生物化学实验复习题-2

生物化学实验复习题：

1.试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。

2.在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷

物淀粉的比旋光度是不同的。其在171～195之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。

3.淀粉含量测定的方法有几种比较各方法特点。

4.淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋

光法等。

5.1、酸水解法：面粉经乙醚除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖，

按还原糖测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。

6.2、酶水解法：面粉经除去脂肪及可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用

盐酸将双糖水解成单糖，最后按还原糖测定，并折算成淀粉。

7.3、旋光法：在加热及稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条

件下，不同面粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在171~195之间，因此可用旋光法测定淀粉的含量。

8.简述旋光法测定淀粉的关键步骤。

9. 1.样品的处理

在电子天平上称取小麦粉置于三角瓶中→加入50ml 1%HCl混成浆状（不能有结块）→沸水浴中准确加热15min→先加1ml 30% ZnSO4混匀→再加1ml 15%亚铁氰化钾混匀→移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤→弃去最初15ml收集其余滤液。

2.旋光度测定

取滤液20ml置于旋光管中，先用1%HCl 调节旋光仪“0”点，然后将样品溶液放入旋光仪中测α

10.写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。

11.

12.…

13.试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。

14.含氮的有机物与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮

则转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。

浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数（相当于待测物中氨的摩尔数）计算出待测物中的总氮量。

15.蛋白质含量测定的方法有几种比较各方法特点。

16.定氮法,双缩尿法（Biuret法）、Folin－酚试剂法（Lowry法）和紫外吸收法.考马斯亮

蓝法（Bradford法）.

17.凯氏定氮灵敏度低,适用于氮,误差为±2％费时

18.10小时将蛋白氮转化为氨,用酸吸收后滴定非蛋白氮（可用三氯乙酸沉淀蛋白质而

分离）用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长

19.双缩脲法（Biuret法）灵敏度低20mg 中速20~30分钟多肽键＋碱性Cu2＋?紫

色络合物硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸用于快速测定,但不太灵敏；不同蛋白质显色相似

20.紫外吸收法较为灵敏50～100mg 快速10分钟蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基

在280nm处的光吸收各种嘌吟和嘧啶；

21.F olin－酚试剂法（Lowry法）灵敏度高5mg 慢速40～60分钟双缩脲反应；磷钼

酸－磷钨酸试剂被Tyr和Phe还原硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；

22.各种硫醇耗费时间长；操作要严格计时；颜色深浅随不同蛋白质变化

23.考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高5mg 快速5～15分钟考马斯亮蓝染料与蛋

白质结合时,其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；

24.S DS 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定；颜色深浅随不同蛋白质变化

25.简述凯式定氮法测定蛋白质的关键步骤。

26.1、消化：在电子天平上称取小麦粉置于凯氏试管底部→加混合混合催化剂和3ml

浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明（2h左右）取出放入通风橱内至不冒白烟，向其中加20ml水，并移至100ml容量瓶定容→即得样品消化液。

同时每4组8人做1空白实验：混合催化剂+3ml浓硫酸置于凯氏试管中放入消化炉加热至淡绿色（1h左右）→冷却后加水移入100ml容量瓶中定容得空白消化液。

2.蒸馏与吸收：吸取10ml 2%的硼酸于三角瓶中→加4d甲基红-溴甲酚绿混合指示剂

（若变绿色则用L HCl调至紫红色）。将其置于冷凝管下端并使管尖插入液面以下，再吸取5ml消化液从漏斗上方加入蒸馏室内用水洗两次，并加入10ml 40%NaOH后水封（注意：勿使漏斗内玻杆取下以防漏气），然后打开通气阀进行加热蒸馏，直至

吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸馏3min→先移去吸收液再停止加热以防倒吸。

3. 滴定：用L HCl 滴定吸收液由绿色退去变红色为止，记下耗去标准盐酸的体积。

27.写出计算蛋白质含量的公式并说明各符号的含义。

28.

29.、

30.试述淀粉酶活力测定的实验原理。

31.淀粉酶主要包括α-淀粉酶和β-淀粉酶两种。α-淀粉酶可作用于淀粉中的α-1,4-糖

苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等还原糖，β-淀粉酶可从淀粉的非还原性末端进行水解，生成麦芽糖。淀粉酶催化产生的这些还原糖能使3,5-二硝基水杨酸还原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水杨酸。

32.

淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的麦芽糖的量表示酶活力。

淀粉酶存在于萌发后的禾谷类种子中，，其中主要是α-淀粉酶和β-淀粉酶。两种淀粉酶特性不同，α-淀粉酶不耐酸，在以下迅速钝化。β-淀粉酶不耐热，在70℃15min 钝化。根据它们的这种特性，采用加热的方法钝化β-淀粉酶，测出α-淀粉酶的活力。

在非钝化条件下测定淀粉酶总活力（α-淀粉酶活力+β-淀粉酶活力），再减去α-淀粉酶的活力，就可求出β-淀粉酶的活力。

33.淀粉酶活力测定的方法有几种比较各方法特点。

34.简述淀粉酶活力测定的关键步骤

淀粉酶活力测定

①α-淀粉酶活力测定

吸取原液1ml于具塞试管中→70℃保温15min用于钝化β-淀粉酶→加1ml 1%淀粉置于40℃水浴中保温5min→加1% 一二硝基水杨酸2ml 沸水加热5min后加水至20ml混匀测A1（用1#管调零）

《

②总酶活力测定

吸取稀释液1ml于具塞试管中→加1ml 1%淀粉40℃保存5min→加入1% 一二硝基水杨酸2ml沸水加热5min后加水至20ml混匀测A2（用1#管调零）

35.写出计算淀粉酶活力大小的公式并说明各符号的含义。

36.

37.试述SDS-PAGE法测定蛋白质分子量的实验原理。

38.聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量的方法，主要是根据各蛋白质组分的

分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所造成的电泳迁移率的差别。在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS），使所有蛋白质颗粒表面覆盖一层SDS分子，导致蛋白质分子间原有的电荷差异消失，此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小。当蛋白质的分子量在15000～200000之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈直线关系。

39.试比较已做实验测定蛋白质分子量方法的异同点。

40.S DS-PAGE 超速离心凝胶过滤粘度法生物质谱技术

41.简述SDS-PAGE法测定蛋白质分子量的关键步骤。

1. 电泳槽的安装：取两块玻璃板→将带玻璃条的板（高板）放置桌面上→在上面放置“U”型橡胶条→最后将凹槽玻璃板（低板）压在高板上，置于电泳槽内，用锲子压紧。

2. 凝胶液的制备与灌装：配置20ml凝胶液：在小烧杯中依次加入5ml 30%凝胶储液，10ml PH 凝胶缓冲液(用前混匀再取)，2ml 1%TEMED，重蒸水，10%过硫酸铵混匀后→立即沿高板内侧倒凝胶液于两板之间直至低板上沿→插上梳子置于35oC培养箱中放置15min，待胶凝后取下“U”条→重新将胶板放置于电泳槽内→向外槽内加三分之一槽深电极缓冲液→向内槽加入电极缓冲液没过低板→最后拔出梳子。

(

3. 加样：用微量进样器加入10μl标准蛋白于中间胶槽内→其余槽内加入10μl下列样品①牛血清蛋白②绿豆分离蛋白

4. 电泳：连接电极线，高板外侧接正极，低板内侧槽接负极，打开电源→调电流120mA →电泳2h（当指示剂前沿超过二分之一胶长时停止）

5. 剥胶：取下胶板倒去电极缓冲液→测量指示剂迁移距离和染色前胶长，然后将胶板置于水龙头下方冲玻板四周直至胶与玻璃板分离

6. 染色与固定：将胶板放入染色盒内→向其中加入%考马斯亮蓝R250使其浸没置于摇床上染色过夜

7. 脱色：用10%乙酸溶液脱色至谱带清晰，测定脱色后胶长及各谱带迁移距离。42.写出电泳法测定蛋白质分子量的计算公式并说明各符号的含义。

43.

44.试述赖氨酸含量测定的实验原理

45.蛋白质中赖氨酸的含量是谷物品质的主要指标之一。由于动物及人类不能合成，须

从食物中得以补充，为此培育高含量赖氨酸的谷物，对于提高营养价值有重要意义。

本实验分别用茚三酮溶液显色法和染料结合法，测定小麦种子中赖氨酸含量。

谷物蛋白中赖氨酸残基有自由的ε－NH3与茚三酮试剂可发生颜色反应，生成紫红色物质，其颜色深浅与赖氨酸残基的数目成正相关，而其它氨基酸没有自由氨基，不能发生这一反应。选用碳原子数目与赖氨酸相同的亮氨酸，配成标准溶液，做出标准曲线，可用以测定谷物蛋白内赖氨酸的含量。

46.，

47.氨基酸含量测定的方法有几种比较各方法特点。

常用的有,半定量法：纸层析法；定量法：HPLC柱前衍生化法.

48.简述测定赖氨酸的关键步骤。

1.标准曲线的制作（每2组4人做1标准曲线）

2、样品的处理与测定：在电子天平上称取小麦粉10mg于具塞试管底部→加1ml 2% 碳酸钠于80℃水浴中保温提取10min→加2ml茚三铜试剂80℃水浴中保温30min后冷却至室温→加5ml 95%乙醇和5ml蒸馏水充分混匀后转移至离心管中3000转/分离心3min（离心前必须平衡）→取上清液测A（以1号管调零）

49.写出计算赖氨酸的公式并说明各符号的含义。

50.试述甲醛滴定法测定氨基氮的实验原理。

)

常温下甲醛能迅速与氨基酸的氨基结合生成亚羟甲基化合物，使上述平衡右移促使NH3+释放H+，从而使溶液酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域内（pH值左右），根据滴定终点时所消耗标准碱的量即可算出反应体系中存在的游离氨基即氨基氮的含量如果样品为一种已知的氨基酸，即可算出该氨基酸的含量。如果样品为未知氨基酸或几种氨基酸的混合物，则只能算出其氨基氮的含量。

51.简述甲醛滴定法测定氨基氮的关键步骤。

已知氨基酸溶液中氨基酸含量的测定:

取3只三角瓶编号①2ml 1% 甘氨酸②2ml 1% 甘氨酸③2ml 水（空白）

均加5ml 水和5ml中性甲醛（用前加2滴% 酚酞滴加LNaOH调至淡红色），及4滴%酚酞混匀→用L滴至粉红色出现为止→分别记下耗去标准碱的体积）

52.写出甲醛滴定法测定甘氨酸的公式并说明各符号的含义。

53.~

54.试述纸上层析法分离氨基酸的实验原理。

纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的－OH具有亲水性，因此能吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动，称为下行层析；自下而上流动，称为上行层析。流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使物质在两相之间不断分配而得到分离。

55.氨基酸分离的方法有几种比较各方法特点。

56.氨基酸的分离提纯方法主要有沉淀法、离子交换法、萃取法、电渗析等

57.离子交换法，根据氨基酸是两性电解质这一特征,以及目的氨基酸与杂质氨基酸pK、

pI值的差异,利用离子交换树脂对各种氨基酸吸附能力的不同对氨基酸进行分离纯化。离子交换法的分离步骤主要包括树脂的处理、装柱、平衡、加样、洗脱等步骤

58.沉淀法，沉淀法是历史最悠久的分离纯化方法，目前仍在工业上发挥着重大的作用。

氨基酸工业中常用沉淀法有等电点沉淀法，特殊试剂沉淀法和有机溶剂沉淀法。沉

淀法原理是根据某些氨基酸可以与某些有机或者无机化合物结合而形成沉淀，可以利用这种性质向溶液中加入特定的沉淀剂，使目标氨基酸沉淀，与其他氨基酸分离，在分离后再将氨基酸与沉淀剂分离即可。

59.萃取法，萃取法主要包括反应萃取法、溶剂萃取法、反向微胶团萃取、液膜萃取法

等。其中，反应萃取法是选择适当的萃取剂，使萃取剂解离出来的离子与氨基酸解离出来的离子发生反应，生成可以溶于有机相的物质，从而使氨基酸从水相进入有机相，进而分离氨基酸。溶剂萃取法，由于氨基酸是离子型化合物，氨基酸在物理萃取时难以高效提取的，因此常用化学发来萃取氨基酸。反向微胶团萃取的原理相对复杂，表面活性剂自发形成的纳米级的一种聚体，它的极性尾在外与非极性的有机溶剂接触，而极性头则排列在内形成极性核，极性核溶于水后就形成了特殊的“水池”，当含有氨基酸的水溶液与含反相微胶团的有机溶剂相混合时，氨基酸以带电离子状态进入反相微胶团的“水池”内或微胶团球粒的界面分子膜层内而被分离。液膜萃取是将第三者液体辗成膜状，利用液膜的选择透过性，从而使目标产物透过半透膜进行分离，这是一种新型的氨基酸分离法，常用于乳酸液泡膜分离L-苯丙氨酸、精氨酸等氨基酸。

60.电透析，由于氨基酸拥有不同的等电点，故可以通过控制溶液的PH值，使氨基酸

带有正负电荷，即当PH大于等电点时，带有负电荷，将氨基酸放置在电场中，会带上负电，并且移向正极，相反，PH值小于等电点时，则带上正电荷，氨基酸向负极移动。电透析主要有毛细电透析等方法，通过这种方法可以高效而精确地分离氨基酸。

61.简述纸上层析法分离氨基酸的关键步骤。

1、平衡：将展开剂（乙醇：水：冰乙酸＝50:10:1）放入培养皿中置于密闭容器内使其充满展开剂（24h左右）

2、点样：取滤纸1张用铅笔在距下方2cm处划线并将所得线段分成5等分从而得到4个标记点，用微量进样器分别取5μl下列样品①phe②lys③pro④混合Aa向4个标记点上加样（样品扩散中?≤1cm）

3、展层：将滤纸卷成筒状且不能够重叠，并用棉线扎紧然后垂直放入培养皿中进行展层2h

（当展开剂沿到达滤纸长度三分之二时，即可取出）测量展开剂前沿移动距离（a）

4、显色：用%茚三酮-丙酮溶液朝点样面喷雾（不要喷得太多）然后将滤纸置于电炉上方20cm 处加热直至斑点出现为止，测量各斑点中心到点样点距离（b）

62.(

63.影响纸上层析法分离氨基酸的因素有哪些

温度,层析液,样品的浓度等

64.试述凝胶层析法测定蛋白质分子量的实验原理。

聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量的方法，主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带净电荷多少等因素所造成的电泳迁移率的差别。在聚丙烯酰胺凝胶系统中，加入一定量的十二烷基硫酸钠（SDS），使所有蛋白质颗粒表面覆盖一层SDS分子，导致蛋白质分子间原有的电荷差异消失，此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小。当蛋白质的分子量在15000～200000之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈直线关系。

65.简述凝胶层析法测定蛋白质分子量的关键步骤。

1. 电泳槽的安装：取两块玻璃板→将带玻璃条的板（高板）放置桌面上→在上面放置“U”型橡胶条→最后将凹槽玻璃板（低板）压在高板上，置于电泳槽内，用锲子压紧。

2. 凝胶液的制备与灌装：配置20ml凝胶液：在小烧杯中依次加入5ml 30%凝胶储液，10ml PH 凝胶缓冲液，2ml 1%TEMED，重蒸水，10%过硫酸铵混匀→立即沿高板内侧倒凝胶液于两板之间直至低板上沿→插上梳子放置15min，待胶凝后取下“U”条→重新将胶板放置于电泳槽内→向外槽内加三分之一槽深电极缓冲液→向内槽加入电极缓冲液没过低板→最后拔出梳子。

3. 加样：用微量进样器加入7μl标准蛋白于中间胶槽内→其余槽内加入7μl下列样品①牛血清蛋白②绿豆分离蛋白

^

4. 电泳：连接电极线，高板外侧接正极，低板内侧槽接负极，打开电源→调电流120mA→

电泳2h（当指示剂前沿超过二分之一胶长时停止）

5. 剥胶：取下胶板倒去电极缓冲液→量取指示剂迁移距离和染色剂的前胶长，然后将胶板置于水龙头下方冲玻板四周直至胶与玻璃板分离

6. 染色与固定：将胶板放入染色盒内→向其中加入%考马斯亮蓝R250使其浸没置于摇床上染色过夜

7. 脱色：用10%乙酸溶液脱色至谱带清晰，测定脱色后胶长及各谱带迁移距离。

66.写出凝胶层析法测定蛋白质分子量的公式并说明各符号的含义。

67.说明离心机使用时应注意的事项。

1 离心机要放在平坦和结实的地面或实验台上，不允许倾斜；

；

2 通常离心机都会有登记表，请在使用前确实登记使用者、转头、转速、时间；

3 离心管一定要用天平平衡重量（重量平衡），盖上离心管盖子并旋紧；

4 把平衡好的离心管对称地放入离心陀中（位置平衡），盖上离心陀的盖子，注意有无旋紧；

5 完成离心时，要等待离心机自动停止，不允许用手或其他物件迫使离心机停转，待转头完全静止后，才能打开舱门，请尽快取出离心管，先观察离心管是否完全，以及沉淀的位置，尽速把上清倒出，小心不要把沉淀弄混浊。

68.使用分光光度计应注意哪些事项。

1. 取拿比色皿时，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光学表面。

2. 比色皿不能用碱溶液或氧化性强的洗涤液洗涤，也不能用毛刷清洗。比色皿外壁附着的水或溶液应用擦镜纸或细而软的吸水纸吸干，不要擦拭，以免损伤它的光学表面。

69.操作旋光仪应注意哪些事项。

￥

旋光仪的使用及注意事项

a．测定前应将仪器及样品置20℃士℃的恒温室中或规定温度的恒温室中，也可用恒温水浴保持样品室或样品测试管恒温lh 以上，特别是一些对温度影响大的旋光性物质，尤为重要。

b．未开电源以前，应检查样品室内有无异物，钠光灯源开关是否在规定位置，示数开关是否在关的位置，仪器放置位置是否合适，钠光灯启辉后，仪器不要再搬动。

c. 开启钠光灯后，正常起辉时间至少20min，发光才能稳定，测定时钠光灯尽量采用直流供电，使光亮稳定。如有极性开关，应经常于关机后改变极性，以延长钠灯的使用寿命。d．测定前，仪器调零时，必须重复按动复测开关，使检偏镜分别向左或向右偏离光学零位。通过观察左右复测的停点，可以检查仪器的重复性和稳定性。如误差超过规定，仪器应维修后再使用。

e．将装有蒸馏水或空白溶剂的测定管，放入样品室，测定管中若混有气泡，应先使气泡浮于凸颈处，通光面两端的玻璃，应用软布擦干。测定时应尽量固定测定管放置的位置及方向，做好标记，以减少测定管及盖玻片应力的误差。

f．同一旋光性物质，用不同溶剂或在不同pH 值测定时，由于缔合、溶剂化和解离的情况不同，而使比旋度产生变化，甚至改变旋光方向，因此必须使用规定的溶剂。

g．浑浊或含有小颗粒的溶液不能测定，必须先将溶液离心或过滤，弃去初滤液测定。有些见光后旋光度改变很大的物质溶液，必须注意避光操作。有些放置时间对旋光度影响较大的，也必须在规定时间内测定读数。

,

h．测定空白零点或测定供试液停点时，均应读取读数三次，取平均值。严格的测定，应在每次测定前，用空白溶剂校正零点，测定后，再用试剂核对零点有无变化，如发现零点变化很大，则应重新测定。

i．测定结束时，应将测定管洗净晾干放回原处。仪器应避免灰尘放置于干燥处，样品室内可放少许干燥剂防潮。

70.写出凝胶层析法测定蛋白质分子量的仪器组成。每种仪器的作用是什么？

71.电泳仪电泳仪是提供直流电源的装置，它能控制电压和电流的输出

72.电泳槽电泳槽是电泳涂装作业的主槽

73.作用：用于分离蛋白质和寡糖核苷酸。

作用原理聚丙烯酰胺凝胶为网状结构，具有分子筛效应。它有两种形式：非变性聚丙烯酰胺凝胶及SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）；非变性聚丙烯酰胺凝胶，在电泳的过程中，蛋白质能够保持完整状态，并依据蛋白质的分子量大小、蛋白质的形状及其所附带的电荷量而逐渐呈梯度分开。

74.使用电泳仪和安装电泳槽应注意哪些事项。

电泳槽的安装：取两块玻璃板→将带玻璃条的板（高板）放置桌面上→在上面放置“U”型橡胶条→最后将凹槽玻璃板（低板）压在高板上，置于电泳槽内，用锲子压紧。

75.赖氨酸含量测定时，加入2%Na2CO3是什么作用

76.影响凯式定氮法测定蛋白质含量的因素有哪些分析结果偏低的原因。

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1、样品消化的完全程度。如：被浓硫酸脱水的样品（有机物），炭化成的氮，由于消化不完全就不能被二氧化硫完全还原成氨，就会造成测定结果偏低。

2、消化温度。消化食不能用强火，应保持缓和沸腾，以免粘附在凯氏瓶内壁上的含氮化合

物在无硫酸存在的情况下未消化完全而造成氮损失。

3、蒸馏装置的气密性。若气密性差（漏气），蒸馏出来的氨气就会挥发流失。（所以，漏斗加碱后应立刻水封，以免氨气由此处逸出而造成损失。）

4、吸收液的温度。硼酸吸收液的温度不应超过40℃，否则对氨的吸收作用减弱，而造成氨损失。

硼酸吸收液的温度不宜过高，过高则氨的吸收能力将减弱，会影响测量结果，使结果偏低。最佳方式是保持溶液温度在20℃以下，或将接收瓶置于冷水浴中。

77.凝胶层析法装柱时应特别注意哪些事项，

1 柱填充要均一,决不能出现气泡.在装柱时候要缓慢倒入凝胶,并轻轻敲打柱身赶走气泡.

2 柱上表面要平,平衡柱时间要长一些,让凝胶充分沉积为均一的柱床.

|

3 上样体积要少,因此最好浓缩样品.

4 柱床上表面不能干燥,要有1~2cm流动相覆盖.

78.影响旋光法测定淀粉含量的因素有哪些试分析结果偏低的原因。

79.1) 溶剂的影响：旋光物质的旋光度主要取决于物质本身的结构。另外，还与光线透

过物质的厚度，测量时所用光的波长和温度有关。如果被测物质是溶液，影响因素还包括物质的浓度，溶剂也有一定的影响。因此旋光物质的旋光度，在不同的条件下，测定结果通常不一样。因此一般用比旋光度作为量度物质旋光能力的标准

2) 温度的影响：温度升高会使旋光管膨胀而长度加长，从而导致待测液体的密度降

低。另外，温度变化还会使待测物质分子间发生缔合或离解，使旋光度发生改变。

3) 浓度和旋光管长度对比旋光度的影响：在一定的实验条件下，常将旋光物质的旋

光度与浓度视为成正比，因为将比旋光度作为常数。而旋光度和溶液浓度之间并不是严格地呈线性关系，因此严格讲比旋光度并非常数.旋光度与旋光管的长度成正比。旋光管通常有10cm、20cm、22cm三种规格。经常使用的有10cm长度的。但

对旋光能力较弱或者较稀的溶液，为提高准确度，降低读数的相对误差，需用20cm 或22cm长度的旋光管。

80.现有一玉米样品，测定其中赖氨酸含量，试设计出实验方案。

81.

570纳米处吸光度

82.引起赖氨酸含量测定结果误差的原因有哪些

83.、

84.说出凝胶层析法中紫外检测仪，部分收集器，记录仪，恒流泵如何设置参数？

85.①紫外检测仪：当档位置于100%T时，调光量至数显为100。当档位置于时调A

数显为0

②记录仪：设置V纸速=2cm/h

③部分收集器：设置每10min收集1管，调恒流泵流速使每管收集液体为4ml 即V

流速=min

86.旋光法测定淀粉时加入亚铁氰化钾和硫酸锌的作用是什么

沉淀蛋白质用硫酸锌

淀粉样品中原有的和水解后产生的转化糖都具有还原性质，在碱性溶液中能将铁氰化钾还原，根据铁氰化钾的

浓度和检验滴定量可计算出含糖量

87.凯式定氮法测定蛋白质时在蒸馏过程中应特别注意哪些事项。蒸馏与吸收：吸取

10ml 2%的硼酸于三角瓶中→加4d甲基红-溴甲酚绿混合指示剂（若变绿色则用L HCl 调至紫红色）。将其置于冷凝管下端并使管尖插入液面以下，再吸取5ml消化液从漏斗上方加入蒸馏室内用水洗两次，并加入10ml 40%NaOH后水封（注意：勿使漏斗内玻杆取下以防漏气），然后打开通气阀进行加热蒸馏，直至吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸馏3min→先移去吸收液再停止加热以防倒吸。

88.—

89.说出通过测定氮来对物质定量的方法，试比较已做过的两种方法的异同点。

90.凯氏定氮法测定蛋白质含量

91.写出纸层析分离氨基酸时，脯氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸Rf排序，分析其原因。

92.

在同一实验条件下，比移值Rf主要取决于分配系数，不同的物质分配系数不同，也就有不同的Rf 。此外，溶剂的溶质的性质、滤纸的性质、展层的温度和p H值均会影响比移值Rf。

在层析过程中，当层析液在毛细拉力作用下，上升流经滤液滴点时，滴点上的氨基酸就相继融入层析液，随着层析液上升，并发生在分配，即有一部分色素从层析液分配溶解

到固定相中，直到平衡。由于分配系数的不同，那些分配系数大的氨基酸分子，随层析液向上移动得快，形成的斑点集中在滤纸的上部；而分配系数小的氨基酸分子，随层析向上移动得慢，形成的斑点集中在滤纸的下面。

93.分析电泳法和凝胶层析法测蛋白质分子量时分子量大小与移动速度的关系。

94.电泳分子量小、阴电荷多泳动最快；分子量大、阴电荷较少者泳动较慢

95.凝胶层析法大分子物质沿凝胶颗粒间隙随洗脱液移动，流程短，移动速率快，

先被洗出层析柱；而小分子物质可通过凝胶网孔进入颗粒内部，然后再扩散出来，故流程长，移动速度慢，最后被洗出层析柱，从而使样品中不同大小的分子彼此获得分离

96.现有一小麦样品，测定其中粗淀粉含量，试设计出实验方案。

97.现有一大豆样品，测定其中粗蛋白含量，试设计出实验方案。

98.现有一小麦芽样品，测定其淀粉酶活力，试设计出实验方案。

99.有一种含有几种蛋白质的混合物，你采取哪些方法将它们分离纯化

100.|

101.如何对酵母RNA三种组分进行鉴定各组分有何实验现象

102.试述酵母RNA提取和组分鉴定及含量测定的实验原理。

103.酵母RNA含量测定的方法有几种比较各方法特点。

104.简述酵母RNA提取和组分鉴定及含量测定的关键步骤。

105.

106.写出测定淀粉酶活力和赖氨酸含量及酵母RNA含量时采用的波长及颜色。107.淀粉酶活力A540 绿色

108.赖氨酸含量A515 绿色