微生物
葡萄球菌：
常见的病原性球菌（pathogenic coccus）因均能引起化脓性感染，故又名化脓性球菌（pyogenic coccus）。包括葡萄球菌、链球菌、肠球菌、脑膜炎球菌和淋球菌等。
病原性球菌均有一定的形态、排列方式、染色性和菌落特点，因此它们的形态学检查和培养特性是细菌学鉴定的主要依据。
形态与染色：葡萄球菌为革兰阳性球菌，平均直径1μm，无特殊构造，常排列成堆，似葡萄状，故名葡萄球菌。也可呈单个、成双或不规则排列。
生化反应：葡萄球菌的生化反应强，能分解多种糖类，蛋白质和氨基酸。触酶试验阳性，金黄色葡萄球菌血浆凝固酶和耐热核酸酶试验均阳性，此外，磷酸酶，吡咯烷酮芳基酰胺试验阳性。肠毒素试验：①动物实验②琼脂扩散，ELISA ③基因测定
蛋白抗原。为葡萄球菌细胞壁上的一种蛋白成分，称为葡萄球菌A蛋白（staphylococcal protein A，SPA），从人体分离出的金黄色葡萄球菌几乎都含有SPA，表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌则不具有。SPA具有抗吞噬作用。它与IgG的Fc段能非特异的结合而不影响Fab 段的免疫活性，故可作为检测各种抗原或抗体的实验诊断试剂（协同凝集试验）。
多糖抗原。是一种位于细胞壁上的半抗原，有型的特异性，可分为A、B、C三型多糖抗原。①A型：存在于绝大多数金黄色葡萄球菌菌株中，检测感染者机体中相应的磷壁酸抗体，有助于诊断和预后判断；②B型：来自非致病性葡萄球菌；③C型：可分离自致病菌株和非致病菌株。
抵抗力：葡萄球菌是无芽胞细菌中抵抗力最强的一属细菌。耐干燥：在干燥的脓、痰、血液中可存活数月；耐热：80℃30min才能杀灭；耐高盐：它能在10%~15%的高盐甘露醇琼脂平板中生长。
临床意义：（1）血浆凝固酶（coagulase）是金黄色葡萄球菌所产生的一种主要致病物质，也是区别金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌的主要指标，它能使含抗凝剂的人或兔血浆发生凝固（2）耐热核酸酶(heat-stable nuclease) 所有金黄色葡萄球菌均能稳定地产生这种酶。耐热，100℃15min或60℃2h不被破坏；能较强降解DNA和RNA。目前临床上已把耐热核酸酶作为判断葡萄球菌有无致病力的重要指标之一。（3）葡萄球菌溶素（staphylolysin）多数致病性菌株均能产生，为外毒素，包括α、β、γ、δ，对人致病的主要是α溶素。该溶素能损伤血小板，破坏白细胞的溶酶体，引起血管平滑肌痉挛，导致局部出血坏死，皮肤出现淤点淤斑。（4）肠毒素（enterotoxin）30%～50%金黄色葡萄球菌可产生这种外毒素，耐热，100℃30min不被破坏，尚可对抗胰蛋白酶的消化。该毒素分为A、B、C、D、G与H九个型别。金黄色葡萄球菌引起的毒素型食物中毒以A型多见。（5）毒性休克综合征毒素—1（toxic shock syndrome toxin l,TSST-1）,它能引起机体多个器官系统的功能紊乱或毒性休克综合征。（6）杀白细胞素（PVL）是一种可溶性物质，有抗原性，为外毒素。能使人和家兔的中性粒细胞脱颗粒，进而杀伤白细胞，有抗吞噬的作用。
所致疾病：1.化脓性炎症①局部感染主要由金黄色葡萄球菌引起②全身感染：如败血症、脓毒血症2.毒素性疾病：食物中毒、烫伤样皮肤综合征、毒性休克综合征、假膜性结肠炎3.医院感染：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和表皮葡萄球菌(MRSE)已成为医院感染的主要菌和辣手问题。
检验方法与鉴定：（1）直接涂片镜检（2）分离培养（3）鉴定要点①致病性葡萄球菌在血平板上的菌落一般呈金黄色，革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，血浆凝固酶试验和耐热核酸酶试验均呈阳性，发酵甘露醇。②Staphaurex胶乳凝集试验：是一种鉴定金黄色葡萄球菌的快速、简便的商品化直接凝集试验。
链球菌
链球菌属（Streptococus）是化脓性球菌中的另一大类常见细菌，为链状排列的革兰阳性球
菌。营养要求高。
生化反应：分解葡萄糖，产酸不产气。对乳糖、甘露醇的分解随不同菌株而异。一般不分解菊糖，不被胆汁溶解，这两种特性可用来鉴别草绿色链球菌和肺炎链球菌。
抗原构造：（1）多糖抗原（C抗原）是细胞壁的多糖成分，系群的特异性抗原。（2）蛋白质抗原（表面抗原）位于C抗原的外层，有型的特异性。A群链球菌有M、T、R和S 等四种，其中与致病性有关的为M蛋白抗原。（3）核蛋白抗原（P抗原）各种链球菌均相同，无特异性，并与葡萄球菌有交叉。
分类1，甲（a）型溶血性链球菌:菌落周围有1-2mm宽的草绿色溶血环，如草绿色链球菌和肺炎链球菌。这类链球菌多为条件致病菌。2，乙（β）型溶血性链球菌：菌落周围呈2-4mm 宽的完全透明溶血环。又称化脓性链球菌。这类链球菌致病力强，常引起人类和动物的多种疾病。3，丙（γ）型链球菌:菌落周围无溶血环，故又称不溶血性链球菌，一般不致病，常存在于乳类和粪便中。
抵抗力：本菌抵抗力不强，加热60℃30min即被杀灭（除D群和某些N群链球菌外），对常用消毒剂敏感，在干燥尘埃中可生存数月。
临床意义：致病物质（1）细胞壁成分①脂磷壁酸②M蛋白③肽聚糖④细胞壁受体（2）侵性酶类①透明质酸酶②链激酶③链道酶④胶原酶（3）外毒素①链球菌溶素②致热外毒素袭鉴定程序与特殊检验：（1）直接涂片染色镜检（2）分离培养常采用羊血平板（3）鉴定要点①杆菌肽敏感试验，阳性者可初步鉴定为A群链球菌②CAMP试验，阳性者可作为Ｂ群链球菌③血清学分类鉴定，出现凝集现象者为阳性。④Optochin敏感试验阳性者为肺炎链球菌。草绿色链球菌为阴性⑤胆汁溶菌试验，阳性者为肺炎链球菌。
肠球菌属
培养特点球菌的营养要求较高需氧和兼性厌氧，肠球菌能在高盐（65g/L）、高碱（pH9.6）条件下，在40%胆汁培养基上和10～45℃的环境中生长，并对多种抗生素表现出固有耐药性。
生化反应：触酶试验阴性，分解甘露醇，不分解阿拉伯糖，胆汁七叶苷试验阳性，多数菌株PYR试验阳性，对杆菌肽耐药。
临床意义：肠球菌主要引起医院感染，最常见为尿路感染。肠球菌对大多常用抗菌药物呈固有耐药，对第三代头孢菌素无效。除做常规KB法药敏试验外，还应做MIC测定与联合药敏试验。
鉴定程序与特殊检验：（1）直接涂片2）分离培养（3）鉴定要点①本菌特征，革兰阳性菌，触酶试验阴性，在65g/l Nacl中生长，胆汁七叶苷试验阳性，能在45℃中生长
奈瑟菌属：
包括脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌。脑膜炎奈瑟菌是奈瑟菌属中的一种重要致病菌，因呈双排列，故原称脑膜炎（双）球菌。革兰阴性双球菌，常位于中性粒细胞内外。为专性需氧菌。生化反应：触酶、氧化酶试验阳性，分解葡萄糖和麦芽糖，产酸不产气，不分解蔗糖、甘糖醇和乳糖，脲酶、吲哚及硝酸盐还原试验均为阴性。
临床意义：①致病物质：包括荚膜、菌毛和内毒素。荚膜有抗吞噬作用。菌毛可粘附本菌至咽部粘膜上皮细胞，以便进一步侵入。内毒素是主要致病物质，可引起小血管和毛细血管出血、坏死，引起发热，皮肤出现瘀点瘀斑，微循环障碍，严重者可造成DIC和中毒性休克。②所致疾病：形成化脓性流行性脑脊髓膜炎，简称流脑。
鉴定程序与特殊检验：标本应注意保温和保湿。检验方法与鉴定，1)直接涂片镜检2）分离培养3）直接凝集试验4）鉴定要点：①本菌特征：形态学特征、生化特性与血清型鉴定。
②与淋病奈瑟菌相鉴别：脑膜炎奈瑟菌分解麦芽糖，而淋病奈瑟菌则不分解该糖
淋病奈瑟菌：革兰阴性双球菌，营养要求高，只能在巧克力平板、血平板或专用选择培养基中生长。
生化反应：触酶、氧化酶试验为阳性；不分解乳糖、麦芽糖和果糖，分解葡萄糖；吲哚、DNA酶和硝酸盐还原试验均为阴性。抵抗力：本菌对外界抵抗力极弱，55℃加热5min或干燥状态下1h即死亡，对各种消毒剂均敏感。
临床意义：①致病物质，有外膜蛋白、菌毛、IgA l蛋白水解酶、LPＳ和铁调节蛋白等②所致疾病，为淋病。人类是本菌的唯一天然宿主和传染源，是较多见的性传播疾病之一。
检验方法与鉴定：1）直接涂片镜检2）分离培养3）鉴定要点①本菌特征；②与莫拉菌属相鉴别：莫拉菌属为革兰阴性短小杆菌，有时呈双排列，酷似双球菌，易与淋病奈瑟菌混淆。但淋病奈瑟菌可分解葡萄糖，而莫拉菌属不分解任何糖；③与不动杆菌属相鉴别：不动杆菌为革兰阴性球杆菌，有时成双排列，酷似双球菌，也易与淋病奈瑟菌混淆。但淋病奈瑟菌氧化酶试验阳性，而不动杆菌则为阴性；④与卡他布兰汉菌相鉴别：淋病奈瑟菌分解葡萄糖，硝还盐还原试阴性，而卡他布兰汉菌正好相反；⑤涂片不典型：应做淋病奈瑟菌培养，同时做普通细菌培养，以区分莫拉菌属和不动杆菌属。
肠杆菌
人类常见病原菌属有：埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶尔森菌属，一些为医院感染的重要病原，为常见的条件致病菌。生化：触酶（＋）、氧化酶（－）、O-F 试验（F+型）、硝还（＋）。乳糖（＋：一般为非致病菌；－：一般为致病菌）、一般均发酵葡萄糖（+ 或⊕）
埃希菌属：G-b，大多有鞭毛，有菌毛，少数有微荚膜（KAg）。培养和生化：营养要求不高，在普通培养基上生长良好，形成较大的圆形、光滑、湿润、灰白色菌落。在血平板上某些菌株可产生β-溶血，在肠道选择培养基上发酵乳糖，PH值降低，菌落呈粉红色。如在MCA平板上呈红色。在KIA（AA+ -）,MIU(+ + -),IMViC(+ + - -)
临床意义：（一）致病因素1 侵袭力2 内毒素3 肠毒素（二）所致疾病1 肠道外感染肠道感染：腹泻检验方法：⑴涂片染色镜检⑵分离培养⑶鉴定：KIA/MIU AA＋－/＋＋－，氧化酶－，IMViC＋＋－－，触酶＋，硝还＋，或全面生化鉴定。
肠道内感染：1.ETEC的检测：分离培养+生化反应+血清分型+肠毒素测定。2.EPEC的检测：分离培养+生化反应+血清分型3.EIEC的检测：分离培养+生化反应+血清分型+毒力试验。
4.EHEC的检测：分离培养+血清分型+生化反应
沙门菌属：G-直杆菌，较细长，除鸡沙门菌，雏白痢沙门菌及无动力变种外，均有周鞭毛，动力+ 2.培养和生化反应：本菌营养要求不高，在普通培养基上均可生长，在SS和MCA平板上菌落无色，薄而透明，光滑稍隆起，直径1-3mm，菌落中心黑色（H2S+），兼氧菌，最适温度35-37℃，PH为6.8-7.8；生化：氧化酶-，KIA/AA++，MIU/+--。
临床意义：（一）致病因素1 侵袭力2 内毒素3 肠毒素（二）所致疾病1.胃肠炎2.菌血症或败血症3.肠热症
检验方法：1.直接检测Ag：乳胶-Ab + Ag（标本或菌液）2，分离培养与鉴定：标本接种
SS或MCA平板，挑可疑菌落染色为G-b,氧化酶（-），接种KIA/MIU初步鉴定，最后血清学鉴定3，血清学诊断：肥达反应
志贺菌属：G-b，无鞭毛，动力-，有菌毛，胞浆中有两种质粒：大质粒编码侵袭力，与EIEC 有同源性；小质粒编码耐药性。培养：在选择培养基SS和MAC平板上菌落无色透明光滑，边缘整齐，但宋内菌落较大，且为R型。生化：KIA（K A- -），MIU（- - -）；宋内志贺菌可迟缓发酵乳糖，ONPG+。
临床意义：致病物质1.侵袭力2.内毒素3.Vero毒素。所致疾病：细菌性痢疾，简称菌痢
检验方法与鉴定：氧化酶，KIA/KA- -，MIU/- - -，毒力试验，快速诊断：乳凝，IF，DNA 探针技术
志贺菌与大肠埃希氏菌的鉴别：无动力，赖氨酸阴性，发酵糖产酸不产气。
志贺菌与伤寒沙门菌的鉴别：硫化氢阴性，无动力。相应血清凝集。
耶尔森菌属：鼠疫耶尔森菌，假结核耶尔森菌，小肠结肠耶尔森菌。生化：乳糖-,GS+,H2S-,I-/+,尿素酶+，动力（25℃+/37℃-），触酶+，氧化酶-。
不发酵革兰阴性杆菌：是一大群不发酵葡萄糖或仅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厌氧的无芽胞革兰阴性杆菌。初步分群试验为：O/F试验、氧化酶和动力观察（在半固体中不显，多用悬滴法）。
铜绿假单胞菌：G-b，一端有单鞭毛，运动活泼。无荚膜、无芽胞，临床分离菌株有菌毛。培养特性：专性需氧，在普通培养基、血平板、MAC、SS上均可生长，最适温度为25-30℃，可产生铜绿色水溶性色素与带荧光的水溶性荧光素，β溶血。生姜味。生化反应：分解糖的能力很弱，仅在O/F培养基氧化利用葡萄糖；氧化酶阳性，大多分解尿素。
临床意义：1、分布广泛：自然界和人体2、致病物质：粘附素、多糖荚膜、内外毒素和多种侵袭酶。3、临床感染类型：继发感染为主，条件致病菌。也是医院感染的主要病原菌。人类假单胞菌感染中，铜绿假单胞菌占70-80% 。
检查方法：（1）标本直接检查显微镜检：G-b，绿脓色素鉴别。抗原检测：血清学，噬菌体分型。核酸检测：指纹图谱，PFGE，芯片，PCR, 16s等（2）分离培养血平板：金属光泽，特殊气味，蓝绿色素。MAC：微小无光泽半透明。48h后中心棕绿色。SS:微小无色半透明。类似沙门菌。（3）生化鉴定O/F实验，氧化酶，精氨酸水解、酰胺酶、葡萄糖酸氧化、42℃生长、明胶液化、鞭毛检测等
嗜麦芽窄食单胞菌：革兰阴性短杆菌，一端丛鞭毛，无芽胞，无荚膜。普通培养基上菌落中等大小、光滑湿润、呈黄色。生化反应较特殊，氧化酶阴性，注意与肠杆菌区别。
微生物鉴定：1、标本采集：据感染部位采取适当标本，血液标本应先增菌。2、分离培养与鉴定：G-b 1）分离培养，在血平板与普通培养基上生长良好，菌落中等大小、圆形、光滑、湿润，产生不溶血的黄色色素2）生化鉴定：氧化酶阴性，液化明胶，水解七叶苷，赖氨酸脱羧酶阳性，氧化分解麦芽糖；3）药物敏感试验：含β-内酰胺酶，临床治疗首选磺胺类（TMP/SMZ）、喹诺酮类、环丙沙星等。对亚胺培南（β-内酰胺酶抑制剂）天然耐药。苛养菌是指营养要求苛刻，在普通培养基上不生长或难以生长的一类细菌。如肺炎链球菌、卡他布兰汉菌和淋病奈瑟菌等。G－苛养杆菌主要包括嗜血杆菌属与鲍特菌属。
嗜血杆菌属：为一群无动力、无芽胞的G－小杆菌，菌体可呈球杆状、丝状或多形态。嗜血杆菌在临床婴幼儿脑膜炎感染中高达45％，尚可引起鼻炎、咽炎、中耳炎、肺炎等。微生物特性：为G－小杆菌，无芽胞，无鞭毛，动力阴性。一般致病菌株均有荚膜，荚膜是致病的主要物质基础。需氧或兼性厌氧，最佳温度35 ℃, pH7.2－7.6，体外培养营养要求高，必须提供含有X、V因子的新鲜血液的血琼脂平板，最佳为巧克力琼脂平板。嗜血杆菌可根据其对吲哚、脲酶及鸟氨酸脱羧酶试验不同结果分型。
标本的直接镜检（1）显微镜直接镜检（2）检测抗原（3）检测核酸
药物敏感试验：采取K-B法。若β-内酰胺酶阴性,则首选氨苄青霉素、阿莫西林，次选磺胺及增效剂、二、三代头孢菌素、红霉素与氨曲南。对流感嗜血杆菌的耐药性监测只需监测β-内酰胺酶与氯霉素的耐药性检测，而不需检测对其他抗生素的敏感性。
百日咳鲍特菌：本菌属G－小杆菌，无芽胞，有荚膜，一半菌株无鞭毛，专性需氧。释放5种毒素，主要为百日咳毒素（Pertussis toxin ,PT），是主要毒力因子，与阵发性咳嗽、支气管痉挛有关。副百日咳鲍特菌也可引起百日咳及急性呼吸道感染，但症状较轻。
分离培养特性与鉴定：（1）分离培养，该菌的最适培养基为鲍－金氏培养基（2）生化鉴定药敏试验：首选红霉素药物治疗，次选氨曲南及磺胺增效剂（SMZ-TMP)
X因子是一种耐热的存在于血红蛋白中的一种血红素及其衍生物，是一种含铁卟啉，是细菌合成过氧化氢酶，过氧化物酶与细胞色素氧化酶的辅基；
V因子是一种对热不稳定的vitB类物质，存在于血液和某些植物中，是脱氢酶的辅酶，在细菌的呼吸中起传递氢的作用。
弧菌科：共性：G- ,有极鞭毛,动力＋,O/F(F＋型),氧化酶＋。甲类传染病是指：鼠疫、霍乱霍乱弧菌，霍乱弧菌是烈性传染病霍乱的病原菌。呈G－弧菌或逗点状，经人工培养后可行成杆菌，取“米泔样”大便涂片镜检呈鱼群状排列，菌体一端有单鞭毛，运动活泼呈穿梭状运动。培养和生化兼性厌氧，营养要求不高，在普通培养基上生长良好。最适温度37℃，最适Ph7.2－7.4，耐碱性。常用的选择培养基为TCBS。
临床意义：1.致病因素（1）侵袭力－－依靠其动力、菌毛和分泌粘液的能力穿过小肠粘膜表面的粘液层，并粘附于小肠粘膜上上皮细胞刷状缘的微绒毛上大量繁殖（2）霍乱肠毒素2.所致疾病，霍乱，临床表现分为四个期：前驱期、吐泻期、脱水虚脱期和恢复期。
检验方法：（1）直接镜检（2）动力和制动试验：动力＋（3）分离培养：接种TCBS平板1）初步鉴定：血清凝集。菌体形态、菌落特征、氧化酶试验等进行初步鉴定。2）最后鉴定：全面生化、血清学与分型。①初筛试验：霍乱红试验＋、粘丝试验＋、O/129敏感试验＋
白喉棒状杆菌：为G+ 细长弯曲杆菌，一端或两端膨大成棒状，无特殊构造，排列不规则，呈栅栏状或X、Y、W等形，有明显异染颗粒（metachromatic granules)，可用Albert、Neisser 等染色法清楚可见。
临床意义1、致病物质：外毒素致病，引起局部炎症、全身中毒症状。2、临床表现：白喉是急性呼吸道传染病，患者的喉部出现灰白色假膜及全身中毒症状。
分枝杆菌属：共性：1，无芽胞，无鞭毛，某些菌株有荚膜，有分枝生长趋势,2，细胞壁脂质含量高，主要为分枝菌酸,3，为G+b,但不易着色，抗酸染色阳性，故又名抗酸杆菌（acid-fast-bacillus）,4，专性需氧，营养要求高，大多生长缓,5，不产生内外毒素及侵袭性酶类，其致病性与菌体成分以及机体对菌体成分所产生的免疫损伤有,6，所致疾病呈慢性过程
结核分枝杆菌：本菌无鞭毛,无芽胞,有荚膜,但因制片破坏不易看到。本菌为专性需氧菌,3%-5%的CO2可促进其生长。最适PH6.5-6.8,最适生长温度为370C。营养要求高，必须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油、无机盐和孔雀绿等的罗-琴，固体培养基才能生长良好
生化反应：本菌生化反应不活泼,不发酵糖类．多数菌株触酶试验阳性,但热触酶试验阴性,而非典型分枝杆菌热触酶试验大多阳性．结核分枝杆菌烟酸试验及硝酸盐还原试验均呈阳性,而牛分枝杆菌均为阴性,有助于鉴别．
三耐五敏：耐干燥、耐酸碱、耐某些染料及抗生素；对75%的酒精敏感、对湿热敏感、对紫外线(日光)敏感、对某些化学消毒剂敏感、对抗痨药物敏感；
检验方法：1.显微镜检查2.核酸检测 3.色谱分析技术4.免疫学诊断
厌氧菌（anaerobic bacteria）是指一大群在有氧条件下不能生长，必须在无氧条件下才能生长的细菌。主要可分为两大类，一类是有芽胞厌氧菌，另一类是无芽胞厌氧菌。
螺旋体（Spirochete）是一类细长、柔软、弯曲呈螺旋状，运动活泼的原核细胞型微生物。外斐试验：因为绝大部分R（Q热等除外）与某些变形杆菌（OX19、OX2、OXk）有共同的耐热性多糖类属Ag，所以利用变形杆菌这些菌株代替R作为Ag，检测疑为R患者血清中相应的Ab的一种非特异性交叉凝集反应。
冷凝集试验：肺炎支原体引起的肺炎患者血清中常产生冷凝集素，它与2%O型人或自身的RBC，在4℃过夜，出现RBC凝集现象，是一种非特性血清学反应。
病毒（Virus）是结构最简单、体积微小、活细胞内寄生、以复制方式增殖的非细胞型微生物。
病毒(virus)的基本特征：病毒体积微小，能通过滤菌器、结构简单，只有一种核酸（DNA/RNA）、严格的活细胞内寄生、以核酸复制的方式进行增殖。
病毒性疾病实验诊断的一般原则：特异、敏感、快速和简便。
将人或动物离体的活组织或分散的活细胞，在实验室的试管或培养基中，模拟体内的生理条件使之生存和生长，称之为组织培养。
病毒的分离与鉴定：病毒是专性细胞寄生，需要在活细胞或动物体内才能得到分离
空斑或蚀斑（plaque）形成试验：空斑是指在单层细胞中被病毒感染引起死亡的细胞区域，周围被活细胞包围。一般而言，一个空斑是由一个感染性病毒颗粒感染所引起。
干扰现象：一种病毒感染细胞后，可以干扰以后进入的病毒的增殖。
红细胞吸附（HAd ）及吸附抑制试验：红细胞吸附现象的产生是由于病毒在细胞膜成熟时，将其血凝素插入细胞膜，使感染细胞吸附红细胞，是病毒增殖的指标。
常见的微生物检测方法
常见的微生物检测 方法
摘要：微生物的检测，无论在理论研究还是在生产实践中都具有重要的意义，本文分生长量测定法，微生物计数法，生理指标法和商业化快速微生物检测简要介绍了利用微生物重量，体积，大小，生理代谢物等指标的二十余种常见的检测方法，简要介绍了这些方法的原理，应用范围和优缺点。 概述： 一个微生物细胞在合适的外界条件下，不断的吸收营养物质，并按自己的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量，体积，大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其体积、重量、密度或浓度作指标来衡量。微生物的生长不同于其它生物的生长，微生物的个体生长在科研上有一定困难，一般情况下也没有实际意义。微生物是以量取胜的，因此，微生物的生长一般指群体的扩增。微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映。因此生长繁殖情况就可作为研究各种生理生化和遗传等问题的重要指标，同
时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病，霉腐微生物的防治都和她们的生长抑制紧密相关。因此有必要介绍一下微生物生长情况的检测方法。既然生长意味着原生质含量的增加，因此测定的方法也都直接或间接的以次为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。微生物生长的衡量，能够从其重量，体积，密度，浓度，做指标来进行衡量。 生长量测定法 体积测量法：又称测菌丝浓度法。 经过测定一定体积培养液中所含菌丝的量来反映微生物的生长状况。方法是，取一定量的待测培养液（如10毫升）放在有刻度的离心管中，设定一定的离心时间（如5分钟）和转速（如5000 rpm），离心后，倒出上清夜，测出上清夜体积为v，则菌丝浓度为（10-v）/10。菌丝浓度测定法是大规模工业发酵生产上微生物生长的一个重要监测指标。这种方法比较粗放，简便，快速，但需要设定一致的处理条件，否则偏差很大，由于离心沉淀物中夹杂有一些固体营养物，结果会有一定偏差。 称干重法：
微生物标准操作流程
目录 生物安全柜操作规程及维护 (3) 实验室高压蒸气灭菌器操作程序 (6) 物体表面细菌监测 (8) 医护人员手指细菌监测 (9) 空气中细菌含量的监测 (10) 环境卫生学监测质控标准 (12) 使用中消毒剂与无菌物品保存液的质控程序 (13) 一次性医疗用品微生物监测 (14) 紫外线消毒质量控制程序 (15) 污水的细菌监测(总大肠菌群) (16) 正确洗手的手法 (18)
生物安全柜操作规程及维护 1.目的： 为了满足生物安全操作的要求，并且达到在操作时保护操作人员的目的，使细菌操作达到无菌操作的要求，便于操作的标准化。 2.原理： 通过使用空气超高过滤器（ULPA）的过滤，使仪器内部的空气洁净度达到100级，使细菌的一般操作限制在一个相对密闭的环境中，不但保护操作人员，还可满足操作的标准化。 3.工作条件： 环境温度：18－30℃相对湿度：<80% 安装的环境必须达到一定的洁净度；远离人员通道及有潜在干扰气流的位置；柜后及两侧各留30cm的空隙，顶部30-35cm空隙。 环境必须有良好的通风设备。 4、操作步骤： 生物安全柜的设置已经设置完全，如果需要重新设置请参看HFsafe生物安全柜使用说明。具体操作步骤为： 4.1将电源插头插入准备好的固定插座，连通电源。 4.2有系统管理员(即本室负责人)开启玻璃门门锁，并将总开关置于开位置“！”，此时系统开始上电。 4.3检查显示及按钮的各项功能，具体见后附注（注意：UV灯的测试除外，开启UV灯时必须将前玻璃门关闭）。 4.4当系统稳定后，对设备进行安全性检查。（检查项目包括：工作室平均垂直风速；工作室内可操作区域洁净度达到100级；设备的密封有没有被破坏。所有的安全检查项目中的洁净度建议由当地卫生防疫部门来进行尘埃粒子数、沉降菌和菌落数的检测，看是否符合其工作室的洁净度要求）。 4.5如果安全性测试通过，系统已经可以使用，请在《使用记录》上写下相应的信息。在使用时需要注意的是，操作必须在工作台板无孔区域进行，物品也必须放置于无孔区域。 4.6操作者应先把手臂放进安全柜内大约1分钟，以使柜子适应并且让气流扫过手臂手臂移入移出柜内应保持前门气流的连续性，应缓缓移入移出，并且方向和前门垂直；为使跨越前门的动作量降低，在实验开始前应把所需的物品放入柜子；柜子在开始工作前以及完成后至少要运行5分钟是，使柜子净化，以便于污染空气从柜内排出。实验操作方向应从清洁区到污染区，一般要求为左→右。 4.7 当工作完成后需要关机前，将试验使用的所有材料和其他物品从设备中取出。
微生物计数方法
微生物的显微直接计数法 一、实验目的 了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能。 二、实验原理 测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用的有显微直接计数法和平板计数法。 显微计数法适用于各种含单细胞菌体的纯培养悬浮液，如有杂菌或杂质，常不易分辨。菌体较大的酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板，一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽（Petrof Hausser）细菌计数板。两种计数板的原理和部件相同，只是细菌计数板较薄，可以使用油镜观察。而血球计数板较厚，不能使用油镜，计数板下部的细菌不易看清。 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区（图21-1），计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。 计数区边长为1mm，则计数区的面积为l mm2，每个小方格的面积为1/400mm2。盖上盖玻片后，计数区的高度为0.1mm，所以每个计数区的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为1/4000mm3。 使用血球计数板计数时，先要测定每个小方格中微生物的数量，再换算成每毫升菌液（或每克样品）中微生物细胞的数量。 已知：1mm3体积=10 mm×10 mm×10 mm= 1000mm3 所以：1mm3体积应含有小方格数为1000mm3/1/4000mm3=4×106个小方格，即系数K=4×106。 因此：每ml菌悬液中含有细胞数= 每个小格中细胞平均数（N）×系数（K）×菌液稀释倍数（d） 三、实验器材 1．活材料：酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）斜面或培养液。 2．器材：显微镜、血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。 四、实验方法 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释到10-2），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将酵母菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘摘入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上，不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高。然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。4．静置片刻，将血球计数板置载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个大方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个大方格（即100小格）的菌数。如果是25个大方格组成的计数区，除数上述四个大方格外，还需数中央l个大方格的菌数（即80个小格）。如菌体位于大方格的双线上，计数时则数上线不数下线，数左线不数右线，以减少误差。
微生物检测流程
食品微生物检测标准 受控状态： 文件编号：H-XM-PGZY-10 颁发部门：品管部 接收部门：品管部 发布日期：// 实施日期：//
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微生物检测目录
食品接触面微生物检测 一、目的： 检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标，生产区域环境当中病原微生物的监控，达到规定标准，以控制食品成品的质量。 二、范围： 标准适用于盘锦兴牧肉联加工集团有限公司食品接触面微生物的检测。 三、采样与检测方法： 3.1、空气微生物采样（自然沉降法） 3.1.1、采样布点要求 (1)室内面积不足50m2的设置3个采样点，50m2以上的设置5个采样点。（2）采样点按均匀布点原则布置，室内3个采样点的设置在室内对角线四等分的3个灯分点上，5个采样点的按梅花布点。 （3）采样点距离地面高度1.2m-1.5m,距离墙壁不小于1m。 （4）采样点应避开通风口、通风道等。 （2）采样方法 采样时，将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5min(静态)，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。 3.1.2、菌落培养： （1）将已采集样品的培养基在6 h内送实验室，细菌总数于37℃±1℃培养
48h观察结果，计数平板上细菌菌落数。 （3）菌落计算： a) 记录平均菌落数，用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。 b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2 个或2 个以上菌落计数。 c)计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，检验 结果以每平皿菌落数（CFU/皿） 3.2、车间设备、工器具（作业前/后）表面采样与检测方法： 3.2.1、样品采集范围： a)在设备、工器具加工前/后进行擦拭检验，以便了解车间卫生清扫消毒情况。 b)产品检验结果超内控标准时，应及时对车间可疑处进行擦拭，如有检验不合格点，整改后再进行擦拭检验。 c)对工作表面消毒产生怀疑时，进行擦拭检验。 d)正常生产状态的擦拭，每周一次。 3.2.2、采样方法： 用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面取25 cm2的面积，在其内涂抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管待检。 3.3、车间工人手、手套（作业前、后）采样及检测方法 3.3.1、样品采样范围：各班组在线工人生产前/后手、手套进行抽检。
微生物大小与数量的测定实验报告
山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
微生物题库(周德庆完整版)考研必备
微生物学试题库 微生物学试题（一） 一、写出下列名词解释的中文翻译及作出解释 1.Gram positive bacteria 2.parasporal crystal 3 ,colony 4, life cycle 5,capsule6,endospore 二、简答题 1，试述微生物与当代人类实践的重要关系？ 2，简述革兰氏染色的机制？ 3.微生物有哪五大共性？其中最基本的是哪一个？为什么？ 三、填空(每空1分,共15分) 1.真核微生物核糖体类型为 _______ 。 2.大肠杆菌长为2.0μm,宽为0.5μm,其大小表示为_____ 。 3.研究细菌遗传、代谢性能常采用_____ 时期的细胞。 4.酵母菌细胞壁的主要成份_____和_______。 5.侵染寄主细胞后暂不引起细胞裂解的噬菌体称________ 。 6.微生物细胞的主要组成元素是______，_____，_______和_______。 7.食用菌是由 ______和 ____ 组成。 8.用物理或化学方法杀死物品上大部分微生物的过程称 ______ 。 9.细菌细胞的碳、氮营养比为______。 10.根瘤菌可与_________共生固氮 四、学名互译 1.A.niger 2.B.subtilis 3. B.thuringiensis 4. A.oryzae 微生物学试题（一）答案： 一，1，革兰氏阳性菌：细菌经革兰氏染色染色后最终染成紫色的菌 2，伴胞晶体：少数芽孢杆菌，在形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形，方形，或不规则形的碱溶性蛋白质晶体称为半胞晶体 3，菌落：当单个细菌细胞或者一小堆同种细胞接种到固体培养基表面，当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下时，该细胞就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，此即菌落。4，生命周期：指的是上一代生物个体经过一系列的生长，发育阶段而产生下一代个体的全部过程。 5，荚膜：包被于某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的透明胶状物质 6，芽孢：某些细菌在其生长发育的后期，在细胞内形成的一个圆形或椭圆形，厚壁，含水量低，抗逆性强的休眠构造。 二，1，①在微生物与工业发展的关系上，通过食品罐藏防腐，酿造技术的改造，纯种厌氧发酵的建立，液体深层通气搅拌大规模培养技术的创建以及代谢调控发酵技术的发明，使得古老的酿造技术迅速发展成工业发酵新技术； ②微生物在当代农业生产中具有十分显著的作用，例如，以菌治害虫和以菌治植病的生物防治技术；以菌增肥效和以菌促生长的微生物增产技术；以菌做饲料和以菌当蔬菜的单细胞蛋白和食用菌生产技术；以及以菌产沼气等生物能源技术。 ③微生物与环境保护的关系越来越受到当代全人类广泛的重视。微生物是占地球面积70%以上的海洋和其他水体中光合生产力的基础；是一切食物链的重要环节；是污水处理中的关键角色；是生态农业中最重要的一环；是自然界重要元素循环的首要推动者；以及是环境污染和监测的重要指示生物；等等。 ④微生物与在食品上的应用。调味品，发酵食品，酸乳，蔬菜加工。 ⑤微生物在医药方面的应用。抗菌素，维生素。 ⑥微生物在能源生产方面也有重要的作用。2，G+细菌由于其细胞壁较厚，肽聚糖网层次多和交联致密，故遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使得网孔缩小再加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫和碘的复合物牢牢留在壁内，使得其保持紫色。反之，革兰氏阴性细菌因其细胞壁较薄，外膜层内酯含量高，肽聚糖层薄和交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜迅速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘的复合物的溶出，因此细胞退成无色。这时，再经沙黄等红色燃料复染，就使革兰氏阴性细菌呈现红色。而革兰氏阳性细菌则保留最初的紫色。3. 微生物的五大共性：（一）体积小，面积大 （二）吸收多，转化快 （三）生长旺，繁殖快 （四）适应强，易变异 （五）分布广，种类多 其中最基本的是微生物的多样性，原因是：微生物因其体积小，重量轻和数量多等原因，可以到处传播以至达到“无孔不入”的地步。不论在动，植物体内外，还是土壤，河流，空气，平原，高山，深海，污水，垃圾，海底淤泥，冰川，盐湖，沙漠，甚至油井，酸性矿水和岩层下，都有大量与其相适应的各类微生物在活动着。 三．填空 1. 80S 2. 0.5μm x2.0μm3对数生长 4.葡聚糖和甘露聚糖。 5.温和噬菌体6蛋白质，核酸，类脂和碳水化合物 7. 营养菌丝,生殖菌丝豆科植物共生固氮 8 灭菌。9. 6/1 10.豆科植物 四．1.黑曲霉 2. 枯草芽孢杆菌 3. 苏云金芽孢杆菌4. 米曲霉 微生物学试题（二） 是非题（共10分。只需注明“对”或“错”） 1.大多数嗜热菌的G-C含量高于中温菌。 2.大肠杆菌属低等原核生物，所以其遗传物质只是一条松散的环状双链DNA，不存在DNA高级结构。 3.当菌体生长、氧吸收和糖利用的比速度下降时，青霉素的合成达到最高值。 4.初生F’菌株和次生F’菌株都属于部分二倍体。 5.分批培养时，细菌首先经历一个适应期，此期间细胞处于代谢活动的低潮，所以细胞数目并不增加。 6.渗透酶( permease)属于诱导酶，而其它种类的酶往往属于组成酶。 7.恒化培养与恒浊培养的区别在于前者的培养物群体始终处于对数生长期。 8.将HR病毒的外壳蛋白与TMV病毒的RNA混合，去感染烟草，则会出现TMV型病灶。若在感染前，用TMV抗体处理，则会钝化病毒，不出现TMV型病灶。 9.霉菌的基因重组常发生于准性生殖时，较少出现在有性生殖过程中。 10.营养物跨膜的主动运输必需依靠载体和能量，而被动扩散不需要载体和能量。 二填充题（30分） 1 突变率10-10表示_ _ _ _ a_ _ _ 。 2 我们常采用_ _ a_ _ _ 浓度的NaCl 或0.1M_ _ _ b_ _ _ 来稀释菌液或清洗菌体细胞。因为_ _ c_ _ _ 。 3 在有机物为基质的生物氧化反应中，以氧为电子传递最终受体的方式称_ _ _ _ a_ _ _ _ ；以无机氧化物为最终电子受体的称_ _ b_ _ ；以有机物为最终电子受体的称_ _ _ _ c_ _ _ _ 。 4 常见的菌种保藏方法有_ _ _ _ a_ _ _ _ 、_ _ _ b_ _ _ 和_ _ _ c_ _ _ 等，其中_ _ _ d_ _ 方法保藏菌种的时间最长久。
微生物大小测定
微生物的大小测定 胡雪芳 201300261033 【实验目的】 1.了解显微镜测定微生物大小的原理。 2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微 尺、镜台测微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。 【实验原理】 微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 1.目镜测微尺 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分（如图1所示）。 图1 目镜测微尺 测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校
正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2.镜台测微尺 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的（如图2所示）。 图2 镜台测微尺 校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 【实验材料】 1.菌株 酵母菌液， 枯草芽孢杆菌斜面培养物
微生物制药的一般工艺流程
微生物制药的一般工艺流程 微生物制药技术 工业微生物技术是可持续发展的一个重要支撑，是解决资源危机、生态环境危机和改造传统产业的根本技术依托。工业微生物的发展使现代生物技术渗透到包括医药、农业、能源、化工、环保等几乎所有的工业领域，并扮演着重要角色。欧美日等国已不同程度地制定了今后几十年内用生物过程取代化学过程的战略计划，可以看出工业微生物技术在未来社会发展过程中重要地位。 微生物制药技术是工业微生物技术的最主要组成部分。微生物药物的利用是从人们熟知的抗生素开始的，抗生素一般定义为：是一种在低浓度下有选择地抑制或影响其他生物机能的微生物产物及其衍生物。(有人曾建议将动植物来源的具有同样生理活性的这类物质如鱼素、蒜素、黄连素等也归于抗生素的范畴，但多数学者认为传统概念的抗生素仍应只限于微生物的次级代谢产物。)近年来，由于基础生命科学的发展和各种新的生物技术的应用，报道的微生物产生的除了抗感染、抗肿瘤以外的其他生物活性物质日益增多，如特异性的酶抑制剂、免疫调节剂、受体拮抗剂和抗氧化剂等，其活性已超出了抑制某些微生物生命活动的范围。但这些物质均为微生物次级代谢产物，其在生物合成机制、筛选研究程序及生产工艺等方面和抗生素都有共同的特
点，但把它们通称为抗生素显然是不恰当的，于是不少学者就把微生物产生的这些具有生理活性（或称药理活性）的次级代谢产物统称为微生物药物。微生物药物的生产技术就是微生物制药技术。可以认为包括五个方面的内容： 第一方面菌种的获得 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买；从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 分离思路新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。具体分离操作从以下几个方面展开。 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。
微生物大小的测定及微生物数量的直接计数法
微生物大小的测定及微生物数量的直接计数法摘要：本文使用了目镜测微尺和镜台测微尺来测量野生酵母的细胞大小，得到的结果是宽在5.78~11之间，长在8.25~20之间。然后用血细胞计数板对酵母菌进行计数，并绘制其生长曲线，有四个时期，分别是延滞期、对数期、稳定期和衰亡期。 关键词：细胞大小血细胞计数板酵母菌生长曲线 前言 生产生活中利用微生物时，需要了解微生物的一些基本物理属性，如菌体的大小形状等。本实验利用显微测微尺对野生酵母进行测量，并用血球计数板对酵母菌进行其生长曲线的测定，了解去生长规律。通过此综合性实验加深对无菌操作的印象，并将其掌握。 1实验材料与仪器 1．1实验材料与试剂 麦芽汁培养基、生理盐水、果汁（自制）、活化的酵母菌、酒精 1．2实验仪器 锥形瓶、试管、接种环、移液枪、显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、盖玻片、载玻片、滴管、血细胞计数板、吸水纸、酒精灯 2实验方法 2．1预准备 2.1.1培养基的制备 麦芽汁培养基（130.1g/L）200ml*4瓶 麦芽汁琼脂培养基（145.1g/L）5ml*2支试管150ml*1瓶 生理盐水9ml*20支 （制备后高压蒸汽灭菌121℃，20min） 2.1.2酵母分离纯化 平板划线分离：先倒制无菌琼脂培养基平板,待充分冷却凝固后,用接种环以无菌沾取少量待分离的含菌样品,在无菌琼脂平板表面进行有规则的划线。划线的方式有连续划线、平行划线、扇形划线或其它形式的划线。通过这样在平板上进行划线稀释, 微生物细胞数量将随着划线次数的增加而减少, 并逐步分散开
来。经培养后,可在平板表面形成分散的单 个菌落。但单个菌落并不一定是由单个细 胞形成的，需再重复划线1-2次, 并结合显 微镜检测个体形态特征, 才可获得真正的 纯培养物。 斜面接种是从已生长好的菌种斜面上 挑取少量菌种移植至另一支新鲜斜面培养基上的一种接种方法。具体操作如下：接种前在试管上贴上标签，注明菌名、接种日期、接种人姓名等。贴在距试管口约2-3cm的位置。点燃酒精灯。用接种环将少许菌种移接到贴好标签的试管斜面上。操作必须按无菌操作法进行。 简述如下：1)手持试管：将菌种和待接斜面的两支试管用大拇指和其他四指握在左手中，使中指位于两试管之间部位。斜面面向操作者，并使它们位于水平位置。2)旋松管塞：先用有于松动棉塞或塑料管盖，以便接种时拔出。3)取接种环：右手拿接种环(如握钢笔一样)，在火焰上将环端灼烧灭菌。然后将有可能伸入试管的其余部分均灼烧灭菌，重复此操作，再灼烧一次。4)拔管塞：用右手的无名指、小指和手掌边先后取下菌种管和待接试管的管塞，然后让试管口缓缓过火灭菌(切勿烧得过烫)。5)接种环冷却：将灼烧过的接种环伸入菌种管，先使环接触没有长菌的培养基部分，使其冷却。6)取菌：待接种环冷却后，轻轻沾取少量菌体或胞子，然后将接种环移出菌种管，注意不要使接种环的部分碰到管壁，取出后不可使带菌接种环通过火焰。7)接种：在火焰旁迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面培养基的底部向上部作“Z”形来回密集划线，切勿划破培养基。有时也可用接种针仅在斜面培养基的中央拉一条直线作斜面接种，直线接种可观察不同菌种的生长特点。8)塞管塞：取出接种环，灼烧试管口，并在火焰旁将管塞旋上。塞棉塞时不要用试管去迎棉塞，以免试管在移动时纳入不洁空气。9)将接种环灼烧灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。
微生物大小及数量地测定
微生物大小及数量的测定 一、实验目的： 1、学习并掌握使用显微镜测微尺测定微生物大小的方法 2、掌握对不同形态细菌细胞大小测定的分类学基本要求，增强对微生物细 胞大小的感性认识 3、学习并掌握使用血细胞计数板测定微生物细胞或孢子数量的方法 二、实验器材 1、菌种： 枯草芽孢杆菌、酿酒酵母 2、溶液和试剂 香柏油、二甲苯、美兰染液 3、仪器和其他用品 目镜测微尺、镜台测微尺、普通光学显微镜、擦镜纸、软布、血细胞计数 板、凹载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、试管、吸管、移液枪 三、实验原理 1、测微尺： 微生物大小的测定，需要借助于特殊的测量工具——显微测微尺，它包括 目镜测微尺和镜台测微尺两个互相配合使用的部件。 镜台测微尺是一个在特制载玻片中央封固的标准刻尺，其尺度总长为1mm，精确分为10个大格，每个大格又分为是10个小格，共100个小格，每个小格长度为0.01mm，即10μm。刻线外有一直径为φ3，粗线为0.1mm的圆，以便调焦时寻找线条。刻线上还覆盖有厚度为0.17mm的盖玻片，可保护刻线久
用而不受损伤。。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于校正目镜 测微尺每一格的相对长度。 目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻 度，一般有等分为50个小格和100个小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不一样，目镜测微尺每小格在不同条件下所代表的实际长度 也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 球菌用直径表示大小，杆菌用长和宽来表示大小 2、显微镜计数： 显微镜计数是将少量待测样品的悬浮液置于一种特定的具有确定容积的载 玻片上（又称计菌器），于显微镜下直接观察、计数的方法。目前国内外常用的 计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley计菌器等，它们可用于各种微生物单细胞（孢子）悬液的计数，基本原理相同。其中血细胞 计数板较厚，不能用油镜，常用于个体相对较大的酵母细胞、霉菌孢子等的计数，
微生物量(1)
土壤微生物生物量碳、氮的测定-氯仿熏蒸浸提法 熏蒸： 称鲜土（10目）7.5g于培养皿（或烧杯）中，将培养皿（或烧杯）置于可抽负压的真空干燥器中，分别内置装有50ml无乙醇氯仿及蒸馏水的小烧杯。用真空泵抽至氯仿沸腾并保持2min，关紧干燥器气阀，将其放入28℃恒温室（或恒温箱）中熏蒸24h。干燥器移出，放空干燥器，把装氯仿的烧杯移走，干燥器清理干净后，反复抽气除去氯仿直至无气味。待氯仿去除干净后： 1.在0.01的天平上称熏蒸土壤5g加30ml 0.5M K2SO4溶液，在往复式震荡机上震荡 提取30min，离心、过滤于100ml带盖塑料瓶中。滤液保存在4℃冰箱中备用，最 好保存不超过一周。 2.剩余土壤2.5g先称重，然后置于烘箱105℃烘 6h，取出称重。 同时做不熏蒸样品的提取： 3.称未熏蒸鲜土2.5g于离心管中，加30ml 0.5M K2SO4溶液，在往复式震荡机上震荡 提取30min，离心、过滤。滤液保存在4℃冰箱中备用，最好保存不超过一周。 4.同时称未熏蒸土壤2.5g，置于烘箱105℃烘 6-8h，取出称重。 试验方法： 微生物碳：吸浸提液5ml至消煮瓶，加入重铬酸钾标准溶液5ml（称经130度烘干2-3h 的重铬酸钾19.622g，溶于水，定容至1L）、浓硫酸10ml，消煮30min，加入蒸馏水10-20ml 冷却。加入1-3滴邻菲罗琳指示剂，用硫酸亚铁滴定剩余的重铬酸钾。（硫酸亚铁的配制及标定见p232）。 微生物氮：吸浸提液5ml于25ml具塞比色管，加入过硫酸钾氧化剂溶液12.5ml，用水定容至25ml，塞紧瓶塞，纱布包好扎紧，放入高压蒸汽灭菌器，加热至120度保持30min，冷却后直接在紫外分光光度计上用波长220和275nm测定。 工作曲线：吸取氮标准溶液（25mg/L）0、0.5、1、2、3、4、5ml分别于25ml比色管中，各加入12.5ml氧化剂溶液，用水定容至刻度，得到氮的标准系列溶液0、0.5、1、2、3、4、
微生物细胞大小与数量的测定
微生物细胞大小与数量的测定 一、实验目的 1.了解显微镜测定微生物大小与血球计数板测定微生物数量的原理。 2.学习并掌握显微镜下测定微生物细胞大小的技术，包括目镜测微尺、镜台测 微尺的校正技术与测定细胞大小的技术。 3.了解血球计数板的结构，学习并掌握血球计数板计数微生物数量的技术，包 括样品的点样、菌数计数的方法与计算。 二、实验原理 1.微生物大小测定原理 微生物细胞的大小，是微生物重要的形态特征之一，也是分类鉴定的依据之一。由于菌体很小、只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 （1）目镜测微尺 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 图 1 目镜测微尺 （2）镜台测微尺 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长l0μm（即0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成象进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的
微生物群落多样性的基本概念
微生物群落多样性的基本概念 环境中微生物的群落结构及多样性和微生物的功能及代谢机理是微生物生态学的研究热点。长期以来，由于受到技术限 制，对微生物群落结构和多样性的认识还不全面，对微生物功能及代谢机理方面了解的也很少。但随着高通量测序、基因芯片等新技术的不断更新，微生物分子生态学的研究方法和研究途径也在不断变化。第二代高通量测序技术（尤其是Roche454高通量测序技术）的成熟和普及，使我们能够对环境微生物进行深度测序，灵敏地探测出环境微生物群落结构随外界环境的改变而发生的极其微弱的变化，对于我们研究微生物与环境的关系、环境治理和微生物资源的利用以及人类医疗健康有着重要的理论和现实意义。 在国内，微生物多样性的研究涉及农业、土壤、林业、海洋、矿井、人体医学等诸多领域。以在医疗领域的应用为例，通过比较正常和疾病状态下或疾病不同进程中人体微生物群落的结构和功能变化，可以对正常人群与某些疾病患者体内的微生物群体多样性进行比较分析，研究获得人体微生物群落变化同疾病之间的关系；通过深度测序还可以快速地发现 和检测常见病原及新发传染病病原微生物。 研究方法进展 环境微生物多样性的研究方法很多，从国内外目前采用的方法来看大致上包括以下四类：传统的微生物平板纯培养方法、微平板分析方法、磷脂脂肪酸法以及分子生物学方法等等。 近几年，随着分子生物学的发展，尤其是高通量测序技术的研发及应用，为微生物分子生态学的研究策略注入了新的力量。 目前用于研究微生物多样性的分子生物学技术主要包括:DGGE/TGGE/TTGE、T-RFLP、SSCP、FISH、印记杂交、定量PCR、基因芯片等。DGGE等分子指纹图谱技术，在其实验结果中往往只含有数十条条带，只能反映出样品中少数优势菌的信息；另一方面，由于分辨率的误差，部分电泳条带中可能包含不只一种16S rDNA序列，因此要获悉电泳图谱中具体的菌种信息，还需对每一条带构建克隆文库，并筛选克隆进行测序，此实验操作相对繁琐；此外，采用这种方法无法对样品中的微生物做到绝对定量。生物芯片是通过固定在芯片上的探针来获得微生物多样性的信息，“只能验证已知，却无法探索未知”，此方法通过信号强弱判断微生物的丰度也不是非常的准确。 而近年来以454焦磷酸测序为代表的高通量测序技术凭借低成本、高通量、流程自动化的优势为研究微生物群落结构提供了新的技术平台。Roche454高通量测序技术能同时对样品中的优势物种、稀有物种及一些未知的物种进行检测，获得样品中的微生物群落组成，并将其含量进行数字化。最近，美吉生物推出了新的测序平台———MiSeq。MiSeq高通量测序平台集中了Roche454和Illumina HiSeq2500的优点，不仅可实现对多样品的多个可变区同时测序，而且在测序速度和测序通量上都有进一步提升，目前此平台已在微生物多样性群落结构研究方面受到了广大学者的认可。 第二代高通量测序技术
微生物数量测定
《环境微生物新技术》课程作业 2.微生物数量测定方法有哪些？空气、水、土壤样品分别适用哪些方法？请举例说明。 常见微生物数量的测定方法 <1> 1.计数器测定法： 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。 本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。 2、电子计数器计数法: 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3、活细胞计数法 : 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出活菌数。
此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。 4、比浊法 比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定围与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。 5、测定细胞重量法 此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。 此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。 6、测定细胞总氮量或总碳量 氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。
微生物数量的测定方法
微生物数量的测定 1.计数器测定法： 即用血细胞计数器进行计数。取一定体积的样品细胞悬液置于血细胞计数器的计数室内，用显微镜观察计数。由于计数室的容积是一定的(O.1mm3)，因而根据计数器刻度内的细菌数，可计算样品中的含菌数。本法简便易行，可立即得出结果。 本法不仅适于细菌计数，也适用于酵母菌及霉菌孢子计数。 2、电子计数器计数法: 电子计数器的工作原理是测定小孔中液体的电阻变化，小孔仅能通过一个细胞，当一个细胞通过这个小孔时，电阻明显增加，形成一个脉冲，自动记录在电子记录装置上。 该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌。因此，要求菌悬液中不含任何碎片。 3、活细胞计数法 常用的有平板菌落计数法，是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。取一定容量的菌悬液，作一系列的倍比稀释，然后将定量的稀释液进行平板培养，根据培养出的菌落数，可算出活菌数。 此法灵敏度高，是一种检测污染活菌数的方法，也是目前国际上许多国家所采用的方法。使用该法应注意：①一般选取菌落数在30～300之间的平板进行计数，过多或过少均不准确；②为了防止菌落蔓延，影响计数，可在培养基中加入O．001％2，3，5一氯化三苯基四氮唑(TTC)；③本法限用于形成菌落的微生物。 广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。 4、比浊法 比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量。细菌悬浮液的浓度在一定范围内与透光度成反比，与光密度成正比，所以，可用光电比色计测定菌液，用光密度(OD值)表示样品菌液浓度。 此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定。 5、测定细胞重量法 此法分为湿重法和干重法。湿重法系单位体积培养物经离心后将湿菌体进行称重；干重法系单位体积培养物经离心后，以清水洗净放人干燥器加热烘干，使之失去水分然后称重。 此法适于菌体浓度较高的样品，是测定丝状真菌生长量的一种常用方法。 6、测定细胞总氮量或总碳量 氮、碳是细胞的主要成分，含量较稳定，测定氮、碳的含量可以推知细胞的质量。此法适于细胞浓度较高的样品。 7、颜色改变单位法（colour change unit,简称CCU） 通常用于很小，用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，因为支原体的液体培养物是完全透明的，呈现为清亮透明红色，因此无法用比浊法来计数，由于支原体固体培养很困难，用cfu法也不容易计数，因此需要用特殊的计数方法，即CCU法。它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标，来计数微生物的相对含量的，下面以解脲脲原体为例单介绍其操作：，简 （1）取12只无菌试管，每一管装1.8ml解脲脲原体培养基。 （2）在第一管加入0.2ml待测解脲脲原体菌液，充分混匀，从中吸取0.2ml加入第二管，依次类推，10倍梯度稀释，一直到最末一管 （3）于37度培养，以培养基颜色改变的最末一管作为待测菌液的CCU，也就是支原体的最大代谢活力，比如第六管出现颜色改变，他的相对浓度就是10的6次方CCU/ml.
我对微生物的认识复习过程
我对微生物的认识
我对微生物的认识 大三选了显微镜下的生命公选课，自我感觉学到了很多东西，老师通过PPT 演讲和视频播放让我们对微生物有了一个整体的认知，下面我就简单谈谈我对微生物的认识。 微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物，个体微小，结构简单，通常要用光学显微镜和电子显微镜才能看清楚的生物，统称为微生物。微生物包括细菌、病毒、霉菌、酵母菌等。（但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。）病毒是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的“非细胞生物”，但是它的生存必须依赖于活细胞。根据存在的不同环境分为原核微生物、空间微生物、真菌微生物、酵母微生物、海洋微生物等。 众所周知，微生物具有体积小，面积大；吸收多，转化快；生长旺，繁殖快；适应强，易变异; 分布广，种类多的特点，让人不得不感慨这些生命的神奇。 微生物的营养物质主要有：1,水和无机盐 2,碳源:凡能为微生物提供生长繁殖所需碳元素的营养物质。来源：周围环境中的有机物质，常用的有糖类、油脂、有机酸及有机酸酯和小分子醇。作用：碳源对微生物生长代谢的作用主要为提供细胞的碳架，提供细胞生命活动所需的能量，提供合成产物的碳架。3,氮源：凡能为微生物提供所必需氮元素的营养物质。来源：周围环境中得有机无机含氮物质。作用:主要用于合成蛋白质，核酸以及含氮的代谢产物。4,能源:能为微生物生命活动提供最初能源来源的营养物质或辐射能。5,生长因子：微生物生长不可缺少的微量有机物。
微生物对人类最重要的影响之一是导致传染病的流行。在人类疾病中有50%是由病毒引起。世界卫生组织公布资料显示：传染病的发病率和病死率在所有疾病中占据第一位。微生物导致人类疾病的历史，也就是人类与之不断斗争的历史。在疾病的预防和治疗方面，人类取得了长足的进展，但是新现和再现的微生物感染还是不断发生，像大量的病毒性疾病一直缺乏有效的治疗药物。一些疾病的致病机制并不清楚。大量的广谱抗生素的滥用造成了强大的选择压力，使许多菌株发生变异，导致耐药性的产生，人类健康受到新的威胁。一些分节段的病毒之间可以通过重组或重配发生变异，最典型的例子就是流行性感冒病毒。每次 流感大流行流感病毒都与前次导致感染的株型发生了变异，这种快速的变异给疫苗的设计和治疗造成了很大的障碍。而耐药性结核杆菌的出现使原本已近控制住的结核感染又在世界范围内猖獗起来。 微生物千姿百态，有些是腐败性的，即引起食品气味和组织结构发生不良变化。当然有些微生物是有益的，它们可用来生产如奶酪，面包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，必须通过显微镜放大约1000 倍才能看到。比如中等大小的细菌，1000个叠加在一起只有句号那么大。想像一下一滴牛奶，每毫升腐败的牛奶中约有5千万个细菌，或者讲每夸脱牛奶中细菌总数约为50亿。也就是一滴牛奶中可能含有50 亿个细菌。微生物能够致病，能够造成食品、布匹、皮革等发霉腐烂，但微生物也有有益的一面。最早是弗莱明从青霉菌抑制其它细菌的生长中发现了青霉素，这对医药界来讲是一个划时代的发现。后来大量的抗生素从放线菌等的代谢产物中筛选出来。抗生素的使用在第二次世界大战中挽救了无数人的生命。一些微生物被广泛应用于工业发酵，生产乙醇、食品