薄荷提取物对小菜蛾生物活性测定及作用机理研究
薄荷提取物对小菜蛾生物活性测定及作用机理研究长期使用化学防治小菜蛾(Plutella xylostella L.),致使小菜蛾产生极其严重的抗药性,且对生态环境的破坏十分严重。因此开发新型生物农药以防治小菜蛾具有重要意义。
本论文研究以薄荷(Mentha spicata L.)茎和叶为材料,采用95%乙醇对绿薄荷茎和叶的干粉进行索式抽提,研究了提取物对小菜蛾不同虫态的生物活性及作用机理,利用气相色谱-质谱联用仪(GC-MS)分析薄荷茎和叶提取物的主要成分,筛选出几种对小菜蛾有较强趋避作用的主要化学成分。主要研究结果如下:1、薄荷茎和叶乙醇提取物对小菜蛾的生物学特性测定通过测定薄荷茎和叶提取物对小菜蛾幼虫取食、生长抑制、胃毒、触杀、成虫产卵选择、卵触杀和蛹羽化的影响。
结果表明薄荷叶提取物的药效强于茎,浓度越大效果越明显。薄荷茎和叶乙醇提取物对小菜蛾3龄幼虫生物活性测定表明:浓度为100mg/mL取食12 h的拒食率最高均为100%,24 h拒食中浓度(AFC50)最小分别为17.61、10.19 mg/mL;取食10d对小菜蛾的生长抑制率最高分别为74.97、76.04%,此时生长抑制中浓度(AGC50)最小分别为38.71、26.90mg/mL;胃毒作用5d的致死中浓度(LC50)最小分别为22.78、16.05 mg/mL;触杀作用72 h的致死中浓度(LC50)最小分别为16.00、17.04 mg/mL。
薄荷茎和叶提取物浓度为100 mg/mL对小菜蛾成虫24 h的产卵趋避率最大均为100%,产卵趋避中浓度(AOC50)48h最小分别为12.84、10.39mg/mL;对卵触杀96 h的校正死亡率最大分别为81.67%、83.67%;蛹的最大羽化率分别为52.22、41.11%。2、薄荷茎和叶乙醇提取物对小菜蛾3龄幼虫的作用机理薄荷茎和叶提
取物处理的小菜蛾体内乙酰胆碱酯酶(AchE)表现出先激活后抑制的趋势,当茎和叶提取物浓度为12.5mg/mL时,小菜蛾幼虫体内在12h的AchE活力分别为 24.93士0.69、22.96±0.16U/mg.minprot,36h的酶活力为 29.89±0.37、30.80±0.77 U/mg.min prot,而 48 h的酶活力为 24.93 ± 0.50、24.53 ± 0.90 U/mg.min prot。
薄荷茎和叶提取物处理的小菜蛾体内羧酸酯酶(CarE)、谷胱甘肽S-转移酶(GST-s)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活力也均表现出先激活后抑制的趋势,最终表现出对照组的酶活力显著高于处理组,浓度越大酶活力越低。3、GC-MS分析薄荷茎和叶乙醇提取物的有效成分通过GC-MS 对薄荷茎和叶提取物成分进行分析,结果表明薄荷茎和叶提取物的组成成分差异明显,叶较茎多。
薄荷茎提取物中含量最多的为角鲨烯,薄荷叶提取物中含量最多的为
(R)-(-)-香芹酮。其中薄荷茎和叶提取物中成分含量均表现最多的三种为
(R)-(-)-香芹酮、2,2’-亚甲基双(6-叔丁基对甲酚)和棕榈酸。
4、初步筛选对小菜蛾有影响的化合物将得到成分含量最多的3种化合物和报道对小菜蛾有触杀作用的松油烯进行行为趋避实验。结果表明上述化合物浓度越大趋避效果越明显,其中(R)-(-)-香芹酮的选择趋避效果最好,浓度为100 μ
L/mL雌雄虫选择率最低分别为7.87、11.57%;松油烯浓度为100μL/mL雌雄虫选择率最低分别为7.04、15.87%;2,2’-亚甲基双(6-叔丁基对甲酚)浓度为10mg/mL 雌雄虫选择率最低分别为8.10、14.54%;棕榈酸浓度为10mg/mL雌雄虫选择率最低分别为26.85、20.74%。
其中浓度为1.25 mg/mL的2,2’-亚甲基双(6-叔丁基对甲酚)和棕榈酸对小
菜蛾雄虫有较低的吸引作用。
天然生物活性物质题型版
名词解释： 1、生物转化：就是应用植物细胞培养体系，微生物或酶等生物体系对外源化合物进行合成与结构修饰。 2、萜类化合物：亦称萜烯类化合物，是天然产物中一类重要的代谢产物，是指以异戊二烯聚合而成的一系列化合物及其衍生物。 3、生物碱：是指来源于生物界（主要是植物界）的一类含氮有机化合物。多数具有碱性且能和酸结合生成盐，大部分为杂环化合物且氮原子在杂环内，多数具有较强的生理活性，是中草药的有效成分。 4、皂苷：是一类结构复杂的螺甾烷及其相似生源的甾体化合物及三萜类化合物的低聚糖苷,可溶于水,其水溶液经强烈振摇能产生大量持久性的肥皂样的泡沫。 5、天然类胡萝卜素：多烯色素是由异戊二烯残基为单元组成的共轭双键长链为基础的一类色素，其中最早发现的是存在于胡萝卜肉质根中的红橙色色素即胡萝卜素，因此这类色素又总称为类胡萝卜素。 6、黄酮类化合物：狭义：黄酮类化合物又称黄酮体、黄碱素，它们常以游离态或与糖结合成苷的形式存在，由于这一类化合物多具有颜色且较早发现的化合物具有2-苯色原酮的结构，故称黄酮或黄酮体。 广义：黄酮类化合物是泛指两个具有酚羟基的苯环（A-与B-环）通过中央三碳原子相互连接而成的一系列化合物。也就是说黄酮类化合物是一大类以C6-C3-C6碳架为基本特征的低分子量多酚化合物。 填空： 1、天然生物活性物质的定义是指从植物、动物、微生物和海洋生物中获得的具有独特功能和生物活性的物质，它包含着复杂的制备技术和工艺流程。 2、天然生物活性物质制备技术包括哪些 （1）、生物材料中天然有效成分的制备技术（2）、微生物转化和酶催化技术（3）、现代生物技术和先进的分离检测技术 3、天然生物活性物质的用途 1、在食品方面的应用（1）食品调味剂和食用香料（2）天然食用色素（3）食品增稠剂、乳化剂（4）食品保鲜剂和抗氧化剂（5）食品营养强化剂 2、在医药方面的应用（1）抗氧化或抗衰老功能（2）降低或抑制胆固醇功能 （3）预防糖尿病、预防高血压功能（4）抗癌或抑制肿瘤功能（5）预防龋齿功能(6）抗过敏功能（7）预防心血管疾病功能(包括抑制血小板凝集) 4、植物来源的天然活性物质 （1）、碳水化合物及磷脂（2）、含氮化合物（3）、生物碱类（4）、酚类（5）、萜类化合物 5、天然生物材料制作成成品的六个阶段、 ①原料的选择和预处理； ②原料的粉碎； ③提取，即从原料中经溶剂分离有效成分，制成粗品的工艺过程； ④纯化，即粗制品经盐析、有机溶剂沉淀、吸附、层析、透析、超离心、膜 分离、结晶等步骤进行精制的工艺过程； ⑤干燥及保存成品原料； ⑥制剂，即原料经精细加工制成供临床应用的各种剂型。 (一)传统提取技术包括哪些方法？ (一)溶剂提取法（二）水蒸气蒸馏法（三）升华法（四）分子蒸馏技术
生物活性物质的论文
海鞘中生物活性物质研究进展 陈小闻 岭南师范学院生命科学与技术学院，湛江，524048 摘要：在海洋生物中，海鞘是种类较为丰富的背囊动物，是以单体或群体生活的海洋动物。海鞘类在系统分类上占有特殊的位置，并因其含有强特异性生理活性物质，海鞘被视为研究生物学、免疫化学和神经生理学等学科的较为理想的生物之一。我国海鞘资源相当丰富，目前已发现有103种，其中渤海有5种、黄海有21种、东海有24种、南海有53种。今年的研究表明，海鞘含有多种生理活性物质，是除海绵以外人类获取具有显著生理活性物质的重要生物资源。 关键词：海鞘；生物碱；环肽；多硫化物 Research Progress of Bioactive subsrances from Ascidians Chen xiao-wen (Life Science and Technology School, Lingnan Normal University, Zhanjiang, 524048) Abstract:In marine organisms, species ascidian is abundant backpack animal, is single or group living marine animal. Ascidians occupies a special position in the classification system, and it contains strong specific physiological active substances, ascidians is regarded as one of the ideal biological study biology, immunohistochemistry and neurophysiology and other disciplines. Ascidians resources in China is rich, has found 103 species, including 5 species in Bohai, the Yellow Sea 21, China 24, China 53. This study shows that, the ascidian contains many physiologically active substance, is in addition to sponge outside human access to important biological resources has significant physiological active substances. Keywords: sea squirts, alkaloids, cyclic peptides, polysulfide 海鞘是接近脊索动物门的高等无脊椎动物[ 1],属于脊索动物,尾索动物亚门,海鞘纲,它与尾索动物亚门的另外2个纲一起被称为被囊动物.全世界大约有 2 000 种被囊动物, 其中海鞘占大多数[2]. 我国海鞘资源相当丰富,已纪录中国沿海海鞘类有66种,其中渤海有5 种,黄海有21种,东海有2 种,南海有53种[3]. 海鞘以单体或群体行固着式生活,形态差异很大,单体生活的海鞘体长从1 cm～
甘草酸药理作用及机制的研究
甘草酸药理作用及机制的研究 摘要：甘草是我国著名的传统，通经脉，利血气，清热解毒，具有降血脂、抗癌、抗干扰素诱生剂及增强细胞免疫调节等多种活性。现代药研究表明，甘草酸是甘草中的主要活性成分，具有显著的肾上腺皮质激素样作用，可用于人体抗衰老、抗炎、降压、增强肌体免疫力、提高生理机能、抑制癌细胞生长等，上的应用表明了确实的疗效。本文对甘草酸丰富的药理作用及机制研究进行了综述。 关键词甘草酸药理作用机制研究进展 甘草为多年生草本植物甘草Glycyrrhiza urlensis的根及根茎，性味甘平，归心、肺、脾、胃经，为我国著名的大宗常用中药材和原料,国内、国际需求量都很大，为临床上最为常用的中草药之一。甘草具有补脾益气、润肺止咳、通经脉，利血气，清热解毒，止血祛痰润肺的功效，广泛地被用丁保肝、降血脂、抗癌、抗干扰素诱生剂及增强细胞免疫调节等方面。现代科学研究表明，甘草中含有100多种有效化学成分，其中以甘草甜素、甘草次酸、甘草苷元和甘草多糖为主。甘草酸(Glycyrrhizic Acid,GA)是一个最重要的甘草甜素类化合物，有显著的肾上腺皮质激素样作用，可用丁人体抗衰老、抗炎、降压、增强肌体免疫力、提高生理机能、抑制癌细胞生长等，它以18-H的两种差向异构体存在(α体和β体)，两者均具有一定的生理活性，如甘草酸_铵(甘利欣)为α体制剂，具有明显的降酶、抗炎和保肝作用；而强力宁和复方甘草甜素则为β体制剂。甘草酸在临床上的应用表明了其确实的疗效，本文就近年来对甘草酸丰富的药理作用及机制研究进行了综述。 1 抗肿瘤作用 体内外抗肿瘤药理模型的研究中，GA对不同肿瘤细胞株均显示了较强的细胞毒作用，通过致细胞变异及诱导细胞凋亡等多种机制，抑制肿瘤细胞增殖，发挥细胞毒作用。利用细胞胞质溶胶混悬培养液以及完整的结肠细胞培养物两种模型体系研究后发现，GA通过抑制人体结肠肿瘤细胞中N-乙酰基转移酶活性和DNA-2氨基芴的内敛可产生抗该肿瘤株增值的药理作用，显著降低乙酰转移酶类在人体结肠肿瘤细胞清除系统的Km和Vmax的有效值［1］,在亚细胞毒性浓度时，显著性抑制芳香胺N-乙基酰转移酶在人体结肠肿瘤细胞瘤株(colo205)的活性，且这一抑制作用呈现出剂量依赖性。同时，DNA-2-氨基芴内敛结构也受到了有效的抑制。该研究首次阐明GA通过抑制乙酰转移酶活性和DNA加合物生成来抑制肿瘤的恶化，为临床上GA的应用提供厂新的思路。另外，GA可通过刺激黑色素瘤细胞B16所含的黑色素生成，加速肿瘤细胞的“老化”。GA可剂量依赖性增加酪氨酸酶的表达信使RNA(mRNA)在细胞间质中的水平，进而提高蛋白质、酶活性、黑色素含量。研究过程中还发现，GA能增加络氨酸酶依赖性蛋白质-2(tyrosinasc-rclatcd protcin-2,TRP-2)的mRNA的表达，对TRP-1却无显著影响，说明GA在有效浓度范围内无细胞毒性，因此在无毒性浓度内等量使用GA对正常黑色素生成无影响，以上结论表明GA通过转录激活机制进而诱导刺激黑素产生，发挥抗黑色素瘤的作用［2］。 GA的抗肿瘤药理作用是多样的，CHUNG等进行系统的研究后，得出的构效关系结论为进一步以GA前体结构开发新药物提供丁思路：①GA能减灭细胞癌变刺激物(如乙醇、丙酮、醋氨酚、CCl4等)活化：酶学测定，通过抑制肝微粒体细胞色素P450(CYPlA，)活性减少前致癌物的活化，GA具有化学性防癌的作用，可对抗四氯化碳、半乳糖胺及丙烯基甲酸盐等化学物质所致肝细胞癌变性损伤。α构型既抑制“增毒”的细胞素P450同工酶活性，减
中药生物活性测定指导原则
中药生物活性测定指导原则 生物活性测定法是以药物的生物效应为基础，以生物统计为工具，运用特定的实验设计，控制药物有效性的一种方法，从而达到控制药品质量的作用。其测定方法包括生物效价测定法和生物活性限值测定法。 中药的药材来源广泛、多变，制备工艺复杂，使得中药制剂的质量控制相对困难，此外，中药往往含有多种活性成分和具有多种药理作用，因此，仅仅控制少数成分不能完全控制其质量和反映临床疗效。为了使中药的质量标准能更好地保证每批药品的临床使用安全有效，有必要在现有对指标成分“含量测定”的基础上增加生物活性测定，以综合评价其质量的可靠性和可控性。 本指导原则的目的是规范中药生物活性测定研究，为该类实验设计、方法学建立等过程和测定方法的适用范围提供指导性的原则要求。 基本原则 符合药理学研究基本原则 建立的生物活性测定方法应符合药理学研究的随机、对照、重复的基本原则；具备简单、精确的特点；应有明确的判断标准。 体现中医药特点 鼓励应用生物活性测定方法探索中药质量控制，拟建立的方法的测定指标应与该中药的“功能与主治”相一致。 品种选择合理 拟开展生物活性测定研究的中药材或中成药应功能主治明确，其中，优先考虑治疗适应症明确单一的中药注射剂品种，对急重症用药、保护品种应重点进行研究。 方法科学可靠 优先选用生物效价测定法，不能建立生物效价测定的品种可考虑采用生物活性限值测定法，待条件成熟后可进一步研究采用生物效价测定法。 基本内容 1.实验条件 试验系选择 生物活性测定所用的试验系，包括整体动物、离体器官、血清、微生物和组织、细胞、亚细胞器、受体、离子通道和酶等。试验系的选择与试验原理和测定指标密切相关，应选择背景资料清楚、影响因素少、检测指标灵敏和
海洋生物活性物质研究简述_陈曦
收稿日期：2011－12－20 作者简介：陈曦，男，1982年生，助理研究员。通讯作者：林能锋，男，1972年生，博士，副研究员 （E －mail ：lnfeng@https://www.360docs.net/doc/4510902321.html, ）。 海洋生物活性物质研究简述 陈 曦，陈秀霞，陈 强，林能峰 （福建省农业科学院生物技术研究所350003） 摘 要：海洋生物已成为天然药物的重要来源之一，从各类海洋生物中可提取分离到具有各种药用活性的化合物，具有开发成新药的潜力。该文对海洋生物活性物质主要种类、研究方法和具体 应用进行了简要阐述，同时对海洋生物活性物质的研究方向及前景进行了展望。关键词：海洋生物；活性物质；抗菌；抗肿瘤 Brief description to active material of marine organism CHEN Xi ，CHEN Xiu-xia ，CHEN Qiang ，LIN Neng-feng （Biotechnology Institute ，Fujian Academy of Agricultural Sciences 350003） Abstract ：Marine organism has become one of important source of natural medicines．Medicinal active compounds extracted and separated from which have the potential of being new medicines．In this paper ，the main kinds ，research method and concrete application of marine organism were briefly expounded ，and the research direction and foreground of marine organ-ism in near future were prospected． Key words ：Marine organism ；active material ；antibacterial ；antitumor 海洋约占地球表面积的71%，生活着20多万种生物。在高盐、高压及缺氧的环境下，很多海洋生物在长期进化过程中能够代谢产生一些结构独特的化学物质，其中具有重要作用的生物活性物质虽然众多，但真正进入临床应用的却非常稀少。随着生物技术的发展，运用现代生化分离与分析手段，通过细胞培养、DNA 重组等技术，可能从海洋中获取大量低毒、高效的活性物质。目前，海洋生物活性物质的主要活性研究侧重在抗癌与抗菌等方面，而具有生物活性的主要海洋生物资源是海洋无脊椎动物，如草履虫、海兔、海鞘、海绵、海藻（包括微藻）及海洋微生物等。 1国内外海洋生物活性物质研究现状 美国是最早研究海洋生物抗菌肽物质的国家之一。随着“回归自然”浪潮的出现，人们越来越关心环境生态与污染、化学致癌物等的关系。天然产物的化学分离与化学分析的长足进步，使现在能以 从前根本不可实现的速度进行分子的提取与鉴定。日本海洋生物技术研究院及海洋科学和技术中心每年用于海洋生物活性物质开发的经费为1亿多美元。在海洋生物活性物质方面的研究发展很快，对海洋微生物、微藻类、海绵、芋螺、海参等多种海洋动植物和微生物等所产生的活性物质进行研 究，其中以海绵和海藻类研究最多［1］ 。 欧盟制订了海洋科学和技术计划，重点资助项 目中有“从海洋生物资源中寻找新药” ，近年来，发现了450多个具有不同生物活性的新海洋天然产 物，其中31个化合物具有明显的抗肿瘤活性。每 年用于海洋药物开发的经费也有1亿多美元［2］ 。 我国利用海洋生物资源入药治疗、健体强身的 历史非常悠久。但现代海洋药物研究则始于20世纪70年代。1997年我国启动海洋高技术计划，海洋药物的开发被列为重点，从而以沿海城市为中心，形成科研、生产、开发技工贸一体化的生产网络 ［3］ 。 2 海洋生物活性物质的种类与生理作用 2.1 抗菌肽 抗菌肽是动物机体具有天然免疫力的重要原因，其抗菌机制推测是其—helix 结构可在细菌的
吸附剂及其作用机理研究与探讨
吸附剂及其作用机理研究与探讨 王丁明 （河北理工大学市政工程系） 摘要：本文全面叙述与探讨了吸附剂的作用机理和物理性质，并对几种常见 的吸附剂给予了介绍。 关键词：吸附剂作用机理活性炭 1前言 任何一对原子（或分子）间均有相互吸引的作用。如果一对原子有一方是固体表面原子，另一方是气体分子，那它们相互作用的结果是将气体束缚于固体表面或使被束缚分子与气体体相内的分子成某种动态平衡。这种气体分子在固体表 面上发生的滞留现象称为气体在固体表面的吸附作用。换言之，气体在固体上的 的吸附作用是发生在两相界面上的行为，使气相中的某种组分在此界面上浓集。吸附作用使固体表面能降低，因而吸附过程是自发过程。 在工农业生产活动和日常生活中，吸附现象是普遍存在的。为了研究方便，通常将被吸附的物质称为吸附质，能有效地吸附吸附质的物质称为吸附剂。吸附质可以是气体、蒸气和液体，吸附剂大多为多孔性大比表面积的固体。 本文将全面叙述与探讨吸附剂的作用机理和物理性质，并对几种常见的吸附剂予以介绍。 2吸附剂的作用机理 吸附是一种建立在分子扩散基础上的物质表面现象。以固体表面和吸附分子 间作用力的性质区分，吸附作用大致可分为物理吸附、化学吸附和离子交换吸附。 2.1物理吸附 有关物理吸附的许多实验结果表明，物理吸附具有吸附热较小、吸附速度快、吸附无选择性、吸附可以是多层的等特点。因此人们认为引起物理吸附的力是普遍存在于各种原子和分子之间的范德华力。范德华力来源于原子与分子间的取向力、诱导力和色散力三种作用。 极性分子可视作偶极子，其极性用偶极矩卩=qd来衡量，即正或负电荷电量（q）与电荷中心间距d的乘积。卩=0的分子为非极性分子，卩越大，分子极性越大。测定分子偶极矩是确定分子结构的一种实验方法。德拜因创立此方法而荣获1936年诺贝尔化学奖。极性分子相互靠近时，因分子的固有偶极之间同极相斥异极相吸，使分子在空间按一定取向排列，使体系处于更稳定状态。这种极性分子之间靠永久偶极与永久偶极作用称为取向力，其实质是静电力。
企业战略企业战略联盟竞争优势作用机理分析
企业战略企业战略联盟竞争优势作用机理分析 Company number：【0089WT-8898YT-W8CCB-BUUT-202108】
★★★文档资源★★★ 内容摘要：企业使用传统的产品、价格和促销等市场要素手段，已经不能够为客户提供差异化的优质产品，企业的竞争优势也不明显。本文探讨了企业战略联盟的成因、战略联盟的益处和战略联盟的发展即供应链管理，以期为企业提供获取竞争优势的有效途径。 关键词：物流能力战略联盟竞争优势 进入21世纪，企业之间竞争日趋激烈，要生存、要发展，必须完成企业的利润目标。企业在完成利润目标和生存竞争时，面临企业内外的各种挑战。外部方面包括信息化、新技术、客户高要求和国内外竞争者等挑战，内部方面包括降低成本、提高效率、改进物流服务和创造更多客户价值等挑战。总之，企业面临这些挑战，要保持高速发展比以往任何时候更加困难。 当今市场环境中，企业使用传统的市场要素—产品、价格和促销等手段，已经不能够为客户提供差异化的优质产品，竞争者可以通过产品革新、价格降低和促销的手段，削减企业的竞争优势。因此，企业不得不寻求更新的方式，在市场中获取竞争优势。研究表明，企业战略联盟是获取竞争优势途径之一。本文探讨了企业战略联盟的成因、战略联盟的益处和战略联盟的发展即供应链管理，以期为企业提供获取竞争优势的有效途径。 战略联盟的成因 （一）竞争优势理论 国内外学者对产生竞争优势的来源和保持竞争优势的途径进行了广泛的研究。波特认为，竞争优势来源于企业为客户提供的价值超出为此付出的成本的部分—超额价值，
这种超额价值可以通过多种途径获得，从而获得竞争优势，波特认为成本优势和差异化是两种主要的方式。 为了获得成本优势，企业分解产生成本的作业工序，剔除不必要的工序，降低成本，有些经验知识是消除无效率活动的关键因素，这些知识在企业内的分享能够降低成本。为了依靠差异化获得竞争优势，企业必须探明产生差异化的途径，这些途径包括企业产品、市场活动、商品配送和人力资源，波特把差异化定义为给客户提供的不仅仅是低价产品，而且是独特的产品，关键是客户付出相同的成本，从本企业获得的价值比从其它企业的要多。 企业不但要懂得如何获得竞争优势，而且也要理解如何才能保持已经获得的竞争优势，波特认为，为了保持竞争优势，企业不但为客户提供超值服务，而且能够阻止竞争者的模仿。 （二）资源基础理论 Penrose 首先提出企业是生产性资源结合体，并且奠定了资源基础理论的基础，该理论认为企业必须拥有提高企业业绩、创造竞争优势的特定资产、技术或资源。Penrose 指出，企业获利水平取决于企业利用资源产生核心竞争力的程度。 Wernerfelt 指出企业资源体现了企业实力的强弱，企业资源分类为有形资产和无形资产，有形资产有设施、运输设备和生产设备等，有形资产的改进可以降低成本，提高企业业绩。Dierickx 指出由于其它企业可以在市场上买入同样的有形资产，因此，有形资产不能够作为保持竞争优势的基础。企业文化、经验、配送管理、关系和客户忠诚等无形资产，在资源基础文献中受到广泛关注，Hall 把无形资产分为二类，一类为资产，如商标和数据库等，一类为能力，如经验和技术等。Mahoney指出无形资产是企业差异化的根源。
华农农药生物活性测定实验2014年
实验一 杀虫剂初步毒力测定 1、 实验原理： 初筛试验，又称初步综合杀虫毒力试验。这种试验不涉及毒杀方式和毒杀能力的大小，一般采用较高的浓度，尽量发挥综合毒效（包括胃毒、触杀、薰蒸等作用）。 一般农药初筛毒力测定方法，根据试虫对象不同，多采用浸渍法、喷雾法、喷粉法、饲料混药法等。每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。一般液剂在0.1-1%，粉剂1-10%。 2、 实验方法与步骤 1、 药剂配制：将A、B药剂配成0.1%的溶液备用。 2、 试虫移取：取小菜蛾3龄幼虫集中混匀后，用毛笔刷入培养皿， 每处理10头，重复一次。 3、 喷布质量检定：用9cm的白色园纸片来检查喷雾雾滴的大小和喷 布是否均匀一致，如不符合要求，可调节喷头及位置，使喷布质 量达到基本要求。 4、 处理方法：采用喷雾法，选用potter喷雾塔，喷布药液前，用清 水及欲喷洒的药液大量喷布。换药前需将受药盘及雾化室底部用 布充分擦净，然后大量喷布试验的药液。在接有小菜蛾的培养皿 中加入一定新鲜菜叶后，用移液管吸取3ml药液进行喷布，约10 秒后，待药液全部沉降，取出培养皿，做好标记，空白对照只喷 洒清水。待药剂干后，将试虫连同饲料置于恢复室内培养24小时 后检查结果。 3、 实验注意事项： 1、 目标试虫的选择：应选用具有一定的代表性及经济价值，耐药 性较强、生长健壮、自然死亡率底，虫龄虫体大小一致，最好 采用人工饲养的试虫。 2、 环境条件的选择：温度在20-28℃，相对湿度在60%-80%，通气 良好。 3、 处理设计：每处理需试虫15-30头，可以不设重复，每次试验均 要设空白对照，施药时要注意各处理用药等量均匀一致。 4、 实验结果处理： 处理24小时，48小时后，检查死活虫数，计算死亡率及校正死亡率，并比较不同药剂的毒力大小。试虫死活标准，一般以能正常活动或飞翔的或能正常行动的作为活虫，其余中毒的均为死虫。 5、 思考题： 1、 将筛选药剂的毒力试验结果记入杀虫剂初步毒力试验记载表，
抗生素微生物检定方法学验证中的常见问题分析
发布日 20070423 期 栏目 化药药物评价>>化药质量控制 标题 抗生素微生物检定方法学验证中的常见问题分析 作者 审评三部 部门 正文容 审评三部审评五室英 摘要：本文对抗生素微生物检定法中的管碟法在方法学验证中的常见问题如线性与围中溶液 浓度与直径的关系、精密度的测定方法等进行了分析，归纳其错误的问题，给出了正确的操作方法。 关键词：抗生素微生物检定法多组分抗生素方法学验证 抗生素微生物检定法是国际上通用的、经典的抗生素测定方法。自20世纪40年代建立至今，在各国药典中被普遍采用。虽然伴随着HPLC等化学分析技术的发展，一些抗生素品种的效价已被化学分析法所取代，但由于①微生物检定法可直观、特异地反映出抗生素品种的抗菌活性； ②多组分抗生素由于结构与不同活性组分生物活性的差异，化学测定结果难以准确表征组分组 成、含量和生物活性间的关系；③许多抗生素品种由于各种原因如无特征紫外吸收等，目前没有适当的化学分析方法表征其活性，故抗生素微生物检定法目前在各国药典中仍占有重要的地位，且短期化学分析法不可能完全取代微生物检定法。中国药典2005年版仍采用抗生素微生物检定法中的管碟法测定其效价，目前申报已有国家标准的该类制剂较多，在质量研究中存在诸多问题，现就常见的问题加以分析，希望对注册申请人有所帮助。 一、方法的建立 1、供试品与标准品的同质性抗生素微生物检定法的原理以供试品与标准品同质为前提，方
法建立前，首先应确定供试品与标准品是否同质，包括化学结构、所含组分及组分比例的一致性，对于制剂还要考虑辅料的影响是否造成供试品与标准品不同质。 2、培养基、试验菌、缓冲液和培养条件的选择 可参照中国药典建立，在此不再赘述。 3、检定方法的确定 可采用一剂量法（标准曲线法）、二剂量法及三剂量法等。一般确定线性与围采用一剂量法（标准曲线法），常规含量测定采用二剂量法，标准品标定采用三剂量法。 4、抗生素溶液的稳定性 选定的品种可参照中国药典现行版附录抗生素微生物检定法的品种，若溶剂和缓冲液与其不同，应考察抗生素储备溶液和测定溶液在室温、40℃和不同pH值缓冲液中，以及放置不同时间的稳定性，以确定抗生素储备溶液和测定溶液的存放时间和条 件。 二、方法的验证 验证的目的是证明采用的方法适合于检测的要求。 验证容有：准确度、精密度（包括重复性、中间精密度）、专属性、适用性和线性。 在申报资料中常见的错误有：线性测定不符合抗生素微生物检定法一剂量中心浓度等比测定的原理；精密度的测定方法不正确；无专属性试验。下面就方法验证的容与常见的错误加以简述。 1、专属性考察杂质、辅料等对测定结果准确性的影响，可通过以下试验验证： (1) 用辅料等替代抗生素进行试验，应不产生抑菌作用。 (2) 采用回收率试验进行验证，至少有9对以上数据，并进行显著性检验。
食物中的生物活性物质(综述)
食物中的生物活性物质(综述) 食物中的生物活性物质(综述) 食物中的生物活性物质 食物中的生物活性物质-医学论文 有些食物含有多种具有生物活性的化合物，当与机体作用后能引起各种生物效应，称为生物活性物质。〔3〕它们种类繁多，有糖类、脂类、蛋白质多肽类、甾醇类、生物硷、甙类、挥发油等等。它们主要存在于植物性食物中，对人有的有利，有的有害。瑞士哲人和医生Paracelsus认为，植物是人类食物和药物的来源，也是毒物的来源，“所有食物都是毒物，没有无毒性的食物，仅仅是量的多少左右了他们毒性的大小”。生物活性物质的危害菌类美味可口，如平菇、香菇等可汤、可菜，很受喜欢，但某些食用伞菌含有多种肼的衍生物，多为潜在的有毒或致癌物质，一般摄入时对健康造成的伤害很小，但大量摄入就很危险。有些人喜食杏仁，而杏仁中含有毒性很强的苦杏仁苷和生氰糖苷，过量食用会有致命的危险。山黧豆种子中含有神经毒素3-N-草酰基-2，3-二氨基丙酸，食入过多会损伤运动神经而引起麻痹。豆类也含有多种有害的生物活性物质，如凝集素、生氰糖苷、肌醇六磷酸、甲状腺肿素、皂角苷、植物雌激素等。所幸的是天然存在于豆类中的大多数有毒物质在烹调过程中会被破坏。植物性食物中的许多生物活性物质还会干扰矿物质的吸收，如茶中的丹宁是铁吸收的抑制剂；肌醇六磷酸可导致维生素D和锌的缺乏。植物中还有许多化合物有类似激素的活性，如首先在南美洲的饲料植物中后来又在野燕麦中发现的维生素D糖苷，具有维生素D的活性；甘草中的甘草酸有盐皮质激素的活性，因此过量食用甘草可导致钠潴留和严重高血压；现还发现在植物尤其豆科植物中有的化合物具有雌激素或抗雌激素的活性。引起过敏反应也是生物活性物质常见的危害，如对那些 6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏的人来说，食用蚕豆可能是致命的；乳糜泻是一种对谷蛋白过敏的反应，这种谷蛋白存在于小麦、黑麦及大麦中，对此物质过敏的人群约占1/2000；饮用葡萄皮中含过量多酚物质的红葡萄酒或含甲基黄嘌呤的饮料引起的偏头痛也 是 )hTTp://wWw.fWJiａ.cOm } 常见的反应。生物活性物质在疾病
生物活性物质研究进展-郑灿龙
新疆农业大学 专业课程论文 题目：核桃青皮的综合加工利用姓名： 学院：食品科学与药学学院 专业：食品科学与工程 班级： 学号：0940910132 指导老师：张辉职称：副教授 2011年6月10日 新疆农业大学教务处制
核桃青皮综合加工利用的发展现状与前景 作者：迪力夏提·卡迪尔 摘要：介绍了核桃青皮的化学成分，并重点介绍了核桃青皮应用的现状和关于研究的最新进展。目前，核桃青皮的综合加工利用程度较低，应用范围也很狭窄。因此,对核桃青皮综合加工的开发与利用,是一项极有意义的工作，本文对核桃青皮综合加工利用的进展进行叙述,以期为核桃青皮的开发利用提供信息。 关键词:核桃青皮；化学成分；加工利用；发展现状 Synthetically processing and using of Green peel of Walnut Author: Abstract：This article has a brief overview on the chemical compounds of Green peel of Walnut, especially introduce and the latest progress of scientific research about Green peel of Walnut.At present, the application processing of green peel of walnut is in a low level. The range of the application is also narrow, mainly applied in medicament. Key words：Green peel of Walnut;chemical compounds; processing; the status quo of development； 前言 核桃(Walnut Epicarp)又名胡桃，胡桃属(Juglans Linn.)植物属于双子叶植物纲金缕梅亚纲胡桃科（Juglandaceae)，全世界已记载约20种。其中，中国有4种，分别为胡桃楸(J.m andshu rica M axim.)、核桃(J.reg ia L inn.)、野核桃(J.cathayensis Dode)和麻核桃(J.hopriensisHu)，主要栽培于东北的南部、华北、西北、华中及华东地区[1-2]。核桃未成熟时核外部有一层厚厚的绿色果皮（核桃青皮）随着核桃逐渐成熟该青皮会渐渐变黑。我国传统中药及临床上有用该青皮治疗胃痛、胃溃疡、皮肤病子宫脱落等的记载,但是疗效和机理尚不明确,临床上曾出现过皮肤过敏现象 [3]。 1.核桃青皮的化学成分 目前，核桃青皮中化学成分的提取分离和成分鉴定研究取得了一定的进展。用气相色谱/质谱联法分别鉴定出核桃青皮中有39种挥发油和7种脂肪酸，结果显示挥发油占79.09％、脂肪酸占19.02％，其中的挥发油有烃类（26种、71.80％）、酮类（3种、10.83％）、醇类（6种、7.96％）、呋喃类（1种、5.79％）、酚类（1种、1.99％）、肟类（1种、0.95％）、酯类（1种、0.71％）七大类化合物，以倍半萜类为主[4]，具有平喘、抑菌抗肿瘤作用。 各脂肪酸的含量为十六碳酸19.30％、十八碳酸3.03％、十六碳烯酸2.93％、十八碳烯酸1.45％、十八碳二烯酸14.36％、十八碳三烯酸3.21％。十八碳二烯酸是人体所必需的脂肪酸，而花生四烯酸其生物活性最强，体内含量最高，对其营养功能亦不可忽视。亚麻酸具有软化血管、防治高血压及心脏病等特殊功效，具有极高的食用和营养价值，缺乏时可影响幼猴视力和视网膜反应[5]。用水提醇沉法提取粗多糖，高效毛细管电泳测定单糖组成，苯酚-硫酸法测定质量分数，粗多糖提取率为38.07％、精制多糖为76.08％。主要单糖组分为半乳
抗氧化剂的作用机理研究进展
抗氧化剂的作用机理研究进展 摘要：食品抗氧化剂的作用比较复杂。BHA和BHT等酚型抗氧化剂可能与油脂氧化所产生的过氧化物结合，中断自动氧化反应链，阻止氧化。抗坏血酸、异抗坏血酸及其钠盐因其本身易被氧化，因而可保护食品免受氧化。另一些抗氧化剂可能抑制或破坏氧化酶的活性，借以防止氧化反应进行。研究食品抗氧化剂的作用机理并合理使用抗氧化剂不仅可延长食品的贮存期，给生产者、经销者带来良好的经济效益，也给消费者提供可靠的商品。 关键词：抗氧化剂作用机理自由基现状前景展望 食品的变质，除了受微生物的作用而发生腐败变质外，还会和空气中的氧气发生氧化反应。食品氧化不仅会使油脂或含油脂食品氧化酸败(哈败)，还会引起食品发生退色、褐变、维生素破坏，从而使食品腐败变质，降低食品的质量和营养价值，氧化酸败严重时甚至产生有毒物质，危及人体健康。防止食品氧化变质，在食品的加工和储运环节中，除采取低温、避光、隔绝氧气以及充氮密封包装等物理的方法还可以配合使用一些安全性高、效果大的食品抗氧化剂以防止食品发生氧化变质。 1 食品抗氧化剂的定义 食品抗氧化剂是指防止或延缓食品氧化，提高食品稳定性和延长食品储藏期的食品添加剂。具有抗氧化作用的物质有很多，但可用于食品的抗氧化剂应具备以下条件：①具有优良的抗氧化效果； ②本身及分解产物都无毒无害；③稳定性好，与食品可以共存，对食品的感官性质(包括色、香、味等)没有影响；④使用方便，价格便宜。[1] 2 食品抗氧化剂的分类 目前，对食品抗氧化剂的分类，按来源可分为人工合成抗氧化剂和天然抗氧化剂(如茶多酚、植酸等)。按溶解性可分为油溶性、水活性和兼溶性三类。油溶性抗氧化剂有BHA、BHT等；水溶性抗氧化剂有维生素C、茶多酚等；兼溶性抗氧化剂有抗坏血酸棕榈酸酯等。按作用方式可分为自由基吸收剂、金属离子螯合剂、氧清除剂、过氧化物分解剂、酶抗氧化剂、紫外线吸收剂或单线态氧淬灭剂等。[2] 3 食品抗氧化剂的作用机理 由于抗氧化剂种类较多，抗氧化的作用机理也不尽相同，归纳起来，主要有以下几种： 一是抗氧化剂可以提供氢原子来阻断食品油脂自动氧化的连锁反应，从而防止食品氧化变质； 二是抗氧化剂自身被氧化，消耗食品内部和环境中的氧气从而使食品不被氧化； 三是抗氧化剂通过抑制氧化酶的活性来防止食品氧化变质。 四是将能催化及引起氧化反应的物质封闭，如络合能催化氧化反应的金属离子等。[3]
生物药物分析与检验
生物药物分析与检验 生物药物分析与检验的特点： 1.需要进行相对分子质量的测定、 2.需要检查生物活性 3.需做安全性检查 4.需做效价测定 5.要用生化法确证结构 终点测定法的条件： 1.必须有专一地作用该被测物质的酶，并能得到它的制品； 2.能够确定使这种酶反应接近进行完全的条件； 3.反应中底物的减少、产物的增加、辅酶物质的改变等可以借助简便的方法进行测定 高效液相色谱法的定性分析 1.利用已知物质定性的方法 ①利用保留特性 ②利用不同柱比较 2.色谱法与其他方法结合定性 ①利用化学反应定性 ②利用选择性检测器定性 ③液相色谱-质谱联用技术、液相色谱-核磁共振联用技术 生物检定的范围: 1.药物的效价测定 2.体内微量生物活性物质的测定 3.中药质量的控制 4.某些有害杂质的限度检查 基因工程药物的特点： 1.分泌量极低而生理、药理活性极高 2.具有细胞和组织特异性 3.多数细胞生长因子具有多功能性 4.细胞因子间存在复杂的相互作用 5.具有低免疫原性 特殊杂质检查方法：物理化学区分方法 一、物理法“1. 臭味及挥发性的差异 2. 颜色上的差异 3. 溶解行为上的差异 二、化学分析法 1. 酸碱反应 2. 呈色或沉淀反应 3. 产生气体 4.氧化还原反应
免疫电泳技术：将琼脂电泳与免疫扩散结合起来，即利用电场作用下带电蛋白质在琼脂凝胶中具有不同的迁移率，以及相同的蛋白质具有完整的抗原性的特点，用于分析抗原或抗体性质的一种技术。 电泳：带电颗粒在电场的作用下，向着与其电性相反的电极移动的现象。 终点测定法：先借助酶反应（单独的反应或几种酶构成的偶数酶反应）使被测物质定量地进行转变，然后在转化完成后，测定底物、产物或辅酶物质（第二底物）等的变化量 生物检定：利用生物体（整体动物、离体组织/器官、细胞和微生物等）的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。 质反应：当一定剂量的药物注入动物体内后，观察某一反应或反应的某一程度出现与否，只有质的变化。 量反应：药物对生物体所引起的反应随着药物剂量的增加产生的量变可以测量者。 杂志：指药物中存在的无治疗作用、或影响药物稳定性和疗效、甚至对人体健康有害的物质 药典主要包括凡例、正文、附录和索引四部分组成 生物药物常用的定量分析法：酶法、电泳法、免疫分析法、理化测定法、生物检定法 酶分析法包括酶法分析和酶活力测定 酶联免疫吸附分析法包括直接法和夹心法 电泳法分为自由界面电泳、区带电泳和高效毛细管电泳。 指示液：溴酚蓝用于指示电泳终点；甘油比重大，使样品下沉 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的三种效应：分子筛效应、浓缩效应、电荷效应 高效液相色谱法的优点：速度快、分辨率高、灵敏度高、柱子可反复使用、样品容易回收 要获得较好色谱分离有两个途径：一是最大峰间的距离要大，二是色谱峰要窄 常用的脱气方法：真空脱气法、煮沸脱气法、溶剂的滤过 微生物检定法测定抗生素效价：稀释法，浊度法，管碟法。其中我国是管碟法。 氯化物检查法：用硝酸，硝酸银 硫酸盐检查法：用盐酸，氯化钡，标准对照液：标准硫酸钾溶液 铁盐检查法：中国药典和美国药典采用硫氰酸盐，英国药典采用巯基醋酸法 重金属检查常用的显色剂：硫代乙酰胺、硫化钠 澄清：不超过0.5号浊度标准液的浊度时；几乎澄清：介于0.5号至1号浊度标准液之间
微生物对抗生素抗性实验设计
微生物综合性实验设计报告化学抑杀菌剂的效果评价
微生物综合性实验设计报告 化学抑杀菌剂的效果评价 一、所选化学试剂的主要性质 试剂性状药理应用备注 头孢霉素白色或类白色的 结晶性粉末；微 臭。在水中略溶， 在乙醇、氯仿、乙 醚中几乎不溶。 1％水溶液pH为 3.5～6。在碱性物 质存在时，游离酸 容易溶解。对金黄色葡萄 球菌、肺炎链球 菌、大肠杆菌、 流感嗜血杆菌 等有抗菌作用。 抑制细胞壁合 成 其游离酸供口服， 用于呼吸道、泌尿 道、皮肤和软组织 等部位的敏感菌感 染，注射剂也用于 败血症和骨感染。 对青霉素过敏或有过敏 体质者及肾功能不全者 慎用。对头孢类抗生素 过敏者禁用；注射剂刺 激性较低，适宜于肌注 应用；可致菌群失调、 维生素缺乏、二重感染 等副作用。干燥、阴凉 处，避免受热。 红霉素白色或类白色的 结晶或粉末；无 臭，味苦；微有引 湿性。在甲醇、乙 醇或丙酮中易溶， 在水中极微溶解。抗菌谱与青霉 素近似，对葡萄 球菌、螺旋杆菌 等有较强的抑 制作用。对支原 体、放线菌、立 克次氏体、衣原 体有抑制作用。 金黄色葡萄球 菌对本品易耐 药。抑制蛋白质 合成 抗菌谱与青霉素相 似，且对支原体， 衣原体，立克次体 等及军团菌有抗菌 作用。 在酸中不稳定，能被胃 酸破坏，抗菌活性随pH 值的升高而增强。与万 古霉素、青霉素、及碳 酸氢钠等混用可产生浑 浊、沉淀或降效。主要 对革兰氏阳性菌具有抗 菌性。细菌的聚核糖体 结合而抑制肽链的延 伸； 磺胺类 复方磺胺甲噁唑白色结晶性粉末， 无臭，味微苦。几 乎不溶于水，溶于 稀盐酸、氢氧化钠 试液或氨试液中。 熔点为 167-171℃。 抗菌谱与SD 相似，但抗菌作 用较强。磺胺药 在体内的代谢 产物乙酰化物 的溶解度低 敏感菌所致肠炎， 支气管炎，中耳炎， 尿路感染等 交叉过敏对一种磺胺 药过敏的患者对其它磺 胺药可能过敏。 穿心莲清热、祛湿、利胆。用于肝胆湿热引起的口苦、肋痛；急性胆囊炎、胆管炎。 黄连素黄连素是一种重要的生物碱，它具有显著的抑菌作用。黄连素能对抗病原微生物，对多种细菌如痢疾杆菌、结核杆菌、肺炎球菌等都有抑制作用，其中对痢疾杆菌作 用最强，常用来治疗细菌性胃肠炎、痢疾等消化道疾病。临床主要用于治疗细菌性 痢疾和肠胃炎，它无抗药性和副作用。 二、所用菌种主要特点
海洋生物活性物质和其研究进展
海洋生物活性物质及其研究进展 [摘要]广阔的海洋蕴含着丰富的生物资源，特别是高活性的生物活性物质如高不饱和脂肪酸、类胡萝卜素、维生素等，对人类健康和长寿有着重要的作用，它们在未来的医药、食品、保健、畜禽及水产养殖等各个方面必将占据显著地位[1、2]。鉴于此，本文就主要海洋生物活性物质的分类及特性、当前的研究现状及进展进行了综述，并展望了该领域的发展前景。 [关键词]海洋生物活性物质高不饱和脂肪酸 EPA DHA 类胡萝卜素维生素 引言地球约有71％的表面是水，而海水总体积占地球总水量97％的海洋，生物资源丰富、种类繁多。据统计，大约有着4O多万种动、植物和上亿种微生物生存在其中。如此众多的海洋资源是我们开发医药、食品、化工产品的巨大宝库。海洋中的生物为了生存繁衍，在竞争中取胜并使自己适应海洋的独特环境，如高压、低营养、低温(特别是深海)、无光照、以及局部的高温、高盐等所谓生命极限环境，在漫长的进化中各自形成了特殊的结掏和奇妙的生理功能．为人类提供了众多结构新颖、功能独特和生理活性很强的活性物质，包括萜类、甾醇类、生物碱、甙类、多糖、肽类、核酸、蛋白质、酶等，这些生物活性物质的主要药理作用包括抗细菌、抗病毒、抗肿瘤、防治心血管疾病、延缓衰老及免疫调节等作用[1、2]。 所谓生物活性物质，是指来自生物体内的对生命现象具有影响的微量或少量物质。海洋生物活性物质，则是指海洋生物体内所含有的对生命现象具有影响的微量或少量物质、主要包括海洋药用物质、生物信息物质、海洋生物毒素产生物功能材料等海洋生物体内的天然产物[3]。 随着环境污染的加剧和人类寿命的延长，心脑血管疾病、恶性肿瘤、糖尿病、老年性痴呆症等疾病日益严重地威胁着人类健康，艾滋病、玛尔堡病毒病、伊博拉出血热等新的疾病又不断出现，仅病毒病世界上平均每年就新增2－3种。人类迫切需要寻找新的、特效的药物来治疗这些疾病。人们纷纷将目光投向海洋。此外，人们还希望利用海洋生物活性物质开发出增进健康、预防疾病的营养食品、保健食品，有些海洋生物活性物质还可用于化妆品中，有的可制成特殊的生物功能材料，使得海洋生物活性物质成了研究热点[3、4]。
溶菌酶作用机理研究
裂解酶PlySs2裂解细菌的作用机理研究 1.实验目的 PlySs2是从猪链球菌（Streptococcus suis）噬菌体中分离到的一种裂解酶，对甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant streptococcus aureus,MRSA）、万古霉素中介耐药 金黄色葡萄球菌（V ancomycin-intermediate streptococcus aureus,VISA）、猪链球菌、李斯特 菌（Listeria）、模仿葡萄球菌（Streptococcus simulans）等细菌具有抑制活性，活性高，抗菌谱广[1, 2]。研究发现，PlySs2由两个功能结构域构成，即催化结构域（Catalytic domain,CD,PlySc）和细胞壁结合结构域（Cell wall binding domain,CBD,PlySb）[1, 2]。CBD结构域负责与细胞壁上相应基质结合，CD结构域侧催化相应的化学反应促使细胞壁上特定物质分解，从而破坏细胞壁结构并裂解细胞。PlySs2的N端为半胱氨酸-组氨酸氨基水解酶（Cysteine-histidine amidohydrolase/peptidase，CHAP）催化结构域，C端为SH3 5型结合结构域。CHAP结构域即具有丙氨酸酰胺酶活性，也具有肽桥内切酶活性[2]。研究发现，只有完整的PlySs2才能 保持其较高的溶菌活性，PlySs2属于结合结构域PlySb依赖型，单独的催化结构域PlySc的溶解活性很小或者基本无活性[1]，说明PlySb对底物的识别十分重要。PlySs2能识别多种菌的细胞壁并产生裂解活性，但是不同菌之间存在活性差异，这即体现了其广谱性，又体现了活性差异性。相关报道表明，多数裂解酶与细菌细胞壁中肽聚糖的特定位点结合并破坏其结构，从而裂解细菌。不同菌株之间细胞壁的组成成分具有差异，导致裂解酶存在活性差异[3]。目前推测，PlySs2的结合位点在细胞壁肽聚糖上，并破坏其结构以裂解细菌。本研究的目的是找到PlySs2与肽聚糖相互作用的结合位点，分析PlySs2裂解细菌的作用机理。 2.实验思路 根据实验室已有的方法诱导表达和纯化PlySs2，备用。选择PlySs2裂解活性最高的金 黄色葡萄球菌作为实验菌，在最适条件下培养并获得菌体。 实验思路一：PlySs2直接与金黄色葡萄球菌相互作用。 在最适条件下孵育PlySs2和金黄色葡萄球菌的混合物，离心并收集上清液。由于PlySs2与金黄色葡萄球菌细胞壁上某种物质相互结合并反应，可能存在PlySs2与底物结合在一起 的复合物，离心后收集上清液，其中可能存在少量该复合物，再采用非变性聚丙烯酰胺凝胶