微生物的高密度培养

定义一[1]

高密度培养指应用一定的培养技术和装置提高菌体的发酵密度，使菌体密度较普通培养有显著的提高，最终提高特定产物的比生产率。单位：细胞干重/升（DCW/L）。凡是细胞密度比较高，以至接近其理论值的培养均可称为高密度培养，，一般认为其上限值为150～200g （DWC/L），下限值为20～30g（DCW/L）。

定义二[2]

细胞高密度培养(high cell density culture，HC-DC)是指在人工条件下模拟体内生长环境，使细胞在细胞生物反应器中高密度生长，使液体培养中的细胞密度超过常规培养10倍以上，最终达到提高特定代谢产物的比生产率(单位体积单位时间内产物的产量) 的目的，用于发酵生产生物制品的技术。

用途[1]

各种微生物（乳酸杆菌、芽孢杆菌、大肠杆菌等）的生产中，改进发酵工艺，提升其现代化发酵进程，增加单位体积培养液中菌体的数量，提高生产效率，加速微生物制剂的商品化进程。

发展状况[2]

细胞高密度培养不仅是生产高质量的浓缩型细胞和代谢产物的重要环节，是工程菌和非工程菌能否以低成本实现规模生产的关键性因素，也是细胞和代谢产物工业化生产过程中必需达到的重要目标与方向。随着市场需求的日益扩大，高密度培养技术广泛地应用于各种细胞( 植物、动物、微生物) 的生产中，它不仅可以改进发酵工艺，提升其现代化发酵进程，而且对于增加单位体积培养液中菌体数量，提高生产率，加速微生物制剂的商品化进程，更好地满足市场需求，具有重要而深远的意义。但是目前细胞高密度培养仍然是我国生物制品难以攻下的课题，只有对细胞高密度培养关键技术进行不断的研究、改进，科学系统地运用，才能对我国传统的生物制品生产技术进行升级和科技创新。

谷胱甘肽(GSH)的生产[3]

谷胱甘肽(GSH)是一种重要的生化药物,具有独特的抗氧化、抗衰老特性,近年来作为食品添加剂,其需求渐增。迄今国内尚未有工业化生产GSH的报道,为了打破进口品的垄断地位,迫切需要加大开发GSH的力度。本研究室[4～6]近来深入研究了影响面包酵母(Saccharomyces cerevisiae)生产GSH的各种重要因素,目前仍在进行有关高菌种选育、发酵过程优化和产物提取的研究工作。构建具有高GSH合成活性的重组E.coli是近十年来GSH 生物合成研究中的一个新方向,其关键在于将分别编码GSHⅠ和GSHⅡ的基因gshⅠ和gshⅡ在宿主菌中高效表达。重组或非重组的S.cerevisiae相比,重组E.coli具有生长速度更快、产物提取更容易等优点。 Murata等[7,8]通过在细胞中扩增gshⅠ和gshⅡ成功地获得了具有较强GSH合成能力的重组E.coli,但没有深入研究高细胞密度培养技术。实际上,与其它胞内重组蛋白一样,GSH的体积生产率通常随着发酵液中的细胞密度增大而增加,故研究生产菌株的高密度培养方法,在保证GSH合成活性的前提下使反应器中工程菌的细胞密度尽可能高,不仅有利于提高生产率,也有利于后提取与纯化的进行。本文报道高密度培养重组大肠杆菌生产GSH的研究结果。

1 材料与方法

1.1 试剂

谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase)、还原型辅酶Ⅱ (NADPH)、5′-三磷酸腺苷( ATP)和DTNB (5, 5′-dithiobis (2-nitrobenzoic acid))均为Sigma公司产品。 GSH 和GSSG购自华美生物工程公司。酵母膏为Oxoid产品。葡萄糖购自无锡润生淀粉油脂公司。

其余试剂均为国产分析纯。

1.2 菌种

重组大肠杆菌(Escherichia coli)WSH-KE1,gshⅠ和gshⅡ基因的拷贝数为2∶1,由韩国仁荷大学生物工程系提供。

1.3 主要发酵设备

上海HYG-Ⅱ回转式恒温调速摇瓶柜。美国Virtis 2.5L实验用台式玻璃发酵罐,配备温度、pH自动控制系统、溶氧自动显示。

1.4 培养基

斜面培养基: (g /L)蛋白胨10,酵母膏5,NaCl 10,琼脂20,氨苄青霉0.05;pH=7.2。

种子培养基: (g /L)蛋白胨10,酵母膏5,NaCl 10,葡萄糖30;pH7.2。发酵培养基: (g /L)葡萄糖10.0, KH2PO4 13.3,(NH4)2HPO4 4.0,MgSO4·7H2O 1.2,柠檬酸1.7;(mg /L)EDTA 8.4, CoCl2·6H2O 2.5,MnCl2·4H2O 15.0,CuCl2·2H2O 1.5, H3BO3 3.0, Na2MoO4·2H2O 2.5,Zn(CH3COO)2·2H2O 13.0,柠檬酸铁(Ⅲ)100.0,盐酸硫胺 4.5;消泡剂0.5ml(摇瓶不加);pH=7.2。

流加培养基:(g /L)葡萄糖600,MgSO4·7H2O 20.0; (mg /L) EDTA 13.0, CoCl2·6H2O 4.0,MnCl2·4H2O23.5, CuCl2·2H2O 2.5, H3BO35.0,Na2MoO4·2H2O4.0, Zn(CH3COO)2·2H2O 16.0,柠檬酸铁(Ⅲ) 40.0;消泡剂1.0ml,pH=7.2。

1.5 培养方法

1.5.1 摇瓶培养

菌种在斜面培养基上30℃培养24 h后,接入种子培养基(装液量25 ml/250 ml锥形瓶)。30℃振荡培养24 h后,以10%接种量接入发酵培养基(装液量50 ml/500 ml锥形瓶),发酵时间如无特别注明均为24 h。

1.5.2 流加培养

2.5 L发酵罐中装液量1.0 L,接种量20% ,发酵温度30℃ ,通过调节搅拌转速和空气流速使溶氧百分数保持不低于30% ,当通空气无法满足溶氧要求时开始通纯氧。通过流加氨水控制pH在7.2左右。分批培养8h后,按不同实验要求进行流加培养。葡萄糖浓度反馈控制流加:发酵过程中每隔0.5 h测定罐内葡萄糖浓度,根据罐内残糖浓度的高低来调节葡萄糖流加速率,以便将罐内葡萄糖浓度控制在很低的范围内。恒速流加:以恒定的速率将流加培养基流加入发酵罐,流加速率可按实验要求变化。指数流加:按指数流加模式[9]: Fi=_*V0X0exp (_*t)/Yx/s(SF-S)计算得出流加曲线,因无法连续改变进料量,故采用每1 h变化一次流加量的阶梯式进料方式。

1.6 分析方法

葡萄糖浓度和细胞干重:见文献[10]。胞内GSH含量:按Murata[11]等报道的方法从大肠杆菌细胞内提取GSH,采用Tie-tze[12]的改良DTNB-GSSG循环分析法分析提取液中GSH含量。

参考文献

[1]刘子宇，李平兰，郑海涛，靳志强.微生物高密度培养的研究进展.中国乳业，2005

[2]齐士朋，徐尔尼，罗玉芬，巫小丹.细胞高密度培养技术的应用研究进展.南昌大学,2011

[3]李寅,陈坚,伦世仪.中国医药工业杂志,1999;01

[4]李寅,陈坚,周楠迪等.生物工程学报,1998;14(2)∶ 149

[5]李寅,陈坚,周楠迪等.中国医药工业杂志,1998;29(12)∶ 537

[6]周楠迪,李寅,陈坚等.生物技术,1997;7(4)∶ 30

[7]Murata K,KimuraA.Appl Environ Microbiol,1982;44∶ 1444

[8]MurataK,MiyaT,Gushima Het al. AgricBiol Chem,1983;47∶ 1381

[9]李寅,陈坚,宋祺等.生物工程学报,1997;13∶160

[10]LiY,ChenJ,Mao YY et al. Proceedings of 4th Asia-Pacific Bioche-mistryEngineering Conference,Beijing,1997∶ 431-434

[11]MurataK,Kimura A. J Gen Microbiol,1982;128∶ 1047

[12]TietzeF.Anal Biochem,1969;29∶ 502

微生物培养基成分及其用途

[Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种（青虫菌）、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌（大肠杆菌）、铜绿假单胞菌（绿脓杆菌）、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O 0.1ｇＮa2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the liquid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌）、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ(乳酸菌培养基Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围：植物乳杆菌（胚芽乳杆菌） 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY （蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基）Peptone（蛋白胨）10g Yeast extract （酵母膏）5g Glucose （葡萄糖）1g Distilled water （蒸馏水）1L 8. Glycerol Agar （甘油琼脂） Peptone （蛋白胨）5g Beef extract （酵母膏）3g Glycerol （甘油）20g Top water （自来水）1000ml Agar （琼脂）15g pH 7.0-7.2 9. Rhizobium medium （根瘤菌培养基）AS 9 Yeast eztract （酵母膏）1g Soil eztract （土壤浸提液）200ml Mannitol （甘露醇）10g Agar （琼脂）15g

微生物知识培训试题-------答案

部门培训试题培训内容：微生物知识及消毒与灭菌知识姓名得分一、填空题（每空2分、共50分） 1、微生物（microorganism, microbe）是一些肉眼看不见的微小生物的总称。 2、微生物按其结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类：真核细胞型、原核细胞型、非细胞型。 3、细菌的基本结构由：细胞壁、细胞膜、细胞质、核质四部分组成。 4、细菌的主要生长繁殖方式为：无性二分裂法。 5、对微生物和尘粒进行更加严格的控制对于生产洁净室非常重要。 6、在细菌鉴定方面，被国际公认的参考书是：《伯杰氏手册》。 7、细菌内毒素的主要化学成分是：O-特异链、核心多糖、类脂A 。 8、影响制剂生产的四大污染源：空气污染、用水污染、人员污染、器具污染 9、输液反应包括：药物过敏反应、热源反应、菌污染反应。 10、灭菌从机理上看，可分为：物理灭菌法、化学灭菌法、无菌操作法。

1．真菌属于___A__型微生物。 A. 真核细胞型 B. 原核细胞型 C. 非细胞型 D.多核细胞型 2.下列不属于原核细胞型的是____D__ A.细菌 B.衣原体 C. 放线菌 D.病毒 3. 杀灭芽胞最可靠的方法是___C___ A.干热灭菌法 B. 流通蒸汽灭菌法 C. 高压蒸汽灭菌 D. 巴氏灭菌法 4. 下列那个是构成细胞的重要物质__B____ A.水 B.碳源 C. 细胞核 D.无机盐 5. 滤过除菌法要求最终过滤的滤膜孔径为__A____ A.0.22μm B.0.36μm C.0.45μm D.0.65μm 6. 低温间隙灭菌:将物品先用___C___加热1h，然后置20~25℃保存24h（或常温过夜），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如此反复三次。 A.30 ~40℃ B.45 ~55℃ C. 60~80℃ D. 85~95℃ 7. 新洁尔灭为我们车间常用消毒剂，其浓度为____B__ A. 0.01% B.0.1% C.1% D.10% 8．车间常用乙醇消毒剂的浓度为____A__ A. 70%~75% B.75%~80% C.65%~70% D.70%~80%

微生物培养基

培养基培养基(medium或culturemedium)是一种人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合养料。因此任何培养基都应具备微生物所需要的六大营养要素，且其间的比例是合适的。任何培养基一旦配成，必须立即进行灭菌，否则很快引起杂菌丛生，并破坏其固有成分和性质。一、选用和设计培养基的原则和方法在微生物学研究和生产实践中，配制合适的培养基是一项最基本的工作。但是，许多工作不但要求我们去选用一种现成的培养基，而且还经常要求亲自去设计一种更合适的培养基，这就要求人们除了熟悉微生物的营养知识和规律外，还要有一套科学的设计培养基所应遵循的基本原则和方法。不巧的是，在一般的书籍中，这方面的内容不易找到。为此，这里根据自己的体会，提出了四个原则和四种方法，以作为总结这类工作的一个尝试。 (一)四个原则 1．目的明确在设计新培养基前，首先要明确配制该培养基的目的，例如，要培养何菌？获何产物？用于实验室作科学研究还是用于大规模的发酵生产？作生产中的“种子”，还是用于发酵？等等。如果某培养基将用于实验室研究，则一般不必过多地计较其成本。但必须明确对该培养基是作一般培养用，还是作精细的生理、代谢或遗传等研究用。如属前者，可尽量按天然培养基的要求来设计，如系后者，则主要应考虑设计一种组合培养基(即“合成培养基”，详后)。拟培养的微生物对象也十分重要。不同大类的微生物，对培养基中碳源与氮源间的比例、pH的高低、渗透压的大小、生长因子的有无以及特殊成分的添加等都要作相应的考虑。如果某培养基将用于大规模的发酵生产上，则用作“种子”的培养基，一般其营养成分宜丰富些，尤其氮源的含量应较高(即C/N比低)；相反，如拟用作大量生产代谢产物的发酵培养基，则从总体来说，它的氮源含量宜比“种子”培养基稍低(即C/N比高)。除了对不同类型的微生物应考虑其特定条件外，在设计发酵培养基时，还应特别考虑到生产的代谢产物是主流代谢产物，或是次生代谢产物。如属主流代谢产物(一般指通过主要代谢途径产生的那些结构较简单、产量较高、价值较低的降解产物)，则生产不含氮的有机酸或醇类时，培养基中所含的碳源比例自然要比生产含氮的氨基酸类产物时高，反之，生产氨基酸类含氮量高的代谢产物时，氮源的比

微生物基础知识培训试题(卷)

微生物基础知识培训试题（卷）姓名部门得分一、填空题（每空2分、共50分） 1．微生物（microorganism, microbe）是一些肉眼看不见的微小生物的总称。 2．微生物按其结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类：真核细胞型、原核细胞型、非细胞型。 3．微生物按形态结构分为：细菌、霉菌、酵母菌、放线菌、病毒。 4．微生物的营养：水分、碳源、氮源、无机盐类、生长因子。 5．洁净室对温湿度、压差及微生物和尘粒进行严格的控制。 6．辐射灭菌法：辐射有两种类型：一种是电磁波辐射，如紫外线、红外线、微波；一种是电离辐射，如可引起被照射物电离的X射线、γ射线。 7．过滤除菌的效果与滤膜的性能、孔径的大小、密度、滤膜的厚度等因素有关。 8．高压蒸汽灭菌法：超过一个大气压时，水的沸点高于100℃，反之亦然。此法适用于耐高温和潮湿的物品。二单项选择题（每题2分、共16分） 1．真菌属于___A__型微生物。 A. 真核细胞型 B. 原核细胞型 C. 非细胞型 D.多核细胞型 2.下列不属于原核细胞型的是____D__ A.细菌 B.衣原体 C. 放线菌 D.病毒 3. 杀灭芽胞最可靠的方法是___C___ A.干热灭菌法 B. 流通蒸汽灭菌法 C. 高压蒸汽灭菌 D. 巴氏灭菌法 4. 下列那个是构成细胞的重要物质__B____ A.水 B.碳源 C. 细胞核 D.无机盐 5. 滤过除菌法要求最终过滤的滤膜孔径为__A____ A.0.22μm B.0.36μm C.0.45μm D.0.65μm 6. 紫外线杀菌的常用波长为 D A.80-100nm B.120-140nm C.160-195nm D. 253.7nm 7. 新洁尔灭为常用消毒剂，其浓度为____B__ A. 0.01% B.0.1% C.1% D.10% 8．常用乙醇消毒剂的浓度为____A__ A. 55% B.65% C.75% D.85% 三多项选择（每题4分、共16分） 1.下列哪些是我们常用的消毒剂 ABCD A. 75%乙醇水溶液 B. 37%~40%甲醛溶液 C. 新洁尔灭 D. 过氧乙酸 2. 高压蒸汽灭菌常用条件为：ABC A. 115.5℃ 30min B. 121.5℃ 20min C. 126.5℃ 15min D. 200℃ 45min 3.下列哪些属于微生物的特点ABCD

1 如何获得微生物纯培养

1 如何获得微生物纯培养？为什么说获得微生物的纯培养仍然是一个挑战？首先要把微生物分散开，方法有：1破碎、碾磨、超声2 离心法分离3 稀释法分离4 单细胞分离5 选择性分离然后进行培养，获得微生物菌株，方法分为：1.固体培养法：单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、有一定形态结构的细胞生长群体。再通过平板划线法进行分离培养2厌氧稀释摇管法:针对厌氧菌进行厌氧稀释摇管 3.液体培养法：静置培养法；震荡培养法最后对获得纯培养的微生物进行保藏微生物发展到今天，只有大约5%的数量得到了纯培养，人们对一些微生物的生命活动，理化指标还不够了解，而且研究微生物的纯培养需要大量反复的实验，微生物的种类又有如此庞大的数量，如果不能在纯培养方面有质的飞跃，很难实现对一些不常用微生物的纯培养，因此说获得微生物的纯培养仍然是一个挑战。 2微生物的营养物质类型与营养类型有哪些？营养物质类型有：碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源营养类型分为：按照碳源划分自养型以CO2 为唯一或主要碳源异养型以有机物为碳源按照能源划分光能营养型以光为能源化能营养型以有机物氧化释放的化学能为能源按照电子供体划分无机营养型以还原性无机物为电子供体有机营养型以有机物为电子供体 3如何设计一种培养稀有放线菌的培养基？ 1首先要了解培养目的：培养什么菌？获何产物？实验室研究还是生产？一般研究还是生理、生化、遗传等紧密研究？做种子还是做发酵？ 2了解这种放线菌的生活习性：通过查阅文献以及参照前人的实验经验，对所要培养的放线菌有一个初步的了解。 3然后要选择培养基的营养成分：可以通过对放线菌生长环境的分析；放线菌的物质组成；以及培养其他放线菌的经验来选择适宜的营养成分 4然后选择适宜的理化环境：1. pH 值2.渗透压和水活度3.氧化还原电势4.氧气浓度 4原核细胞与真核细胞有哪些相同与不同？细菌细胞的特殊结构有哪些？它们有什么功能？细菌和真菌的细胞壁组分

微生物培养基种类大全

摘要：1、营养琼脂（普通琼脂）成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤）100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定）制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。2、血琼脂平板（BA）制法：取营养琼脂（PH7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养 1、营养琼脂（普通琼脂) 成份：牛肉浸液（或其它浸液，消化液或肉膏汤) 100毫升琼脂（视天气，琼脂质量而定) 制法：将上物加热溶解，补足水，调ph至7．6，过滤分装121℃，高压灭菌15分钟。用途：作普通琼脂平皿。 2、血琼脂平板（BA) 制法：取营养琼脂（PH7．6)，加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。用途：1．一般棉拭子均接种此培养基。 2．尿液，脓液 3．分离细菌标本用。 3、基础培养基（肉膏汤BB) 成份：蛋白胨10克牛肉膏5克氯化钠5克水1000毫升制法：将以上各物称好，加水煮沸溶解，用1NNOH校正PH至7．6，过滤分瓶，121℃高压灭菌，20分钟备用。用途：1 作耐药试验，增菌用分装小管。 2 作普通琼脂斜面。 4、血液培养基（大管肉汤培养基) 成份：1 新鲜牛肉浸液1000毫升 2 PABA（对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕) 1g% 1毫升 3 MgSO 4 [相当于0．493/100毫升] 49．3% 1毫升 4 枸椽酸钠0．3g 制法：1 将1号，4号混合液，2号，3号液分装高压灭菌。

2 取灭菌1，4号混合液用无菌法加入PABA，MgSO4，再分管，行无菌试验三天方可使用。用途：作血，骨髓培养用。 5、肠道杆菌培养基（伊红美兰琼脂) 成份：蛋白胨10克乳糖10克氯化钠5克琼脂25（22)克水1000毫升2%伊红溶液20毫升 0．5%美兰溶液20毫升制法：将蛋白胨，氯化钠琼脂称好，加水1000毫升使溶解，校正PH7．4过滤，补足失水，加入2%伊红溶液20毫升，0．5%美兰溶液20毫升，（115℃高压20分钟)，冷却至50℃左右倾注平板，凝固后存冰箱备用。（高压以后方可再加乳糖) 用途：用作分离沙门氏，志贺氏菌属，也作菌群调查。 1 6、罗文斯坦培养基成份：磷酸二氢钾2．4克硫酸镁0．24克枸椽酸钠0．6克天门冬素3．6克纯甘油（丙三醇) 12毫升水600毫升马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升（约3公斤) 2%孔雀绿水溶液20毫升制法：1 除鸡蛋外（还有孔雀绿)。可将其它物品称好，放入大三角瓶包扎好，高压灭菌。 2 鸡蛋用75%酒精泡30分钟，灭菌法打蛋，倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。 3 将各成份按比例配好，分装每管约5毫升。 4 间歇灭菌第一次90℃1小时，第二次80℃半小时，第三次80℃半小时（或放85℃烤箱内连续二次)。质控标准： 1 灭菌试验合格。 2 接种结核杆菌要求两星期生长良好。用途：作结核分枝杆菌培养用。

选修1第1讲微生物的培养和利用

选修一生物技术实践第1讲微生物的培养和利用 1．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( ) ①能够用相同的培养基②都需要使用接种针实行接种③都需要在火焰旁实行接种④都能够用来计数活菌 A．①②B．③④ C．①③D．②④ 解析平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，故①准确；平板划线法采用接种针实行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器实行操作，故②错误；纯化时，要实行无菌操作，需要在火焰旁接种，避免空气中的微生物混入培养基，故③准确；平板划线法一般用于分离而不是计数，故④错误。答案 C 2．下列相关培养基和菌种鉴定的叙述不准确的是( ) A．植物组织培养常用的是固体培养基 B．可利用固体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型 C．利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌 D．在无氮培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌解析在只含有尿素作为氮源的培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌。答案 D 3．通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作相关的叙述中，不．准确的是 ( ) A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板 B．取104、105倍的土壤稀释液0.1 mL，分别涂布于各组平板上 C．将培养皿倒置，37℃恒温培养24～48小时 D．选择菌落数在300个以上的培养皿实行计数

解析检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37℃恒温培养24～48小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的平板实行计数。答案 D 4．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，准确的是( ) A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230 B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238 C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163 D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233 解析在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不准确。C项虽涂布了3个平板，但是，其中1个平板的计数结果与另两个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，此时，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。答案 D 5．如表所示为分离分解尿素的细菌所用的培养基配方： (1)该培养基含有微生物所需要的________类营养物质。其中最主要的碳源是葡萄糖，氮源是尿素。

微生物卫生培训试题

姓名：部门：成绩：微生物、卫生培训试题注意 1、本试题满分为100分。 2、试卷分为判断题、填空题、单选题、多选题、问答题五类。 3、考试时间为50分钟。 4、可以采用圆珠笔、钢笔碳素笔等填写，不得采用铅笔填写。 5、本试卷共46小题一、填空题：（每题3分，计30分） 1、《药品生产管理规范》各项卫生措施的核心是：（）。 2、卫生在《药品生产管理规范》中是指（）。 3、洁净区卫生要求地漏干净，经常消毒，经常保持液封状态，盖严上盖，清洁剂、消毒剂要（）使用。 4、物料进入生产区前，应在外包装清洁处理间进行脱去外包装，若不能脱去外包装的应对外包装进行（），保证清洁、无尘；工作结束后及时结料退料，生产区不能存放多余的物料。 5、每天或每批生产结束后应按规定进行（），生产中使用的各种器具、容器应清洁，必要时进行消毒，并不得遗留清洁剂、消毒剂残留物。 6、洁净区内对药品产生污染的因素包括（）、原料、（）、设备、空气。 7、药品受微生物和其它杂质的污染后，引起药品质量的变化对人体健康带来的危害主要有（）。 8、最常见的两种污染形式是（）。传播污染的四大媒介（）。

9、洁净区与非洁净区之间、不同级别洁净区之间的压差应不低于（）帕斯卡。 10、防止污染的最佳办法就是建立制药企业的（）。二、判断题（每题2分，计20分） 1．洁净室应定期消毒，使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。（） 2．粉碎间的产尘量较大，因此它对周围环境应保持相对负压。（） 3．每批药品生产完毕后，各工序一起清场，填写清场记录，检查合格后，方可进行下一批药品的生产。（） 4、胶囊剂一般应在C级的区域内生产。（） 5、与药品直接接触的设备表面应平整光滑，不易积尘、不长霉、无脱落物，不与加工的药品发生化学变化或吸附所加工的药品。（） 6、患有传染病、体表有伤口者、皮肤病患者及药物过敏者不得从事直接接触药品的生产。（） 7、生产人员应经安全培训、操作技能培训和GMP知识培训考核合格才能上岗。 ( ) 8．任何进入生产区的人员均应当按照规定更衣。（） 9．生产区可以存放水杯及个人用药品等非生产用物品。（） 10．操作人员应当避免裸手直接接触药品、与药品直接接触的包装材料和设备表面。（）三、单项选择题（每题2分，计20分）

人教版高级高中生物选修一专题二《微生物的培养与应用》知识点归纳

专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养 ·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。 ·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。 ·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。 ·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。 ·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。 ·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。 ·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。 ·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件 ·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面： ①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。 ④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。

微生物基础知识培训(试题答案)

微生物基础知识培训试题（答案）部门：姓名：分数：一、填空题（每空3分，共60分） 1、从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。 2、真菌包括单细胞与多细胞两类。单细胞真菌呈圆形或卵圆形，称为酵母菌；多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或霉菌。 3、药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆虫和其它啮齿动物、生产操作人员。 4、选择填空： A 无菌 B 抑菌 C 消毒 D 灭菌 E 防腐 (1)消毒：杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细菌的芽胞。 (2)灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。 (3)抑菌：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。 (4)防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。 (5)无菌：不存在活的细菌。 5、影响微生物的物理因素有温度、辐射、干燥、渗透压、超声波、滤过；化学因素有pH值、重金属及其化合物、有机化合物、抗生素。二、问答题（共2题，共40分） 1、简述微生物的特点。（10分）个体小，面积大；分布广，种类多；代谢强，转化快；生长旺，繁殖快；适应性强，易变异。 2、为什么说土壤是微生物生长最适宜的环境？（30分）土壤具备微生物生长繁殖的各种条件：（1）营养土壤中的动植物遗体是最好的食料。（2）微量元素土壤含有大量微生物所需要的矿质元素，如：钙、钾、铁、镁、硫、磷等。（3）pH值土壤的酸碱度接近中性，适宜微生物生长。（4）渗透压土壤的渗透压在3～6个大气压之间，对于大多微生物都适宜。（5）温度土壤温度一年四季温差不大，适宜生存。（6）水分土表深处保墒（水分），为微生物生存提供了保障。

微生物的培养与应用知识讲解及练习

微生物的培养和应用【学习目标】 1、掌握培养基的分类、组成、功能及配制。 2、掌握无菌技术的内容和无菌操作技术。 3、研究培养基对微生物的选择作用 4、掌握分离、纯化特定微生物的研究思路和方法，掌握从土壤中分理处能够分解尿素的细菌并进行技术的操作过程。【要点梳理】要点一、微生物的实验室培养 1、培养基：（1）培养基的配制原则 ①目的要明确（根据微生物的种类、培养目的等）。如培养基可由简单的无机物组成，生产用培养则可加入化学成分不明确的天然物质，而分类鉴定培养基必须加入已知化学成分的物质。 ②营养要协调。注意各种营养物质的浓度和比例。 ③pH要适宜。各种微生物适宜生长的pH范围不同。如细菌、放线菌和真菌生长的最适pH分别为：6.5～7.5、 7.5～8.5和5.0～6.0。（2）培养基的种类和用途（3）选择培养基和鉴别培养基应用实例

（4）培养基中的营养要素要点诠释： ①微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常用的氮源是铵盐、硝酸盐。 ②对异养微生物来说。含C、H、O、N的化合物既是碳源．又是氮源。 ③有些培养基不需要添加生长因子，生物自己能合成；而绝大多数微生物培养需要加入生长因子，原因是它们缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限。 2、无菌技术（1）无菌技术的概念在微生物培养中，获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，其主要技术是无菌操作。无菌技术是指通过一定物理、化学的手段，防止实验室培养物被外来微生物污染，保持微生物的纯培养的技术，其中包括在微生物的分离、转接、保存等过程中防止其他微生物污染的手段。无菌技术主要围绕如何避免杂菌污染展开的，主要包括以下几方面： ①对实验操作的空间，操作者的手和衣着，进行清洁和消毒。 ②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 ③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近或接种箱内进行。 ④应避免已经灭菌处理的材料用具与周围其他物品相接触。（2）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。方法见下表：注意：灭菌所依据的原理基本上都是使菌体内的蛋白质和核酸发生变性，从而达到杀菌的效果。（3）消毒是指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。 ①煮沸消毒法：在100℃煮沸5 min～6 min可以杀死微生物细胞和一部分芽孢。 ②巴氏消毒法：在70℃～75℃煮30 min或在80℃煮15 min。可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营

环境监测微生物知识培训试题有答案

环境监测微生物知识培训试题一、填空题（共20空，每空3分） 1.环境监测微生物测试主要包括的项目有沉降菌、浮游菌、表面微生物、人员微生物。其中沉降菌测试的时间一般为4h。 2.对于洁净区表面微生物取样,对于规则表面通常使用RODAC双碟进行测试,对于不规则表面一般使用擦拭取样法。 3.静态状态下进行的环境监测，除监测操作人员（不得超过2人），无其他操作人员活动。 4.酵母菌和霉菌的监测为1年4次，一般在1、4、7、10月采用沙堡氏培养基加测。 5.所用的每一批号的培养基，应选取3只进行阴性对照，以检验此批号培养基无菌是否良好。 6.应在A级关键操作的同时，对A级背景区域进行微生物项目的监测。 7.807车间的N1070/06房间及809车间的T128、T149、T207、T239房间，如某一品种在该区域生产时需要进行A级操作，则该房间按相连B级频率测试；如该房间没有A级操作过程，则按不相连B级频率测试。 8.无菌双碟在洁净区使用时，应在双碟表面标明测试区域、测试位点、测试日期、产品批号（限有产品的A级区域），避免混淆。用于写标识的笔应为不易擦除的无尘记号笔。 9.沉降菌测试时，在准备好的双碟底部写好编号后放置在各取样点，将培养皿大盖全部打开，并扣在不产尘的灭菌纸或PE膜上。 10.沉降菌测试过程中，如双碟被不慎触碰，A级双碟继续监测；其他级别的双碟结束测试并重新放置双碟继续监测，结束后结果按累加计数。 11.浮游菌测试测试位置一般距地面左右，A级区域仪器放在工作台面上。二、问答题（共2题，每题20分） 1.简述培养基双碟递入递出流程。 1.培养基由车间物流通道进入。 2.在D级递物柜间黄线外去掉纸箱或转运筐。 3.打开物流递物柜房间递物柜紫外灯，空照30分钟后，递入培养基双碟。 4.用紫外灯照射60分钟后方可递入C级区。5操作人员在C级区对双碟进行表面清洁，去掉最外层塑料袋包装，递入B级区递物柜内，用紫外灯照射60分钟后递入B级区存放。

微生物的培养和利用

微生物的培养和利用来自：全世界晚安与微生物的培养和利用有关的基础知识微生物的概念：形态微小，结构简单，需借助显微镜才能观察到的生物思考：请说出微生物的类群（包括细菌、蓝藻等原核生物、酵母菌、霉菌等真菌、病毒等）微生物所需要的营养物质营养成分主要种类作用碳源CO 2、NaHCO 3 —自养型微生物糖类、脂肪酸等—异养型微生物构成细胞的物质和代谢产物异养型生物的主要能源物质氮源N 2 、NH 3 、铵盐、硝酸盐尿素、牛肉膏和蛋白胨合成蛋白质、核酸等生长因子（特殊成分）维生素、氨基酸、嘌呤碱和嘧啶碱等补充微生物生物必需的微量有机物无机物水无机盐作用同细胞中的水和无机盐培养基的种类及用途划分依据种类用途物理性质固体培养基分离、鉴别微生物、观察菌落、计数液体培养基扩大培养、工业生产半固体培养基略化学成分合成培养基科研、分离菌种、计数等天然培养基工业生产用途选择培养基筛选微生物鉴别培养基鉴定某种微生物实验室条件下的无菌技术方法应用范围灭菌高压蒸汽灭菌培养基、培养皿、移液管等灼烧灭菌接种环、玻璃刮刀等接种器具熏蒸灭菌接种室、接种箱等紫外线灭菌接种室、接种箱、超净工作台细菌过滤器加热不稳定的物质消毒酒精、次氯酸钠等化学试剂实验材料（如外植体）、工作台和器具、培养空间高温煮沸

微生物培养基本流程注意：使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃。微生物培养的注意事项 ①根据微生物的代谢类型、所需营养配制培养基 ②培养时注意：温度、是否需要氧气等微生物的分离（1）平板划线法分离微生物用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，则在划线的过程中菌液逐渐减少，菌体数量也逐渐减少，菌间的距离增大。在培养10-20小时后，划线末处可观察到由一个菌产生的单菌落；如果再挑取它们后，接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个菌产生的后代（或纯种）。（2）液体稀释涂布法分离微生物

微生物基础知识试题

微生物基础知识试题部门：____________ 姓名：______________ 成绩：____________ 一、填空题（每空2分，共40分） 1、微生物的形体极度小，必须借助于_____________或______________放大数，百倍、千倍至数万倍，常用______________、______________作为测量单位。 2、微生物分布广泛，存在于_________、_______、_________、______________ 、______________之表以及______________。 3、原核细胞生物由_____________构成，真核细胞生物多数由_____________组成。 4、利用某种微生物制成_____________或____________为人类预疾病。 5、活性粒子是夹带有大量_____________的粒子，非活性粒子是单纯的_____________粒子。水是制药企业的____________或____________，由于水的污染，将直接导入污染源。 6、热力灭菌利用高温杀微生物可分为__________________、________________。二、多项选择题（共15分） 1、来苏（甲酚皂）2%的水溶液用于（）消毒。 A．皮肤 B、设备 C、容器 D、空气 2、常用的消毒剂75%的乙醇用于（）消毒。 A．皮肤工具 B、设备 C、容器 D、空气 3、消毒剂用于表面活性剂0.1-0.2%的新洁尔灭液，用于（）消毒。 A．皮肤 B、工具 C、地漏 D、容器 4、37-40%的甲醛液8-9ml/m3( )消毒。 A．皮肤 B、工具 C、地漏 D、室内 5、常用的灭菌器主要有（） A．高压蒸汽灭菌器 B、烘箱 C、紫外线灯

微生物的培养与利用

微生物的培养与利用一、微生物的类群二、在实验室如何培养微生物 1、细菌、真菌：培养基培养； 2、单细胞动、植物：培养液培养； 3、病毒：培养 4、在实验室培养微生物，一方面需要为培养的微生物提供，另一方面需要确保无处不在的其他微生物。三、微生物需要的营养物质及功能微生物需要的五大类营养要素物质是：1.碳源 2.氮源 3.水 4.无机盐 5. 1.微生物的碳源 ⑴.概念：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。 ⑵.来源①碳源：CO2；NaHCO3等（型微生物能利用） ②碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等（型微生物能利用） ⑶.作用：①构成和一些 ②有机碳源是异养微生物的 2.微生物的氮源 ⑴.概念：是能够为微生物提供N元素的营养物质。 ⑵.来源①无机氮源：N2：（能利用） NH3：( 能利用） NO3-、NH4+：（能利用） ②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等 ⑶.作用：要用于合成、及含N的代谢产物。 3.水 4.无机盐 5.生长因子(有的微生物能自身合成,有的不能需要额外添加） ⑴.概念：微生物生长不可缺少的。 ⑵.作用：和的组成成分。 ⑶.常见的生长因子：维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。

四、培养基 1、培养基的概念：人们按照微生物对的不同需求，配制出专供微生物的营养基质 2.培养基的成分：一般都含有、、、等营养物质，另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气等的要求。例如：培养乳酸菌需加入，若培养霉菌PH呈，若培养细菌PH呈，培养厌氧微生物时则需要提供。 3.培养基的类型和用途五、无菌技术 1. 获得纯净培养物的关键是 2. 无菌技术的目的：一是防止实验室的培养物，二是避免操作者 3.消毒与灭菌的比较六、实验操作：纯化大肠杆菌 1、制备牛肉膏蛋白胨培养基 1）计算；2）称量 3）溶化、、分装

微生物培养基配制

微生物培养基配制培养基是指人工配制的、适合于微生物生长繁殖或累积代谢产物所需的各种营养物的混合基质。配制培养基是进行微生物检验工作的基础,甚至是任何与微生物有关工作的基础。注意事項–灭菌锅的使用 ①加水盖过底部铁板—②放入东西—③关门—④調整溫度時間—⑤关紧泄压阀灭菌結束後，等压力降回零時才可打開門進入灭菌锅之物品，蓋子不可關太緊或太鬆拿滅菌後物品請記得帶耐熱手套培养基中的主要成分及其作用：营养物质：N源、C源、无机盐、生长因子、水常用的N源：蛋白胨、牛肉膏、肉浸汁、酵母膏常用的C源：糖、醇类物质（单糖：葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖双糖：蔗糖、麦芽糖、乳糖；多糖：淀粉、纤维素、菊糖；

醇类：甘露醇、卫茅醇、甘油）水：用蒸馏水，不能用自来水凝固剂：琼脂、明胶、血清等抑制剂： 1、作用：鉴定细菌、抑制杂菌的生长繁殖，增加待检菌的检出率 2、种类：盐类：氯化钠、氯化锂、氰化钾、亚碲酸钾（钠）、亚硒酸钠等染色剂类：煌绿、蔷薇酸、结晶紫、孔雀绿、孟加拉红、玫瑰红胆盐类：猪（牛、羊）胆盐、混合胆盐、三号胆盐、去氧胆酸盐、胆石酸盐抗菌素：青霉素、链霉素、杆菌肽、多粘菌素指示剂 1、作用：用于指示鉴别细菌可否利用分解糖醇类物质和含氮化合物，产酸产碱的能力。

2、常用的指示剂：酚红、溴甲酚紫、中性红、中国蓝、甲基红、复红、伊红、美蓝、孔雀绿等。培养基的类型： ●根据培养基的物理状态来区分： 1、液体培养基：主要用于增菌培养、鉴别性培养 2、固体培养基：用作微生物的分离、鉴定、检验杂菌、计数、保藏、生物测定 3、半固体培养基：观察微生物的动力，有时用来保藏菌种 4、脱水(商品)培荞基：脱水培养基也称为商品培养基、预制干燥培养基。 ●将各种营养成分按比例配制完全,制成脱水的干粉状,装瓶出售;使用时只需按比例加人定量的水溶化、灭菌便可。 ●根据培养基的用途来区分：增殖培养基选择培养基鉴别培养基 1、增殖培养基：在普通培养基中加入一些某种微生物特别喜欢的营养物质，以增加这种微生物

《微生物的培养与应用》测试题

选修1专题2《微生物的培养与应用》章检测一、选择题 1. 下列对菌落的表述不正确的是 A. 每个菌落都是由多种细菌大量繁殖而成 B. 各种霉菌在面包上生长形成的不同颜色的斑块即为菌落 C. 噬菌体能使固体培养基上的细菌裂解，菌落变得透明 D. 细菌和真菌在培养基上形成的菌落形态不同 2. 将醋酸菌接种到四个相同的培养基中，放在以下条件下培养，其中菌落形成最快的是 3. 下列说法不正确的是（） A.科学家从70－80度热泉中分离到耐高温的TaqDNA聚合酶 B.统计某一稀释度的5个平板的菌落数依次为M1、M2、M3、M4、M5，以M3作为该样品菌落数的估计值 C.设置对照实验的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度 D.同其他生物环境相比，土壤中的微生物数量最大，种类最多。 4. 利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是 A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物 B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物 D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌 5. 某混合样品中微生物R含量极少，要得到大量的R，比较理想的方法是采用( ) A．天然培养基 B．稀释涂布平板法 C．利用适合R生长但同时抑制或阻止其他种类微生物生长的选择培养基 D．用显微镜直接观察、寻找，再培养 6. 稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是 A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释 B．需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面 C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落 D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理 7. 培养基、培养皿、接种环、实验操作员的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是 ①化学消毒②灼烧灭菌③干热灭菌④紫外线灭菌⑤高压蒸汽灭菌⑥巴氏消毒法 A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤ 8.微生物的接种技术最常用的有 ①平板划线法②稀释涂布平板法③斜面接种④穿刺接种 A.①②③ B.①② C.②③④ D.①②③④ 9. 下列是对四种微生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢类型的描述，正确的一组是微生物种类乳酸菌根瘤菌硝化细菌衣藻 A能源糖类光能NH3光能 B碳源糖类CO2CO2CO2 C氮源NO3－N2NH3NO3－ D代谢类型异样厌氧型自养需养型自养需养型自养需养型 10. 将大肠杆菌菌种从菌种试管接种到另一支试管的操作下列说法有误的一项是 A.整个接种过程都要在酒精灯的火焰附近进行 B.接种环放在酒精灯火焰上灼烧之后即可伸入菌种试管挑取少许菌种 C.菌种试管口和待接种的试管口接种前后都要通过酒精灯火焰2至3次 D.带菌的接种环应在培养基斜面上由底部向上轻轻划“S”型曲线 11. 下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是 A.操作顺序为配制培养基、调节pH、分装、灭菌、包扎、倒平板