苯酚的检测方法

1.0 目的苯酚含量的检测方法

2.0 范围常州亚邦精细化工有限公司技术部及各分厂化验室

3.0 责任技术部、质量负责人及化验员

4.0 程序

4.1 含量检测——化学法

4.1.1 原理：采用碘量法，利用苯酚与溴反应生成三溴苯酚，过量的溴与碘化钾反应生成碘，用硫代硫酸钠标准溶液滴定，计算出苯酚的含量。

4.1.2 仪器及设备

（2）碱式滴定管，50ml；

（3）三角烧瓶，500ml；

（4）分析天平，准确至0.0001g。

4.1.3 试剂

（1）溴标准溶液，0.1mol/L；

（2）硫代硫酸钠标准溶液，0.1mol/L；

（3）淀粉指示液，2%；

（4）碘化钾，分析纯；

（4）盐酸，分析纯；

（5）三氯乙烷，分析纯。

4.1.4 检测步骤

准确称取约0.1g试样，放入500ml碘量瓶中，加水30ml水，精密加入溴标准溶液40ml，加入5ml盐酸，封口，振荡30分钟，静至15分钟，加2g碘化钾，立即封口。充分振摇后，加入三氯乙烷1ml，用硫代硫酸钠标准液滴定至近终点时加3ml淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失为终点。

4.1.5 含量计算

苯酚的含量按下式进行计算：

%10001596

.0)((%)2211???-?=M V N V N X

式中 X ：苯酚含量（m/m ），%

N 1：溴标准溶液的浓度，mol/L ；

V 1：加入溴标准溶液的体积，ml ；

N 2：硫代硫酸钠标准液的浓度，mol/L ；

V 2：滴定时消耗的硫代硫酸钠标准液的体积，ml ；

M ：苯酚样品的称样量，g

0.01596:苯酚的毫摩尔当量。

4.1.6 允许误差

苯酚的两次平行测定结果之绝对差值应不大于0.2%，取其算术平均值作为检测结果。

4.2.1 原理

采用气相色谱法将苯酚与杂质组份分离，利用面积归一法计算试样中各组分的含量。

4.2.2 药品及试剂

（1）氮气，纯度不小于99.99%

（2）氢气，纯度不小于99.99%

（3）空气，经硅胶、分子筛充分干燥和净化

4.2.3 仪器及设备

（1）气相色谱仪

（2）色谱工作站

（3）微量进样器，1μl

（4）色谱柱

4.2.4 检测步骤

（1）仪器调整：按下列参数调整仪器：

汽化室温度：230℃

检测器温度：250℃

柱箱温度：200℃

氮气流速：20ml/min

氢气流速：40ml/min

空气流速：350ml/min

进样量：0.4μl

（2）进样检测：用微量进样器吸取样品0.4μl，快速进样，待最后一个组分出峰后停止检测。

4.2.5 结果计算

苯酚的含量按下式进行计算：

X-

)

(%)1W

式中X：苯酚的含量，%

X1：苯酚的面积百分含量，%

W：样品中水分的含量。%

4.2.6 允许误差

两次平行测定结果的绝对差值应不大于0.06%，取两次平行测定结果的算术平均值作为测定结果。

4.2.7 色谱柱条件及制备

柱1：内径3mm，长3m的不锈钢管，载体︰固定液=100︰12

柱2：内径3mm，长1m的不锈钢管，载体︰固定液=100︰3

固定液：聚乙二醇1500

载体：酸洗硅烷化铬姆沙铂0.18～0.25mm(60-80目)

固定相的制备：分别按柱1、柱2填充物配比，精确称取所需固定液于40ml的烧杯中，加入相当于载体体积1.2倍的三氯甲烷不断搅拌，使其溶解，然后将载体徐徐倾入，轻轻搅拌使其均匀地浸润，在40℃红外线烘箱内间歇搅拌，将其转入蒸发皿中，使溶剂慢慢挥发至干，最后在60～70℃下烘干，冷却后过筛填柱，1m柱填充量约2g，3m柱填充量约6g。

柱的老化：将已填充好的色谱柱安装于色谱仪上，老化时应暂时断开与检测器相连的一端，通氮气在210～220℃下老化6～8小时。

4.3 水分测定

按《常州亚邦精细化工有限公司分析标准操作程序（SOP）——微量水分检测方法-卡尔·费休法》中的规定进行，两次平行测定结果的绝对差值应不大于0.005%，取其算术平均值作为检测结果。

5.0 质量指标

11-紫外分光光度法测定苯酚标准曲线

紫外分光光度法绘制苯酚标准曲线一、实验目的掌握紫外光谱法进行物质定性、定量分析的基本原理； 2、学习紫外--可见分光光度计的使用方法。二、实验原理含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收。物质结构不同对紫外及可见光的吸收具有选择性。其中，最大吸收波长λ、摩尔吸收系数ε及吸收曲线的形状不同是进行物质定性分析的依据。由于在λmax处吸光度A有最大值，在此波长下A随浓度的变化最为明显，方法的灵敏度最大，故在紫外分光光度计上作苯酚水溶液（试液）的吸收光谱曲线，再由曲线上找出λmax，据此对物质进行定量分析。用紫外分光光度计进行定量分析时，若被分析物质浓度太低或太高，可使透光率的读数扩展10倍或缩小10倍，有利于低浓度或高浓度的分析，其方法原理是依据朗伯-比耳定律：A=εbc。三、主要仪器与试剂主要仪器：紫外-可见分光光度计；1cm石英吸收池2个；50mL比色管5支；5mL、1支；吸耳球1个。试剂：苯酚标准溶液：100mg/L；四、实验步骤 (1)、分析溶液的配制取5支50mL的比色管，用移液管分别准确加入0.5mL、1mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL浓度为100mg/L 的苯酚标准溶液，用去离子水稀释至25mL刻度，摇匀。实验数据记录于标准表中。 (2)、确定最大吸收波长取稀释后浓度为8 mg/L的苯酚标准溶液，在紫外-可见分光光度计上，用1cm石英吸收池，去离子水作参比溶液，在200~330nm波长范围内进行扫描，绘制苯酚的吸收曲线。在曲线上找出λmax1、λmax2。 (3)、标准曲线的制作各浓度的苯酚标准溶液，用1cm石英吸收池，去离子水作参比溶液，在选定的最大波长下，按顺序从低至高浓度依次测量各溶液的吸光度，实验数据记录于标准表中。以吸光度对浓度作图，作出标准工作曲线。五、数据记录及结果分析标准曲线图六、思考题紫外分光光度计的基本结构

酚氯仿法提取DNA的原理

作者: 渭水凡夫(站内联系TA)发布: 2013-04-06 最近在博客上看到的一篇可以作为入门级《分子生物学十万个为什么》和大家分享一下用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA 溶于水相。使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，使DNA与蛋白质分离开。加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。最后用95%乙醇沉淀DNA。溶解：将离心后除去RNA的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。加4毫升10％SDS溶液，使溶液的SDS浓度达到1％左右，边加边搅拌，放置60 ℃水浴保温10 分钟（不停搅拌），冷却。加固体氯化钠，使溶液氯化钠浓度达到1mol/L，充分搅拌10分

苯酚含量的测定

苯酚含量的测定一、实训目的 1.掌握KBrO3-KBr标准溶液的配制方法。 2.掌握溴量法测定苯酚的原理与方法。 3.掌握本实验空白实验的实际意义与方法。二、原理 KBrO3与KBr在酸性介质中反应,可产生相当量的Br2。Br2与苯酚发生取代反应,生成稳定的三溴苯酚,反应如下: KBrO3 + 5KBr + 6HCl = 3 Br2 + 6KCl + 3H2O 若加入过量的Br2与苯酚反应后,剩余的Br2用过量的KI还原,析出的I2可用 Na2S2O3标准滴定溶液滴定。 Br2 + 2KI = I2 + 2 KBr I2 + 2Na2S2O3 = Na2S4O6 +2NaI 三、试剂 1.苯酚试样。 2.固体KBrO3、KBr。 3.浓HCl。 4.KI溶液(100g/L)。 5.NaOH溶液(100g/L)。 6.Na2S2O3标准滴定溶液c(Na2S2O3)=0、1 mol/L。 7.淀粉指示液(5g/L)。 8.氯仿四、实训内容 1.配制KBrO3-KBr标准溶液c(1/6 KBrO3)=0、1 mol/L:称取0、5g(准至0、1g) KBrO3与2、5gKBr,放于烧杯中,加少量水溶解,稀释至150mL,搅匀备用。 2、苯酚纯度的测定准确称取苯酚试样0、2～0、3g(称准至0、0001g)放于盛有5mLNaOH溶液的250mL烧杯中,加入少量蒸馏水溶解。仔细将溶液转入250mL容量瓶中,用少量水洗涤烧杯数次,定量转入容量瓶中。以水稀释至刻度,充分摇匀。用移液管移取试液25、00mL,放于碘量瓶中,用滴定管准确加入KBrO3-KBr标准溶液30、00～35、00mL,微开碘量瓶塞,加入10mL(1+1)HCl,立即盖紧瓶塞,振摇1～2min,用蒸馏水封好瓶口,与暗处放置15min。微启瓶塞,加入KI溶液10mL,盖紧瓶塞,充分摇匀后,加氯仿2mL,摇匀。打开瓶塞,冲洗瓶塞与瓶壁,立即用c(Na2S2O3)=0、1 mol/L Na2S2O3标准滴定溶液滴定,至溶液呈浅黄色时加淀粉指示剂3mL,继续滴定至蓝色恰好消失即为终点。记录消耗Na2S2O3标准滴定溶液的体积V 。

[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理

[方案]酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理酚氯仿法提取DNA主要步骤: 1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。每个梯度脱水时间为5-10min 2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液(300μl)，研磨后再加入 300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。 3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床(56?,5h)。 4.加入等体积的Tris饱和酚(500μl)，摇匀(10min)。 5.离心:12000R， 7min，4?。离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。 6.吸取上层液体加入新的离心管。 7.配制Tris饱和酚:氯仿:异戊醇=25:24:1。 8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。 9.离心:12000R，7min，4?。 10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl(氯仿:异戊醇=24:1)。 11.离心:12000R，7min，4?。 12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20?冷冻的100%的酒精。-20?过夜。 13.将样品取出，12000R，7min，4?离心。 14.弃上清，留白色沉淀(DNA)，加400μl的75%的经过-20?冷冻的酒精，反复吹打溶解。

15.重复第14步骤2次(用75%酒精洗三次)。 16.提取DNA完成。溴氯仿法提取DNA的原理: 用酚抽提细胞DNA时，有什么作用, 使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚的优点:1. 有效变性蛋白质;2. 抑制了DNase的降解作用。缺点:1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly(A)RNA。2. 不能完全抑制RNase的活性。氯仿的作用, 氯仿:克服酚的缺点;加速有机相与液相分层。最后用氯仿抽提:去除核酸溶液中的迹量酚。(酚易溶于氯仿中) 用酚,氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么, 异戊醇:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子, 用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。原理:动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白(DNP)可溶于水或浓盐溶液(如1mol/L 氯化钠)，但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白(RNP)则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。

实验一、硫酸苯酚法测多糖含量

实验一硫酸－苯酚法测多糖含量 1．目的要求测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量 2．方法原理糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量，本方法可用于多糖、单糖含量的测定。 3．主要实验仪器及材料浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。４．掌握要点硫酸显色的安全、准确操作，单糖到多糖的转换系数。５．试剂配制 1）葡萄糖标准液的配制准确称取干燥恒重的葡萄糖100 mg，蒸馏水准确定容至100 mL的1 mg/L的葡萄糖液，摇匀后准确吸取10 mL该溶液，蒸馏水稀释定容至100 mL,即得100 ug/mL的葡萄糖标准液。2）90%苯酚液的配制准确移取苯酚90mL，蒸馏水定容至100 mL，即得90％苯酚液，棕色瓶中避光保存 3）6%苯酚液的配制将90%苯酚液稀释至6%，即一体积储存液对应十四体积纯水，临用现配。 6.实验步骤表1 标准曲线的制作步骤管号0 1 2 3 4 5 6 7 葡萄糖 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 苯酚液 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 浓硫酸 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 3.0 取8支干净的具塞试管按表2方法在操作，先在冰水浴中加入0.5ml的苯酚溶液，震荡摇匀后缓慢逐滴加入纯硫酸，以不放热或微量放热为宜，摇匀后恒温加塞沸水放置20min,取出凉水冷却10min,以0号作为空白调零,在最大吸收波长处（490nm）测定吸光度。以葡萄糖浓度X为横坐标（ug/mL），吸光度Y为纵坐标，从而来绘制标准曲线。用exceL软件求得回归方程 2）待测样品多糖的测定与计算将提取得到的待测多糖用蒸馏水溶解，定容至100 mL,取溶解后的溶液，按标准曲线中的测定方法，以样液为参比液，测定溶液的吸光值，按回归方程计算待测溶液的多糖浓度，注意乘换算系数。

邻氨基苯酚的生产工艺与技术路线的选择

邻氨基苯酚的生产工艺与技术路线的选择 2.1 邻氨基苯酚的生产工艺邻氨基苯酚的制备方法主要有铁粉还原法、硫化钠还原法、电解合成法和加氢还原法等四种方法。 2.1.1 铁粉还原法邻氨基苯酚传统的合成方法是以邻硝基苯酚为原料，经水解，铁粉还原制得。还原过程中三废污染严重，产生大量的铁泥，产品包在铁泥中使得产品收率不高。目前实验室和小型的企业生产多采用铁粉还原法。…… 2.1.2 硫化钠还原法 …… 2.1.2 电解合成法电解合成法与传统的化学法相比，具有产物纯，产率高，污染小等优点。关于邻氨基苯酚的电解合成，曾有报道用滴Hg电极在醇的酸溶液中电解还原邻硝基酚以制备邻氨基苯酚，但Hg电极实施不便。另外有一种新的电解合成方法，在碱性溶液介质中，以铜为阴极，电解还原邻硝基苯酚以制备邻氨基苯酚。该法有产物易分离，污染小的优点，在选定条件下，邻氨基苯酚的最大产率为97％，收率在90％以上。但是产率和产品纯度受电极电位的影响，而控制电极电位的稳定性仍在研究中。…… 2.1.3 催化加氢法目前工业生产邻氨基苯酚一般采用催化加氢法，即在高压或者常压加氢装置

中，Ni，Pd，或Pt催化下还原邻硝基苯酚，其工艺简单，收率、纯度高，成本较低，邻硝基苯酚催化加氢制取邻氨基苯酚时醇水最佳体积比为2：1．邻硝基苯酚液相催化加氢制取邻氨基苯酚产品的纯度98％以上，收率接近80％。但是设备投资大，适合于大吨位的工厂生产。…… 2.2 邻氨基苯酚的生产工艺比较表2.1 几种工艺技术比较表 2.3 邻氨基苯酚的生产工艺研究及进展催化加氢常用的催化剂有兰尼镍、Pd/C等。以液相加氢法，采用混合溶剂，不但克服了三废污染严重问题，还提高了收率。早期催化加氢法生产邻氨基苯酚，多以水为介质在强酸或强碱条件下反应。还原过程中由于邻硝基苯酚在水中的溶解度太小，因而以前的工作大多采用有机溶剂。但由于邻氨基苯酚在有机溶剂中溶解度较大，且很不稳定，因而收率一直不高。在强碱条件下邻硝基苯酚溶解良好，但催化剂活性下降，反应时间长，且邻氨基苯酚在碱性条件下极不稳定。在强酸性条件下邻硝基苯酚的溶解性不好，反应明显受传质阻力影响。反应到最后几乎不进行，但还有大量邻硝基苯酚未反应，且强酸性条件对反应设备腐蚀严重。后期工作大多数采用醇作反应介质，其中绝大部分以甲醇为溶剂。以醇为溶剂邻硝基苯酚溶解良好，反应速度很快，催化剂用量很少。但反应放热太剧烈，产率不高。…… 详细内容参见六鉴网(https://www.360docs.net/doc/3615872424.html,)发布《邻氨基苯酚技术与市场调研报告》。

报告紫外吸收光谱法鉴定苯酚及其含量的测定

华南师范大学实验报告学生姓名：杨秀琼学号：20082401129 专业：化学年级班级：08化二课程名称：仪器分析实验实验项目：实验类型：综合实验时间：2010/3/25 一实验目的: 掌握紫外光谱法进行物质定性分析的基本原理掌握紫外光谱法进行定量分析的基本原理学习UV1700型紫外可见分光光度计的使用方法。实验原理: 定性分析的原理:含有苯环和共轭双键的有机化合物在紫外区有特征吸收。物质结构不同对紫外及可见光的吸收曲线不同。最大吸收波长λmax，最大摩尔吸收系数εmax 及可见光的吸收曲线的形状不同是进行物质定性分析的依据。定量分析的原理:根据物质对紫外—可见光吸收的吸光度与物质含量符合朗伯—比尔定律：A=εbC 仪器与实验试剂: 1.仪器 UV1700型紫外可见分光光度计

1cm石英吸收池2个25mL容量瓶10个 10m移液管一支100mL烧杯一个洗耳球1个 2.试剂苯酚标准溶液100mg/L 苯酚待测液实验步骤: 一）定性分析 1. 分析溶液的制备取苯酚标准溶液1.0mL，放入25mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，则得到100mg/L 苯酚标准溶液。 2.鉴定在UV1700型紫外可见分光光度计上，用1cm石英吸收池，蒸馏水作参比溶液，在200－330nm波长范围扫描，绘制苯酚的吸收曲线。由曲线上找出λmax，并求出εmax 与其所对应的吸收度的比值，与苯酚紫外吸收光谱数据表对比，鉴定苯酚。二)定量分析 1. 标准曲线的制作取5个25mL的容量瓶，分别加入2.0，4.0，6.0，8.0，10.0mL的苯酚（100 mg/L），用去离子水到刻度，摇匀。用1cm石英比色管，去离子水作参比，在选定的最大波长下，分别测定各溶液的吸光度，以吸光度对浓度作图，作出工作曲线。 2. 定量测定废水中的苯酚含量

核酸提取常见试剂的作用原理

异硫氰酸胍强用力的蛋白质变性剂，能迅速溶解蛋白质，导致细胞结构破碎，核蛋白由于其二级结构的破坏消失而迅速与核酸分离。胍盐是破坏蛋白质三维结构的离液剂，在通常使用的蛋白质变性剂中作用最强的是异硫氰酸胍，它们可以使多数蛋白质转换成一随机的卷曲状态。含有强力的阴离子和阳离子基团，它们可以形成较强的氢键。在还原剂存在的情况下，异硫氰酸胍可以断裂氢键，而去垢剂，如SDS存在的情况下，可以破坏疏水作用。盐酸胍、尿素盐酸胍是一个核酸酶的强抑制剂，它并不是一种足够强的变性剂，可以允许完整的RNA 从富含RNase的组织中提取出来。 4-8M可断裂氢键，有两种可能机制：1变性蛋白和盐酸胍、尿素优先结合，形成变性蛋白-变性剂复合物，当复合物被除去，从而引起N-D反应平衡向右移动，随着变性剂浓度增加，天然状态的蛋白不断转变为复合物，最终导致蛋白质完全变性；2盐酸胍、尿素对氨基酸的增溶作用，能形成氢键，当浓度高时，能破坏水的氢键结构，结果盐酸胍、尿素就称为非极性残基的较好溶剂，使蛋白质内部的疏水残基伸展和溶解性加强，盐酸胍、尿素引起的变性往往是不可逆的。高浓度尿素使蛋白质变性并抑制Rnase活性十二烷基肌氨酸钠使蛋白质解体变性巯基试剂

1防止蛋白质或酶等（如辅酶A）分子中SH基团氧化成二硫键，2在某些酶反应过程中维持体系的还原环境。DTT，DDTE、巯基乙醇应用最广，谷胱甘肽也常应用，由于他是生物体内的还原剂，同时氧化后能被谷胱甘肽还原酶原位释放。DNA提取中，常使用巯基乙醇，维持缓冲液的还原环境，防止多酚类氧化，由于具有一定的毒性，浓度不应高于2%。巯基乙醇 β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的二硫键（肽和蛋白质分子中的半胱氨酸残基中的键）。 1 还原蛋白质二硫键，使Rna酶变性 2 抑制酚类氧化，若氧化，核酸会变成灰黑色，苯酚的氧化产物苯醌等氧化物引起磷酸二酯键的断裂及导致RNA和DNA的交联 3 保护蛋白质的巯基蛋白质提取中需要巯基乙醇还原二硫键，使RNA酶失活化学变性剂SDS、尿素、盐酸胍能破坏疏水键、盐键、氢键、范德华力使蛋白质变性但不影响肽键和二硫键，不能使蛋白质彻底变性加上还原剂巯基乙醇或DTT，能还原二硫键，使RNA彻底变性 DTT二硫苏糖醇刺激性气味要小很多，毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时，两者效果相近，但DTT价格略高一些。由于容易被空气氧化，因此DTT的稳定性较差；但

苯酚硫酸法测总糖

苯酚-硫酸法苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。 [试剂] 6%苯酚：先配置80%苯酚：80g苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20g水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。再配置6%苯酚：取75ul的80%苯酚于烧杯中，加入960ul水（每次测定均需现配），测定的时候就用6%的苯酚来测！浓硫酸 [操作] 1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。 2．样品含量测定：吸取2.0ml样品，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置30分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。可能有以下问题需要注意:

1。苯酚是否重蒸、其溶液浓度、是否现配现用 2。加入硫酸后是否加热、显色时间的确定 3。阁下所选波长：这个最为重要，因为已糖及其甲基化衍生物在490nm下有最大吸收峰，而戊糖、糠醛酸及其甲基化衍生物在480nm下有最大吸收峰。如果阁下的多糖样品不是单一品而是数种混合（纯化也难一达到100%纯），则波长一定要扫描过再做 4。加浓硫酸前要摇匀，加之后也要摇匀。苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。试剂 1．浓硫酸：分析纯，95.5% 2．80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。 3．6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。（每次测定均需现配） 4．标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。 5．15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。 6．5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。

MestReNova核磁谱图处理指南

MestReNova核磁谱图处理指南 1、单击Mnova图标运行Mnova。 2、进入File/Open菜单或使用键盘快捷键CmdO in Mac或单击工具栏的Open按钮。 3、找到您磁盘上需要处理的实验数据打开实验数据文件夹打开名为fid的文件。Mnova界面上将会出现在谱仪上已经经过初步处理的谱图。 4、标定化学位移。单击工具栏的Reference按钮选择要用来定标的峰。 PabloMonjePhD 25、调整相位和基线。单击工具栏的PhaseCorrection按钮和Baseline Correction按钮。 6、粘贴参数表格在谱图上。在菜单栏上按以下操作 View/Tables/Parameters。出现对话框之后单击Report按钮译者注如无特别需要此步骤可以不做。建议在谱图上手动添加样品编号其操作方法是通过菜单操作Annotate/Text 或按键盘T键在谱图的某一位置手动添加一个文本框加入样品编号。 7、标注各峰化学位移。单击工具栏的PeakPicking按钮自动标注各峰化学位移。译者补充如果您认为自动标注标出的峰太多或太少可以选择手动标注其操作方法是单击工具栏的PeakPicking按钮右边的小箭头在其中选择manual这样便可以3能过鼠标选择区域进行标注。 8、积分。单击工具栏的Integration按钮谱图将会被自动积分。积分数值显示在各峰的下面。详细的各峰区域和积分值列表可以通过菜单操作 View/Tables/Integrals将其显示出来。单击Report按钮可将其粘贴到谱图上。译者注如无特别需要将各峰区域和积分值列表粘贴到谱图上的步骤可以不做。

酚氯仿法提取DNA的原理

荧光原位杂交（FISH）探针的制备及其应用概述 1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征 2、染色体异常常见的类型 3、染色体异常的检测方法二、荧光原位杂交及其探针 1、荧光原位杂交的原理 2、荧光原位杂交的探针三、荧光原位杂交探针的制备和荧光原位杂交（按试验流程介绍）一、概述 1、克隆性染色体异常是肿瘤的特征 1914年德国遗传学家Boveri就提出染色体畸变与肿瘤起源相关，然而这还仅仅只是一个假说；1960年Nowell和Hungerford在7例慢性髓系白血病（chronic myeloid leukemia，CML）的患者中发现后来被称为费城染色体（Philadelphia chromosome）的微小染色体；1973年Rowley证实了Ph染色体是9号和22号染色体易位所致，这是人们在肿瘤中认识到的第一个染色体易位；目前，已经有11,500篇文献报道了55,600多种克隆性细胞遗传学异常。这些染色体畸变，尤其是染色体易位及其相应的融合基因在肿瘤致病的起始阶段有着重要的作用，无不说明克隆性细胞遗传学异常是肿瘤的特征，在肿瘤起源中起重要作用。

下图是各种疾病报告的克隆性染色体异常病例数

2、染色体异常的常见类型染色体异常指数目异常和结构异常两类：前者包括整条染色体数目的扩增和缺失；后者包括染色体易位、插入、倒置、区带的缺失或扩增等。下图是染色体数目异常

染色体结构异常 3、染色体异常的检测方法染色体异常的识别得益于二十世纪六十年代后发展起来的胰蛋白酶－姬姆萨染色和常规显带技术，使得常规筛查全基因组染色体异常和检测染色体核型改变成为可能。染色体显带是细胞遗传学分析技术中标准和常用的方法，但耗时且依赖于获得良好的分裂相，还难于分析复杂和隐匿的异常。

邻氨基苯酚理化性质与质量指标

邻氨基苯酚理化性质与质量指标 1.1 邻氨基苯酚的基本概况邻氨基苯酚又称2-氨基苯酚；邻羟基苯胺；邻氨基酚；邻氨基；英文名称：o-aminophenol;o-hydroxyaniline；2-Aminophenol；分子式：C6H7NO；分子量：109.13；结构式：图1.1 邻氨基苯酚的结构图 CAS RN：95-55-6；邻氨基苯酚是一个重要的有机合成中间体，主要作为有机合成和染料中间体。用于制硫化染料和偶氮染料，也用作毛皮染料（毛皮黄A），还用于生产酸性媒介蓝R、硫化黄棕、荧光增白剂EBF等。也是金、银的检定试剂。邻氨基苯酚是一种重要的化工中间体，广泛应用于染料、医药、印刷业以及生物领域。

1.2 邻氨基苯酚的理化性质邻氨基苯酚为白色针状晶体，久置时转变成棕色或黑色，纯品是白色针状结晶，分子式C6H7NO，分子量109.13，熔点172～177℃，沸点164℃(11 mmHg)，密度1.328，闪点168℃。溶于水、乙醚或酒精，微溶于苯。加热升华，易在空气中氧化，然后转变为棕色或黑色。遇三氯化铁变成红色。与无机酸作用生成易溶于水的盐。表1.1 邻氨基苯酚的理化性质基本性质和常数 CAS号148-24-3 中文名称邻氨基苯酚英文名称2-Aminophenol 别名2-氨基苯酚；邻羟基苯胺；邻氨基酚；邻氨基分子式C6H7NO 外观与性状白色针状晶体分子量109.13 熔点172～177℃ 沸点164℃ (11 mmHg) 密度 1.328 闪点168℃溶解性溶于水、乙醚或酒精，微溶于苯。主要用途用作分析试剂及重氮染料和硫化染料的中间体 1.3 邻氨基苯酚的安全、包装及运输等邻氨基苯酚吸入食入有害，LD50：1300mg／kg(大鼠经口)。属致敏物质，能引起支气管哮喘及接触过敏性皮炎，吸入过量的邻氨基苯酚粉尘，可引起高铁血红蛋白血症。邻氨基苯酚密闭操作，提供充分的局部排风。操作人员必须经过专门培训，

实验二--紫外-可见分光光度法测定水中苯酚含量

实验二紫外-可见分光光度法测定水中苯酚含量苯酚是工业废水中一种有害污染物质，需对水中酚含量控制。苯酚在270-295nm波长处有特征吸收峰，其吸光度与苯酚的含量成正比，应用Lambert－Beer定律可直接测定水中总酚的含量。一、实验目的 1．学会使用Cary50型紫外-可见分光光度计 2．掌握紫外-可见分光光度计的定量分析方法二、原理简介紫外-可见吸收光谱是由分子外层电子能级跃迁产生，同时伴随着分子的振动能级和转动能级的跃迁，因此吸收光谱具有带宽。紫外-可见吸收光谱的定量分析采用朗伯-比尔定律，被测物质的紫外吸收的峰强与其浓度成正比，即：其中A是吸光度，I、分别为透过样品后光的强度和测试光的强度，为摩尔吸光系数，b为样品厚度。由于苯酚在酸、碱溶液中吸收波长不一致（见下式），实验选择在碱性中测试，选择测试的波长为288nm左右，取紫外-可见光谱仪波长扫描后的最大吸收波长。 Cary50是瓦里安公司的单光束紫外-可见分光光度计。仪器原理是光源发出光谱，经单色器分光，然后单色光通过样品池，达到检测器，把光信号转变成电信号，再经过信号放大、模/数转换，数据传输给计算机，由计算机软件处理。三、仪器与溶液准备 1、Cary50型紫外-可见分光光度计 2、1cm石英比色皿一套 3、25 ml容量瓶5只，100 ml容量瓶1只，10ml移液管二支

配置250 mg/L苯酚的标准溶液：准确称取0.0250 g苯酚于250 mL烧杯中，加入去离子水20 mL使之溶解，加入0.1M NaOH 2mL，混合均匀，移入100 mL容量瓶，用去离子水稀释至刻度，摇匀。取5只25 mL容量瓶，分别加入1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL苯酚标准溶液，用去离子水稀释至刻度摇匀，作为标准溶液系列。将溶剂，标准溶液，待测水样依此装入石英比色皿。按测试程序的提示，依次放入样品室中进行测试。四、测试过程 1、确认样品室内无样品 2、开电脑进入Window 系统 3、点击进入Cary50 主菜单 4、双击Cary-WinUV图标 5、在Win-UV 主显示窗口下，双击所选图标“SCAN”以扫描测定吸收曲线：取上述标准系列任一溶液装进1cm石英比色皿至4/5，以装有蒸馏水的1cm石英比色皿作为空白参比，设定在220－350 nm波长范围内扫描，获得波长-吸收曲线，读取最大吸收的波长数据。 6、在Win-UV 主显示窗口下，双击图标“Concentration”进入定量分析主菜单 7、设定测试分析步骤: （l）单击Setup功能键，进入参数设置页面。在Wavelength处填入由步骤5获取的波长数据。（2）按Cary Control 、Standards、Options、Samples、Reports、Auto store顺序，分别设置好菜单中每页的参数。按OK回到“Concentration”界面主菜单。（3）单击View莱单，选择需要显示的内容。例如基本选项Toolbar，buttons，Graphics，Report。（4）单击Zero，提示“Load blank press OK to read” (放空白按OK读)，放入空白蒸馏水到样品室内，按OK测试，测完取出样品。（5）单击Start, 出现标准／样品选择页。选Selected for Analysis（选择分析的标准和样品）。此框的内容为准备分析的标准和样品。（6）按OK进行分析测试。依Presentstdl的提示：放入标准1然后按OK键进行读数。放标准2按OK进行读数。直到全部标准读完。（7）出现“Present Samplel Press OK to read”提示框，根据提示，放入样品1按OK开始读样品，直到样品测完。（8）可点击Save Method AS保存此方法，以后可以从Open Method调用此方法。从标准曲线读出水样中苯酚的含量（g／L），测试数据采用点击Save Data AS 保存。

酚氯仿法提取DNA实验报告

酚氯仿法和试剂盒法提取DNA实验报告一、实验目的实验原理：酚氯仿法：先从全血中分离白细胞，再通过蛋白酶K 消化，通过酚、氯仿的抽提,使DNA进入水相与蛋白质成分分开，在RNase作用下，降解RNA以纯化 DNA。蛋白酶K的重要特性是能在SDS和EDTA乙二胺四乙酸二钠存在下保持很高的活性。在匀浆后提取DNA的反应体系中晶SDS可破坏细胞膜、核膜晶并使组织蛋白与DNA分离晶EDTA则抑制细胞中Dnase的活性而蛋白酶K可将蛋白质降解成小肽或氨基酸晶使DNA分子完整地分离出来。氯仿-异戊醇溶液可以使核蛋白变性沉淀晶将核酸物质萃取出来再向萃取液中加入适量乙醇晶可使DNA析出。氯仿异戊醇抽提和乙醇沉淀方法在DNA纯化研究中非常常用晶氯仿-异戊醇抽提的原理是晶氯仿可使蛋白质变性并加速有机相与液相分层异戊醇有助于消除抽提过程中产生的气泡。而 DNA不溶于乙醇等有机溶剂晶因此可以通过乙醇沉淀来纯化和浓缩DNA 二、实验用品试剂：

1mol/L(M)Tris-Cl(pH8.0), 0.5M EDTA（pH8.0），5M NaCl TES（15mM Tris, 15mM EDTA，15mM NaCl） Tris饱和酚（PH8.0）氯仿/异戊醇（V/V=24/1） 10％SDS 5mg/ml Protease K 70％乙醇、无水乙醇 TE缓冲液（pH8.0）：10mM T ris-Cl（PH8.0） 1mM E DTA(PH8.0) 10mg/mL 溴化乙锭（EB）耗材：仪器：低温离心机、移液枪一套，低温冰箱，恒温水浴锅、紫外分光光度计（Eppendorf）。三、实验步骤 4.1取血样：实验人员相互取血样5ml.（用品：采血管、采血针、无水乙醇、棉签、橡皮管、废液缸） 4.2血液样品的预处理：分取2ml 血样加入到离心管A中用于酚氯仿法提取DNA。 1) 破除RBC：

酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理

酚氯仿法提取DNA主要步骤和原理酚氯仿法提取DNA主要步骤： 1.将动物组织放在1.5ml的离心管中，分别用75%、50%酒精和纯水梯度脱酒精。每个梯度脱水时间为5-10min 2.将组织放入研钵中，加入适量DNA裂解液（300μl），研磨后再加入300μlDNA裂解液冲洗研磨棒。 3.将研磨好的组织液用移液枪加到1.5ml离心管，在管中加10μl蛋白酶K，用封口带将离心管封口，放入摇床（56℃,5h）。 4.加入等体积的Tris饱和酚（500μl），摇匀（10min）。 5.离心：12000R，7min，4℃。离心后分成上中下三层，上层为DNA，中层为蛋白质，下层为有机质。 6.吸取上层液体加入新的离心管。 7.配制Tris饱和酚：氯仿：异戊醇=25:24:1。 8.在含有上清液的离心管中加入Tris饱和酚、氯仿和异戊醇混合液450μl，摇匀10min。 9.离心：12000R，7min，4℃。 10.吸取上清液加到新的离心管，加入等体积的氯仿和异戊醇混合液400μl（氯仿：异戊醇=24:1）。 11.离心：12000R，7min，4℃。 12.吸取上清液加入新的离心管，加入2.5倍经过-20℃冷冻的100%的酒精。-20℃过夜。 13.将样品取出，12000R，7min，4℃离心。 14.弃上清，留白色沉淀（DNA），加400μl的75%的经过-20℃冷冻的酒精，反复吹打溶解。 15.重复第14步骤2次（用75%酒精洗三次）。 16.提取DNA完成。溴氯仿法提取DNA的原理：

用酚抽提细胞DNA时，有什么作用？使蛋白质变性，同时抑制了DNase的降解作用。用苯酚处理匀浆液时，由于蛋白与DNA 联结键已断，蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相，而DNA溶于水相。使用酚的优点：1. 有效变性蛋白质；2. 抑制了DNase的降解作用。缺点：1. 能溶解10-15%的水，从而溶解一部分poly（A）RNA。2. 不能完全抑制RNase 的活性。氯仿的作用？氯仿：克服酚的缺点；加速有机相与液相分层。最后用氯仿抽提：去除核酸溶液中的迹量酚。（酚易溶于氯仿中）用酚－氯仿抽提细胞基因组DNA时，通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇，为什么？异戊醇：减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。异戊醇可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。用乙醇沉淀DNA时，为什么加入单价的阳离子？用乙醇沉淀DNA时，通常要在溶液中加入单价的阳离子，如NaCl 或 NaAc，Na+中和DNA分子上的负电荷，减少DNA分子之间的同性电荷相斥力，而易于聚集沉淀。原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在 0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，使DNA与蛋白质分离开。加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。最后用95%乙醇沉淀DNA。溶解：将离心后除去RNA的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。加4毫升10％SDS溶液，使溶液的SDS浓度达到1％左右，边加边搅拌，放置60 ℃水浴保温10分钟（不停搅拌），冷却。加固体氯化钠，使溶液氯化钠浓度达到1mol/L，充分搅拌10分钟；

苯酚含量测定

1 溴酸钾法 KBrO 3是强氧化剂，在酸性溶液中，半反应如下： BrO3- + 6H + + 6e - = Br- + 3H 2O E q = 1.44V KBrO 3容易提纯，在453K ( 180 C)烘干后，可以直接配制成标准溶液。也可以配成近似浓度后，用碘量法标定。在酸性溶液中，一定量的KBrO 3与过量KI作用，析出12，反应如下： BrO3- + 6I - + 6H + = Br- + 3I 2 + 3H 2O 析出的|2，用Na2S2O3标准溶液来滴定。溴酸钾法可用于测定Sb3+。在酸性溶液中，以甲基橙作指示剂，可用溴酸钾标准溶液直接滴定 Sb3+： 3Sb3+ + BrO 3- + 6H+ = 3Sb5+ + Br- + 3H2O 过量一滴 KBrO 3溶液，即将指示剂氧化，使甲基橙褪色，从而指示终点的到达。此法也可直接滴定 AsO 33-及TI+等。在酸性溶液中， KBrO3-KBr 标准溶液发生以下反应： BrO3- + 5Br- + 6H+ = 3Br2 + 3H2O 生成的Br2与待测物(如苯酚)作用，剩余的 Br2用KI还原

Br 2 + 21 - 2Br- + I 2 析出的I2可用Na2S2O3标准溶液滴定。溴酸钾-碘量法主要用于苯酚的测定。通常在KBrO3的标准溶液中加入过量的 KBr，将溶液酸化。 2溴酸钾碘量法在酸性溶液中KBrO3-KBr标准溶液发生反应，生成一定量的 B"。 KBrO3 + 5KBr + 6HCI = 3Br 2 + 6KCI + 3H 20 Br2与苯酚反应，生成三溴苯酚过量的Br2与三溴苯酚继续反应，生成溴化三溴苯酚过量的Br2、溴化三溴苯酚均与KI反应，生成12 0H +2H+ + 2I- OEr

邻氨基苯酚安全技术说明书

编号:JM-EHS-MSDS-027 邻氨基苯酚安全技术说明书(MSDS) 1、物质的理化常数 2.对环境的影响: 一、健康危害侵入途径：吸入、食入。健康危害：本品属致敏物质，能引起支气管哮喘及接触过敏性皮炎，吸入过量的氨基苯酚粉尘，引起高铁血红蛋白血症。二、毒理学资料及环境行为

急性毒性：LD501300mg/kg(大鼠经口) 微生物致突变性：鼠伤寒沙门氏菌：333μg/皿。危险特性：遇明火、高热可燃。与强氧化剂可发生反应。受热分解放出有毒的氧化氮烟气。燃烧(分解)产物：一氧化碳、二氧化碳、氮化氮。 3.现场应急监测方法: 4.实验室监测方法: 极谱法(空气，苏联) 环境和废水试样中痕量2-、3-和4-氨基苯酚的电子浮获检测-GC测定[刊，日]/Osaki Y.；Matsueda T.//分析化学.-1988,37(2)-253～258 《分析化学文摘》1992-1993 5.环境标准: 前苏联水体中有害物质最高允许浓度0.01mg/L 6.应急处理处置方法: 一、泄漏应急处理隔离泄漏污染区，限制出入。切断火源。建议应急处理人员戴自给式呼吸器。穿一般工作服，不要直接接触泄漏物。小量泄漏：避免扬尘，小心扫起，轩于袋中，转移至安全场所。大量泄漏：用塑料布、帆布覆盖，减少飞散，然后收集回收或运至废物处理场所处置。二、防护措施呼吸系统防护：空气中浓度较高时，佩戴防毒面具。紧急事态抢救或逃生时，应该佩带自给式呼吸器。眼睛防护：可采用安全面罩。防护服：穿工作服。

手防护：必要时戴防护手套。其它：工作现场禁止吸烟、进食和饮水。及时换洗工作服。工作前后不饮酒，用温水洗澡。进行就业前和定期的体检。三、急救措施：皮肤接触：脱去被污染的衣着，用肥皂水和清水彻底冲洗皮肤。眼睛接触：担起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗，就医。吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处，保持呼吸通畅。如呼吸困难，给输氧，如呼吸停止，立即进行人工呼吸，就医。食入：饮足量温水，催吐，就医。灭火方法：雾状水、泡沫、二氧化碳、干粉、砂土。

有机化合物的紫外吸收光谱及溶剂效应

实验九有机化合物的紫外吸收光谱及溶剂效应实验目的：（1）学习有机化合物结构与其紫外光谱之间的关系；（2）了解不同极性溶剂对有机化合物紫外吸收带位置、形状及强度的影响。（3）学习紫外—可见分光光度计的使用方法实验原理：与紫外-可见吸收光谱有关的电子有三种，即形成单键的σ电子、形成双键的π电子以及未参与成键的n电子。跃迁类型有：σ→σ*，n→σ* ，n→π*，π→π* 四种。在以上几种跃迁中，只有π-π*和n-π*两种跃迁的能量小，相应波长出现在近紫外区甚至可见光区，且对光的吸收强烈，是我们研究的重点。影响有机化合物紫外吸收光谱的因素有内因和外因两个方面。内因是指有机物的结构，主要是共轭体系的电子结构。随着共轭体系增大，吸收带向长波方向移动（称作红移），吸收强度增大。紫外光谱中含有π键的不饱和基团称为生色团，如有C=C、C=O、NO2、苯环等。含有生色团的化合物通常在紫外或可见光区域产生吸收带；含有杂原子的饱和基团称为助色团，如OH、NH2、OR、Cl等。助色团本身在紫外及可见光区域不产生吸收带，但当其与生色团相连时，因形成n→π*共轭而使生色团的吸收带红移，吸收强度也有所增加。影响有机化合物紫外吸收光谱的外因是指测定条件，如溶剂效应等。所谓溶剂效应是指受溶剂的极性或酸碱性的影响，使溶质吸收峰的波长、强度以及形状发生不同程度的变化。这是因为溶剂分子和溶质分子间可能形成氢键，或极性溶剂分子的偶极使溶质分子的极性增强，从而引起溶质分子能级的变化，使吸收带发生迁移。例如异丙叉丙酮的溶剂的溶剂效应如表１所示。随着溶剂极性的增加Ｋ带红移，而Ｒ带向短波方向移动（称作蓝移或紫移）。这是因为在极性溶剂中π→π * 跃迁所需能量减小，吸收波长红移（向长波长方向移动）如图（a）所示；而n→π * 跃迁所需能量增大，吸收波长蓝移（向短波长方向移动），溶剂效应示意图如（b）所示。图1 电子跃迁类型 σ π * σ * n π?

核磁各种谱图介绍

一维氢谱：一维碳谱：二维谱：异核相关谱：HSQC, HMQC, HMBC 异核相关谱特别是13C-HSQC(HSQCED)比一般一维碳谱要灵敏的多，同时还能区分与奇数或偶数相连的碳，结合HMBC，能有效监测碳的化学位移并节省时间。建议做1维碳谱的同学，做13C-HSQC和13C-HMBC和一维氢谱。同时也可以作15N-HSQC，15N-HMBC。同核相关谱：dqfCOSY, NOESY, TOCSY，ROESY 对于小分子COSY通过化学耦合常数观测三键相连的氢-氢相关， NOESY主要用来测量氢-氢的距离相关，对于小分子可以采用长的混合时间通常是大于300毫秒；TOCSY主要用来检测氢-氢通过耦合常数耦合并在一定混合时间内达到全程相关，可以用来观测长于三键的氢-氢相关。ROESY与NOESY相似，对于分子量在1000-2000道尔顿的化合物，ROESY比较理想。考虑到不同课题组的研究内容不同，有些需要在水溶液或者在D2O里做，这就要考虑溶剂峰的压制。激发雕蚀压水比较理想，可以利用此技术来压制溶剂峰。通常的一维和二维实验都要采取压制溶剂峰的脉冲序列。交换实验：用NOESY的脉冲序列，只是改变交换混合时间d8，做一系列实验二维实验。化学交换实验可以测定化合物两种构象之间的交换速率，同时也能区分同一组成中的两种构象。对于对映体的区分比较有用。同时有可能观测到交换过程中的中间体。下面是三台核磁仪器上的实验参数名称核磁402: 1.2DNOESYinD2O:此实验主要利用压水的脉冲序列，如果有水存在样品，可以考虑用此参数。对于小分子化合物，建议设置d8在500ms-800ms范围内。同时此脉冲可以用来在有水存在下作交换实验，类似EXSY。 2.1DinD2O:压水的1维氢谱，水溶剂的峰几乎可以压到溶质峰以下 3.dqfCOSY:双量子过滤的COSY 4.TOCSYinD2O:在有水存在下的TOCSY实验，水峰可以达到理想的压制。