实验十人类染色体G显带技术及G带核型分析.docx
实验目的
1、初步掌握染色体G带标本的制备技术。
2、了解人类染色体的G显带的带型特征。
实验用品
1、材料：常规方法制备的中期人类染色体标本（标本片龄不超过30 天为宜）。
2、器材：显微镜、恒温培养箱、烤箱、恒温水浴箱、冰箱、染色缸、小镊子、玻片架、
香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸。
3、试剂：％胰蛋白酶溶液、％EDTA溶液、胰蛋白酶一EDTA混合液、％生理盐水、蒸
馏水、 Giemsa 原液、 Giemsa 稀释液、 1／ 15mol ／ L 磷酸缓冲液。
实验原理
人们将用各种不同的方法，以及用不同的染料处理染色体标本后，使每条染色体上出
现明暗相间，或深浅不同带纹的技术称为显带技术（banding technique）。本世纪 70 年
代以来，显带技术得到了很大发展，且在众多的显带技术中（ Q带、G带、C 带、R 带、T
带），
G带是目前被广泛应用的一种带型。因为它主要是被Giemsa 染料染色后而显带，故称之为
G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。
研究发现，人染色体标本经胰蛋白酶、 Na0H、柠檬酸盐或尿素等试剂处理后，再用 Giemsa 染色，可使每条染色体上显示出深浅交替的横纹，这就是染色体的 G带。每条染色体都有其较为恒定的带纹特征，所以 G显带后，可以较为准确的识别每条染色体，并可发现染色体上较细微的结构畸变。关于G显带的机理目前有多种说法，例如，Lee 等（ 1973）认为染色体上与 DNA结合疏松的组蛋白易被胰蛋白酶分解掉，染色后这些区段成为浅带，而那些组蛋白和 DNA结合牢固的区段可被染成深
带。有人认为，染色体显带现象是染色体本身存在着带的
结构。比如用相差显微镜观察未染色的染色体时，就能直接观察到带的存在。用特殊方法处理后，再用染料染色，则带更加清楚，随显带方法不同，显出来的带特点也不一样，说明带
的出现又与染料特异结合有关。一般认为，易着色的阳性带为含有AT 多的染色体节段，相反，含 GC多的染色体段则不易着色。总的来说，G显带的机理还未搞清。
内容与方法
一、人类染色体G显带标本制备
1、胰蛋白酶法
①将常规制备的人染色体玻片标本（未染色的白片）置70℃烤箱中处理 2 小时，然后转入37℃培养箱中备用，一般在第3～7 天进行显带。
②取％的胰蛋白酶原液加生理盐水至50ml ，配成％的工作液并用NaHCO3
调
pH 值至7 左右。
③将配好的胰蛋白酶工作液放入37℃水浴箱中预热。
④将玻片标本浸入胰蛋白酶中，不断摆动使胰蛋白酶的作用均匀，处理 1～ 2 分钟（精确的时
间自行摸索）。
⑤立即取出玻片，放入生理盐水中漂洗两次。
⑥染色。将标本浸入37℃预温的Giemsa 染液（ 1:10 的 Giemsa 原液和的磷酸缓冲液）
中染色 10 分钟左右。
⑦自来水冲洗（用细水小心冲洗）、晾干。
⑧镜检显带效果。在低倍镜下选择分散良好的长度适中的分裂相转换油镜观察，若染色体未出现带纹，则为显带不足；若染色体边缘发毛为显带过头，此时应根据具体情况增减胰
蛋白酶处理时间重新处理一张标本。
2、 EDTA一胰蛋白酶法
①取 25ml 生理盐水和％的EDTA溶液倒入立式染色缸中混匀。
pH 值至7 左右。置
②取％的胰蛋白酶原液1ml加入到上液中混匀，并用5％ NaHCO3
调
水浴箱预温至37℃。
③将染色体标本片浸入胰蛋白酶一EDTA溶液中处理5～20 秒，同时轻轻摇动玻片。
④取出标本立即浸入生理盐水中洗两次。
⑤浸入 37℃的 Giemsa 染液中染色5～ 10 分钟。
⑥细水冲洗后晾干、镜检。
二、正常人各染色体的G带特征
A 组： 1～ 3 号染色体。
1 号染色体。
短臂：近侧段有 2条深带，第 2 深带稍宽，在处理较好的标本上，远侧段可显出3～ 4条淡染的深带。此臂分为 3 个区，近侧的第 1 深带为 lp 21 ；第 2 深带为 1p31。
长臂：副缢痕紧贴着丝粒，染色浓。其远侧为一宽的浅带，近中段与远侧段各有两条深
带，此中段第 2 深带染色较浓，中段两条深带稍靠近，此臂
分为 4 个区，副缢痕远侧的浅带为lp21 号带、中段第 2 深带为 lp31 号带，远侧段第 1 深带为lp41号带。
2 号染色体。
短臂：可见 4 条深带，中段的 2 条深带稍靠近，此臂分为 2 个区，中段两条深带之间的
浅带为2p21。
长臂：可见7 条深带，第 3 和第 4 深带有时融合。此臂分为 3 个区，第 2 和第 3 深带之间的浅带为2p21带，第 4 和第5 深带之间的浅带为2p31 号带。
3 号染色体。在长臂与短臂的近中段各具有 1 条明显的宽的浅带。
短臂：一般在近侧段可见 1 条较宽的深带，远侧段可见 2 条深带，其中远侧 1 条较窄，且着色淡，这是区别 3 号染色体短臂的显着特征。在处理较好的标本上，近侧段的深带可分
为 2 条深带，此臂分 2 个区，中段浅带为 2 区 1 带。
长臂：一般在近侧段和远侧段各有 1 条较宽的深带，在处理好的标本上，近侧段的深带可分为 2 条深带，远侧段的深带可分为 3 条深带，此臂分为 2 个区，中段浅带为 2 区 1 带。该染色体的G带图有点象蝴蝶结。
B 组： 4~5 号染色体。
4 号染色体
短臂：可见 2 条深带，近侧深带染色较浅，短臂只有 1 个区。
长臂：可见均匀分布的 4 条深带，在处理较好的标本上，远侧段的 2 条深带可各自分为
2 条较宽的深带。此臂分为
3 区，近侧段第 1 和第 2 深带之间的浅带为 2 区 1 带，远侧段两
条深带之间的浅带为 3 区 1 带。
5号染色体
短臂：可见 2 条深带，其远侧的深带宽且着色浓，此臂仅 1 个区。
长臂：近侧段 2 条深带，染色较淡，有时不明显，中段可见 3 条深带，染色较浓，有时
融合成 1 条宽的深带，远侧段可见 2 条深带，近末端的 1 条着色较浓，此臂分为 3 个区，中段第 2 深带为 2 区l带，中段深带与远侧深带之间的宽阔的浅带为 3 区1 带。
C组： 6~12 号和 X 染色体
6号染色体
短臂：中段有 1 条明显宽阔的浅带，形如“小白脸”，是此染色体的特征，近侧段和远
侧段各有 1 条深带，近侧深带贴着丝粒。在处理较好的标本上，远侧段的深带可分为两条深带。此臂分为 2 个区，中段的明显而宽的浅带为 2 区 1 带。
长臂：可见 5 条深带，近侧 1 条紧贴着丝粒，远侧末端的 1 条深带着色较淡；此臂分为
2 个区，第 2 和第
3 深带之间的浅带为 2 区 1 带。
7号染色体
着丝粒着色浓。
短臂：有 3 条深带，中段深带着色较淡，有时不明显，远测深带着色浓，形似“瓶塞”。此臂分为 2 个区，远侧段的深带为 2 区 1 带。
长臂：有 3 条明显深带，远侧近末端的 1 条着色较淡；第 2 和第 3 带稍接近。此臂分为
3 个区，近侧第 1 深带为 2 区 1 带、中段的第 2 深带为 3 区 1 带。
8 号染色体。
短臂：有 2 条深带，中段有 1 条较明显的浅带，这是与10号染色体相鉴别的主要特征。
此臂分为 2 个区，中段的浅带为 2 区 1 带。
长臂：可见 3 条分界极不明显的深带，此臂分 2 个区，中段的深带为 2 区 1 带。
9 号染色体
着丝粒着色浓。
短臂：近侧段和中段各有 1 条深带，在处理较好的标本上，中段可见 2 条较窄的深带。此臂分为 2 个区，中段深带为 2 区 1 带。
长臂：可见明显的 2 条深带，次缢痕一般不着色，在有些标本上呈现出特有的颈部区。
此臂分为 3 个区，近侧的 1 条深带为 2 区 1 带，远侧的 1 条深带为 3 区 1 带。
10 号染色体
着丝粒着丝浓。
短臂：近侧段和近中段各有 1 条深带，在有些标本上近中段可见
2 条深带，但与8 号染色体短臂比较，其上深带的分界欠清晰。此臂只有 1 个区。
长臂：可见明显的 3 条深带，远侧段的 2 条深带稍靠近，这是与8 号染色体相鉴别的一
个主要特征，此臂分为 2 个区，近侧段的 1 条深带为 2 区1 带。
11 号染色体
短臂：近中段可见 1 条深带，在处理较好的标本上，这条深带可分为 3 条较窄的深带。此臂只有 1 个区。
长臂：近侧有 1 条深带，紧贴着丝粒。远侧段可见 1 条明显的较宽的深带，这条深带与近侧的深带之间是 1 条宽阔的浅带，这是与12 号染色体相鉴别的一个明显的特征，在处理
较好的标本上，远侧段的这条较宽的深带可分为 2 条较窄的浅带，两深带之间有 1 条很窄的浅带，一般极难辨认，但它是分区的一个界标，在有些标本上近末端处可见 1 条窄的淡染的深带。此臂分 2 个区，上述远侧两条深带之间的那条很窄的淡带为 2 区 1 带。
12号染色体
短臂：中段可见 1 条深带，此臂只有 1 个区。
长臂：近侧有 1 条深带，紧贴着丝粒，中段有 1 条宽的深带，这条深带与近侧深带之间
有 1 条明显的浅带，但与11 号染色体比较这条浅带较窄，这是鉴别11 号与 12 号染色体的一个主要特征。在处理较好的标本上，中段这条较宽的深带可分为 3 条深带。其正中一条着色较浓，在有些标本上，远侧段还可以看到l ～ 2 条染色较淡的深带。此臂分为 2 个区，中段正中的深带为 2 区 1 带。
X 染色体
其长度介于7 号和8 号染色体之间，主要特点是长臂和短臂中段各有 1 条深带，有“一担挑”之名。
1 条窄的着
短臂：中段有一明显的深带，宛如竹节状。在有些标本上远侧段还可以看见
色淡的深带，此臂分为 2 个区，中段的深带为 2 区 1 带。
长臂：看见3～ 4 条深带，近中部 1 条最明显，此臂分为 2 个区，近中段的深带为 2 区1带。
D组： 13~15 号染色体，具有近端着丝粒和随体。
13号染色体着
丝粒区深染。
长臂：可见 4 条深带，第 1 和第 4 深带较窄，染色较淡；第 2 和第 3 深带较宽，染色较浓。
此臂分为 3 个区，第 2 深带为 2 区 1 带，第 3 深带为 3 区 1 带。
14 号染色体
着丝粒区深染。
长臂：近侧和远侧各有 1 条较明显的深带。在处理较好的标本上，中段尚看见
1 条着色较浅的深带。此臂分为 3 个区，近侧深带为
2 区 1 带，远侧深带为
3 区 1 带。
15 号染色体
着丝粒区深染。
长臂：中段有一条明显深带；染色较浓，有的标本上近侧段可见l ～2条淡染的深带。此臂分为 2 个区，中段深带为 2 区1 带。
E 组： 16 一18 号染色体
16 号染色体
短臂：中段有 1 条深带，在较好的标本上看见 2 条深带，此臂只有 1 个区。
长臂：近侧段和远侧段各有 1 条深带。有时远侧段 1 条不明显，次缢痕着色浓；此臂分
2 个区，中段深带为 2 区1 带。
17 号染色体
短臂：有 1 条深带，紧贴着丝粒，此臂只有 1 个区。
长臂：远侧段看见 1 条深带，这条深带与着丝粒之间为一明显而宽的浅带，此臂分为2个区，这条明显而宽的浅带为 2 区 1 带。
18 号染色体
短臂：一般为浅带，此臂只有 1 个区。
长臂：近侧和远侧各有 1 条明显的深带，此臂分为 2 个区，两深带之间的浅带为 2 区 1带。
19号染色体
着丝粒及其周围为深带，其余为浅带。短臂和长臂均只有 1 个区。
20号染色体
着丝粒区浓染。短臂有一条明显的深带，此臂只有 1 个区。
长臂：中段和远侧段看见1～ 2 条染色较淡的深带，有时全为浅带。此臂只有 1 个区。
此染色体有“头重脚轻”之名。
G组； 21～ 22 号染色体和Y 染色体， 21、 22 号有随体。
21号染色体
着丝粒区着色淡。其长度比22 号短，其长臂上有明显而宽的深带。此臂分 2 个区，其深带为 2 区 1 带。
22 号染色体
着丝粒区染色浓。其长度比21 号长，在长臂上可见 2 条深带，近侧的 1 条着色浓，而且紧贴着丝粒。近中段的 1 条着色淡，在有的标本上不显现。此臂只有 1 个区。
Y 染色体
长度变化大，有时整个长臂被染成深带，在处理好的标本上可见 2 条深带。此臂只有1个区。
三、镜下带型分析
每人用自己所作的G显带标本，选择分散好，染色体带型清晰的分裂相，在油镜下根据上述 G显带各号染色体的特征，依次找出 1 至 22 号染色体和性染色体，绘成草图。各染色
体的位置、形状大小尽量真实（不必绘出带型）。并在各染色体旁边标明染色体序号。
四、正常人染色体G带照片分析
1、在 G带染色体显微摄影照片上，用剪刀将染色体沿边缘一条条剪下。
2、按染色体分类标准，分组配对排列在报告纸上，经反复调整，认为准确无误后用胶
水贴上。
注：本实验内容较多，可分二次进行。第一次进行G显带标本的制备并在镜下识别l~10号染色体；第二次进行11～ 22 号染色体及X、Y 染色体的识别并完成染色体G显带核型分析。
作业与思考
1、每人剪贴一张G带染色体照片，作为对照的中期分裂相贴在报告单上方，核型贴在
下方。
2、要制备出良好的G带标本，操作时需注意哪些问题？
3、染色体显带有何意义？
男性 G显带女性 G显带
植物染色体制片与观察实验报告
植物染色体制片与观察实验报告（洋葱组） 姓名：蔡梦雅 1230170010 同组成员：曹鉴云陈锦容刘艳马彦霞 一、中文摘要：染色体（Chromosome），是细胞内具有遗传性质的物体，易被碱性染料染成深色，又叫染色质。其本质是脱氧核甘酸，是细胞核内由核蛋白组成、能用碱性染料染色、有结构的线状体，是遗传物质基因的载体。这里我们用洋葱染色体作为代表使用压片法制片并且进行观察。 二、关键词：染色体洋葱压片法 三、引言：洋葱（onion）是百合科（Liliaceae）葱属中以肉质鳞片和鳞芽构成鳞芽的2年生草本植物，其学名为Allium cepa L，染色体数为2n=2x=16。由表1和图1可见,洋葱的8对染色体中,有7对(第1~7对)染色体,臂比在1·01~1·70之间,为中部着丝点染色体,1对(第8对),臂比为4·74,为近端部着丝点且带随体的染色体;依据STEB-BINS[4]的核型分类标准,洋葱的染色体核型在遗传进化上属较古老的2A型。100多年来有关染色体与染色体组结构功能的研究一直是生命科学最活跃的研究领域之一，现今人们完成基因组测序后回到对染色体上进行基因定位和作图，因此有关染色体的研究在基因组合功能基因组时代都有重要意义，陈瑞阳教授历时25年的研究完成的《中国主要植物染色体研究》对我国2834种植物染色体数目进行了报道，完成了1045种植物的核型分析，积累了宝贵的染色体基础数据创建了我国植物染色体研究信息平台。研究染色体进化与生物进化的有不可分割的关系,国际对染色体的化学成分,DNA含量,碱基组成和以染色体数目、形态、结构、大小等为特征的核型进化与物种形成和演化关系的研究,为揭示生物进化趋势提供染色体方面的科学资料，总的来说对染色体的研究在各类学科领域内都有着重要的意义。国内外对洋葱的研究主要在其成分和药用方面，在细胞遗传上张自力和陈瑞阳等对洋葱的C带显示法进行过研究，田秋元等对洋葱的核型分析及有关制片方法进行了探讨。植物根尖的分生细胞的有丝分裂，每天都有分裂高峰时间，此时把根尖固定，经过染色和压片，再置放在显微镜下观察，可以看到大量处于有丝分裂各时期的细胞核染色体。我们设计了不同的实验方案探究如何制作优良的植物染色体玻片，掌握染色体技术。 四、材料与方法： 1.取材 洋葱（Aillum cepa）的鳞茎 2.实验器具和药品 2.1器具 a.载玻片 b.盖玻片 c.烧杯 d.量筒 e.培养皿 f.滤纸 g.玻璃棒 h.镊子i.手术刀 2.2药品 a.0.1mol/L醋酸钠溶液 b.0.25%秋水仙素 c.冰醋酸 d.无水乙醇 e.1mol/LHcl f.纤维素酶 g.果胶酶 h.卡宝品红 2.3试剂配制 卡诺固定液：用3份无水酒精，加入1份冰醋酸（现配现用）。 酸解液：一份无水乙醇与一份1mol/L 盐酸1:1进行配制。 酶解液：用0.4g的纤维素酶和0.15g的果胶酶溶解在20ml蒸馏水里。
人类染色体的识别及核型分析
生命与环境科学学院实验报告 实验课名称遗传学实验实验名称人类染色体的识别及核型分析成绩______________ 姓名王大锤实验报告系列年级学号组别一时间2015.温度6℃ 实验原理及目的 实验目的 1、学习并掌握染色体核型的分析方法； 2、熟悉人类染色体的特征； 3、了解人类染色体结构畸变的表示方法。 实验原理 1．染色体组型（核型）的基本含义 含义：生物体细胞所有可测定的染色体表型特征的总称。 包括：染色体的总数，染色体组的数量，每个染色体组内染色体基数，每条染色体的形态、长度、着丝粒的位置，随体或次缢痕等。 染色体组型是物种特有的染色体信息之一，具有很高的稳定性和再现性。 2．人类染色体特征 Denver体制 1960年，在美国Denver市召开了第一届国际遗传学会议，讨论并确定正常人核型（karyotype）的基本特点即Denver体制，成为识别人类各种染色体病的基础。 3.染色体显带标本 显带技术（banding technique）：用各种不同方法，以及用不同染料处理染色体标本后，每条染色体上出现明暗相间或深浅不同带纹的技术。 每条染色体带纹相对固定，可用于鉴别。 显带技术种类：Q带、G带、C带、R带、T带. G带是目前被广泛应用的一种带型。主要是被Giemsa染色后而显带，故称之为G显带技术，其所显示的带纹分布在整个染色体上。 4.遗传学中一些常用于对染色体和核型分析的指标描述 界标(landmark)：稳定、明显标记的指标.包括末端、着丝粒和带. 区（region）：两相邻界标之间. 带（band）：着色处.（浅、深；亮、暗）. 臂（arm）：p、q 实验材料、仪器及试剂 1.人类染色体标本——非显带标本和显带标本 2.直尺，剪刀，计算机等。 实验步骤 ①染色体制片 制片方法：植物染色体——压片法（酸解、酶解） 动物染色体——滴片法（骨髓细胞、外周血细胞）标本种类：非显带染色体；显带染色体 图片要求：染色体分散；数目全；形态好 ②选择最佳图象拍照 ③测量、计算 ④配对 ⑤剪贴 ⑥排列 排列原则：从大到小；短臂向上；着丝粒在一条线上；性染色体单排。
习惯性流产伴41例异常染色体核型分析
习惯性流产伴41例异常染色体核型分析 田艳，王厚照，刘芳，史彩虹4 （解放军第174医院检验科，厦门361003） 摘要：目的评价习惯性流产与染色体核型分布的关系。方法对110对习惯性流产夫妇进行外周血染色体核型分析。结果在受检的110对习惯性流产夫妇220例样品中，共检出异常染色体核型41例（女18例、男23例），总检出率为18.6%。在检出的41例染色体异常核型中常染色体结构异常有29例（70.7%），含平衡易位13例（39.02%），罗氏易位3例（7.32%）、臂间倒位3例（7.32%），随体增加5例（12.20%），次缢痕增加5例（12.20%）；性染色体结构异常占12例29.3%。其中大Y染色体5例（12.20%），小Y染色体7例（17.07%）。结论习惯性流产与染色体异常核型密切相关，为降低发病率对夫妻双方进行产前筛查很有必要。 关键词：习惯性流产；染色体；核型分析 中图分类号：R714.21文献标识码：B文章编号：1006－9534（2012）08－0066－02 41cases about karyotype analysis on those habitual abortion abnormal．TIAN Yan，WANG Hou－zhao，LIU Fang，SHI Cai－hong．（174th Hospital of PLA；Xiamen；Fujian361003；China） Abstract：Objective：To study the correlation of chromosome karyotypes and habitual abortion．Methods：Detecting the hromo-some karyotypes of circular lymphocytes in110couples with habitual abortion．Results：Out of110cases，41abnormal chrosome was found，accounting for18.6%of total cases．Including29cases of autosome Abnormalities：13cases of balanced reciprocal transloca-tion and3cases of Robertsonian translocations，2cases of inversions，5cases of satellite increases and5cases of secondary constric-tion．12cases of sex chromosome abnormalities：5cases of large Y chromosom and7cases of small Y chromosom．Conclusion There is a close relationship between chromosome karyotypes and habitual abortion，antepartum screening is necessary to the couples for the purpose of depressed． Key words：Habitual abortion；Chromosomes；Karyotyping 习惯性流产是指3次或3次以上的自然流产。引起习惯性流产的原因有很多，如遗传因素、免疫失调、内分泌紊乱、生殖道感染等，其中遗传因素是引起习惯性流产的重要原因。研究发现习惯性流产大多数处于胚胎发育早期，其染色体异常率高达30% 60%［1］。本文就对41例异常染色体核型进行分析，现报道如下： 资料与方法 1．资料一般资料自2005年9月－2011年9月，对256对习惯性流产夫妇进行相关检查，确诊无功能性病变及其它相关性病变，排除接触各种射线及有毒物质接触史，再进行外周血染色体分析。 2．方法 试验方法：对习惯性流产夫妇双方的外周血淋巴细胞染色体核型进行检查。抽取夫妇双方的正中肘静脉血2mL，在无菌条件下，5mL培养基中，置37?培养，培养66 68h后加入秋水仙素，再继续培养至72h，离心收集培养物，KCl低渗处理35min，加入固定液固定30min或者4?过夜，最后进行制片和染色显带。核型分析：每例平均计数30个核型，分析5 8个核型，异常者加大计数到50个核型，同时分析30个核型，最后按照标准G带核型作细胞遗传学诊断，必要时进行C显带分析。 结果 1．在受检的110对习惯性流产夫妇220例样品中，共检出异常染色体核型41例（女18例、男23例），总检出率为18.6%。在检出的41例染色体异常核型中常染色体结构异常占29例70.7%，含片段易位19例：包括平衡易位13例（39.02%），罗氏易位3例（7.32%）、臂间倒位3例（7.32%），随体增加5例（12.20%），次缢痕增加5例（12.20%）。性染色体结构异常占12例29.3%。其中大Y 染色体5例（12.20%），小Y染色体7例（17.07%）。异常染色体核型比例及构成比见表1，具体核型见表2。 表1异常染色体核型比例及构成比异常类型例数异常率（%）构成比（%） 平衡易位137.2731.70 罗氏易位3 1.367.32倒位3 1.367.32随体增加50.9012.20 次缢痕增加5 2.2712.20 大Y染色体5 2.2712.20 小Y染色体7 3.1817.07合计4118.6 讨论 胚胎染色体异常、男女双方或其中任何一方染色体异常都可导致习惯性流产的发生。染色体异常包括结构异常和数目异常两种，结构异常主要包括缺失、易位、倒位和重复4 · 66 ·中国优生与遗传杂志2012年第20卷第8期
核型分析实验报告
核型分析 摘要植物核型分析是指对植物细胞染色体的数目、形态、长度、带型和着丝粒位置等内容的分析研究,是植物分类和遗传研究的重要手段。本实验利用Photoshop软件，对栽培四棱大麦的染色体进行核型分析。本方法主要是物理分析法，在本试验中，我们先对大麦的染色体进行配对，再利用Photoshop软件对染色体进行分析，并测量了大麦染色体的臂长和随体长。 1.引言 核型指染色体组在有丝分裂中期的表型，包括染色体数目、大小、形态特征的总和。一个体细胞中的全部染色体，按其大小、形态特征(着丝粒的位置）顺序排列所构成的图像就称为核型。将待测细胞的核型进行染色体数目、形态特性的分析，确定其是否与正常核型完全一致，称为核型分析。以目前的技术水平，已实现使用计算机自动完成核型分析，我们学生也可以利用Adobe Photoshop 很容易地完成染色体的测量、排序等工作，再利用Excel 表格和Photoshop结合做出核型模式图。 2.实验材料 2.1实验材料 栽培四棱大麦的分散良好的有丝分裂中期细胞的显微照片、Adobe Photoshop等软件2.2实验方法 2.2.1绘制核型图 在Photoshop中对照片进行必要的处理。首先是剪裁照片，用套索工具将每条染色体分离出来，对染色体进行配对并将每条染色体的着丝点排在一条线上，并对染色体进行适当的旋转变换。其次是利用标尺工具测量每条染色体的臂长、随体长。再根据测量结果计算出染色体的臂比，总长，随体长，相对长度等数据。 2.2.2写出核型公式 根据上面的测量结果写出四棱大麦的核型公式。 2.2.3画核型模式图 将所测并经过计算后的数据在Excel表格中绘制成堆积柱形图，并在Photoshop里切出着丝点和次缢痕。除此之外，还需将整个图像转换成黑白。 3.结果与讨论 3.1染色体核型分析图 图1 染色体核型分析图
实验七 植物染色体标本的制备与观察实验报告
细胞及遗传学实验报告陈香燕201008030103 生科1班 实验七植物染色体标本的制备与观察 （一）实验目的 学习植物染色体标本的制备技术，掌握染色体的技术方法，了解染色体的生物学意义。 （二）实验原理 植物染色体标本的制备，常用分生组织，如根尖、茎尖和嫩叶做材料。常规压片法仍是当今观察植物染色体常用的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤。由于秋水仙素可以阻断细胞在分裂中期纺锤体（微管二聚体）的形成，以至于不能拉动染色体分开向细胞两极，因此可以使细胞分裂停止在分裂中期，再经过染色，压片，镜检之后便可观察到细胞的染色体形态。 （三）实验用品 一、材料：蚕豆 二、试剂
1.Carnoy固定液 2.0.1%秋水仙素溶液 3.1mol/L HCl 4.Schiff试剂 5.亚硫酸水溶液（漂洗液） 6.Carbor fuchsin （卡宝品红）染液 配方1：原液A：称取3g碱性品红，溶于100ml 70%酒精中（此液可无限期保存）。 原液B：取10ml 原液A，加入90ml 15%石炭酸（苯酚）水溶液（两周内使用）。 染色液：55ml 原液B加6 ml冰醋酸和6 ml 37%甲醛（此液适用于植物原生质体培养中细胞核和核分裂的染色）。 配方2：取配方1中的染色液2~10 ml，加90~98ml 45%醋酸和1.8g 山梨醇（此液适用于核和染色体的一般形态观察，具有广泛适用性）。 （四）实验方法步骤 1.取材：将蚕豆种子培养在培养皿内的湿滤纸上，室温或28°C 下发芽，待胚根长达1~2cm时，切取0.5cm长的根尖部分。 2.预处理：将切下的根尖浸入0.1%秋水仙素液中，室温下处理 3~4h。 3.水解：把根尖投入预热的58~60°C 1mol/L热HCl中，恒温条 件下水解14~15min 4.染色：倒去热HCl,滴加卡宝品红少许，染色5~10分钟。
出生缺陷儿的染色体核型分析内容是什么
出生缺陷儿的染色体核型分析内容是什么 导读：我根据大家的需要整理了一份关于《出生缺陷儿的染色体核型分析内容是什么》的内容，具体内容：探讨出生缺陷与染色体核型异常之间的关系。方法 154例出生缺陷儿染色体核型分析。结果发现异常核型31例，异常检出率为20。下面我为你整理154例出生缺陷儿的染色体核型分析，希望能帮到... 探讨出生缺陷与染色体核型异常之间的关系。方法 154例出生缺陷儿染色体核型分析。结果发现异常核型31例，异常检出率为20。下面我为你整理154例出生缺陷儿的染色体核型分析，希望能帮到你。 为探讨出生缺陷与染色体核型异常之间的关系，我们对154例出生缺陷患儿进行外周血淋巴细胞染色体G显带核型分析，发现其中31例为染色体异常，染色体畸变率为20.13%，其结果报告如下。 1 对象与方法 1.1 对象在重庆市2002年8月～2003年11月期间鉴定的独生子女病残儿中选出154例出生缺陷儿。其中，年龄最小的2岁，最大的16岁，平均年龄7.6岁;男112例，占7 2.7%，女42例，占27.3%。 1.2 方法采取患儿静脉血0.8ml，置RPMI1640培养基培养72h，常规制片、G显带分析，每例镜下计数30个分裂相，核型分析5个，发现核型异常则增加计数分析。 2 结果 在154例出生缺陷儿中，发现染色体异常31例(检出率20.13%)涉及异
常核型6种，其中典型的21-三体综合征10例，klinefelter综合征4例，Y染色体异常12例，Turner综合征2例(均为嵌合型)，超雄1例，性反转2例(见表1)。 表1 31例染色体异常核型(略) 3 讨论 出生缺陷是指出生时发生的遗传疾病和不具遗传倾向的先天性畸形。目前我国出生缺陷的发生率约为13.7，其中原因大致可分为3种:遗传因素、环境因素、不明因素。本文154例出生缺陷儿发现31例为染色体异常，染色体异常发生率为20.13%。因此，在出生缺陷儿中染色体畸变率的发生较高。 在出生缺陷儿中，智力低下的病因复杂，有遗传因素、胚胎期因素及后天因素。本文154例出生缺陷儿均有不同程度的智力(MR)低下、发育迟缓、生殖器发育异常。其中先天愚型(21-三体)发生率占首位，10例为32.2%(男女之比8:2)。可见智力低下最常见的异常核型为21-三体。典型的21-三体几乎都是新发生的。与父母核型无关(它主要是母方生殖细胞在减数分裂时不分离的结果)。本文中涉及的病残儿的父母生育患儿时年龄均未超过30岁，染色体核型分析为正常，因此排除平衡易位携带者遗传和生殖细胞老化等因素。由于患儿父母生育该患儿时年龄均较低，是否存在其他导致减数分裂过程障碍或不良环境因素引起，还有待于进一步研究。 47，xxy的患儿4例，均为纯合型，称为克氏(Kliefeter)综合征，又名先天性睾丸发育不全或先天性小睾丸，是一种常见的睾丸分化异常疾病。是导致男性性功能低下及不育的病因之一。克氏综合征的发生原因是亲代
大蒜根尖染色体观察实验.
大蒜根尖染色体实验报告 一、 实验目的与实验要求 1、掌握洋葱培养的方法，掌握利用秋水仙素诱导植物多倍体的方法。 2、掌握洋葱根尖制片的方法，复习染色、压片的基本操作。 3、通过对于有丝分裂相的观察，统计洋葱染色体数目，加深对于细胞有丝分裂过程的理解。 4、对比进行多倍体诱导前后的洋葱根尖，理解四倍体与二倍体的区别，认识微核和植物细胞分裂期的各形态特征。 5、体验开放式实验教学，培养生物实验意识，提高学习的主动性、获取实验知识的能力和撰写实验报告水平。 二、 实验方案 1、实验仪器 显微镜、载玻片、盖玻片、试管、烧杯、小塑料管、滤纸、刀片、解剖针、滤纸等 2、实验药品 新鲜、健康的洋葱鳞茎一个；0.02%秋水仙素、1mol/L HCl、醋酸洋红染液、卡诺氏固定液，碱性品红、乙酸，乙醇等。 3、实验原理 (1 洋葱的根尖 洋葱根尖的整体结构如右图，其中只有分生区的初生分生组织由于细胞始终处于持久而强烈的有丝分裂之中而作为我们的观察对象，其余部分在制片时都应当尽量剔除来保证观察效果。 (2 多倍体的诱导
多倍体的诱导使用秋水仙素，秋水仙素可以阻止微管蛋白的聚合，从而使有丝分裂中期纺锤体不能正常形成，但是姐妹染色单体照常想成，只是没有被拉向两级，于是染色体数目加倍。 各步骤的作用：固定液可以迅速杀死细胞，保持细胞形态在有丝分裂相。解离可以破坏细胞的胞间层（果胶），使细胞之间的联系变松散，有利于压片和染色。漂洗可以洗去过量的盐酸，防止解离过度 破坏细胞结构或影响染色效果（盐酸是酸性，而醋酸洋红是碱性染料）。 (3 有丝分裂 完整的有丝分裂相包括G1期（合成前期）、S 期（合成期）、G2期（合成后期）和M 期（分裂期），其中G1期、S 期和G2期合称间期，细胞完成DNA 的复制以及有丝分裂的准备，而M 期又可以分为前期、中期、后期和末期，为了形态观察的方便，本实验采用后一种分法。如表一。 表一植物有丝分裂各时期特点 4、实验步骤 (1 将大蒜剥皮后放进垫了滤纸的培养基中，加入清水，放进25℃恒温
人类染色体G显带示意图 口诀
人类染色体G显带示意图 口诀： 一秃二蛇三蝶飘四像鞭炮五黑腰 六号ｐ似小白脸七上八下九两条 十号ｑ三深带好十一低来十二高 十三四五一个样着色深带一二一 十六深带连着点十七深带跑得远 十八人小肚子大十九中间一点腰 二十头重脚轻二十一像葫芦瓢 二十二两两一点Y黑脚，Xｐｑ一担挑 １号染色体（中央） ｐ近侧１／２有两条宽阔和浓染的深带，远端有３－４条较窄较淡的带。长臂有５条深带，中央有一条最亮最深的带。ｑ的次溢痕深染。 ２号染色体（亚中） ｐ有间隔较均匀的４条深带，中间的两条稍靠近。着丝粒染色很浅。长臂根据标本的质量可间６－８条深带。 ３号染色体（中央） ｐ和ｑ中部色浅是３号染色体的特点。ｐ近着丝粒区通常有两条深带。远端可见３条，中间的一条最宽最浓。ｑ臂近端可见两条深带，中间一条明显的浅带，远侧有４－５条深带。 ４号染色体（亚中） ｐ有１－２条深带，ｑ有均匀分布的４条深带，在较好的标本还可以分出较好的更多的带纹。 5号染色体（亚中） ｐ有１－２条深带，ｑ中段有３条深带（有时为１条），远端有１－２条深带。６号染色体（亚中） ｐ中段为一明显宽阔的浅带，这是6号染色体的特征。远端和近端各有一条深带，后者紧邻着丝粒。在质量较好的标本可细分ｑ有６条深带。 7号染色体（亚中） ｐ上有３条深带，末端一条较宽且色深，有如“瓶盖”，ｑ有３条明显的深带，远端一条较浅，且可分为两条。 8号染色体（亚中）最后一条深带宽浓粗壮 p的两条深带被一条浅带隔开，最后一条深带宽浓，粗壮，这是8号染色体的特征，q的3－5条带，近侧段内带和末端较浅的一条带常不明显 9号染色体（亚中）苗条 ｐ有3条深带，远侧的两条深带有时融为一条。ｑ有２条较亮的间隔均匀的深带，远端的一条有时一分为二，次溢痕不着色，长度变异大，但可用ｃ带等选择性染色。 10号染色体（亚中）第一条宽浓 ｐ中段有１－２条深带，ｑ有间隔基本均匀的３条深带。远端２条相距较近。近侧的一条着色最深。 11号染色体（亚中）着丝粒可能染色 ｐ中央有一宽阔的深带有时再分出较窄的一条。着丝粒可能染色。ｑ近着丝粒有
人类染色体组型分析-实验报告
【实验题目】 染色体组型分析 【实验目的】 1. 掌握染色体组型分析的各种数据指标。 2. 学习染色体组型分析的基本方法。 3．对照标准图型，学习识别人体各对染色体的带型特征。 4．初步掌握人体染色体组型带型分析方法。 5．了解染色体组型与带型分析的意义。 【实验材料与用品】 1.器材：直尺、剪刀、胶水、计算器、白纸 2.材料：人体细胞染色体放大图 【实验原理】 染色体组型又称核型，是指将动物、植物、真菌等的某一个体或某一分类群（亚种、种、属等）的体细胞内的整套染色体，按它们相对恒定的特征排列起来的图像。核型模式图是指将一个染色体组的全部染色体逐个按其特征绘制下来，再按长短、形态等特征排列起来的图像。 （一）描述染色体的四个参数： 1．相对长度= 每条染色体长度 单倍常染色体之和+X 2．臂指数= 长臂的长度 q 短臂的长度 p 为了更准确地区别亚中部和亚端部着丝粒染色体，1964年Levan 提出了划分标准： ① 1.0-1.7之间，为中部着丝粒染色体（M ） ② 1.7-3.0之间，为亚中部着丝粒染色体（SM ） ③ 3.0-7.0之间，为压端部着丝粒染色体（ST ） ④ 7.0以上，为端部着丝粒染色体（T ） ×100 （相对长度可以用来表示每条染色体的长度） ×100 （臂指数可以用来确定臂的长度）
3．着丝粒指数 = 短臂的长度 p ×100 （着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位置）染色体全长 p+q 按Levan划分标准: ① 50.0-37.5之间为M ② 37.5-25.0之间为SM ③ 25.0-12.5之间为ST ④ 12.5-0.0之间为T 4．染色体臂数（NF）：根据着丝粒的位置来确定。 a．端着丝粒染色体（T），NF=1； b．中部、亚中部、亚端部着丝粒染色体（M，SM，ST），NF=2。 （二）人类体细胞染色体的分类标准及其主要特征 染色体组型及分群依据：主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次级缢痕或随体的有无等方面。 分组排队原则：着丝粒类型相同，相对长度相近的分一组；同一组的按染色体长短顺序配对 排列；各指数相同的染色体配为一对；可根据随体的有无进行配对；将染色体按长短排队， 短臂向上。 染色体组型图的应用
人类染色体核型分析
人染色体核型分析 一．实验目的 1. 学习染色体核型的分析方法； 2.了解人类染色体的特征。 二．实验原理 1．染色体组型（核型）是指生物体细胞 所有可测定的染色体表型特征的总称。包括： 染色体的总数，染色体组的数目，组内染色体 基数，每条染色体的形态、长度、着丝粒的位 置，随体或次缢痕等。 染色体组型是物种特有的染色体信息之 一，具有很高的稳定性和再现性。 组型分析能进行染色体分组外，还能对染 色体的各种特征做出定量和定性的描述，是研 究染色体的基本手段之一。利用这一方法可以鉴别染色体结构变异、染色体数目变异，同时也是研究物种的起源、遗传与进化，细胞遗传学，现代分类学的重要手段。 2．人类的单倍体染色体组（n=23）上约有30000-40000个结构基因。平均每条染色体上有上千个基因。各染色体上的基因都有严格的排列顺序，各基因间的毗邻关系也是较为恒定的。 人类的24种染色体形成了24个基因连锁群，所以，染色体上发生任何数目异常、甚至是微小的结构变异，都必将导致许多获某些基因的增加或减少，从而产生临床效应。染色体异常常表现为具有多种畸形的综合征，称为染色体综合征，染色体病的检查、诊断已经成为临床实验室检查的重要内容。 1960年，在美国Denver市召开了第一届国际遗传学会议，讨论并确定正常人核型（karyotype）的基本特点即Denver体制，并成为识别人类各种染色体病的基础。按照Denver体制，将待测细胞的染色体进行分析和确定是否正常，以及异常特点即为核型分析。 三．实验材料 人类染色体非显带标本或人类染色体显带标本。 直尺，剪刀，计算机等。 四．实验方法
①选择最佳图象拍照； ②测量、计算； ③配对； ④剪贴（排列——原则：从大到小，短臂向上，着丝粒在一条线上，性染色体单排）。五．实验结果
建立减数分裂中染色体变化的模型实验报告
建立减数分裂中染色体变化的模型 一、实验原理 减数分裂是进行有性生殖的生物在产生成熟生殖细胞时，进行的染色体数目减半的细胞分裂。减I的主要特征是同源染色体配对——__________；四分体中的非姐妹染色单体发生__________；同源染色体________ ，分别移向细胞两极。减II的主要特征是染色体不再复制；每条染色体的__________分裂，姐妹染色单体分开，分别移向细胞的两极。 二、实验过程 1、活动准备： （1）用彩色纸片做出4条黄色和4条红色的染色单体，其中2条黄色的染色单体长3-4cm , 2条长6-8cm；2条红色的染色单体长3-4cm , 2条长6-8cm。 （2）把颜色、长度相同的两条染色单体成对并排放置。用同种颜色的吸扣代表着丝点。（3）磁力小黑板1个，在左侧画一个初级精母细胞的轮廓、中心体和纺锤体；在右侧画2个次级精母细胞的轮廓，中心体和纺锤体。 2、活动任务： （1）模拟减数分裂时染色体数目及主要行为的动态变化；边操作边完成染色体/DNA数量变化表和曲线图 实验方法步骤 实验记录 时期 每一个细胞中 染色 体数 DNA 数 染色单 体数 1 把颜色、长度相同的两条染色单体粘在一起。代表减 数分裂开始时已完成复制的染色体。把做好的染色体 放在画好的精原细胞内。 间期 2 让长度相同、颜色不同的两条染色体配对。红色代表 来自母方的染色体，黄色代表来自父方的染色体 减Ⅰ前 3 将已经配好对的两对染色体横向排列在纺锤体中部 赤道板处， 减Ⅰ中 4 双手分别抓住并移动染色体的着丝点，使红色和黄色 的染色体分离。分别移向细胞的两极。 减Ⅰ后 5 在两极有染色体的部分画出细胞轮廓，代表新细胞的 生成。 减Ⅰ末 6 在另一张纸上再画两个次级精母细胞的轮廓，并画出 中心体和纺锤体。将已经移到细胞两极的染色体分别 放到这两个新细胞中。 减Ⅱ前 7 把新细胞中的染色体横向排列在细胞中央的赤道板 处。 减Ⅱ中 8 把姐妹染色单体分离，成为独立的染色体，并将染色 体分别拉向细胞的两极。尽量一次移动所有的染色 体，象在活细胞中发生的那样 减Ⅱ后 9 在两极有染色体的部分画出细胞轮廓，代表新细胞的 生成。 减Ⅱ末 （2）模拟减数分裂过程中非同源染色体的自由组合 探究创新：如果用3对染色体进行模拟，将产生多少种类型的配子？
植物细胞染色体制片及有丝分裂观察
实验报告 学生姓名： 学号： 专业: 年级、班级： 课程名称： 遗传学实验 实验项目：植物细胞染色体制片及有丝分裂观察 实验目的 1.学习和掌握植物根尖细胞有丝分裂染色体压片技术 2.观察有丝分裂过程中染色体的形态特征和动态变化 实验原理 1. 在有丝分裂过程中，细胞核内染色体能准确地复制，并能有规律地均匀分配到两个子细胞中去，使子细胞遗传组成与母细胞完全一样，从而保证了性状的发育和遗传的稳定性。 2. 有丝分裂是一个连续的过程，可分为前期、中期、后期和末期。高等植物的有丝分裂主要发生在根尖、茎尖及幼叶等部位的分生组织。经过适当的取材处理、固定、离析、染色、压片等步骤，可获得清晰的植物细胞有丝分裂染色体动态变化的装片。 实验材料 无水乙醇、70%乙醇、冰乙酸、饱和对二氯苯水溶液、0.1%秋水仙素、0.1N 盐酸、洋葱根尖 实验步骤 材料培养 取材 预处理 固定 解离（酸解） 实验结果 醋酸洋红染色 染色 改良品红染色 压片 镜检
图1 染色后低倍镜下洋葱根尖细胞全视野图图2 处于分裂间期的洋葱根尖细胞图3 处于有丝分裂前期的洋葱根尖细胞图4 处于有丝分裂中期的洋葱根尖细胞 图5 处于有丝分裂后期的洋葱根尖细胞图6 处于有丝分裂末期的洋葱根尖细胞
思考与分析 根据你的实验情况总结出制备好一张优良的细胞分裂标本应注意哪些问题？ 预处理方面 由于正常情况下细胞分裂中期持续的时间很短，且分裂现象较少，因此在预处理时可采用化学或物理方法使细胞分裂停止于中期，从而获得更好的观察效果。 解离方面 在酸解过程中一定要掌握好温度和时间，若解离不够，则压片不易分散，若解离过长则在下一步处理时由于材料过软而易将根尖丢失。 3.取材方面 只取2mm ～3mm 长的分生区 要细心区别根尖的前端和后端，若误取了根尖的后端，在观察时，则只会见到长方形的成熟区细胞，见不到方形的分生区细胞。材料经解离、冲洗后根尖前端分生区部分呈乳白色、比较圆滑，后端部分则较透明和粗糙（取根时不用剪刀而改用镊子夹取则更明显）。 4.染色方面 ⑴使用醋酸洋红染色时，可以在酒精灯上稍加热，这样可以使材料更易着色和染色背景更清晰。 ⑵媒染一定要充分，媒染后的水洗也要充分，洗不足时影响染色效果，并会在组织内外产生大量沉淀，制成的片子污浊。 图7 有丝分裂中期的洋葱根尖细胞绘制图（10x40） 图8 有丝分裂后期的洋葱根尖细胞绘制图 （10x40）
实验七染色体核型分析
【实验项目】染色体核型分析 〖实验目的和要求〗 观察分析细胞有丝分裂中期染色体的长短、臂比和随体等形态特征；学习染色体组型分析的基本方法和技能。 〖实验原理〗 染色体组型分析是细胞遗传学研究的基本方法，是研究物种演化、分类以及染色体结构、型态与功能之间的关系所不可缺少的重要手段。染色体组是指二倍体生物配子中所含的染色体总称，常以“Ｘ”表示。 同一物种的同一染色体组内各染色体的形态、结构和连锁群是彼此不同的，但它们却相互协调，共同决定生物性状的发育。 研究染色体组型的方法，一是靠有丝分裂时染色体的形态特征，另一是靠减数分裂时染色体的形态和特征。本实验着重介绍有丝分裂的染色体组型分析。 细胞有丝分裂中期是识别染色体个性特征的最佳时期，而染色体组型分析就是进行染色体特征的鉴别和描述，其形态的鉴别主要依据染色体的长度、着丝粒位置、付缢痕的有无和位置、随体的有无、形状和大小等资料进行分析。现分别介绍如下： 1.染色体长度，同一染色体组内各染色体的长度是不一致的，其绝对长度可在显微镜上测量，或用放大 照片测量后换算。由于染色体制片过程中使用的药剂及方法不同，另外供观察的细胞分裂不可能保证同一时期，故染色体的收缩有差异而导致绝对长度在同一物种或个体不同细胞间发生差异，针对这种情况，在分析中常用染色体的相对长度来表示。 在染色体长度测量中，对染色体的两条臂要分别测量，一般随体不计入染色体长度内。 2.着丝粒的位置：每条染色体都有一着丝粒，其位置可因不同染色体而异。由于着丝粒把染色体分为 两个染色体臂：长臂和短臂，它们的比率（即臂比）便可确定着丝粒的位置。 3.付缢痕的有无和位置：有些染色体上除着丝粒，还另有一不着色或缢缩变细的区域称符缢痕。 4.随体的有无、形状和大小：有些染色体在短臂的末端有一棒状小体称为随体，随体和染色体臂之间 常以付缢痕相隔，具随体的染色体称SAT染色体。 〖材料和方法〗 细胞有丝分裂永久制片或其中期染色体图象的放大照片。 〖用具和药品〗 剪刀、直尺、胶水。 〖实验步骤〗 （一）染色体标本的制备 1.制片 2.观察制片，选择理想的中期分裂相细胞进行显微摄影，冲洗放大照片 （二）染色体组型分析 1.染色体计数
染色体标本制作与观察实验报告
【实验题目】 染色体标本制作与观察 【实验目的】 1、掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操作步骤的原理。 2、了解常用实验动物染色体的数目及特点。 3、认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。 【实验材料与用品】 1.?器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、手术剪、解剖盘、胶头滴管、离心管、离心机、 小烧杯、冰箱、酒精灯、小烧杯等? 2.?材料：小鼠 3. 试剂：蒸馏水、0.9%?NaCl溶液、0.3%?KCl溶液，固定液（甲醇：冰醋酸=3:1）、 秋水仙素 【实验原理】 一、制作染色体标本的先决条件 ?细胞具有旺盛的分裂能力：选择活跃的组织，如胸腺、骨髓、睾丸、小肠；或施加药物使 细胞分裂（PHA） ?设法得到大量的分裂中期细胞：利用秋水仙素 二、染色体 染色体是基因的载体。真核细胞染色体的数目和结构是重要的遗传特性之一。制备染色体标本是细胞学最基本的技术之一，优良的染色体制片是进行染色体显带、组型分析、原位杂交等的先决条件。 染色体的制备在原则上可以从所有发生有丝分裂的组织和细胞悬浮液中得到。最常用的途径是从骨髓细胞、血淋巴细胞、、和组织培养的细胞中制备染色体。本实验采用的方法是从小鼠的睾丸细胞中获取。
染色体的形态结构在细胞增殖周期中是不断的运动变化的，一般在有丝分裂中期，染色体形态最典型、最易辨认和区分。因此，制备染色体标本获取的是中期细胞。 染色体特征：数目、长度（绝对长度、相对长度）、着丝粒位置（M/SM/ST/T)、随体与次缢痕的数目大小和位置、带型分析 描述染色体的四个参数：? ①?相对长度=（每条染色体的长度）/（单倍常染色体之和+X染色体）*100，相对长度可以 用来表示每条染色体的长度。? ②?臂指数=（长臂的长度）/(短臂的长度)，臂指数可以用来确定臂的长度。 ③?着丝粒指数=（断臂长度）/（染色体全长）*100，着丝粒指数可以决定着丝粒的相对位 置?。 ④?染色体臂数（NF），根据着丝粒的位置来确定。 三、操作原理 小型动物的染色体制片最好最有效的材料就是骨髓组织（由于分裂活动旺盛，睾丸也可）利用睾丸细胞的制片技术虽然需要离心以及细致的操作，但基本程序并不复杂。在小鼠睾丸中，细胞有丝分裂和减数分裂比较旺盛，因此不需要体外培养就可以直接得到分裂中期细胞。通过小鼠睾丸得到染色体比较简便，一般不需要无菌操作。用秋水仙素作为有丝分裂的抑制剂，将其注入到小鼠腹腔中，可以阻止分裂细胞纺锤体的形成。 由于小鼠睾丸细胞分裂活动旺盛，具有高度的分裂能力，本次实验通过前处理、低渗、固定、制片染色等步骤制得染色体标本，可观察到许多处于分裂中期的染色体，可以进行染色体组型分析。 Giemsa染色法的染色结果：细胞核染成紫红色、细胞质和核仁染成蓝紫色 四、制作染色体标本的意义 了解染色体的特征（形态、大小、数目）——绘制染色体组型图? 染色体组型：把真核动物一个体细胞各染色体按长度、形状、着丝粒位置排列成一定顺序。? 染色体核型：某一物种特有的一组或一套染色体的形态特征。?? 染色体组型图的应用? ①?鉴别生物种类：兔44条；小鼠40条；大鼠42条；鸡78条；猫38条；狗78条；马64?
染色体 实验报告
染色体标本的制备及组型实验 生命科学学院张瀛 【实验目的】 1．掌握染色体标本的制作方法。 2．认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组型图。 【实验用品】 小白鼠，秋水仙素，生理盐水，0.3%KCl液，固定液，铜网，酒精灯，离心机，注射器，剪刀，镊子，载玻片，滴管，显微镜等。 【实验原理】 染色体标本制作的原理 细胞分裂中期染色体形状较为清楚，故使用中期细胞，并以每条染色体相对独立存在为 染色体标本制作的四大要点 1）PHA：促细胞分裂，使淋巴细胞返幼，变为淋巴母细胞。 2）秋水仙素：破坏微管装配，使纺锤体不能形成，使大量细胞停止在分裂中期。（相同作用：秋水仙胺、长春碱、鬼臼素） 3）低渗作用：水进入细胞内，使细胞内容空间变大，染色体间的距离拉大，易于染色体分散开。 4）空气干燥：使细胞和染色体展开。 5）固定：用camoy`s solution（甲醇：冰醋酸=3:1）作用使蛋白质变性，对染色体内的组蛋白来说，变形后硬度增加，保持了染色体的“即时形态”，对细胞膜蛋白来说，变形使细
胞膜硬度增强，形成屏障作用，防止了细胞内物质外溢和丢失。 染色体标本制作的意义 根据染色体的特征（数目、形态、大小等）制作染色体组型图。 染色体标本制作的应用 1） 生物学方面：根据染色体特征鉴别生物及种类。 染色体数目：兔-44条，猫-38条，狗-78条，马-64条，人-46条，小鼠-40条（18对端着丝粒染色体，第17、18对为亚端着丝粒染色体），大鼠-42条，鸡-78条。 2） 临床医学方面：主要用于遗传性疾病的诊断及研究。 因此，染色体组型实验广泛应用于胎儿遗传性疾病早期诊断中（抽取羊水）。 染色体组型 把真核生物的一个体细胞中的各个染色体按其长度、形状和着丝粒的位置排列成一定顺序的过程，即为染色体组型。 染色体核型 染色体组型是染色体核型的模式表达。 染色体组型及分群依据 主要根据染色体的相对长度，着丝粒的位置，其次是臂的长短，以及次级缢痕或随体的有无等方面。 描述染色体的四个参数 相对长度：可用来表示每条染色体的长度。 臂指数：可用来确定臂的长度。 为了更准确的区别压中部和亚端部着丝粒染色体，Levan 提出划分标准： 1．0-1．7之间：中部着丝粒染色体（M ） 1．7-3．0之间：亚中部着丝粒染色体（SM ） 3．0-7．0之间：亚端部着丝粒染色体（ST ） 7．0以上：端部着丝粒染色体（T ）
染色体核型分析
细胞遗传学（染色体核型）分析 克隆性染色体异常是诊断恶性血液病的重要依据。许多特异性染色体畸变和特定的恶性血液病亚型相联系，因而成为恶性血液病诊断分型的重要指标；诊断时的染色体核型对恶性血液病具有独立的预后价值，对于治疗方案的选择具有指导意义；同时染色体畸变可作为监测白血病缓解、复发及突变的重要参考指标，也为分子学研究提供了重要线索。比如t(9;22)异常的急性淋巴细胞白血病、复杂染色体异常的白血病预后很不好，应尽早进行异基因造血干细胞移植等。WHO制定的恶性血液病分型系统中，将染色体核型作为最重要的分型及诊断指标，发现重现性异常的染色体可提前作出AML的诊断。很多染色体异常导致特异性的白血病融合基因。染色体分析除用于各类恶性血液病患者，如急、慢性白血病、MDS、MPNs、淋巴瘤、多发性骨髓瘤(MM)患者外，还可用于儿童遗传性疾病、先天性畸形的染色体检测，以及习惯性流产、不孕不育等疾病的诊断。但是染色体分裂相的制备和分析具有一定的难度，需要时间长，因此导致临床染色体的诊断缺乏及时性，往往发报告时间需要一个月甚至更长的时间；染色体核型分析需要细胞分裂才能完成，因此需要细胞具有良好的分裂活性，部分患者的细胞不分裂就不能观察到可供分析的中期分裂相（正常染色体分裂相，核型排列后如图3和图4），在一定程度上影响了患者的确诊和治疗。此外染色体一般只能分析20-30个分裂相细胞，敏感性只有百分之一，当异常细胞比例较低时，也难以发现异常的染色体。异常染色体核型的判断需要经验丰富的技术人员，尤其对一些复杂染色体异常，或异常较小的染色体，往往难以正确判断。采用染色体全自动扫描暨自动核型分析系统可以加快染色体检测和发报告速度。通过加用一些促细胞分裂的试剂可增加可供分析的核型。
小鼠染色体的制备观察染色
生命科学学院 Life Science College 细 胞 生 物 学 实验报告 姓名：柳伟雄班级：2013级生科一班 学号：同组者：曾玮璠 山东大学实验报告2015年6月1日 姓名：柳伟雄系年级：生科一班2013级同组者：曾玮璠 科目：细胞生物学实验题目：小鼠染色体的制备、染色、观察 一、目的和要求 1.初步掌握小鼠睾丸细胞染色体标本的基本制作过程和Giemsa染色法，了解各操 作步骤的原理。 2.了解常用实验动物染色体的数目及特点。 3.认识不同生物染色体的特征，学会做染色体组形图。 二、原理 凡处于活跃增殖状态的细胞，或者经过各种处理后，任何动物组织的细胞就可进入分裂，均可用于染色体分析。在正常动物体内，精巢和骨髓均为是活跃分裂的组织。给动物注射一定剂量的秋水仙素，即可使许多处于分裂的细胞停滞于中期，然后采用常规空气干燥法制备染色体，即可得到大量可分析的染色体标本。本方法简便、可靠，不需要经体外培养和无菌操作，易于推广。骨髓细胞是用于动物细胞遗传学研究很好的材料。但在取材方面，精巢又比骨髓要简易一些，故本实
验选用小鼠的精巢为实验材料。 对于小鼠精巢染色体标本的制作，一般包括以下几个要点: 1. 用一定剂量的秋水仙素破坏纺锤丝的形成，使细胞分裂停滞在中期, 使中期染色体停留在赤道面处; 2. 用低渗法使细胞膨胀, 以至于在滴片时细胞被胀破, 使细胞的染色体铺展到载玻片上; 3. 空气干燥法可使细胞的染色体在载片上展平,经Giemsa染色后便可观察到染色体的显微图象。 Giemsa染色是最常用的染色方法之一，适用于多种细胞和染色体染色。主要用Giemsa染液可以将细胞核染成紫红色或蓝紫色，胞浆染成粉红色，在光镜下呈现出清晰的细胞及染色体图像。 三、试剂和器材 1.试剂：秋水仙素、生理盐水（0.9%的NaCl溶液）、0.3%KCl低渗溶液、固定液（甲 醇：冰醋酸=3：1）、Giemsa染液 Giemsa染液的配制： 吉姆萨粉(Giemsa stain) 甘油(AR) 甲醇(AR) 将Giemsa粉放入研钵中，先加入少量甘油，研磨至无颗 粒为止，然后再分批加入甘油，放56℃温箱中2h后，分批 加入甲醇，将配制好的染液密封保存棕色瓶内(最好于0~4℃ 保存)。使用前，将母液用PBS稀释后使用。 2.器具：解剖盘、镊子、眼科剪、小烧杯（×2）、吸管、玻璃刻度离心管、离心 机、铜网、预冷载玻片、记号笔、普通光学显微镜、玻璃等 3.材料：小白鼠 四、实验步骤 制片 1.取雄性小鼠以每克体重4μg注射秋水仙素，经14～16小时后，断头法杀死小 鼠，取出睾丸用生理盐水（0.9%的NaCl溶液）洗去血污。 2.将睾丸放入装有1ml 0.3%KCl低渗溶液的小烧杯中剪碎至呈乳白色。 3.用铜网过滤到玻璃刻度离心管中，再加0.3%KCl缓冲溶液至4ml。 4.静置30min，进行低渗处理。 5.以800～1000r/min的转速离心8min。 6.取出离心管，弃去上清液，加入2ml固定液（甲醇：冰醋酸=3：1），并用吸管 至管底吹气，轻轻打散细胞，固定8min。 7.再以800～1000r/min转速离心8min。 8.弃上清，加入1ml固定液，再制成细胞悬液，固定5min。 9.取洁净的低温预冷载片，距载片10～15cm高度滴下2～3滴细胞悬液，从载片 一边向另一边轻轻吹气，同时轻轻敲打载片，以使细胞均匀分布和促使染色体展开。 10.用滤纸擦去载片上多余液体，空气干燥或成文火干燥。 染色