掌握致热源实验的基本方法。 二、实验原理: 致热源试验是通过被测材料或其浸提液注入实验动物体内,若浸提液存在热源物质,作用于单核细胞、巨噬细胞等靶细胞后,促使其产生内出性热源,作用于丘脑体温调节中枢,使动物体温上升,因此,观察动物的体温变化可用来判断该材料或其浸提液中所含热源量是否符合人体的要求。 三、实验对象:兔 四、实验器材和药品: 硅橡胶、蒸馏水、生理盐水(0.9℅)、注射器(50ml)、烧杯(150ml)、量筒(100ml)、高压消毒器、体温计(肛测)。 五、实验步骤: 1.浸提液制备: 1.1将所有与浸提液接触的容器、量器等玻璃器皿均应先置于干燥箱内250℃加热30min,或180℃加热2h去除热原物质。 1.2 浸提液所用灭菌0.9℅生理盐水应是热原检查合格者,试样浸提前应用同一批号灭

急性毒性试验

急性毒性试验 试验目的:急性毒性试验是在24小时内给药1次或2次(间隔6-8小时),观察动物接受过量的受试药物所产生的急性中毒反应,为多次反复给药的毒性试验设计剂量、分析毒性作用的主要靶器官、分析人体过量时可能出现的毒性反应、I期临床的剂量选择和观察指标的设计 提供参考信息等。 一、啮齿类动物单次给药的毒性试验 (一)试验条件 1.动物品系:常用健康的小鼠、大鼠。选用其他动物应说明原因。年龄一般为7-9周龄。同批试验中,小鼠或大鼠的初始体重不应超过或低于所用动物平均体重的20%。实验前至少驯养观察1周,记录动物的行为活动、饮食、体重及精神状况。 2.饲养管理:动物饲料应符合动物的营养标准。若用自己配制的饲料,应提供配方及营养成分含量的检测报告;若是购买的饲料,应注明生产单位。应写明动物饲养室内环境因素的控 制情况。 3.受试药物:应注明受试药物的名称、批号、来源、纯度、保存条件及配制方法。 (二)试验方法: 由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异,毒性也不同,有的很难观察到毒性反应,实验者可根据受试药物的特点,由下列几种实验方法中选择一种进行急 性毒性试验。 1.伴随测定半数致死量(LD50)的急性毒性试验方法。 2.最大耐受剂量(MTD)试验方法:最大耐受剂量,是引起动物出现明显的中毒反应而不产

生死亡的剂量。 3.最大受试药物量试验方法:在合理的浓度及合理的容量条件下,用最大的剂量给予实验动 物,观察动物的反应。 4.单次口服固定剂量方法(Fixed-dose procedure)。选择5、50、500和2000mg/kg四个 固定剂量。 实验动物首选大鼠,给药前禁食6-12小时,给受试药物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感,首先用雌性动物进行预试。根据受试药物的有关资料,由上述四个剂量中选择一个作初始剂量,若无有关资料作参考,可用500mg/kg作初始剂量进行预试,如无毒性反应,则用2000mg/kg进行预试,此剂量如无死亡发生即可结束预试。如初始剂量出现严重的毒性反应,那就用下一个挡次的剂量进行预试,如该动物存活,就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。每个剂量给一只动物,预试一般不超过5只动物。每个剂量试验之间至少应间隔24小时。给受试药物后的观察期至少7天,如动物的毒性反应到第7 天仍然存在,尚应继续再观察7天。 在上述预试的基础上进行正式试验。每个剂量最少用10只动物,雌雄各半。根据预试的结果,由前面所述的四种剂量中选择出可能产生明显毒性但又不引起死亡的剂量;如预试结果表明,50mg/kg引起死亡,则降低一个剂量档次试验。 试验观察:给受试药物后至少应观察2周,根据毒性反应的具体特点可适当延长。对每只动物均应仔细观察和详细记录各种毒性反应出现和消失的时间。给受试药物当天至少应观察记录两次,以后可每天一次。观察记录的内容包括皮肤、粘膜、毛色、眼睛、呼吸、循环、自主及中枢神经系统行为表现等。动物死亡时间的记录要准确。给受试药物前、给受试药物后1周、动物死亡及试验结束时应称取动物的体重。所有动物包括死亡或处死的动物均应进行尸检,尸检异常的器官应作病理组织学检查。固定剂量试验法所获得的结果,参考下表标准进 行评价。 单次口服固定剂量试验法结果的评价

实验二-经口急性毒性试验

毒理学实验二经口急性毒性试验 一、实验目的 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LD50的试验设计原则 3、小鼠的经口灌胃技术 二、试剂和材料 1、实验动物: (1)动物品种:健康成年ICR小鼠,体重18g~22g (2)样品来源:首都医科大学实验动物部 2、器材:注射器(1ml)、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。 3、试剂:敌敌畏(1400mg/ml)、苦味酸染液(标记用)。 三、实验内容 1、健康实验动物的选择和性别鉴定 选择健康的雄性小鼠(健康标准:毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎,废弃。) 肛门与生殖孔距离:大者为雄性,小者为雌性 2、实验动物称重、编号和随机分组 选择体重在18-22 g的小鼠,采用随机分组的方法(动物按体重分为几个体重段,再从每个体重段分出各组动物),每组10只小鼠,用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。 3、受试化学物溶液的配制 (1)确定灌胃量:0.1ml/10g (2)确定最高给药量,计算溶液浓度,估计给药总体积 (3)药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定,右手持灌胃器,插入动物口腔,沿咽后壁徐徐插入食道,深度为口腔至剑突的距离。 5、毒性体征的观察和LD50计算 (1)毒性体征的观察: 染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间,记录死亡情况及时间,观察期为30 min

组数 :各组死亡率:数相邻两组对数剂量之差:最大剂量的对数 P d :X )P P (d 21X lg 150i i k i i k LD ∑++-=)lg 96.1(lg lg 95%:1)P 1(P d lg 50501-50LD S LD ni ni LD S i i ±--=∑可信区间:实验动物数。标准误公式: (2)LD50的计算: a 、实验各组剂量的确定:设5组,每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为: d 为相邻两个剂量组剂量对数之差 利用lgLD0依次加d ,取反对数,即可得出各组剂量。 b 、LD50的计算(见附件): C 、求半数致死量的95%可信区间 四、实验过程 1、人员分工:本次实习同学分两个大组(A 组和B 组),分别在不同实验室。每大组分5个小组,分别处理雌雄动物,每小组10只动物。 集体活动:1、 2、 3、 4、5 组各1人,进行受试物配制。 1 lg lg d 0100--=组数LD LD

急性毒性试验方法

由于受试药物的化学结构、活性成分的含量、药理、毒理学特点各异,毒性也不同,有的很难观察到毒性反应,实验者可根据受试药物的特点,由下列几种实验方法中选择一种进行急性毒性试验。 1.伴随测定半数致死量(LD50)的急性毒性试验方法。 2.最大耐受剂量(MTD)试验方法:最大耐受剂量,是引起动物出现明显的中毒反应而不产生死亡的剂量。3.最大受试药物量试验方法:在合理的浓度及合理的容量条件下,用最大的剂量给予实验动物,观察动物的反应。 4.单次口服固定剂量方法(Fixed-dose procedure)。选择5、50、500和2000mg/kg四个固定剂量。 实验动物首选大鼠,给药前禁食6-12小时,给受试药物后再禁食3-4小时。如无资料证明雄性动物对受药试物更敏感,首先用雌性动物进行预试。根据受试药物的有关资料,由上述四个剂量中选择一个作初始剂量,若无有关资料作参考,可用500mg/kg作初始剂量进行预试,如无毒性反应,则用2000mg/kg进行预试,此剂量如无死亡发生即可结束预试。如初始剂量出现严重的毒性反应,那就用下一个挡次的剂量进行预试,如该动物存活,就在此两个固定剂量之间选择一个中间剂量试验。每个剂量给一只动物,预试一般不超过5只动物。每个剂量试验之间至少应间隔24小时。给受试药物后的观察期至少7天,如动物的毒性反应到第7天仍然存在,尚应继续再观察7天。 在上述预试的基础上进行正式试验。每个剂量最少用10只动物,雌雄各半。根据预试的结果,由前面所述的四种剂量中选择出可能产生明显毒性但又不引起死亡的剂量;如预试结果表明,50mg/kg引起死亡,则降低一个剂量档次试验。

药物急性毒性实验

实验一药物急性半数致死量(LD50)的测定 【目的】 了解药物半数致死量(LD50)测定的意义、原理,掌握半数致死量的测定方法和计算过程。【原理】 LD50是指在一群动物中能使半数动物死亡的剂量。由于实验动物的抽样误差,药物的致死量对数值大多在50%质反应的上下呈正态分布。在这样的质反应中药物剂量和质反应间呈S型曲线,S型曲线的两端处较平,而在50%质反应处曲线斜率最大,因此这里的药物剂量稍有变动,则动物的死或活的反应出现明显差异,所以测定半数致死量能比较准确地反映药物毒性的大小。 【实验材料】 1、动物:小白鼠,体重18-24g,雌、雄各半,实验前禁食12小时,不禁水。 2、药品:盐酸普鲁卡因,苦味酸。 3、器械:小鼠笼,天平,注射器(1mL),电子计算器。 【方法和步骤】 (一)预备实验 1、探索剂量范围:先找出100%及0%死亡的剂量,此即上下限剂量(D m及D n)。方法是先取出小鼠9-12只,每组3只,按估计量(根据经验或文献资料定出)给药,如3只小鼠全死则降低剂量一半,如全不死则增加剂量一倍,如部分死亡,则按2:1的比例向上、向下调整剂量,由此找出上下限剂量。 2、确定组数,计算各组剂量: 确定组数(G):可根据适宜的组距确定组数,一般分5-8个剂量组。 计算各组剂量:要求各组剂量按等比级数排列,在找出D m及D n和确定组数后,可按下列公式求出公比r: r 再按公比计算各组剂量D1,D2,D3,D4,D5……D m,其中D1=D n=最小剂量,D2=D1?r; D3=D2?r; D4=D3?r; D5=D4?r; ……D G=D G-1?r。r值一般以1.7~1.15之间为宜。 计算举例:已知某药在致死毒性实验中,Dm=187.5 mg/kg; Dn=76.8 mg/kg, 确定组数 G=5,求r及各组剂量。先代入公式求r=1.25,再计算各组剂量D1=Dn=76.8 mg/kg, D2=76.8?1.25=96 mg/kg, 依次计算D3,D4,及D G(D5)分别为120,150,187.5 mg/kg。

中药急性毒性实验简介

中药急性毒性实验简介 动物急性毒性实验研究目的:阐明药物的毒性作用;了解其毒性靶器官;长期毒性实验剂量参考;药效学研究的剂量的设计依据;临床实验起始剂量的参考 受试物: 用于申报新药的受试物应采用制备工艺稳定,符合临床试验用质量标准规定的中试样品。 如果由于给药容量或给药方法限制,可以采用原料药进行试验。 实验动物: 通常采用哺乳动物进行实验; 通常选用雌雄各半(临床为单性别用药除外); 年龄和体重:一般采用健康成年动物(如临床拟用于儿童,采用幼年动物); 初始体重不应偏离平均体重的20%。 给药途径: 可采用不同给药途径,但其中包括与拟临床给药途径一致的给药途径。 经口给药时必须禁食不禁水过夜。 给药容量: 小鼠一次不超过40ml/kg,大鼠一次给药容量不超过20ml/kg。 观察期限 一般为14天,如果毒性反应较慢应延长观察时间。 观察指标 动物体重变化,饮食,外观,行为,分泌物,排泄物,死亡情况,中毒反应等。 对死亡动物应及时进行大体解剖,器官异常时进行组织病理学检查。 结果处理和分析 根据所观察到的各种反应出现的时间、严重程度、持续时间等,分析各种反应在不同剂量时的反应率、反应程度。 判断出可能涉及的组织、器官和系统以及毒性靶器官等。 根据急性毒性实验结果,结合其他安全性实验、有效性实验等,分析其开发前景。 通常测定的毒性剂量 最大给药量,最大无毒剂量,最大耐受量,致死量(LD50,LD5)等。 通常测定的毒性反应剂量: 最大给药量: 单次或24h内2-3次(间隔4-6h一次)给予的最大给药剂量(合理的最大给药浓度,最大给药容量),观察动物出现的反应。 中药及复方制剂急性毒性研究中常用。

急性毒性实验参考

小鼠口服枸橼酸托烷司琼原料急性毒性试验 摘要 小鼠一次灌胃枸橼酸托烷司琼原料,连续观察14天。观察行为反应并记录死亡情况。死亡小鼠解剖可见心脏瘀血。存活者第15天全部解剖,肉眼检查主要脏器未见明显病变。其死亡率用Bliss法求得枸橼酸托烷司琼LD50 为418.29 mg/kg;95%可信限为390.74 ~447.79 mg/kg。 1.0 实验目的 观察受试物一次口服对小鼠产生的急性毒性反应和死亡情况。 2.0 受试物 2.1 名称:枸橼酸托烷司琼原料,白色粉末。 2.2 提供单位:中国科学院上海药物研究所朱友成组 2.3 批号: 9902 2.4 含量:99.7% 2.5 配制方法:将受试药物用0.5%CMC-Na 研磨配制成混悬液,并稀释成相应浓度,使各剂量组给药体积相等。 2.6 溶剂:0.5%CMC-Na 3.0 动物 3.1 来源、种属、合格证:昆明种小鼠60只,(♀30只,♂30只)由中国科学院上海实验动物中心提供,合格证:中科动管第005号。 经一周适应性饲养。饲料购自中英合资上海西普尔-必凯实验动物有限公司。自由取水,饲养温度为23±2℃。 3.2 体重:给药时体重为18-22克。 3.3 性别:雌雄各半。

3.4 每组动物数:按体重随机分组,实验时以每10只(♀5只,♂5只)为一组。 4.0 剂量 4.1 剂量设置:按预初实验结果,最高剂量定为570 mg/kg。以0.9的比例递减,即为570、513、461.7、41 5.5、374、33 6.6 mg/kg,6个剂量组。 4.2 每只动物接受容量:口服体积为0.2 ml/10g 体重。 5.0 给药途径 小鼠禁食6 小时一次灌胃给药。 6.0 方法 动物按体重随机分6组,每组10只,雌雄各半,每组的小鼠体重分布相似。给药后即观察动物各方面反应情况,死亡动物即进行解剖,检查内脏。记录每天动物的死亡数。 7.0 观察指标 7.1 观察期:14天 7.2 毒性反应:观察检查小鼠外观、行为、进食、粪便等情况,死亡动物进行尸解。第15天实验结束时,存活小鼠解剖,检查心、肺、肝、脾、肾等脏器病变。 8.0 结果 8.1 毒性反应及死亡原因:小鼠灌胃枸橼酸托烷司琼原料后,高剂量组(570、513 mg/kg) 药后5分钟左右安静,活动减少、趴地,15分钟左右全身抖动、抽搐死亡。大部分死亡发生在24 h内。死亡小鼠解剖肉眼检查发现心脏瘀血。存活小鼠第15天解剖,肉眼检查各脏器未见明显病变。

药物急性毒性试验LD50的方法

药物急性毒性试验LD50的方法 对全新结构的药物或中草药复方,先通过小批量动物的摸索,找出0%和100%估计致死量(即Dmin和Dmax),再求出i值。 (1)用10倍稀释的药物浓度系列,用少量动物(每组2~3只),找出大致死亡范围。如: 上述结果提示,大致死亡范围为:50~500 mg/kg。 (2)再用1、2、4、8……等2倍稀释的药物浓度系列,每组4只,找出Dmin和Dmax。如: Dmax:当出现4/4死亡时,如其前一组为3/4死亡,则取4/4组的剂量为Dmax;如前一组为1/4或2/4死亡,考虑到4/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率低于70%,为慎重起见,可将4/4组的剂量乘以2作为Dmax。 Dmax=400×70%×2=560 mg/kg Dmin:当出现0/4死亡时,如其后一组为1/4死亡,则取0/4组的剂量为Dmin;如后一组大于1/4,考虑到0/4组的剂量在正式实验中可能的死亡率高于70%,为慎重起见,可将0/4组的剂量除以2作为Dmin。 Dmin=50÷70%÷2≈35 mg/kg (3)本法用较少的动物和药物,寻找出正式实验时最高死亡率不低于70%,最低死亡率不高于30%点剂量范围在确定了Dmax和Dmin以后,可求得组间距(i值): lg Dmax-lgDmin i= n-1 (4)以Dmin的对数为起点,向上退出n组动物的各组剂量的对数值,求出反对数即可得出各组的剂量值。 注意:①LD50测定中剂量组数的设计,除符合统计学要求外,还应根据预试验所提供的药物的毒性情况而定。②一般而言,在实际工作中,设4~5个剂量组,组距以0.65~0.85为宜。③小鼠每组10只(雌雄各半),大鼠不应少于6~8只。

实验二经口急性毒性试验

实验二经口急性毒性试验 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020

毒理学实验二经口急性毒性试验 一、实验目的 1、掌握实验动物分组方法 2、测定LD50的试验设计原则 3、小鼠的经口灌胃技术 二、试剂和材料 1、实验动物: (1)动物品种:健康成年ICR小鼠,体重18g~22g (2)样品来源:首都医科大学实验动物部 2、器材:注射器(1ml)、灌胃针头、烧杯、吸管、容量瓶、烧杯、棉签、动物秤。 3、试剂:敌敌畏(1400mg/ml)、苦味酸染液(标记用)。 三、实验内容 1、健康实验动物的选择和性别鉴定 选择健康的雄性小鼠(健康标准:毛顺、毛顺、无分泌物、反应敏锐。动物出现圆圈动作可能为中耳炎,废弃。) 肛门与生殖孔距离:大者为雄性,小者为雌性 2、实验动物称重、编号和随机分组

选择体重在18-22 g 的小鼠,采用随机分组的方法(动物按体重分为几个体重段,再从每个体重段分出各组动物),每组10只小鼠,用黄色的苦味酸饱和液标号1~9,10号小鼠不标记。 3、受试化学物溶液的配制 (1)确定灌胃量:0.1ml/10g (2)确定最高给药量,计算溶液浓度,估计给药总体积 (3)药品称量及稀释 4、小鼠灌胃技术 左手固定,右手持灌胃器,插入动物口腔,沿咽后壁徐徐插入食道,深度为口腔至剑突的距离。 5、毒性体征的观察和LD50计算 (1)毒性体征的观察: 染毒后注意观察小鼠中毒的发生、发展过程及死亡数和死亡时间 按表格记录动物体征及出现时间,记录死亡情况及时间,观察期为30 min (2)LD50的计算: a 、实验各组剂量的确定:设5组,每组雌雄动物各10只。 剂量组距 d 为: 1 lg lg d 0 100--=组数LD LD

急性毒性试验总结

急性毒性试验总结 目前搜集到的水质的急性毒性试验相关标准有3个,分别是 《GB/T 15441-1995 水质急性毒性的测定发光细菌法》 《GB/T 16125-2012 大型溞急性毒性实验方法》 《GBT 13267-91 水质物质对淡水鱼(斑马鱼) 急性毒性测定方法》以下分别针对三个标准进行简单的整理归纳: 一、GB/T 15441-1995 水质急性毒性的测定发光细菌法》 1、适用范围:本标准适用于工业废水、纳污水体及实验室条件下溶性化学物质的水质急性毒性监测。 2主要仪器耗材、化学试剂 (1)、氯化汞(剧毒) (2)、明亮发光杆菌T3小种(冻干粉) (3)、生物发光光度计 (4)、2ml、5ml测试管(玻璃制品,与生物发光光度计配套) 3实验过程 主要是以氯化汞作为参考毒剂,进行样品的测试,后期需要绘制曲线将测得的数据转化成相应的氯化汞的浓度 4、结果表达 (1)可用氯化汞浓度来表达样品毒性 (2)可用EC50值表达样品毒性 此方法难点: 1、氯化汞为剧毒,次方法使用氯化汞次数较多,需要操作人员特

别注意。 2、对于后期的各种计算,需要多次试验进行总结整理 二、《GB/T 16125-2012 大型溞急性毒性实验方法》 1、适用范围:本标准适用于评价可溶性化学物质的毒性、工业废水及固体废弃物浸出液的综合毒性、废水的处理效果、地表水、地下水及水中沉积物的毒性 2主要仪器耗材、化学试剂 1、常规化学试剂即可 2、大型溞幼溞(受试生物) 3、常规现场测定仪器如PH计、溶解氧仪、温度计等 3实验过程 将样品稀释不同的浓度,事先通过预实验,确实出大型溞全部存活和全部死亡的浓度,在这个浓度范围内进行稀释,观察受试生物的情况 4、结果表达 以24hEC50或48hEC5来表示受试生物在一定时间内对大型溞运动能力(包括死亡)抑制的程度。检测化学物质样品时,以mg/L表示,当检测废水样品、固体废弃物或水中沉积物浸出液时,以百分数或ml/L表示。 此方法难点: 与其他生物毒性一样,对于受试生物的培养、繁殖、驯养及实验过程中对照组的存活率,都有一定的不确定因素。

鱼的急性毒性实验设计

鱼类急性毒性实验设计 一实验目的及意义 本实验通过观察在不同受试物浓度处理下,鱼的急性中毒表现和经过,了解和基本掌握 测定毒物的半数致死剂量/浓度(LD 50/LC 50 )的方法,了解受试物剂量和生物反应的关系及计 算表示方法。 通过鱼类急性毒性试验可以评价受试物对水生生物可能产生的影响,以短期暴露效应表明受试物的毒害性。鱼类急性毒性试验不仅用于测定化学物质毒性强度、测定水体污染程度、检查废水处理的有效程度,也为制定水质标准、评价环境质量和管理废水排放提供环境依据。 二实验原理 鱼类对水环境的变化反应十分灵敏,鱼类毒性试验在研究水污染及水环境质量中占重要地位。当水体中的污染物达到一定程度时,就会引起一系列中毒反应,例如行为异常、生理功能紊乱、组织细胞病变、直至死亡。在规定的条件下,使鱼接触含不同浓度受试物的水溶液,实验至少进行24h,最好以96h为一个实验周期,在24 h、48 h.72h、96 h时记录实验鱼的死亡率,确定鱼类死亡50%时的受试物浓度,半数致死浓度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和96h LC50表示,并记录无死亡的最大浓度和导致鱼类全部死亡的最小实验浓度。 本实验将经过曝气驯化的鱼(保证其初始状态一致),放入不同浓度的重铬酸钾溶液中进行96hr的观察,记录不同浓度组6、24、48、72和96hr的鱼的死亡率,得出剂量-死亡率曲线,求出不同时间的LC 50 。 三实验材料 1)待测化学物:使用实验室剂---重铬酸钾溶液K 2Cr 2 O 7 (Cr6+, 2000mg/L)溶液、曝气自来 水)以及助溶剂(丙酮)。 2) 实验动物:斑马鱼(从鱼市购买):用曝气后的自来水驯养3天,补充氧气以保证溶解氧的浓度。 3)实验常用仪器设备:温度控制仪分光光度计玻璃水槽抄网(尼龙制,对照和实验容器分用)气相色谱-质谱联用 pH计(PHS-3B) 溶解氧测定仪(JYD-1A) 水硬度计温度计电子分析天平烧杯(25,50ml)移液管(1,10ml)量筒等。 四实验步骤 1、实验动物的选择。 鱼是水生生态系统的重要组成部分,是人类主要的食物来源,所以,鱼类的急性毒理资料是常用的评价有毒化学物质和工业废水对水生生物危害的资料. 实验鱼类一般选择对污染物敏感,在生态类群中具有代表性,经济价值比较高,来源丰富、取材方便、遗传稳定,生物学背景资料丰富,大小适中,在室内条件下易于饲养和繁殖的种类。 而斑马鱼是国际标准化组织(ISO)推荐的实验鱼种,其个体较小,性成熟期短,繁殖能力强,价格便宜。被广泛的应用于生命科学的研究,也是实验室标准毒理学检验最常用的实验

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